Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

GABA beyin dilimleri içinde uygulanması Puff tarafından indüklenen bütün hücreli akımları

Published: October 12, 2017 doi: 10.3791/56387
* These authors contributed equally

Summary

Biz hangi tarafından farmakolojik reaktifler bütün hücreli yama-kelepçe kayıt sırasında yönetilemez duruma gelir ve başarısı için çok önemli özellikleri çeşitli yönlerini vurgulamak puf tekniğini tanımlamak.

Abstract

Farmakolojik yönetim yaygın olarak bütün hücreli yama-kelepçe beyin dilimler halinde kayıt yürütmek için kullanılır. Elektrofizyolojik kayıt sırasında uyuşturucu uygulamasının en iyi yöntemlerden birini farmakolojik reaktifler beyin dilimleri nöronal faaliyetleri üzerindeki etkisini incelemek için kullanılan puf tekniğidir. Puff uygulama en büyük avantajı ilaç konsantrasyonu kayıt site çevresinde hızlı, böylece membran reseptörleri duyarsızlaştırma engelleyen artırır olmasıdır. Puff uygulama başarılı kullanımı dikkat için aşağıdaki öğeleri içerir: ilaç konsantrasyonu, puf micropipette, puf micropipette ve kaydedilen nöron ucu ve süresi arasındaki mesafe parametreleri ve puf sürüş basınç (inç kare başına pounds PSI). Bu makalede gama - aminobütirikasit (GABA) bir nöron prefrontal kortikal dilimin üzerine şişirme tarafından indüklenen bütün hücreli akımları kaydetmek için adım adım bir yordam açıklanır. Özellikle, aynı yordamı küçük değişiklikler oluşur ve striatum gibi diğer beyin bölgeleri ve hücre kültürleri gibi farklı ürünleri ile uygulanabilir.

Introduction

Yama-klemp tekniği, nöronlar, elektrik sinyalleri soruşturma için birincil araç 1970'lerde1,2geliştirilmiştir. O nasıl spesifik tedaviler üzerinde bilgi sağlamak bu tekniği önemli bir avantajı olduğunu (örneğin, farmakolojik) nöronal işlevleri veya gerçek zamanlı3kanalları değiştirebilir. Nöronal fonksiyon farmakolojik değerlendirme bütün hücreli bir beyin dilimi kayıt sırasında kaydedilen nöronlar agonistler veya belirli reseptörlerinin antagonistleri gibi ilaçlar uygulamaya gerektirir. Bu yöntem uygulama böylece daha iyi nöronlar4fizyolojik ve patolojik özelliklerini anlamak için önde gelen özel bir ilaç takip meydana gelen nöronal değişiklikler tanımlamasını sağlar. Farmakolojik yönetim ya da perfüzyon5 veya puf6yapılabilir rağmen ikinci üstün bir tekniktir. Özellikle: (i) uygulama hızla puf artar ilaç konsantrasyonu bir seviyeye kaydedilen nöron etrafında öyle ki membran reseptörleri duyarsızlaştırma engellenir; (II) böylece bu nedenle yönetilen kimyasallar beyin dilimleri üzerinde herhangi bir istenmeyen etkileri azaltır banyo çözüm üzerinde küçük etkisi şişirilmiş uyuşturucu hacmi son derece düşüktür; (iii) puf Protokolü olabilir ayarlamak ve kaydedilmiş, deneme çok hassas tekrarlanabilir; yapma (iv) puf uygulama agonistler/antagonistleri, özellikle bu tür reaktifler pahalı veya elde etmek zor olduğu ekonomik kullanımını gösterir.

Burada, Bütün hücreli akımları GABA akut hazırlanan beyin dilimleri, nispeten iyi korunmuş beyin devreleri avantajına sahip bir hazırlık şişirme tarafından indüklenen kayıt üzerinde durulacak. Bu makalede nasıl inhibitör akımları puf kaynaklı7 kuralları açıklanacaktır. Sezyum (Cs+) kullanarak-tabanlı iç çözümler ve nöronlar 0 tutan mV, GABA-puf uyarılmış tanıtacak inhibitör postsinaptik akımları (eIPSCs) uygun teknik ayrıntılarla. Biz gösteriyor ki eIPSC lipopolysaccharide (LPS) enjeksiyon8tarafından indüklenen depresyon bir fare modeli kullanarak GABA puff tarafından uyarılmış genlik, LPS-Injected fareler araç kontrollere göre dilim içinde önemli ölçüde azalır. Bu makalede nasıl nefes tekniği yaygın olarak uygulanabilir herhangi bir kimyasal madde, bileşikleri veya uyuşturucu beyin dilimleri nöronal faaliyetleri üzerindeki etkisini değerlendirmek yönelik çalışmalar için göstermelidir bizim niyeti olduğunu.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Hayvan barınma ve tüm hayvan deneyleri Etik Komitesi tarafından Ulusal Enstitüsü kurulan hayvan bakımı için yönergelere göre Güney Çin Normal Üniversitesi'nde hayvan araştırma tarafından onaylanmış prosedürler uyarınca yapılmıştır Sağlık.

