Summary
Den sura tumör mikromiljö spelar avgörande roller i tumör progression. För att bedöma effekterna av surt extracellulära pH på cancer celler in vitro etablerade vi enkla sura kultur system.
Abstract
Villkoren för den tumör närmiljön, såsom hypoxi eller näringsämnen svält, spela avgörande roller i cancer progression och malignitet. Dock har rollen som sura extracellulära pH i tumör aggressivitet och dess underliggande mekanismen inte studerats jämfört med hypoxisk eller näringsämnen svält villkor. Dessutom har en väl definierade kultur metod att efterlikna den sura extracellulära tumör närmiljön inte fullt rapporterats.
Här presenterar vi en enkel i vitro kultur metod för att bibehålla sura extracellulära pH med nedsatt bikarbonat och ökad laktat eller HCl koncentrationer i odlingssubstratet. Medelstora pH var kvarstod under minst 24 h och gradvis minskade med 72 h efter kultur PANC-1 och AsPC-1 pankreascancer celler. Tre distinkta sura media villkor i denna studie högt uppreglerad pH-lyhörd gener såsom MSMO1, INSIG1och IDI1 jämfört med hypoxi eller näringsämnen svält. Uppreglering av dessa gener kan användas som markör för surt pH. Dessa enkla tekniker är nyttiga att belysa underliggande mekanismer av tumör malignitet under sura tumör mikromiljö. Därför gör vårt extracellulära sura pH kultur system upptäckten av cellulära sura pH svaren inte bara i cancerceller utan också i primära celler, renal tubulär celler, i förhållande till de andra sura sjukdomar inklusive, diabetisk ketoacidos, laktacidos, renal tubulär acidos och respiratorisk acidos.
Introduction
Den tumör mikromiljö spelar avgörande roller i tumör progression och cancer cell metabolism1,2,3. Cancercellerna utsätts ofta för villkor som hypoxi, näringsämne deprivation och sura extracellulära pH (pHe). Dock rollen som pHe i tumör progression inte har klargjorts så stor utsträckning som i hypoxi eller näringsämne svält. PHe i tumörvävnad kan bli sura, når cirka pH 6,84,5. Sura pH-värde uppstår från aerob och anaerob glycolytic utsöndring av protons (H+) och laktat av prolifererande cancer celler5,6.
Senare studier visade att sura pHe-inducerad Histon deacetylering, fettsyra oxidation och exocytos av sura lysosomer för anpassning till den svåra sura miljö7,8,9,10. Mekanismerna genom vilka extracellulära försurning påverkas emellertid cancercellers beteende och identitet nyckel tillsynsmyndigheter i den sura pH tumör närmiljön inte har fastställts fullständigt. Dessutom flera rapporter beskrivs olika sura pH media med oklart koncentrationer av bikarbonat, Tris, rör och HEPES buffert eller laktat och HCl, men det finns några rapporter om att demonstrera stabiliteten i den justerade medium eller heltäckande jämförelse av flera distinkta sura kultur media7,8,9,10
För att belysa de viktigaste regulatorer och metabola förändringar i cancerceller i samband med extracellulära försurning, vi etablerade en enkel i vitro kultur modell för att upprätthålla en sura pHe och undersökte pHe i cancer celler11roll. Med den här metoden vi upprätthållit en sura odlingsmedium med en pHe på 6,8 vid 37 ° C under 5% CO2, med minskad bikarbonat koncentrationer i odlingssubstratet. pH 7,4 användes som vanligt och styra medium. Medelstora pH var kvarstod under minst 24 h och gradvis minskade med 72 h under kultur PANC-1 och AsPC-1 pankreascancer celler. Eftersom ökad glykolys påskyndar utsöndringen av inte bara protoner men också laktat7,8,9, vi också etablerat en kultur metod härma laktat-inducerad acidos genom att lägga till laktat i stället för att minska den bikarbonat koncentration. Dessutom, tillåter HCl-inducerad sura pHe på medellång oss att utesluta möjligheten att cellulära svar till sura pH odlingssubstratet inte är på grund av en minskad koncentration av bikarbonat. Dessutom kan använder olika medier med ett pH på 6,4-7.4 med olika bikarbonat koncentration, vi bedöma omfattningen av pHe effekter på cellulära svar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. beredning av sura odlingsmedium
-
Beredning av kontroll (pH 7,4) och låg-pH (pH 6,8) odlingsmedium
- Lös 4,75 g DMEM pulver utan L-glutamin i 500 mL vatten.
