Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

توبال علم الخلايا من أنبوب فالوب كأداة واعدة لسرطان المبيض الكشف المبكر

Published: July 25, 2017 doi: 10.3791/55887
Automatic Translation
1, 1, 1, 2, 3,4, 5,6
1Department of Pathology, University of Arizona College of Medicine, 2Department of Obstetrics and Gynecology, Henan Provincial People's Hospital, 3Department of Obstetrics and Gynecology, University of Arizona College of Medicine, 4University of Arizona Cancer Center, 5Department of Pathology, University of Texas Southwestern Medical Center, 6Department of Obstetrics and Gynecology, University of Texas Southwestern Medical Center

Summary

استكشفنا طريقة ستولوجيك الأنبوبي عن طريق أخذ العينات أنبوب فالوب مباشرة بعد الجراحة الختان كأداة للكشف المبكر عن سرطان المبيض. هنا، نقدم بروتوكول لجمع خلايا أنبوب فالوب من العينات الجراحية تلقى حديثا.

Abstract

حاليا، فمن المقبول على نطاق واسع أن الغالبية العظمى من المبيض عالية الجودة سرطان المصلية (هغسك) تنشأ من قناة فالوب. ومع ذلك، نظرا لعدم وجود علامات أو أدوات لتحديد سرطان المبيض، والكشف المبكر عن هغسك لا يزال تحديا. أخذ العينات المباشرة من قناة فالوب يمكن أن تعزز حساسية للكشف عن الخلايا الورمية عندما الورم ليس مرئيا بشكل واضح. وضعنا إجراء لجمع خلايا أنبوب فالوب مباشرة من العينات الجراحية تلقى حديثا، والتي أظهرت علاقة ممتازة مع النتائج النسيجية. هذا النهج يضع أساسا للمنفعة المستقبلية للفحص بالمنظار الحد الأدنى في مجموعات المرضى عالية المخاطر.

Introduction

سرطان المبيض عالية الجودة المصلية (هغسك) هو النوع الأكثر شيوعا وقاتلة من سرطان المبيض، ولا يزال يشكل تهديدا كبيرا للصحة العامة. في العقد الماضي، اقترح الباحثون أن الغالبية العظمى من الحالات هغسك تنشأ من قناة فالوب بدلا من المبيض نفسه 1 ، 2 ، 3 ، 4 ، 5 ، 6 . ومن المسلم به على نطاق واسع سرطان داخل الظهاري البوقي (ستيك) باعتبارها مقدمة من هغسك 1 ، 7 ، 8 ، 9 ، 10 ، 11 . وحتى الآن، لا يزال الكشف المبكر عن سرطان المبيض صعبا. وقد أظهر بروتوكول الفحص الحالي مع مستضد السرطان مجتمعة 125 (كا-125) والموجات فوق الصوتية عبر المهبليتأثير قليل على وفيات المرضى 12 ، 13 . أظهرت عينات بطانة الرحم للكشف عن سرطان المبيض حساسية منخفضة للغاية 14 . دراستان رائدة 15 ، 16 استكشاف استخدام بالمنظار أخذ العينات المباشرة من أنابيب فالوب حميدة ويتميز السمات الخلوية من ظهارة الأنبوبي حميدة. ونحن نعتقد أن أخذ العينات مباشرة من قناة فالوب يمكن أيضا أن تكون وسيلة عملية ومباشرة للكشف عن ستيك أو هغسك في مرحلة مبكرة عندما لا يتم تصوير الورم عن طريق التصوير.

على الرغم من أن الهدف النهائي هو فائدة فحص بالمنظار الحد الأدنى في المرضى الذين يعانون من عوامل عالية الخطورة، والأهداف المباشرة للدراسة الحالية هي: 1) لإنشاء السمات الخلوية الأساسية من ظهارة حميدة الأنبوبي. و 2) لاختبار حساسية وخصوصية الخلايا البوقية في الكشف عن سرطان المبيضإرس وسلائف السرطان. لذلك قمنا بتطوير أساس الخلايا الأساسية طريقة الخلايا التالية لاختبار فعالية هذا البروتوكول في الكشف عن هغسك وسلائفها ستيك 17 . في هذه الدراسة، استفدنا من الحجم الكبير من العينات الجراحية المستلمة بانتظام، وأجرينا عينات مباشرة من أنبوب فالوب الذي تم استئصاله جراحيا بالإضافة إلى إجراءات إحصائية روتينية.