1. hazırlık çözümler

  1. hazırlamak 500 mL standart yapay serebrospinal Tablo 1 ' de listelenen gibi bizim eseri 7 ' açıklanan bileşenleri içeren sıvı (ACSF). Taze bir ACSF çözüm hazırlamak için deiyonize su ile
    1. kullanımı temiz cam şişeler. NaCl, KCl, NaH eklemek için kullanmadan önce kuru ve temiz spatula deiyonize su ile 2 PO 4, NaHCO 3, MgSO 4, D-glikoz ve çözüm / % 5 ile % 95'i O 2 bubbled sonra CaCl 2 ekleyin CO 2 ~ 20 dk (olarak ayrıntılı olarak açıklandığı tablo 1) 500 mL deiyonize su karışımı. Tamamen eriyene kadar karıştırın.
    2. Tamamen ACSF olduğunu emin olun herhangi bir yağış temizleyin. Sonra pH 7.2 7.4 için ayarlayın. Kabarcık % 95'i O 2 ve %5 CO 2 ~ 20 dakika süreyle oluşan bir gaz karışımı ile
  2. 250 mL içeren Tablo 2 ' de açıklanan kimyasallar 7 dilim kesme çözeltisi hazırlamak.
    1. KCl, MgCl 2, NaH 2 PO 4, NaHCO 3, choline·Cl, D-glikoz Ekle ve CaCl 2 son 1.1.1, 250 ml deiyonize su gösterildiği gibi ekleyin ve 1.1.1 ve 1.1.2 anlatılan geçiyoruz.
    2. Köpüren sonra % 95'i O 2 / %5
    3. CO 2, kesme çözüm olur, böylece çözüm için 15-20 dk bir dondurucu buz gibi ve kısmen donmuş yerleştirin.
      Not: Biz ne zaman dilimleri 1-2 ay yapım bu kesme çözüm kullanın-eski fareler; formül 2 aydan daha büyük fareler için farklı olabilir.
    4. Steril endotoksin-Alerjik izotonik salin eriterek tarafından hazırlamak LPS çözüm (% 0.9 NaCl). LPS intraperitoneally yönetilen (0.5 mg/kg) ve 2 h sonra kaydını başlatmak.

2. Prefrontal korteks dilim hazırlanması

  1. kesme çözüm dondurucudan almak ve bir rüşvet almak için lunaparkçı. Çözüm buz koyun ve sürekli kabarcık / % 5 ile % 95'i O 2 CO 2.
  2. Büyük, keskin makas kullanarak, hızlı bir fare olarak açıklanan 9 başını kesmek ve hemen kafa ile dolu bir ölçek buz gibi koymak içine (0-4 ° C) kesme çözüm.
  3. Orta çizgi boyunca kafatası tepesine bir burun Kaudal yönde iyi makasla kesme ve yanal kafatası kısımları kaldırmak. Buz gibi soğuk kesme çözüm bir güzel spatula ve damla ile beyin kaldırın.
    Not: Adım 2.2 2.3 hızla yapılmalıdır (ideal olarak < 1dk).
  4. Beyin buz dolu bir 9 cm Petri kapağını yerleştirin. Buz gibi soğuk kesme çözüm beyinle durulayın. Serebellum ve olfaktör ampul bir tıraş bıçağı ile kesti.
  5. Uygula cyanoacrylate tutkal numune için sahibi bir vibratome. Dikkatle tutkal, rostral tarafı yukarı, damla üzerinde beyin blok yer ve hemen buz gibi kesme çözümde bırakın.
  6. Vibratome 15 ° yatay düzlemde referansla açısı için bıçak sahibi ayarlamak ve koronal beyin dilimleri 350 µm hazırlamak (bıçak titreşim frekansı 85 Hz, hız = 0.1 mm/s =).
  7. Bir pipet kullanarak, kurtarma odası dilimlere dolu ACSF ile transfer kuluçkaya 1 sürekli köpüren % 95'i O 2 / %5 ile h (RT) için CO 2.