- Förbereda 0,33 M NaHCO3 lösning i en trycktäta flaska.
Varning: Det är viktigt att använda en trycket snäva flaska eftersom NaHCO3 avger CO2 gas när uppvärmd och termiskt nedbrutet. - Autoklav medium och lösning. Tillåt dessa buffertar svalna till 25 ° C.
- Tillsätt 5 mL 200 mM L-glutamin, 5 mL penicillin-streptomycin, och 50 mL fetalt bovint serum till 500 mL DMEM utan bikarbonat.
- För kontroll (pH 7,4) medium, tillsätt 2,4 mL 0,33 M NaHCO3 per 100 mL DMEM utan bikarbonat. För låg-pH (pH 6,8) medium, lägga till 0,6 mL 0,33 M NaHCO3 lösning per 100 mL DMEM utan bikarbonat.
- Kontrollera medium pH-värdet efter 24 h inkubation vid 37 ° C under 5% CO2.
Obs: Mängden NaHCO3 lösning behöver justeras beroende på medellång pH, som kan variera beroende på halten CO2 inkubator och lufttryck. Idealiskt, för första gången är det bättre att mäta medium pH med olika bikarbonat koncentrationer att bestämma lämplig mängd NaHCO3 lösning att lägga till DMEM.- Samla odlingsmedium omedelbart efter bort kultur skålen från CO2 inkubatorn och mäta pH-värdet med hjälp av en pH-mätare. Hålla medellång temperaturen vid 37 ° C med ett vattenbad om det behövs. Mäta medium pH tre gånger självständigt.
Obs: NaHCO3 lösning ska förvaras vid 4 ° C och varje media bör vara nyberedd. Kommersiellt tillgängliga produkter som kan användas i denna studie visas i Tabell för material.
- Samla odlingsmedium omedelbart efter bort kultur skålen från CO2 inkubatorn och mäta pH-värdet med hjälp av en pH-mätare. Hålla medellång temperaturen vid 37 ° C med ett vattenbad om det behövs. Mäta medium pH tre gånger självständigt.
-
Förbereda laktat-inducerad eller HCl-inducerad sura odlingsmedium
- Lägga till 74 µL av laktat eller 125 µL av 1 M HCl till 100 mL kontroll medium (bereddes i steg 1.1.5).
- Kontrollera medium pH-värdet efter 24 h inkubation vid 37 ° C under 5% CO2.
Obs: Mängden laktat eller HCl-lösning måste också justeras enligt de medelstora pH, vilket kan variera beroende på halten CO2 i inkubatorn och lufttryck. Idealiskt, är det bättre att mäta medium pH med seriell laktat eller HCl koncentrationer att bestämma lämplig för att justera till önskad pH av medium.
2. skörd och behandling av celler
- Börja odla celler vid 37 ° C under 5% CO2 minst 1 vecka innan du utför experiment.
Obs: De cellinjer som används i denna studie visas i Tabell för material. - Passagen celler när de når 70-90% konfluens. Tillåt inte cellerna att bli konfluenta. Ändra på medellång varje 2-3 dagar under dagliga odling.
- Tvätta cellerna genom att tillsätta 5 mL PBS. Aspirera PBS och Lägg du lossar enzym som 1 mL Trypsin.
- Inkubera vid 37 ° C tills cellerna är avrundade och börja lossna.
- Tillsätt 5 mL odlingsmedium i fristående celler och inaktivera enzym. Överföra cellsuspensionen till en 15 mL rör och Centrifugera under 3 minuter vid 300 x g. Aspirera supernatanten och Slamma upp cellerna med odlingsmedium.
- Räkna de viabla celler med hjälp av en hemocytometer och Trypan-blå.
- Utsäde 5.0 x 105 celler per brunn av en 10-cm parabolantenn i 10 mL av medium. Inkubera cellerna för 24 h vid 37 ° C under 5% CO2.
- Aspirera odlingsmediet, tvätta cellerna med 5 mL PBS och tillsätt 10 mL av den sura odlingsmedium som förberett i avsnitt 1. Inkubera cellerna för 24 h vid 37 ° C under 5% CO2.
3. RNA isolering
- Aspirera odlingsmedium och tvätta cellerna med 5 mL PBS. Störa cellerna genom att lägga till RNA extraktion reagens (se Tabeller för material).