وأظهرت دراستنا الأخيرة 17 أن التشخيص الخلوي من الخبيثة أو الاشتباه للخبيثة يرتبط ارتباطا وثيقا التشخيص النسيجي لل هغسك (100٪). وبالإضافة إلى ذلك، حدد التقييم الخلوي البوقي نيوبلسا داخل الرحم في حالتين ستيك أكدها نسيجيا فقط المشاركة في هذه الدراسة. ونحن نعتقد أن الخلايا البوقية لديها امكانيات كبيرة في الكشف المبكر، وسوف توفر معلومات قيمة لإدارة المريض.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

وقد تم الحصول على موافقة مجلس المراجعة المؤسسية من جامعة أريزونا لإجراء هذه الدراسة. تم الحصول على استمارات موافقة المريض على علم.

1. اختيار المريض

ملاحظة: تم الحصول على موافقة مجلس المراجعة المؤسسية من جامعة أريزونا. وتم تجنيد 38 مريضا. تراوحت أعمار المرضى بين 32 و 86 سنة بمتوسط ​​55 عاما، منهم 26 مريضا بعد انقطاع الطمث و 12 مريضا كانوا قبل انقطاع الطمث.

  1. الحصول على موافقة مستنيرة من كل مريض.

2. فالوبي أنبوب خلايا مجموعة الإجراء

ملاحظة: كان جميع المرضى المدرجة في الدراسة الحالية مجدولة لاستئصال الرحم الكلي والثنائي سالبينغو- أوفوركتومي إما للحد من مخاطر وقائي أو الخبيثة. تفاصيل الجراحة كانت غير معروفة لعلم الأمراض الذي قام بدراسة علم الخلايا.

  1. مباشرة بعد سرجيكال فحص، فحص عينة الأنسجة الطازجة بما في ذلك الرحم والمبايض الثنائية، وقنوات فالوب الثنائي بعناية لتحديد أنبوب فالوب الثنائي.
  2. جمع ووضع خلايا أنبوب فالوب في الحل الحافظة (انظر الجدول من المواد) قارورة في غضون 30 دقيقة من لقط إمدادات الدم. والحافظة الموصى بها هو القائم على الميثانول، حل الحافظة مخزنة.
    ملاحظة: استخدام فرشاة اللمس لطيف لجمع الخلايا البوقية (الخطوات القادمة). باستثناء الحالات النادرة التي يتم فيها تقديم أنبوب فالوب منفصلة عن الرحم، وإدخال رأس فرشاة لجمع الخلايا من المخيم الأنبوبي يحدث عادة عندما يتم ربط أنبوب فالوب إلى الرحم.
    1. مع مساعدة من ملقط صغير، إدراج فرشاة (انظر الجدول من المواد ) في التجويف من قناة فالوب من خلال نهاية فيمبرياي. تدور ببطء في اتجاه عقارب الساعة ونقل الفرشاة إلى الأمام من خلال الجزء القمعي من الخريفأنبوب أوبيان، ثم أمبولة حتى تصل إلى البرزخ.
    2. تدوير ببطء وعكس فرشاة عكس اتجاه عقارب الساعة لسحب الفرشاة. تأكد من أن السرعة القصوى للفرشاة داخل التجويف أبطأ من 1 سم / ثانية.
    3. شطف فرشاة في الحل الحافظة (في قارورة) عن طريق تناوب ودوامة الفرشاة 10 مرات في الحل.
    4. تشديد غطاء قنينة.
    5. تسجيل معلومات المريض وأثرية العينة.
    6. تخزين القارورة في ثلاجة 4 درجات مئوية (لمدة تصل إلى) 6 أشهر.