3. Bütün hücre yama kayıt

  1. yapmak cam borosilikat MİKROPİPETLER için elektrotlar kayıt olarak kullanın veya çektirme işlemi el kitabında MİKROPİPETLER belirli esaslarına göre puf. Elektrotlar kayıt için ipucu Dirençleri aralığında 4-6 M olan Ω, puf MİKROPİPETLER aralığında 2-5 µm uç çapı varken.
  2. Blok hızlı Na + kanal ve böylece aksiyon potansiyelleri, ACSF Na + kanal engelleyici (TTX, 1 µM), ekleme ve Peristaltik Pompa Odası ile 2-3 mL/dk kayıt odasında bu çözümün bir sabit akış hızı sürdürmek ve bunun dışında aspirasyon. ACSF % 95'i O 2 / %5 kabarcık sürekli ve yaşayabilirliği dilimleri sağlamak için CO 2.
  3. Bir beyin dilim kimin iyi ipucu dilim boyutuna sığacak şekilde kesildi değiştirilmiş bir Pasteur pipet kullanarak kayıt odasına aktar. Dilim bir platin dilim çapa ile aralıklı paralel naylon konu ile kapak ≥ dilimi platform üzerinde tutmak için 2 mm ayrı.
  4. Kayıt micropipette iç çözüm 7 ile (Tablo 3) doldurun ve puf MİKROPİPETLER 10 µM, 50 µM ve 100 µM (ACSF içinde çözünmüş) veya araç kontrol olarak ACSF GABA ile doldurmak.
  5. Enkaz ile tıkanma önlemek için
  6. ACSF kayıt elektrot çeker önce 1 mL şırınga kullanarak ışık pozitif basınç uygulayın. Bir micromanipulator (4 x objektif lens), mikroskop altında kullanarak kayıt elektrot ve puf micropipette ipuçları monitör ( şekil 1 A) video görüntüsündeki ortasına görünmesini sağlayacak şekilde getirin.
  7. Yavaş yavaş puf micropipette düşürürken mikroskop odak (40 x objektif lens) ayarlamak ve 45 ° açılı kayıt nöron yukarıda yerleştirin. Puf micropipette ucu ve 20-40 µm ( şekil 1 B) arasında kaydedilen nöron arasındaki mesafe tutun. Yavaş yavaş ve dikkatli bir şekilde kayıt elektrot ile nöron yaklaşım ve pozitif basınç düğmesini bırakın. Zayıf ve kısa emme giga-ohm mühür oluşturmak için elektrot tutucu bağlı boru aracılığıyla uygulamak.
  8. Koru gerilim 0, mV. Giga-ohm mühür oluşumu sonra hızlı için telafi etmek ve kapasite el ile veya otomatik olarak yavaş. Yukarıda belirtilen bütün hücreli moduna almak için boru aracılığıyla kısa ve güçlü bir emici uygulamak.
  9. Kayıt eIPSC gerilim tipi kelepçe içinde modu. Düşük gaz basıncı (azot, 4-6 PSI) tek veya eşleştirilmiş GABA puffs ( Şekil 2) sunmak için bir Master 8 gerilim adım jeneratör tarafından kontrollü bir Picospritzer kullanarak puf micropipette uygulamak.
  10. En iyi eIPSC sonuçları ( şekil 3) elde etmek ve LPS kaynaklı depresyon modeli ( şekil 4) eIPSC ölçmek için puf süresini değiştirmek.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Puff tekniği araştırmacılar uyuşturucu etkisi belirli bir neuron yüzeyinde belirli reseptörleri üzerinde çalışmaya izin verir. Bu makalede, GABA reseptörleri tarafından aracılı akımları odaklanmak. Şekil 1 üfle ve kayıt MİKROPİPETLER gösterir. Fiziksel baskı kaydedilen nöronlar üzerinde herhangi bir etkisi ortadan kaldırmak için puf, ACSF tarafından üretilen ve sukroz puffs (Şekil 2A) denetimleri kullanılır. Şekil 2' deBgösterildiği gibi temel koşulu ACSF wash-out tarafından (mavi), elde edilebilir iken GABA puf (siyah) tarafından indüklenen yanıt olarak bildirilen10, picrotoxin gibi bir GABA reseptör inhibitörü tarafından bloke edilebilir. Özellikle, ne bir ACSF ne de bir Sükroz puf bir yanıt, GABA puffs tarafından indüklenen yanıtları fizyolojik ve kaydedilen hücre yüzeyinde bulunan GABA reseptörleri tarafından aracılı düşündüren neden olmaktadır. Doz ve puf-süre yanıt eğrileri şekil 3' te gösterilmektedir.