- Skrapa skålen kort, sedan bort RNA extraktion reagens med en pipett och deponera RNA extraktion reagens per cell lysate i ett 1,5 mL rör. Lämna i rumstemperatur i 5 min.
- Lägga till 250 µL kloroform och skaka röret kraftigt för cirka 15 s. låt stå i rumstemperatur i 5 min och centrifugera vid ≥8, 000 x g i 5 min.
- Ta försiktigt bort den vattenhaltiga fasen med pipett. Lämna bakom några av vattenfasen. Placera i en annan 1,5 mL tub.
- Lägga till 550 μl isopropanol i vattenfasen och blanda försiktigt. Lämna i rumstemperatur i 5 min. Centrifugera vid maximal hastighet (≥20, 000 x g) under 20 minuter vid 4 ° C.
- Häll av isopropanol och tillsätt 1 mL 75% etanol i DEPC behandlat vatten. Blanda försiktigt. Centrifugera vid 8000 x g i 5 min.
- Överför med pipett av etanol och låt pellets lufttorka.
- Lägg till ca 15-25 µL (beroende på avkastningen) av DEPC behandlat vatten till den RNA pelleten. Blanda noggrant.
- Mätning av koncentrationen av isolerade RNA genom att mäta OD på 260 nm med en spektrofotometer.
4. cDNA syntes
- Kombinera följande komponenter i en PCR-reaktion tube: upp till 5 µg totalt RNA, 1 µL Oligo dT (50 µM) eller Random Primer Mix (60 µM), 1 µL 10 mM dNTP och nuclease-fritt vatten till en total volym på 14 µL.
- Blanda och centrifugera kort komponenterna med hjälp av en liten bänkmonterade centrifug (~ 5 s). Denaturera provet RNA/primer för 5 min vid 65 ° C. Spinn kort (~ 5 s) använder en små bänkmonterade Centrifugera och sätta provet omedelbart på is för minst 1 min.
- Lägg till följande komponenter: 4 µL 5 x omvänd Transkription buffert, 1 µL omvänt transkriptas (200 U/µL), 1 µL RNase Inhibitor (40 U/µL).
Obs: Exempel på kommersiellt tillgängliga kit visas i Tabell av material - Cap röret, blanda och sedan kort Centrifugera innehållet med hjälp av en liten bänkmonterade centrifug (~ 5 s). Inkubera kombinerade reaktionsblandningen på 50-55 ° C i 10 min.
- Inaktivera reaktionen genom inkubation vid 80 ° C i 10 min.
5. mätning av syra-responsivt genuttryck med realtids-PCR
- Kombinera följande komponenter i en 384-väl reaktion tallrik: 1 µL mall cDNA, 0,75 µL 10 X N',N'-dimethyl-N-[4-[(E)-(3-methyl-1,3-benzothiazol-2-ylidene)methyl]-1-phenylquinolin-1-ium-2-yl]-N-propylpropane-1,3-diamine, 0,3 µL 50 µM framåt primer, 0,3 µL 50 µM reverse primer, 1 µL Taq polymeras, 2,5 µL 10 x Taq polymeras buffert, 2,5 µL 20 mM dNTP, 16,65 µL vatten.
Obs: Exempel på kommersiellt tillgängliga kit visas i Tabell för material. En lista av primers visas i tabell 1. En platta med 96 brunnar reaktion kan också användas i det här steget. Övriga sonder (t.ex., Taqman proben) kan också användas. - Ställ in experimentet och följande PCR-program på en Real-time PCR System: 50 ° C i 2 min, 1 cykel; 95 ° C i 10 min, 1 cykel; 95 ° C för 15 s och 60 ° C i 1 min, 40 cykler; 95 ° C under 15 s, 1 cykel; 60 ° C under 15 s, 1 cykel; 95 ° C under 15 s, 1 cykel.
- Placera plattan i qPCR instrumentet. Starta programmet.
Obs: Uppreglering av pH lyhörd generna MSMO1, INSIG1och IDI1 kan mätas genom proteinnivåer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att avgöra lämpliga bikarbonat koncentrationen, vi förberett DMEM på rad 0 - 8 mM NaHCO3 (slutlig koncentration i odlingsmediet) och lyckats förbereda kultur media med pH alltifrån 6,4-7,4 (figur 1). Vi förberett DMEM med 8 mM NaHCO3 (pH 7,4) som en kontroll medium, och 2 mM NaHCO3 (pH 6,8) som medium med sura pH enligt en tidigare rapport anger att extracellulära pH når pH 6,8 för solida tumörer4,5. PH-värdet i surt medium var kvarstod under 24 h och gradvis minskade till ungefär pH 6,6 för 72 h under kultur PANC-1 och AsPC-1 celler (figur 2). Nästa, för att avgöra mängden laktat eller HCl som krävs för att justera pH 6.8 control medellång (pH 7,4), vi lagt till olika mängder av laktat eller HCl till kontroll medium mätt pH av medium och fann att pH-värdet i kontrollen mediet med en slutlig koncentratio n av 22,5 µM laktat och 6,25 mM HCl nådde en värdera av 6,8 (figur 3).
Effekten av extracellulära försurning med hjälp av ett medium med lågt pH kan utvärderas enkelt baserat på uppreglering av sura pH-lyhörd gener som MSMO1, IDI1och INSIG1. Uttryck av dessa gener var starkt ökade under lågt pH jämfört med deras uttryck under hypoxi eller näringsämnen svält (figur 4). Dessutom uppreglering av dessa gener var inte specifika för ett medium där sura pH-värde berodde på minskad bikarbonat nivåer, och de var också uppreglerad av ett medium där sura pH orsakades genom tillsats av laktat eller HCl (figur 5). Jämförelse av cellulära svar till media där sura pH-värde härrör från reducerad bikarbonat nivåer eller tillsats av laktat eller HCl gör det möjligt för oss att avgöra om cellulära svar är specifika för vissa typer av försurning. Uppreglering av sura pH ansvariga gener som IDI1, MSMO1och INSIG1 under extracellulära lågt pH uppstår även i normala celler (figur 6), så vår metod kan tillämpas inte bara tumörceller utan också normala celler. Högt pH villkor var den uttryck av pH-ansvarig gener inte uppreglerad i PANC-1 och AsPC-1 celler (figur 7), som kan användas som negativ kontroll.
Figur 1. Korrelation mellan NaHCO3 koncentration och medelstora pH. Horisontella axeln visar koncentration NaHCO3 och lodräta axeln visar medium pH vid 37 ° C under 5% CO2. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2. Förändring av medelstora pH av låg-pH (pH 6,8) odlingsmedium under 72 h-kultur. Medelstora pH var kvarstod under 24 h och successivt minskat för 72 h under kultur PANC-1 och AsPC-1 celler. 5,0 x 105 celler var seedade till en 10-cm skålen i 10 mL medium, inkuberas i 24 h och ändrade till lågt pH odlingsmedium. Data presenteras som den medelvärde ± SEM minst tre oberoende experiment. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Korrelation mellan laktat eller HCl koncentrationer och mediets pH. Kontroll medium (pH 7,4) var buffras med olika koncentrationer av laktat eller HCl. vänligen klicka här för att visa en större version av denna siffra.
Figur 4. Transkriptionell uppreglering av sura pH-lyhörd gener som svar på lågt pH. Uttryck var MSMO1, IDI1och INSIG1 högre i PANC-1 och AsPC-1 celler i samband med lågt pH (pH) än under hypoxi (H) eller näringsämnen svält (NS) förhållanden efter 24 h. Data presenteras som den medelvärde ± SEM av minst tre oberoende experiment. Student's t-tester utfördes för angivna jämförelser. p < 0,005. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5. Transkriptionell uppreglering av sura pH-lyhörd gener svar på laktacidos och HCl-medierad acidos. Uttryck för IDI1, MSMO1och INSIG1 mRNA i PANC-1 och AsPC-1 celler bestämdes av kvantitativ realtids polymerasen kedjar reaktion analys under kontroll (Con; pH 7,4), lågt pH (pH, pH 6.8, minskad mängd NaHCO3 ), laktacidos (laktat; pH 6.8, ökade mängden laktat) och HCl-medierad acidos (HCl, pH 6.8, ökade mängden HCl) villkoren för 24 h. Data presenteras som den medelvärde ± SEM minst tre oberoende experiment. Student's t-tester utfördes för angivna jämförelser. p < 0,005. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6. Transkriptionell uppreglering av sura pH-lyhörd gener som svar på lågt pH i normala celler. Uttryck MSMO1, IDI1och INSIG1 var uppreglerad i fibroblastic KMS-6, TIG, och MRC9 celler och HUVEC endotelceller efter 24 h. Data presenteras som den medelvärde ± SEM minst tre oberoende experiment. Student's t-tester utfördes för angivna jämförelser. p < 0,005. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7. Uttryck nivå av sura pH-ansvarig gener högt pH (pH 7,6 till 8,0) villkor i jämförelse under lågt pH (pH 6,8). PH-ansvarig gener som IDI1, MSMO1och INSIG1 uttryck förblir oförändrat högt pH (pH 7,6 till 8,0) villkor i PANC-1 och AsPC-1 celler efter 24 h. Data presenteras som den medelvärde ± SEM av minst tre oberoende experiment. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Primer | Forward primer sekvens | Primer | Omvänd pimer sekvens | ||
| ACTB | 5'-AGAAGGAGATCACTGCCCTGGCACC-3' | ACTB | 5'-CCTGCTTGCTGATCCACATCTGCTG-3' | ||
| MSMO1 | 5'-ATCATGAGTTTCAGGCTCCATT-3' | MSMO1 | 5'-AAGCACGATTCCAATGAAAAAT-3' | ||
| INSIG1 | 5'-TGGCAGCTTCCCAAGTATTC-3' | INSIG1 | 5'-ACTGCGGGTTGGTAATTGAG-3 ' | ||
| IDI1 | 5'-TGGATAAAACCCCTGTGGTG-3' | IDI1 | 5'-CAACATCCGGCATAACTGTG-3' | ||
Tabell 1. Lista av primers används i kvantitativ realtids PCR analys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Här beskrivs vi ett enkelt sura pH kultur system och dess utvärderingsprocessen. Kombinationen av tre metoder för medelstora försurning, dvs, minskad bikarbonat koncentration, laktat tillägg och HCl dessutom möjliggjort att grundligt utreda den pH-svarsmekanism och jämföra den cellulära svaren på andra tumör microenvironmental villkor såsom hypoxi eller näringsämne svält.
Nyckeln till denna metod är att fastställa de lämpliga koncentrationerna av bikarbonat, laktat och HCl i odlingssubstratet. Mäta medium pH med olika bikarbonat koncentrationer när du utför denna metod för första gången är viktigt att bestämma lämplig mängd NaHCO3 medium. Under denna process, är det nödvändigt att mäta medium pH efter 24 h inkubation vid 37 ° C under 5% CO2, som medium temperatur och jämvikt status av CO2 kraftigt påverka medium pH. Autoklavering av bikarbonat rekommenderas ofta, eftersom bikarbonat lätt blir platt. Cell densiteten och cell konfluens är avgörande faktorer eftersom stora mängder växande cancerceller enkelt syrsätt odlingssubstratet även i kontrollprover. Dessutom Svaren till extracellulära sura pH-värde beror på villkora av cellerna och kan blekna som celler är anpassade, så att celler med mindre än 10 passager användes för experiment.
Vår metod har avsevärt stabiliteten i medelstora pH för 24 h och jämförs flera sura pH media. I detta protokoll användes medellång pH 6,8 som ett lågt pH skick, men seriell sura pH mellan pH 6,4 och 6,9, utöver serial grundläggande pH media mellan pH 7,4 och 8.0, användes för att undersöka cellulära svar mot extracellulära försurning.
Vi fokuserat främst på cancerceller, men denna metod kan användas för andra typer av celler inom den tumör mikromiljö, inklusive stromaceller, immunceller och vaskulära endotelceller. Vi och andra rapporterade att åtminstone några pH känsliga mekanismer i cancerceller är vanliga i normala celler7. Det är också möjligt att tillämpa denna metod för analys av andra primära celler samt embryonala stamceller och inducerade pluripotenta stamceller. En begränsning av detta kultur-system kan vara svårigheten att upprätthålla villkoret sura pH i långsiktiga experiment.
Acidos är förknippad med olika typer av sjukdomar. Denna metod kan tillämpas inte bara i cancerforskning men också i att studera sura störningar såsom diabetisk ketoacidos, renal tubulär acidos och respiratorisk acidos.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författaren Ayano Kondo är anställd av Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.
Acknowledgments
Vi tackar medlemmarna av avdelningen av genomet teknik och laboratorium för systembiologi och medicin, RCAST, The University of Tokyo. Vi särskilt tacka Dr H. Aburatani, Dr. T. Kodama, (LSBM, RCAST, The University of Tokyo), Dr K. Tomizuka, Dr. T. Yoshida och Dr A.
Kunisato (Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd.) för bra diskussioner och stöd. Detta arbete var delvis stöds av bidrag för unga forskare (A) (26710005, T.O.), bidrag för vetenskaplig forskning på innovativa områden (26116711 och 16 H 01567, T.O.) och bidrag för utmanande
Grundforskning (16K 14605, T.O.) från ministeriet för utbildning, kultur, sport, vetenskap och teknologi av Japan, Stiftelsen Takeda vetenskap (T.O.), Kobayashi grunden för cancerforskning (T.O.) och projektet för cancerforskning och Terapeutiska Evolution (P-skapa) och praktisk forskning för innovativa cancerkontroll från Japan byrån för medicinsk forskning och utveckling, AMED (T.O.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Reagents | |||
| Dulbecco's Modified Eagle Medium“Nissui” 2 | Nissui | 05919 | |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher | 10438 | |
| NaHCO3 | Wako | 191-01305 | |
| L-glutamine solution | Thermo Fisher | 25030-081 | |
| Penicillin-Streptomycin Mixed Solution(Stabilized) | Nacalai | 09367-34 | |
| 0.5g/l-Tripsin/0.53mmol/l-EDTA Solution, with Phenol Red | Nacalai | 32778-05 | |
| 0.5%-Trypan Blue Stain Solution | Nacalai | 29853-34 | |
| Lactic acid solution | Sigma-Aldrich | 252476 | |
| Hydrochloric acid solution | Sigma-Aldrich | H9892 | |
| RNeasy Plus Mini Kit | QIAGEN | 74134 | |
| SuperScript IV First-Strand Synthesis System | Thermo Fisher | 18091 | |
| Power SYBR Green PCR Master Mix | Applied Biosystems | 4368702 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Cell lines | |||
| PANC-1 | ATCC | CRL-1469 | |
| AsPC-1 | ATCC | CRL-1682 | |
| KMS-6 | JCRB Cell Bank | JCRB0432 | |
| TIG | JCRB Cell Bank | ||
| MRC9 | ATCC | CCL-212 | |
| HUVEC | ATCC | CRL-1730 | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipment | |||
| NanoDrop One Microvolume UV-Vis Spectrophotometer with Wi-Fi | Thermo Fisher | ND-ONE-W | |
| QuantStudio 5 Real-Time PCR System | Thermo Fisher | CRL-1682 |
References
- Cairns, R. A., Harris, I. S., Mak, T. W.
- Chang, C. H., et al. Metabolic Competition in the Tumor Microenvironment Is a Driver of Cancer Progression. Cell. 162 (6), 1229-1241 (2015).
- Hsu, P. P., Sabatini, D. M. Cancer cell metabolism: Warburg and beyond. Cell. 134 (5), 703-707 (2008).
- Gerweck, L. E., Seetharaman, K. Cellular pH gradient in tumor versus normal tissue: potential exploitation for the treatment of cancer. Cancer research. 56 (6), 1194-1198 (1996).
- Webb, B. A., Chimenti, M., Jacobson, M. P., Barber, D. L. Dysregulated pH: a perfect storm for cancer progression. Nature Rev. Cancer. 11 (9), 671-677 (2011).
- Gatenby, R. A., Gillies, R. J. Why do cancers have high aerobic glycolysis? Nature reviews. Cancer. 4 (11), 891-899 (2004).
- McBrian, M. A., et al. Histone acetylation regulates intracellular pH. Mol Cell. 49 (2), 310-321 (2013).
- Damaghi, M., et al. Chronic acidosis in the tumour microenvironment selects for overexpression of LAMP2 in the plasma membrane. Nat Commun. 6, 8752 (2015).
- Corbet, C., et al. Acidosis Drives the Reprogramming of Fatty Acid Metabolism in Cancer Cells through Changes in Mitochondrial and Histone Acetylation. Cell Metab. 24 (2), 311-323 (2016).
- Chen, J. L., et al. The genomic analysis of lactic acidosis and acidosis response in human cancers. PLoS genetics. 4 (12), e1000293 (2008).
- Kondo, A., et al. Extracellular Acidic pH Activates the Sterol Regulatory Element-Binding Protein 2 to Promote Tumor Progression. Cell Rep. 18 (9), 2228-2242 (2017).