3. توبال علم الخلايا إعداد الشريحة

  1. تحميل قارورة عينة في المعالج الآلي لإعداد الشريحة.
    ملاحظة: نحن نستخدم المعالج الآلي لإعداد الشريحة. يتم تنفيذ الخطوات التالية تلقائيا بعد يتم وضع قارورة عينة في المعالج: (1) يتم فصل الخلايا والحطام وتفريقها من خلال دوران مرشح الاختبار داخل العينةقارورة. (2) يتم جمع الخلايا البوقية من السطح الخارجي للمرشح بواسطة فراغ لطيف. (3) مقلوب مرشح وضغط ضد الشريحة للسماح للخلايا على التمسك المنطقة الدائرية داخل الشريحة. (4) يتم تثبيت الشريحة أيضا في حمام مثبت الخلية وعلى استعداد لتلطيخ وتحليل الخلايا. لسوء الحظ، لا يوجد طريقة يدوية بديلة، والتي يمكن أن تسفر عن نتائج ذات جودة مماثلة.

4. تعديل بابانيكولاو تلطيخ البروتوكول

  1. وصمة عار الشرائح المصنوعة من الخطوة 3.1 عن طريق تشغيل الآلي غير اللطخة إجراء اللطخة، كما هو موضح في الجدول 1 .
    ملاحظة: طريقة تلطيخ يمثل تعديل تقنية تلطيخ بابانيكولاو التي نستخدمها بشكل روتيني للعينات غير الجهاز التناسلي للمرأة. نحن نستخدم معالج الأنسجة الآلي لصمة عار بعض الشرائح. اخترنا إجراء تلطيخ غير جين على إجراء تلطيخ جين في هذه الدراسة. يوزين المستخدمة هو إي-65، بدلا من إي-50 المستخدمة لعينات أمراض النساء (عينة مسحة باب). وبالإضافة إلى ذلك، لم يتم تضمين أوغ-6 في إجراء تلطيخ جين، والتي هي أساسا لتلطيخ الخلايا الحرشفية، في إجراء تلطيخ لأنه لا يتوقع أن ينظر إلى الخلايا الحرشفية في هذه الدراسة. EA65 (يوزين أزور) هو حل وصمة عار مضادة تتألف من 3 الأصباغ: يوسين Y، فف الأخضر سريع، وبسمارك براون Y. ويوضح هذا الإجراء في الجدول 1 .
  2. إجراء إجراء سريع الباب وصمة عار على النحو التالي.
    1. تراجع الشريحة المحرز في الخطوة 3.1 في الايثانول 95٪، 10 مرات، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
    2. تراجع الشريحة في H 2 O، 10 مرات، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
    3. تظهر الشريحة في الهيماتوكسيلين لمدة 10 - 60 ثانية.
    4. تراجع الشريحة في H 2 O، 10 مرات، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
    5. تراجع الشريحة في الايثانول 95٪، 10 مرات، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
    6. تظهر الشريحة في EA65 لمدة 1 - 3 دقائق.
    7. تراجع الشريحة إنتo H 2 O، 10 مرات، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
    8. تراجع الشريحة في الايثانول 95٪، 10 مرات، مع كل تراجع يستغرق حوالي 1 ثانية.
    9. تراجع الشريحة في زيلين حتى تصبح الشريحة واضحة.
      ملاحظة: هذا هو إجراء تلطيخ بابانيكولاو تعديل. يستخدم هذا الأسلوب كطريقة وصمة عار أكثر سرعة للحالات مع وقت محدود أو الفضاء مثل الموقع طموح إبرة غرامة وعينات ستات. يوفر هذا الإجراء تلطيخ جودة قابلة للمقارنة كما أوتوماتد غير اللطخة الإجراء. ويوضح هذا الإجراء في الجدول 2 .

5. تدور الخلايا على الشرائح

ملاحظة: ثلاث شرائح سيتوسبين مصنوعة لكل عينة. شريحة واحدة H & E ملطخة للمقارنة المورفولوجية مع شريحة علم الخلايا. وقدمت اثنين من شرائح غير ملوثين لدراسة إهك تلطيخ في المستقبل. إن الخطوات التفصيلية لهذا القسم ليست محور هذه الورقة. وبالتالي، فإننا لن نناقشها في د طويلةetails على.