LPS nöronal aktivite ve hayvan davranışları değiştirmek için gösterilen, ama GABA reseptör aracılı yanıt üzerindeki etkisi bilinen değildi. GABA puffs LPS-Injected beyin dilimleri içinde ve araç kontrol fareler tarafından indüklenen akımları karşılaştırdığımızda, biz önemli ölçüde azaltılmış IPSC genlikleri LPS tedavi (şekil 4) nedeniyle görmekteyiz.

Figure 1
Resim 1 . Diyagram puf micropipette ve kayıt elektrot. 
(A) puf kayıt MİKROPİPETLER arasındaki uzaklık. (B) (sol) puf micropipette ve kayıt elektrot yüzeyinde oluşan bir beyin dilim (sağda). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Resim 2 . GABA puff tarafından indüklenen IPSC picrotoxin abluka. 
(A) ACSF şişirme ve sukroz (50 µM) yanıt neden olmaktadır. (B) şişirme 50 µM GABA bir IPSC (siyah) neden olmaktadır (puf süresi = 200 ms, 4-6 PSI) TTX içeren ACSF içinde (1 µM), CNQX (20 µM) ve AP5 (Aksiyon potansiyelleri ve eksitatör akım engellemek için 50 µM) tarafından AMPA ve NMDA reseptör aracılı. GABA kaynaklı IPSC GABA reseptör inhibitörü, 100 µM picrotoxin (kırmızı) banyo uygulama tarafından engellenir. IPSC wash-out picrotoxin sonra kurtarır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3 . Doz ve puf-süre yanıt eğrileri. 
(A) örnek IPSCs 10, 50 ve 100 µM GABA tarafından indüklenen (puf süresi 50 ms, 4-6 psi =). (B) Puff-süre yanıt eğrileri. Siyah, n = 11; kırmızı, n = 8; Mavi, n = 10; Polinom uygun. Veri birden çok deneyler (8 ≤ n ≤11); aracı olarak gösterilir hata Çubuklarõn SEM (C) tekrarlayan akımları GABA (50 µM) puffs 1, 2 veya 3 s arası puf aralıklarla tarafından uyarılmış (puf süresi 100 ms, 4-6 psi =). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4 . eIPSC genlik farelerde LPS enjeksiyonlu araç kontrollere göre azalır.
GABA şişirme indükler bir önemli ölçüde azaltılmış IPSC genlik LPS enjeksiyonlu vs kontrol nöronlar (serum, 19.74 ± 1.93 pA/pF; LPS, 14,10 ± 1,30 pA/pF; p = 0.02). Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Madde g/mol Konsantrasyonu (mM) Ağırlık (g/L)
NaCl 58.443 119 6.9547
KCl 74.551 2.5 0.1864
NaH2PO4 137,99 1 0.1380
NaHCO3 84.007 26,2 2,2010
MgSO4 120.366 1.3 0.1565
D-glikoz 198.17 11 2.1799
CaCl2 110.98 2.5 0.2775

Tablo 1. Kayıt ACSF.

Madde g/mol Konsantrasyonu (mM) Ağırlık (g/L)
KCl 74.551 2.5 0.1864
MgCl2 95.211 7 0.6665
NaH2PO4 137,99 1,25 0.1725
NaHCO3 84.007 25 2.1002
Choline· CL 139.63 115 16.0575
D-glikoz 198.17 7 1.3872
CaCl2 110.98 0,5 0.0555

Tablo 2. Dilim kesme çözüm.

Madde g/mol Konsantrasyonu (mM) Ağırlık (g/L)
CS glukonat 328.052 100 32.8052
CsCl 168.36 5 0.8418
HEPES 238.301 10 2.3830
MgCl2 95.211 2 0.1904
CaCl2 110.98 1 0.1110
BAPTA 476.43
3 11 5.2408 Na2ATP 551.1 4 2.2044 Na2GTP 523.2 0,4 0.2093

Tablo 3. Bütün hücre yama kayıtları için iç çözüm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Puf uygulama postsinaptik reseptör işlevi3,4,7değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır, ancak her deney da hassas doğrulukta denetim gerektirir. Biz burada GABA-puf prefrontal kortikal beyin dilimler halinde IPSCs (yani eIPSCs) indüklenen gösteren bütün hücreli yama sıkma, içeren bir açıklayınız. Kayıt elektrot dayanıklılığını yaklaşık 5 MΩ, puf MİKROPİPETLER uç çapı hakkında ise 2-5 µm. Puff arasında 4-6 psi basınçtır: daha düşük bir basınç neden olabilir daha yüksek bir basınç nöronal hasar, neden bu Aralık, önemlidir postsinaptik GABA reseptörleri yetersiz aktivasyonu. Kaydedilen nöron puf micropipette ucundan yatay uzaklık hakkında ise 20-40 µm (1-2 nöronlar çapı) ve puf micropipette ve dilim yüzey arasındaki açı olduğunu yaklaşık 45°. Puf micropipette dikey olarak 20-40 µm dilim (z ekseni) yukarıda yolgösterendir. Puff süresi 10-150 Bayan yukarıdaki koşullarda, 10-50 µM GABA puffs neden uygun bir nöronal yanıt ve eIPSC genlik ve Kinetik parametrelerin elde tekrarlanabilir olmalı. Protokol burada bir dilim yama puf başvuru üzerine odaklanır açıklanan, aynı zamanda bizim eseri7' de gösterildiği gibi nöronal kültürde kayıtları için uygun olsa da.

Biz de GABA eşleştirilmiş-puf uygulamadan kaynaklanan eIPSCs gösteriyor. Eşleştirilmiş-pulse protokollerinin yaygın olarak presynaptic özellikleri7,11ama etkileyen nörotransmitter-reseptör bağlama oranı ve bağlama benzeşme, değişiklikler gibi olası postsinaptik etkileri değerlendirmek için kullanılan çifte darbe oranları, presynaptic çifte darbe stimülasyon tarafından belirlenemiyor. Bu makalede açıklanan protokol eşleştirilmiş ve hatta darbe-tren bizi canlı tutan postsinaptik değişiklikler aydınlatmak için bir yol sağlar. Prefrontal korteks eIPSC genlik azalma LPS-Injected farelerin değişmiş düzeyleri veya etkinlik GABA reseptörlerinin davranış değişiklikleri LPS kaynaklı altında yatan göstermektedir.

Olarak çoğu uyuşturucu teslim teknikleri ile bu hedef hücre ulaşan tam GABA konsantrasyon bilmek zor olmasına rağmen, GABA, belirli düzeyde doku konsantrasyonu, türü ile tutarlı olmak tarafından korumak hala mümkün olduğunu MİKROPİPETLER kullanılan ve parametreler ile böyle gibi sürücü basınç ve mesafe puf. Bizim durumumuzda, kabarık çözüm hacmi 100 ms süre sonunda yaklaşık 1.1 µL var. Böylece, şişirme gerçekleştirilen7,12olduğu nicel çalışmalar sağlar.

Sağlıklı beyin dilimleri akut prefrontal korteks üzerinden hazırlanması için yordam kayıt puf biz tanımlamak ve aşağıdaki noktaları akılda önemlidir. İlk olarak, beynini incelememize ve prefrontal korteks hızlı bir şekilde ayrı (< 1 dk) ve sonra beyin blok buz gibi kesme çözüm en fazla 1 dakika tutun. Daha sonra sıkıca vibratome beyin bloğunu numune tutucu üzerine yapıştırın veya aksi takdirde beyin blok kesit sırasında savrulabilir. Hız ve vibratome sıklığını bile, sağlıklı dilimler oluşturmak için ayarlamanız gerekir. Tüm yordamlar 0-4 yukarıda yapmak için çaba yapılmalıdır nöronal uyarılabilirlik en aza indirmek için ° C.

Biz bu makalede tarif kesme çözüm 1-2 ay için kullanılması gereken dikkati çekiyor-eski fareler. Büyük fareler için (yani > 3 ay), kesme çözüm açıklanan13değiştirilmelidir. Puff teknik farmakolojik tedavi içeren yama-kelepçe deneyler bir dizi için geçerlidir ve uyuşturucu etkisi herhangi bir nöronların elektriksel aktivitesinin sınamak için de kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Yazarlar aşağıdaki kuruluşlar teşekkür etmek istiyorum: Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı Çin (31171018, 31171355), bilim ve teknoloji bölümü, Guangdong (2013KJCX0054), Guangdong Eyaleti, Doğa Bilimleri Vakfı ( 2014A030313418, 2014A030313440) ve Guangzhou bilim ve teknoloji Bürosu (201607010320).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Glass Borosilicate micropipettes Shutter Instruments BF150-86-10 1.50 mm outer diameter; 0.86 mm inner diameter
Micropipette Puller Shutter Instruments MODEL P-97  Flaming/Brow Micropipette Puller
Micromanipulators Shutter Instruments MP-285
Computer controlled Amplifier    Molecular Devices Multiclamp 700B
Digital Acquisition system  Molecular Devices Digidata 1440A
Imaging Camera Nikon  2115001 Inspection equipment
Microscopy  Nikon  Eclipse FN1 
Master 8 A.M.P.I. Master-8 Pulse stimulator
Vibratome Slicer Leica VT 1000S
Razor blade Gillette 74-S FLYING EAGLE
Video monitor Panasonic WV-BM 1410
502 Glue Deli 7146 Cyanoacrylate Glue
Peristaltic pump Shanghai JIA PENG Corporation BT100-1F
Video Camera Olympus America Medical OLY-150
Transfer Pipets Biologix 30-0138A1

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260 (5554), 799-802 (1976).
  2. Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain. Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).
  3. Eyo, U. B., et al. Neuronal hyperactivity recruits microglial processes via neuronal NMDA receptors and microglial P2Y12 receptors after status epilepticus. J Neurosci. 34 (32), 10528-10540 (2014).
  4. Dickinson, G. D., Parker, I. Factors determining the recruitment of inositol trisphosphate receptor channels during calcium puffs. Biophys J. 105 (11), 2474-2484 (2013).
  5. Lee, J., et al. Columnar distribution of activity dependent gabaergic depolarization in sensorimotor cortical neurons. Mol Brain. 5, 33 (2012).
  6. Glykys, J., Mody, I. The main source of ambient GABA responsible for tonic inhibition in the mouse hippocampus. J Physiol. 582, (Pt 3) 1163-1178 (2007).
  7. Chen, M., et al. APP modulates KCC2 expression and function in hippocampal GABAergic inhibition. Elife. 6, (2017).
  8. Dunn, A. J., Swiergiel, A. H. Effects of interleukin-1 and endotoxin in the forced swim and tail suspension tests in mice. Pharmacol Biochem Behav. 81 (3), 688-693 (2005).
  9. Engel, D. Subcellular Patch-clamp Recordings from the Somatodendritic Domain of Nigral Dopamine Neurons. J Vis Exp. (117), (2016).
  10. Wondolowski, J., Frerking, M. Subunit-dependent postsynaptic expression of kainate receptors on hippocampal interneurons in area CA1. J Neurosci. 29 (2), 563-574 (2009).
  11. Yang, L., Wang, Z., Wang, B., Justice, N. J., Zheng, H. Amyloid precursor protein regulates Cav1.2 L-type calcium channel levels and function to influence GABAergic short-term plasticity. J Neurosci. 29 (50), 15660-15668 (2009).
  12. Huo, Q., et al. Prefrontal Cortical GABAergic Dysfunction Contributes to Aberrant UP-State Duration in APP Knockout Mice. Cereb Cortex. , (2016).
  13. Zhou, W. L., Gao, X. B., Picciotto, M. R. Acetylcholine Acts through Nicotinic Receptors to Enhance the Firing Rate of a Subset of Hypocretin Neurons in the Mouse Hypothalamus through Distinct Presynaptic and Postsynaptic Mechanisms. eNeuro. 2 (1), (2015).

Tags

Neuroscience sorunu 128 tüm hücreli yama-kelepçe akut hazırlanan beyin dilimleri puf prefrontal korteks GABA eIPSC
GABA beyin dilimleri içinde uygulanması Puff tarafından indüklenen bütün hücreli akımları
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Feng, Y., Tang, B., Chen, M., Yang,More

Feng, Y., Tang, B., Chen, M., Yang, L. Whole-cell Currents Induced by Puff Application of GABA in Brain Slices. J. Vis. Exp. (128), e56387, doi:10.3791/56387 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter