Summary
ここで我々 はリアルタイム、非侵襲的発光緑膿菌のバイオ フィルム創傷感染の監視のヘアレス マウスを用いた新規糖尿病マウスモデルをについて説明します。このメソッドは、他の菌種と複数種バイオ フィルムを含む、遺伝子組換え微生物の感染症を評価および antibiofilm 戦略の有効性をテストして合わせることができます。
Abstract
慢性の傷、特に糖尿病患者での構造化されたバイオ フィルムとしての細菌の存在は、創傷治癒や解像度を防ぐためと考えられます。慢性マウスモデルの傷は、微生物とホストの間の根本的な相互作用を理解するために使用されています。これまで開発したモデルは、髪の動物の使用は、細菌による傷組織のターミナル ・ コレクションに依存します。これらのモデルに重要な洞察を得た、この実験動物の大きい数が必要です、サンプリングは時間がかかります。慢性創傷におけるバイオ フィルムの進行を評価するいくつかの最適な革新を組み込んだ新規マウスモデルを開発した:) それは毛の取り外しのための必要性を排除、ヘアレス マウスを利用してb) 永続化の即時評価とホストにこれらのコミュニティの効果を可能にする傷に前もって形成されたバイオ フィルムを適用されます。c) 遺伝子組み換え生物発光菌緑膿菌、感染症の研究ごとに必要な動物の数を減らすをリアルタイムで監視できるように、光を定量化することでバイオ フィルムの進行を監視します。このモデルで単一の全深さの傷は STZ 誘発糖尿病マウスの裏面に生産、膿発光ひずみ Xen 41 のバイオ フィルムを接種しました。傷からの光出力生体内イメージング システムに、生体内でその場で急速なバイオ フィルムの可視化と傷内バイオ フィルム細菌の局在に毎日記録されます。この手法は柔軟な遺伝子組み換え種、複数種バイオ フィルムなど、他の微生物を調査する使用することができ、抗菌閉塞性ドレッシングを含む抗バイオ フィルム戦略をテストで特別な価値があります。
Introduction
バイオ フィルムの慢性の傷1の解像度が低い要因として強調表示されている高分子物質のマトリックスに埋め込まれた微生物の複雑なコミュニティであります。これらの高度に組織化された、永続的な微生物集団の研究は、四肢周辺変質的な知覚メカニズムに血行不良が検出されない病変2につながる糖尿病の患者のため特に重要です。アメリカ合衆国では、糖尿病患者の 15% は自分たちの生活の中に、少なくとも 1 つの潰瘍を開発すると推定されます。これは無量の感情的、社会的負担を述べない治療3,4で約 280 億ドルの経済的な支出に変換します。傷のベッドで癒しのイベントでこれらのバイオ フィルムに与える影響を永続化する微生物ができる要因を理解することは、影響を受ける患者のためのより良いケアを駆動し、新しい処置のアプローチの開発を推進することが不可欠です。したがって、再現で変換可能な体内細菌のホストの相互作用の探索にモデルの確立が重要です。
慢性の傷でバイオ フィルムの影響を研究する、マウスモデルを正常に開発されています。ただし、これらのモデルは、しばしば、髪の種を利用し、犠牲にされた動物が、時間がかかり、高価なから摘出組織の細菌細胞のプレート カウントによってバイオ フィルム クリアランスを評価します。
感染症の評価における動物の終了点サンプリング バイオフォトニック代替最初、Contagらにより提案されました。(1995 年)5,人は抗生物質の治療効果を測定する恒常発光サルモネラから発光をキャプチャする手法を開発しました。他の生物発光発光細菌の活用の研究が続いた。たとえば、Rochettaら。(2001 年)6検証を激化させた電荷結合素子を用いた発光を測定することにより大腸菌太もも感染症のマウスを研究する感染症モデルおよび後で、Kadurugamuwaら。(2003 年)7は黄色ブドウ球菌マウスにおけるカテーテル治癒モデルにおけるいくつかの抗生物質の有効性を調査するための設計されたひずみの性質を発光の光子を利用しました。
ここで特徴づけられるメソッドを提示ヘアレス マウスの糖尿病を誘発する、制作し膿の前もって形成された発光バイオ フィルムで傷を予防接種、バイオフォトニック感染のモニタリングを実施する簡単なプロトコル生体内でイメージ投射システムを使用しています。直通快速、その場で、慢性の傷でバイオ フィルムを評価する非侵襲的かつ定量的プロセスを提供していますさらに、詳細な分析により、癒しの顕微鏡イメージング傷、断続的な採血のためなどサイトカイン測定と組織学のためのターミナルの組織コレクション。