  1. إعداد سيتوكنتريفوج مع شريحة المسمى، عينة القمع وتصفية لكل عينة لفحصها.
  2. تركيز الخلايا بواسطة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 200 × ز.
  3. إزالة حوالي نصف طاف ثم إعادة تعليق الخلايا عن طريق بيبتينغ لطيف.
  4. إضافة 200 ميكرولتر من كل تعليق خلية لقمع عينة.
  5. تدور في 250 x ج لمدة 5 دقائق. إزالة بعناية الشريحة (ق) من سيتوسنتريفوج ونقلها إلى الإيثانول 95٪ للتثبيت.
  6. الهواء الجاف قبل تلطيخ والتخزين على المدى الطويل.
    ملاحظة: اعتمادا على كثافة الخلية على الشرائح النهائية، يمكن تخطي الخطوة 5.2 والخطوة 5.3 أو تعديلها. في هذه الدراسة، ونحن نطلب على الأقل 2 مجموعات الخلايا الموجودة في عرض الطاقة العالية للكثافة الخلوية كافية.

.6 التقسيم والتفتيش على نطاق واسع لبروتوكول نهاية فيمبريتاتد (سي-فيم)

  1. إصلاح العينة بأكملها (بما في ذلك الرحم، وقنوات فالوب الثنائية، والمبايض)في الفورمالين 10٪ قبل إحصار لتقليل التقشير.
  2. فصل بلطف وبعناية أنابيب فالوب من الرحم في البرزخ باستخدام ملقط صغير ومقص. إذا التصاق موجود، تشريح بعناية نهاية فيمبريتد من سطح المبيض باستخدام ملقط صغيرة ومقص. هذه الخطوات حاسمة للحد من التلوث عبر الورم بين المبيض وقناة فالوب نظرا لقربهم الحميمة.
  3. بتر البوق و فيمبرياي الجزء (القاصي 1.0 - 2.0 سم من فالوب أنبوب) من بقية العينة.
  4. قسم القمع و فيمبريا طوليا في فترات 2 ملم. تقديم جميع أقسام في توتو للفحص نسيجية.
  5. قسم البرزخ وأمبولة في فترات 2-3 ملم وتقديم كامل.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وأظهرت دراستنا السابقة أن أخذ العينات مباشرة من أنبوب فالوب استئصال باستخدام فرشاة لمسة لطيف يمكن أن تسفر عن عينة كافية وكمية كافية لمزيد من التقييم الخلوي. وبالإضافة إلى ذلك، فإن الجمع بين إعداد الشريحة الآلي وتعديل بابانيكولاو تعديل تمكن الطبيب الشرعي لتصور أفضل التفاصيل الخلوية لإجراء تشخيص دقيق. ويرد مثال على دليل وصمة عار سريعة باب عينة من أنبوب فالوب حميدة في الشكل 1 . كما هو مبين في الشكل 1 ، المناورة فرشاة النتائج في أخذ عينات كافية من العينة. وعلاوة على ذلك، دليل سريع وصمة عار الباب يوفر قرار جيد من التفاصيل النووية والشفافية السيتوبلازمية، والتي هي ضرورية للتقييم الدقيق للخلايا البوقية.

المقارنة بين دليل الباب السريع ستعين من شريحة علم الخلايا و H & E تلطيخ شريحة سيتوسبين هو مبين في الشكل 2 . واحدة من مزايا إعداد الشريحة المذكورة أعلاه مقارنة مع تشويه التقليدية هو أن لديها خلفية أنظف بكثير وأفضل قرار من التفاصيل النووية والشفافية السيتوبلازمية. ويرد في الشكل 3 مثال واحد على سي-فيم لبروتوكول أنبوب فالوب. كما هو مبين في الشكل (1) ، وجود اثنين من السكان الخلية (خلايا مهدبة وخلايا إفرازية) هو سمة من سمات ظهارة الأنبوبي حميدة. ويرد في الأنسجة من أقسام تمثيلية من المخيم وأمبولة في الشكل 4 . يظهر مناورة الفرشاة اضطراب خفيف في بنية الزغب في حوالي ثلث العينة.

في دراستنا السابقة 17 ، التشخيص الخلوي البوقي مرتبط مع ديا النسيجيغنوسيس من هغسك بشكل جيد جدا (100٪). ظهور خلوي من الأورام الخبيثة يظهر مجموعات ثلاثية الأبعاد تتألف من خلايا مع نوى بارزة ونيسونوكليوسيس ( الشكل 5A ). في المقابل، قدمت علم الخلايا رد الفعل غير نمطية كما صفائح مرقمة تتألف من خلايا غير نمطية مع نوى صغيرة ونسان النواة معتدلة دون تجميع ثلاثي الأبعاد ( الشكل 5B ). وقد لوحظت مجموعات الخلايا مثل هغسك في سياق صفائح مصابة من الخلايا الظهارية العادية ( الشكل 6 ).

شكل 1
الشكل 1: مثال على دليل سريع باب وصمة عار من ظهارة حميدة توبال. ( أ ) خلايا الخلفية. وتشمل الخلايا الخلفية مجموعات الخلايا الصغيرة التي تتكون من خلايا إفرازية كبيرة وخلايا مهدبة صغيرة، واحدة كبيرة (المفترض ثانيةخلايا ريتوري) وخلايا صغيرة (خلايا مهدبة مفترضة)، متناثرة كبيرة وصغيرة نوى عارية. ( ب ) كتلة الخلايا الصغيرة تتكون من خلايا مهدبة صغيرة وخلايا إفرازية كبيرة (السهم). ( C ) قطاع ظهارة مهدبة (السهم). ( D ) ظهارة توبال مع أوراق تشبه الظهارية. لاحظ الخلايا مهدبة متشبث في محيط (السهم). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2: مقارنة بين دليل سريع باب وصمة عار من شريحة علم الخلايا ( A ) و H & E تلطيخ شريحة السيتوسبين ( B ). وهناك خلية حميدة خلية مقلدة موجودة في وسط كل من وصمة عار باب و H & E الشرائح وصمة عار. كلا الطريقتين توفر جيدةقرار للتقييم الخلوي للعينة. ومع ذلك، فإن وصمة عار الباب من الشريحة علم الخلايا أعطى خلفية أنظف. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 3
الشكل 3: تصوير سي-فيم من أنبوب فالوب. يرجى ملاحظة التقسيم الطولي للقطع و فيمبرياي الجزء و سيكتيونينغ عرضية من البرزخ والأمبولة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 4
الشكل 4: الأنسجة من ظهارة حميدة توبال.( A ) الجزء فيمبرياي. تتكون ظهارة البوق من اثنين من السكان خلية متميزة: خلايا مهدبة صغيرة (السهام) وخلايا إفرازية كبيرة غير مهدبة (الدوائر). ويلاحظ اضطراب فيلا طفيف. ( ب ) قسم أمبولا. لاحظ فيمبريا مثل إصبع. ( C ) اضطراب معتدل من هيكل الزغب (السهم). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 5
الشكل (5): المقارنة بين الكتلة غير النمطية ( أ ) والمجموعة الخبيثة ثلاثية الأبعاد ( ب ) . الخلايا الخبيثة تظهر مجموعات ثلاثية الأبعاد تتألف من خلايا مع نوى بارزة ونيسونوكليوسيس ( ب ). يظهر علم الخلايا غير نمطية ورقة المزروعs تتألف من خلايا غير نمطية مع نوى صغيرة و إنسونوكليوسيس معتدلة. ملاحظة: لا يوجد تجميع ثلاثي الأبعاد ( أ ). وقد اعتمد هذا الرقم من المرجع 17 .

الشكل 6
الشكل 6: الارتباط بين الخلوي والمظهر النسجي من الأورام داخل الظهاري. ( أ ) الأورام الخلوية داخل الرحم. [نيترلسا] [أنتروبلل] خلوي يظهر اقتناء من [كنتر] [ثري-ديمنسيونل] و [أنيسونوكليوسيس] كبيرة وكرز كبيرة نوى حمراء (دائرة) ضمن السياق من يزود صفح من خلايا ظهارية عادية (سهم). ( ب ) المقابلة قسم الأمراض الجراحية مع سرطان داخل الظهاري البوقي. لاحظ الخلايا ديسبلاستيك عالية (دائرة) المتاخمة للخلايا الظهارية المظهر الطبيعي نسبيا (السهم). وكان هذا الرقمالمعتمد من المرجع 17 . الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

</ الجدول>

الجدول 1: خطوات اللطخة غير جين.