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Protocol
動物実験は機関動物ケアおよび使用委員会のミシガン州立大学によって承認されました
。1. 閉塞性ドレッシングの準備やシリコーン スペーサー
- 透明な閉塞性ドレッシングをカットして正方形約 1 cm × 1 cm ハサミで 。
- カット 10 mm 丸 10 mm 生検パンチ センター 5 mm 生検を使用して 0.5 mm 厚のシリコン シート 10 mm の円の中にパンチとしっかりとフォームに穴を作成するを押して、" ドーナツ "-添え木として使用されるディスクのよう。
2. 実験動物
商業ブリーダーから- 使用 8 週間の古い (22-26 g) 男性 SKH 1 マウス。食料と水 21 ° C と無料で 12 時間の明暗周期の標準条件でマウスを維持します 。
- 糖尿病を誘発する注入マウス intraperitonially 13 mg/ml ストレプトゾトシン (STZ) solutionand 25% ブドウ糖 (250 μ l/マウス/) 5 日間連続で。
- 100 mm クエン酸、pH 4.5 5 μ L の STZ の希釈の 65 μ g で STZ ソリューションを作成します 。
- は、マウスの体重の 1 kg あたり 65 mg STZ の最終的な質量に各マウスの噴射量を調整します。同じ日に 100 mM クエン酸溶液 pH 4.5 でマウスを挿入します 。
- 血糖モニタリング、glucometer と最後の STZ 投与後 14 日間で高血糖を確認します。多尿があります糖尿病マウスそして彼らの寝具は湿気を除去するためにはより頻繁に変更する必要があります、その重みを週に 3 回を監視します 。
3。バイオ フィルム
- バイオ フィルム準備
- 成長のコロニー バイオ フィルム 8 傷を接種します。37 ° C で培養した手術開始前に 2 日間発光の一晩文化 膿 Xen トリプシン大豆スープ (TSB) 41 200 rpm で揺れと紫外線への露出によって 0.2 μ m 孔サイズのポリカーボネート製メンブラン フィルターを殺菌しなさい側あたり 15 分のための生物学的安全フードの光 。
- 1 日手術前に遠心 2 分 20,000 × g で一晩かけて培養し、Dulbelcco 1 mL で 3 回洗う ' 上下ピペッティングによる s リン酸緩衝生理食塩水 (DPBS).
- DPBS 600 0.05 の吸光度に懸濁液を希釈 nm 。
- トリプシン大豆寒天 (TSA) に各膜希薄文化のピペット 10 μ L。乾燥することができます後、72 時間ごと 24 時間新鮮な TSA プレートに転送するバイオ フィルムの成長を 35 ° C で膜を孵化させなさい
- 標準曲線
- 発光と細菌数を関連付ける標準曲線を作る実験の開始前にします 。
- 3.1 で述べたように、バイオ フィルムを準備します 。
- は、視覚的に均一溶液が作成されるまで DPBS とボルテックス バイオ フィルムを混合することにより、1/2 から 1/24 に至るまでバイオ フィルムのシリアル希薄を作る。黒の 96 ウェル プレートと 生体内 イメージング システム イメージで希薄水溶液のピペット 200µL.
- TSA のプレートにプレートの希釈液を広げ、35 ° C 24 時間インキュベート
- プレートのコロニー形成単位 (CFU) をカウントし、生物発光と細菌数を関連付ける標準曲線を作成します 。
4。手術の傷
- 1 L/分の流量で 95% oxygen/5% CO 2 (性ケトアシドーシスによる死亡を防ぐため) にイソフルランを使用して全身麻酔を誘導し、1-3% イソフルランを使用して麻酔を維持します。手術中に熱マット上の動物を維持します 。
- マウスの深いペダル反射足をピンセットでつまんで抑制されやすい位置にマウスを置きことを確認します 。
- メロキシカム (0.2 mg/kg) を皮下注射 (30 μ l) 痛みの管理を介して管理します 。
- 10% ポビドン ヨード 3 回で背中とイソプロパノール パッドの肌を拭く 。
- マウスの 1 つの側面の傷の 1 つの円形のパターンの概要を説明する滅菌 4 mm 生検パンチを使用して '、肩のレベルで s 正中線。永久的なマーカーとパターンの概要を説明します 。
- 鋸歯鉗子を使用して組織層 carnosus を含む皮下組織まで全層創傷を作成し、組織の円形の部分を切除するアウトラインとアイリスのはさみの真ん中に皮膚を持ち上げます.
- は、医療防水皮膚接着剤接着剤をマウスの皮膚に適用し、穏やかな圧力を適用するシリコーン スプリントを配置します。透明な閉塞性ドレッシング材で傷をカバーしてください。手術後、個別にケージ動物 。
5。術後管理
- メロキシカム (0.2 mg/kg) 一度毎日皮下注射を介して次の 2 日間の術後鎮痛管理します 。
- モニター動物の痛み、体重減少の症状のために毎日。糖尿病動物体重の 15% 以上を紛失した場合インスリン注射が必要です 。
6。バイオ フィルムの接種材料の準備や感染症
- 次の手順で説明するよう手術後 48 時間のマウスに接種します 。 滅菌のへらを使用して膜から
- こすり 72 h バイオ フィルム微量遠心チューブに配置し、希釈 DPBS で 1:2。簡単に上下にピペッティングしてミックスします 。
- 拡散板合計 CFU を計算する TSA のプレートに接種。カウントが正確であるためには、一連の超音波洗浄器で 40 kHz で 2 分間超音波処理ステップによってインターカ レートした 2 つ 1 分ボルテックス手順によってさらにバイオ フィルム菌を打破します 。
- ドレッシングでカバー傷とシリコーン スプリントし、参照の定規を使用して接続されているカメラで顕微鏡と傷口の顕微鏡写真を取るを削除します 。
- 200 μ L ピペット チップの先端をカットし、各傷にバイオ フィルム菌の 10 μ L をピペットします 。
- 生体内 イメージング システムの自動設定を使用してイメージのマウス: 露光時間 5-300 s、中ビン、1 f/ストップと開いているフィルター ビューのフィールド C と (12.9 x 12.9 cm).
- カバーは新鮮なドレッシング創傷します 。
7。傷の計測とイメージング
- 動物毎日 9 の臨床徴候を評価します 。
- 食品を提供、水、ケージを必要に応じて変更します 。 毎日のドレッシングの
- チェックの整合性。ドレッシングが存在する場合は、傷の閉塞のためのみ発光を測定できます。8 日でドレッシングが削除され、傷の閉鎖のできる測定を置き換えられません 。
- その他の毎日の動物の重量を量ます 。
- 、すべての日の隔離室で個別にマウスを配置HEPA フィルターと、生体内で イメージ投射システム毎日または発光値がバック グラウンド レベルを下回るまで、その他の毎日を使用してイメージを装備 。
- 8 日後全身麻酔を誘導し、傷が治癒するまで毎日参照の定規を使用して接続されているカメラで顕微鏡と傷口の顕微鏡写真を撮ます 。
8。組織学的解析
- 安楽死、安楽死の CO 2 の 2 l/分の流量でマウスのバック グラウンド レベルを下回ると発光、傷が完全に治癒後の部屋。2 番目のメソッドとして安楽死の頚部転位によって死を確認します 。
- アイリスはさみを使用しての周りや創傷部 (直径約 1 cm) 下の広い、完全切除を作成し、組織学的解析のための 4% パラホルムアルデヒドで組織を維持します 。
- 他の分析: サイトカインの検出
- レトロ軌道毛細管ガラス管を用いた麻酔下の動物から血を収集し、EDTA 処理管にそれを転送します 。
- 4 ° C で 20 分間 2,000 rpm で血液を遠心し、サイトカインの検出のため血漿を凍結します 。
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Representative Results
この新しいモデルを開発する c57bl/6 j マウスを過去に使用した上毛 SKH 1 の活用において多くの利点が見られました。通常 STZ 注射を受ける動物糖尿病の発症と緩やかな減量を経験します。ただし、傷の癒しの実験以前による所内ダンらによって提示されたモデルを再現します。(2012 年)9 c57bl/6 j、急激な体重減少を使用していた (図 1).対照的に、これを使用して巻き上げられた場合 SKH 1 マウスに統計的に有意な低減量がみられるモデル (P < 0.0001, マン-ホイットニーの U 検定)。さらに、前の実験 (図 2) で感染 c57bl/6 j マウスの 40% の死亡率を認めた中膿Xen 41 バイオ フィルム感染糖尿病 SKH 1 マウス コホートにおける死者は出ていないです。
ここに提示されたモデルに別の利点は、髪除去ステップ c57bl/6 j マウスのために必須の実験 SKH 1 マウスの必要です。髪マウスと私たちの前の実験で特別な注意は皮膚への刺激を最小限に抑えるために与えられたがいくつかの損傷は、(図 3) を必然的に発生します。特に、ただし、このモデルでヘアレス マウスの活用においての最大の利点は、長期的創傷治癒の研究で観察された髪の再成長の問題の除去です。C57bl/6 j マウスでの経験、髪の再成長が動物から動物を様々 なそれは常に発生し、創傷面積測定と干渉研究の長期的な性質を考えると、や脱臼傷スプリントや慣れでカバー ドレッシング感染傷、傷 (図 4) の乾燥の結果可能性があります。
SKH 1 創傷治癒モデルにおける糖尿病が確認された後手術簡単に実行できる円形完全厚さの動物の背中に傷を作成します。シリコーン スプリントは、医療防水皮膚接着剤で場所に保管され、新しく作成された傷のベッド (図 5) と閉塞性ドレッシングから直接接触を避けます。
膿ポリカーボネート膜 (図 6) 上に成長した Xen 41 発光バイオ フィルムまで、簡単に転送され傷への配信のために準備する注射器に、接種したマウスを毎日監視臨床(図 7) の感染の徴候。このモデルでは、2 つのフェーズを実装されています。最初の段階でバイオの接種後、傷は、透明な密閉包帯で覆われてスプリントによって囲まれました。傷を閉塞膿の蓄積でこの結果します。バイオ フィルムを含む傷を毎日生体内イメージング感染症の開発を監視し、(図 8および図 9) バイオ フィルムの進化を評価システム イメージしました。生物発光、全光束 (p/s) として記録は、細菌密度標準曲線 (図 10) を使用して関連付けることができます。
8 日にスプリントとドレッシングは、創傷治癒過程の可視化を許可するように削除されました。生物発光はその後傷口周囲膿の損失のため削除します。しかし、細菌は傷組織によって決定されるに関連付けられて残った。創傷治癒を測定するドレッシングを除去するこのアプローチは、その他の慢性創傷治癒の研究 (REFs) で利用されています。創傷治癒の進行は、顕微鏡 (図 11) に接続されているカメラで顕微鏡写真を撮影によって決定することができます。
図 1: 糖尿病マウス SKH 1 と c57bl/6 j マウスの比較割合減量します。0 日は STZ 射出重量 (5th) の最後の日に対応しています。n SKH 1 n = 10 マウス c57bl/6 j = 12 マウス。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 2:膿Xen 41 バイオ フィルム アプリケーション (1 日目) 後 SKH 1 と c57bl/6 j の糖尿病マウスのパーセント生存率。n SKH 1 n = 5 マウス c57bl/6 j マウス 10 匹を =。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 3:シェービング c57bl/6 j マウスに脱毛クリームを使用すると、将来的に負傷エリア皮膚裂傷。(A): プロシージャの日(B): プロシージャの後の 4 日間。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 4:(A) c57bl/6 j マウスを部分的に削除された傷スプリント。スプリントの (B) 物を持ち上げるには、完全に再成長した髪に囲まれた癒される傷が明らかにしました。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 5: SKH 1 マウスが負傷したため手術。(A) 分界生検パンチ;分界; (B) 概要(C) 負傷が完了。(D) 医療防水皮膚接着アプリケーション(E) 接着スプリント(F) 傷は閉塞性ドレッシングで覆われています。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 6: バイオ フィルム菌の準備。緑膿菌Xen ポリカーボネート膜上に成長した 41 の 72 h (A) コロニー バイオ フィルム(B) 測定、syrin を用いたバイオ フィルムのge。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 7: SKH 1 糖尿病マウス膿Xen 41 バイオ フィルム傷は接種後 6 日。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 8: 糖尿病の SKH 1 マウスで時間をかけて発光の進化を追跡することによってバイオ フィルム感染症の監視します。(A) バイオ フィルムのアプリケーションの日(B) 5 日のポスト-バイオ フィルム;(C) 8 日投稿-バイオ フィルム;(D) 12 日の記事-バイオ フィルム;(E) 16 日投稿-バイオ フィルム;(F) 20 日の記事-バイオ フィルム。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 9: 実験の過程で膿Xen 41 バイオ フィルム感染 SKH 1 糖尿病マウスにおける傷からフラックスを合計します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 10: CFU あたり生物発光の標準曲線生成膿Xen 41 バイオ フィルムの傷あたり CFU を推定します。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
図 11: 治癒の進行を示す糖尿病の SKH 1 マウスで 41 バイオ フィルム膿Xen に感染した傷の顕微鏡写真タイムライン。バイオ フィルム感染後日は、各画像の左下隅に表示されます。この図の拡大版を表示するのにはここをクリックしてください。
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Discussion
ここで我々 は、翻訳、再現性のある、柔軟なモデルの作成に多くの利点を持つ糖尿病慢性創傷でバイオ フィルムの研究のための新しいマウスモデルをについて説明します。
最初の技術革新は、ヘアレス マウスの使用です。糖尿病の慢性創傷治癒の10、11を勉強する他のマウスのモデルが開発されているが、すべてはワックスや髪クリップの併用のいずれかを含むプロセスによって毛皮の除去を必要とする髪のマウスの使用に依存しています。脱毛クリーム。この手順では、時間がかかり、面倒なだけでなくが、傷を格納する領域で動物の皮膚を傷つける可能性があります。ヘアレス マウス発がん研究12,13のシリーズで使用されてきたが、これらのマウス使用されていない慢性の傷でバイオ フィルムの持続性を評価します。毛のない動物は、特に長期的研究の使用によって解決したもう一つの共通の問題は、創傷治癒の評価を危険にさらすし、包帯を混乱させる可能性のある創傷部の髪の再成長です。
また、STZ 誘発性に従う証明 SKH 1 動物は I 型糖尿病と、c57bl/6 j マウスと比較すると不必要なインスリンを投与する実験の過程で統計的に有意な低減量をしていた。これは特に興味深い特性とインスリン治療潜在的感染の結果として証明ワターズら (2014)14 に感染してインスリン治療糖尿病動物の細菌数の増加を説明した人に影響を与える膿なくインスリン対応と比較するとバイオ フィルム。さらに、私たちのモデル動物が感染症に対処するに可能性がありますより弾力性のあることを示す無毛のコホートにおける死亡率の大幅な削減があった。
このモデルの第二の特徴は、浮遊性の成長細胞と対照をなして傷に感染する測定の前もって形成されたバイオ フィルム菌液のアプリケーションです。傷口にすでに代謝複雑で構造化された細菌群集を提供する、細菌の細胞は、免疫系を回避すること、病変で、バイオ フィルムの即効性を決定することができます。
この新しい創傷モデルの 3 番目の利点は、微生物株を生体内イメージング システム空間をローカライズし、細菌を定量化する測定が発光を作り出すことができるの使用です。これはバイオ フィルムの進化の時間の経過をリアルタイムで追跡することができます。膿Xen 41 系統が 1 つ安定したP. ルミネッ センス luxCDABEオペロンの発光は、超高感度カメラでキャプチャできる構成の放射をもたらす細菌の染色体上のコピーを所有しています。イメージング システム。このリアルタイム、非侵襲的場の機能は、シーネとカバーが間にも生物発光によるバイオ フィルムの測定できます。この機能は、研究ごとに必要な動物の数を大幅に減少しバイオ フィルムを監視するための特定の時点で動物を犠牲にする必要はありません。しかし、バイオ フィルムと膿の存在は遮蔽測定創傷治癒します。本研究では創傷治癒の可視化を許可するように 8 日目でドレッシングを削除しましたが、対処されて質問に応じてこのパラメーターは変更可能性があります。
最後に、イメージング システム、最大発光を検出できる、2.5 cm の深さで、新しく提案されたモデルは抗菌療法のソリューションまたはゲルの形態かどうかのテストに従う、または閉塞性ドレッシングに組み込まれました。リアルタイム感染症監視モデルでは、別の投与濃度と静的エンドポイント アッセイではなく期間の影響を測定する多くの柔軟性をことができます。このモデルは、慢性創傷でバイオ フィルムを根絶するために潜在的な新しい治療法の検証に貢献できます。
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Disclosures
著者は、彼らは競合する金銭的な利益があることを宣言します。
Acknowledgments
著者らはこの作業 (グラント # #7-13-BS-180)、トレーニングと、生体内でイメージ投射システムへのアクセスを提供するためミシガン州立大学研究技術支援施設を支援する米国糖尿病協会を感謝したいとミシガン州大学調査病理組織学的研究室マウス生検病理組織学的検査のためを処理するため
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Opsite | Smith & Nephew | Model 66000041 | Smith & Nephew Flexfix Opsite Transparent Adhesive Film Roll 4" x 11yards |
| SKH-1 mice Crl:SKH1-Hrhr | Charles River Breeding Laboratories | SKH1 | Hairless mice, 8 weeks old |
| Streptozotocin (STZ) | Sigma Aldrich | S0130-1G | Streptozocin powder, 1g |
| AccuChek glucometer | Accu-Chek Roche | Art No. 05046025001 | ACCU-CHEK CompactPlus Diabetes Monitoring Care Kit |
| Pseudomonas aeruginosa Xen 41 | Perkin Elmer | 119229 | Bioluminescent Pseudomonas aeruginosa |
| Polycarbonate membrane filters | Sigma Aldrich | P9199 | Millipore polycarbonate membrane filters with 0.2 μm pore size |
| Dulbelcco phosphate buffer saline (DPBS) | Sigma Aldrich | D8537 | PBS |
| Tryptic soy agar | Sigma Aldrich | 22091 | Culture agar |
| Meloxicam | Henry Schein Animal Health | 49755 | Eloxiject (Meloxicam) 5mg/mL, solution for injection |
| 10% povidone-iodine (Betadine) | Purdue Products LP | 301879-OA | Swabstick, Betadine Solution. Antiseptic. Individ. Wrapped, 200/case |
| 4% paraformaldehyde | Fisher Scientific | AAJ61899AK | Alfa Aesar Paraformaldehyde, 4% in PBS |
| Capillary glass tube | Fisher Scientific | 22-362-566 | Heparinized Micro-Hematocrit Capillary Tubes |
| Silicone to make splints | Invitrogen Life Technologies Corp | P-18178 | Press-to-Seal Silicone Sheet, 13cm x 18cm, 0.5mm thick, set of 5 sheets |
| Tryptic soy broth | Sigma Aldrich | 22092 | Culture broth |
| IVIS Spectrum | Perkin Elmer | 124262 | In vivo imaging system |
| IVIS Spectrum Isolation chamber | Perkin Elmer | 123997 | XIC-3 animal isolation chamber |
| HEPA filter | Teleflex | 28022 | Gibeck ISO-Gard HEPA Light number 28022 |
| Biopsy punches | VWR International Inc | 21909-142 | Disposable Biopsy Punch, 5mm, Sterile, pack of 50. |
| Biopsy punches | VWR International Inc | 21909-140 | Disposable Biopsy Punch, 4mm, Sterile, pack of 50. |
| Glucose | J.T.Baker | 1916-01 | Dextrose, Anhydrous, Powder |
| Citric acid | Sigma Aldrich | C2404-100G | Citric Acid |
| Mastisol | Eloquest Healthcare | HRI 0496-0523-48 | Mastisol Medical Liquid Adhesive 2/3 mL vial, box of 48 |
| Corning 96-well black plates | Fisher Scientific | 07-200-567 | 96-well clear bottom black polysterene microplates |
| 25 gauge 5/8 inch needle | BD | 305122 | Regular bevel needle |
| Bransonic M Ultrasonic Cleaning Bath | Branson Ultrasonics | N/A | Ultrasonic Cleaner |
References
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