95٪ الإيثانول 5 دقائق
H2O 10 ثانية
الهيماتوكسيلين 15 ثانية - 3 دقائق
مقطر H2O 5 دقائق
95٪ الإيثانول 30 ثانية
EA65 2 - 5 دقائق
95٪ الإيثانول 30 ثانية
95٪ الإيثانول 30 ثانية
100٪ الإيثانول 30 ثانية
100٪ الإيثانول 30 ثانية
زيلين 30 ثانية
زيلين 5 دقائق
95٪ الإيثانول 10 الانخفاضات
H2O 10 الانخفاضات
الهيماتوكسيلين 10 ثانية -1 دقيقة
مقطر H2O 10 الانخفاضات
95٪ الإيثانول 10 الانخفاضات
EA65 1 - 3 دقائق
95٪ الإيثانول 10 الانخفاضات
100٪ الإيثانول 10 الانخفاضات
زيلين تراجع حتى واضحة

الجدول 2: دليل سريعة الباب وصمة عار الخطوات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد تبين أن استئصال سالبينجكتومي الثنائي أو وقائي سالبينغو-أوفوركتومي يقلل من خطر تطوير هغسك في السكان المعرضين للخطر، مثل النساء مع الطفرات الجينية بركا وتاريخ السرطان العائلي قوي. ومع ذلك، فإن عقم وانقطاع الطمث الجراحية الناجمة عن الجراحة هي عواقب وخيمة وجعل قرار صعب، وخاصة بالنسبة للنساء في سن الإنجاب. وقد أظهرت الدراسة السابقة علاقة ممتازة بين علم الخلايا الأنبوبي وعلم الأنسجة 17 . ونحن نعتقد أن الخلايا الأنبوبية على خلايا أنبوب فالوب التي تم جمعها بالمنظار لديها إمكانات كبيرة لتصبح أداة عملية، أقل التدخلية للكشف المبكر عن السرطان.

الخطوات الأكثر أهمية لجمع ناجحة من خلايا أنبوب فالوب هي: 1) الوقت بين لقط إمدادات الدم وجمع الخلايا. و 2) المناورة لطيف وصحيح من فرشاة اللمس لطيف.

الوقت (في غضون 30 دقيقةإس) بين لقط وجمع الخلايا أمر بالغ الأهمية للحفاظ على حسن التشكل والتفاصيل النووية من الخلايا التي تم جمعها. يضمن التواصل الفعال بين علماء الأمراض والجراحين أن يتم تسليم العينة إلى موقع التجميع خلال هذه الفترة. أجريت الغالبية العظمى من الحالات المدرجة في الدراسة في غرفة المقطع المجمدة. لجمع الخلايا البوقية بنجاح، يجب على الشخص الذي يؤدي جمع محاولة أفضل قدر ممكن لتجنب السماح فرشاة تلمس سطح المصلية المصلية بسبب التدريج ضمنا إذا كانت القضية خبيثة. في وقت ما، قد يكون هذا صعبا بسبب قرب الجهازين المعنيين وتعقيد تشريح العينة. فصل أنابيب فالوب من العينة بأكملها قبل جمع قد يكون هناك ما يبرره.

فرشاة اللمس لطيف المستخدمة في هذه الدراسة يمكن جمع عدد كبير من الخلايا التي يمكن بعد ذلك نقلها بسهولة إلى الشرائح أو حاوية حلوة قارورة،ولها طرف اللمسة اللطيفة المصممة لتقليل الصدمة إلى القناة. وعلاوة على ذلك، فإن المناورة بأكملها تحتاج إلى أن تكون بطيئة ورقيقة لتجنب إزعاج شديد الهياكل الزغابية من الغشاء المخاطي للبوق. في بعض الحالات، قد يكون من الصعب الحصول على فرشاة تمرير أنبوب فالوب بأكمله بسبب انسداد. ومع ذلك، فمن المهم أن نبذل قصارى جهد ممكن لجمع الخلايا من فيمبريا والجزء القمعي، لأنه يعتقد أن غالبية هغسك ينبع من نهاية البعيدة من قناة فالوب. ومع ذلك، لا ينبغي أن تستمر المجموعة إذا سلامة من العينة يمكن أن تكون عرضة للخطر.

استنادا إلى خبرتنا، يمكن تخزين العينة في الحل الحافظة لعدة أشهر دون المساس التشكل من الخلايا التي تم جمعها. وصمة عار بابانيكولاو هو تقنية تلطيخ الخلوي شائعة الاستخدام في علم الأمراض الخلوي. المزايا الرئيسية لهذا الإجراء تلطيخ ما يلي: 1) تعريف جيد للتفاصيل النووية؛و 2) الشفافية السيتوبلازمية. في هذه الدراسة، يتم استخدام اثنين من إجراءات بابانيكولاو تعديل وصمة عار لشرائح تلطيخ الخلايا، بما في ذلك إجراء تلطيخ غير جين أوتوماتيكي وإجراءات باب وصمة عار سريعة. كلا الإجراءات تعطي ممتازة وموثوق بها تلطيخ الشريحة، مما يدل على الحفاظ الجيد من التفاصيل النووية وحشوية، ونظيفة الخلفية. على الرغم من الشرائح السيتوسبين عموما لديهم خلفية أكبر بالمقارنة مع الشرائح علم الخلايا، و H & E وصمة عار أظهرت نوعية مماثلة من تلطيخ الخلية. H & E تلطيخ هذه الشرائح يمكن أن يكون وسيلة بديلة مناسبة لتحليل الخلايا البوقية إذا كان المعالج التلقائي غير متوفر.

يتم استخدام بروتوكول سي-فيم لإجمالي جميع أنابيب فالوب المدرجة في هذه الدراسة، بما في ذلك كل من الحالات الحميدة والخبيثة. وقد تم تطوير بروتوكول سي-فيم في البداية لعينات إيجابية سالبينغو-أوفوركتومي الثنائية بركا إيجابية، وهو خيار الحد من المخاطر القياسية وأو ناقلات طفرة بركا. هذا البروتوكول يسمح التعرض القصوى من الثنيات الأنبوبية، والتي يعتقد أن ستيك تنشأ. يتم اتخاذ هذا حاليا كمعيار الذهب للكشف عن تمديد هجسك البوقي و ستيك. الارتباط بين النتائج الخلوية البوقية مع سي-فيم الكشف النسيجي أمر بالغ الأهمية لهذه الدراسة للتحقق من صحة البروتوكول الحالي.

أحد المخاوف من جمع الخلايا البوقية باستخدام فرشاة تعمل باللمس لطيف هو أن المناورة قد يخل بسلامة ظهارة البوق ويعيق تفسير الأنسجة في وقت لاحق دقيقة من العينات الجراحية، وخاصة انطلاق الورم، إذا تم تحديد الأورام الخبيثة. ومع ذلك، استنادا إلى تجربتنا، وحوالي ثلث الحالات تظهر اضطراب خفيف من الزغب على تحليل الأنسجة، والتي عموما لا تتداخل مع التفسير النهائي للأنسجة الأنبوبي.

وقد أظهرت دراستنا السابقة أن الخلايا الأنبوبية حساسة و سبيسيفإيك في الكشف عن هغسك و ستيك. سيكون من مصلحة كبيرة لمواصلة اختبار ما إذا كان الجمع بين الخلايا الأنبوبية مع المؤشرات الحيوية تلطيخ مثل P53 و IMP3 قد تزيد من حساسية وخصوصية الكشف عن سرطان المصلية من أصل البوقي. وستركز الدراسة المستقبلية على تطوير إجراء بالمنظار لأخذ عينات ظهارة فالوب في الجسم الحي .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ويعلن المؤلفون أنه ليس لديهم مصالح مالية متنافسة.

Acknowledgments

ويود المؤلفون أن يعترفوا بقسم علم الأمراض، جامعة أريزونا، على الدعم المالي. ويدعم هذا المشروع جزئيا صندوق الهبات مارك وجين جيبسون إلى وز.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cytobrush plus GT gentle touch of Medscand sample collection kit CooperSurgical C0112
ThinPrep preservCyt solution HOLOGIC 234005
ThinPrep 2000 Processor HOLOGIC 70031-001
Papanicolaou Stain, EA 65 sigma aldrich HT40432
95% Ethanol sigma aldrich 652261
100% Ethanol sigma aldrich 493538
Xylene sigma aldrich 214736
Hematoxylin sigma aldrich H9627
Sakura Tissue Tek 2000 tissue processor SAKURA TISSUE-TEK VIP 2000
Mayo Dissecting Scissors,5.5 straight Pilgrim medical equiment FA710-45
Chemware Forceps United state plastic corp 76122
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades,short SAKURA 4785
Tissue-Tek Accu-Edge Trimming blades handle,short SAKURA 4786

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Carlson, J. W., et al. Serous tubal intraepithelial carcinoma: its potential role in primary peritoneal serous carcinoma and serous cancer prevention. J Clin Oncol. 26 (25), 4160-4165 (2008).
  2. Kurman, R. J., Shih Ie, M. The origin and pathogenesis of epithelial ovarian cancer: a proposed unifying theory. Am J Surg Pathol. 34 (3), 433-443 (2010).
  3. Lee, Y., et al. A candidate precursor to serous carcinoma that originates in the distal fallopian tube. J Pathol. 211 (1), 26-35 (2007).
  4. Li, J., Fadare, O., Xiang, L., Kong, B., Zheng, W. Ovarian serous carcinoma: recent concepts on its origin and carcinogenesis. J Hematol Oncol. 5, 8 (2012).
  5. Przybycin, C. G., Kurman, R. J., Ronnett, B. M., Shih Ie, M., Vang, R. Are all pelvic (nonuterine) serous carcinomas of tubal origin? Am J Surg Pathol. 34 (10), 1407-1416 (2010).
  6. Zheng, W., Fadare, O. Fallopian tube as main source for ovarian and pelvic (non-endometrial) serous carcinomas. Int J Clin Exp Pathol. 5 (3), 182-186 (2012).
  7. Carcangiu, M. L., et al. Atypical epithelial proliferation in fallopian tubes in prophylactic salpingo-oophorectomy specimens from BRCA1 and BRCA2 germline mutation carriers. Int J Gynecol Pathol. 23 (1), 35-40 (2004).
  8. Leunen, K., et al. Prophylactic salpingo-oophorectomy in 51 women with familial breast-ovarian cancer: importance of fallopian tube dysplasia. Int J Gynecol Cancer. 16 (1), 183-188 (2006).
  9. Piek, J. M., et al. Dysplastic changes in prophylactically removed Fallopian tubes of women predisposed to developing ovarian cancer. J Pathol. 195 (4), 451-456 (2001).
  10. Crum, C. P., et al. The distal fallopian tube: a new model for pelvic serous carcinogenesis. Curr Opin Obstet Gynecol. 19 (1), 3-9 (2007).
  11. Jarboe, E. A., et al. Tubal and ovarian pathways to pelvic epithelial cancer: a pathological perspective. Histopathology. 53 (2), 127-138 (2008).
  12. Menon, U. Ovarian cancer screening has no effect on disease-specific mortality. Evid Based Med. 17 (2), 47-48 (2012).
  13. Buys, S. S., et al. Effect of screening on ovarian cancer mortality: the Prostate, Lung, Colorectal and Ovarian (PLCO) Cancer Screening Randomized Controlled Trial. JAMA. 305 (22), 2295-2303 (2011).
  14. Otsuka, I., Kameda, S., Hoshi, K. Early detection of ovarian and fallopian tube cancer by examination of cytological samples from the endometrial cavity. Br J Cancer. 109 (3), 603-609 (2013).
  15. Dhanani, M., Nassar, A., Dinh, T. Classification of Fallopian Tube Cytology Sampling to Develop a Model for Future Peritoneal and Ovarian Cancer Screening. J Am Soc Cytopathol. 3 (5), S35-S36 (2014).
  16. Rodriguez, E. F., Lum, D., Guido, R., Austin, R. M. Cytologic findings in experimental in vivo fallopian tube brush specimens. Acta Cytol. 57 (6), 611-618 (2013).
  17. Chen, H., Klein, R., Arnold, S., Chambers, S., Zheng, W. Cytologic studies of the fallopian tube in patients undergoing salpingo-oophorectomy. Cancer Cell Int. 16, 78 (2016).

Tags

الطب، العدد 125، علم الخلايا توبال، عالية الجودة سرطان المصلية، المصلية سرطان داخل الظهاري البوقي، الكشف المبكر، سرطان، قناة فالوب
توبال علم الخلايا من أنبوب فالوب كأداة واعدة لسرطان المبيض الكشف المبكر
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Chen, H., Klein, R., Arnold, S.,… More

Chen, H., Klein, R., Arnold, S., Wang, Y., Chambers, S., Zheng, W. Tubal Cytology of the Fallopian Tube as a Promising Tool for Ovarian Cancer Early Detection. J. Vis. Exp. (125), e55887, doi:10.3791/55887 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter