نقدم هنا بروتوكولا لتحليل تكوين البروتين البروتين الأصلي كبير: البروتين والبروتين: مجمعات الحمض النووي من الاغتصاب البذور الزيتية (نابوس باء) لحاء نضحة باستخدام نهج 3D polyacrylamide هلام التفريد (صفحة) يجمع بين الأزرق أصلي (BN) مع صفحتين يشوه متبوعاً بالهوية الجماعية والمطيافيه.
أخذ العينات في لحاء النباتات العليا غالباً شاقة وتعتمد إلى حد كبير على الأنواع النباتية. ومع ذلك، يمكن تحقيق دراسات البروتين تحت ظروف يشوه في الأنواع النباتية المختلفة. البروتين: البروتين الأصلي والبروتين: مجمعات الحمض النووي من عينات لحاء قد حتى الآن نادراً ما تم تحليلها، على الرغم من أنها قد تؤدي أدواراً هامة في الحفاظ على هذه المقصورة المتخصصة أو يشير إلى مسافات بعيدة. جمعيات الجزيئية كبيرة يمكن أن تكون معزولة التفريد جل أصلي أزرق (BN-الصفحة) باستخدام. يمكن فصل مكوناتها البروتين بواسطة كبريتات صوديوم لاحقة دوديسيل صفحة (الحزب الديمقراطي الصربي صفحة). بيد المشترك تهاجر البروتينات مع الأوزان الجزيئية مماثلة، ما يمكن أن تعيق تحديد البروتين من الطيف الكتلي. الجمع بين BN-الصفحة مع اثنين يشوه جل التفريد خطوات مختلفة، أي تريس-تريسيني-اليوريا والحزب الديمقراطي الصربي صفحة، يمكن فصل إضافية من البروتينات وفقا لما هيدروفيليسيتي/هيدروفوبيسيتي ومما يزيد القرار ونجاح لتعريف البروتين. بل أنه يسمح تمييز البروتينات التي تختلف فقط في تلك التعديلات بوستترانسلاشونال. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تطبيقها النشاف الأزرق الشمالي الأصلي لتحديد عناصر الجيش الملكي النيبالي في مجمعات الجزيئات. نظهر أن لدينا بروتوكول مناسبة لكشف البروتين وعناصر الجيش الملكي النيبالي من البروتين: البروتين الأصلي ومجمعات ribonucleoprotein (رنب) التي تحدث في عينات لحاء. الجمع بين زرقاء الصفحة الأصلية مع خطوتين الصفحة يشوه مختلفة يمكن أن تساعد على الفصل بين أنواع مختلفة من المجمعات الكبيرة من البروتين، وأيضا من معدل زيادة تحديد مكوناتها من الطيف الكتلي. وعلاوة على ذلك، البروتوكول متينة بما فيه الكفاية لكشف في الوقت نفسه يحتمل أن تكون منضمة الأحماض النووية داخل مجمعات البروتين وحيد.
قنوات مسافات طويلة لحاء ضرورية لتوزيع المواد الغذائية العضوية في النباتات العليا، ولكن تشارك أيضا في تنظيم العديد من العمليات المختلفة هامة للنمو والتنمية والدفاع الممرض والتكيف مع السلبية الظروف البيئية. إلى جانب الصغيرة المستجيبة مثل أيونات أو فيتوهورمونيس أو نواتج الأيض أنفسهم، ظهرت مؤخرا الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات والكشف كإشارات محتملة.
وقد أظهرت الدراسات أن تحميل لحاء البروتينات حجم التابعة والخاضعة للرقابة باستثناء الحد الأقصى لحجم (SEL) وحدات المسام بلاسموديسمال ربط الخلايا رفيق (CC) ومنخل العناصر (جنوب شرق) التي عادة في حدود 10-> 67 كاتشين1 , 2 , 3-بيد أن على الرغم من هذه القيود حجم البروتينات أكبر والبروتين تم العثور على مجمعات داخل منظومة لحاء تتحدى فكرة استبعاد حجم4وخسارة غير محدد حتى البروتينات من CC إلى سراج الدين قد اقترح5 .
مجمعات ريبونوكليوبروتين مولتيبروتين، فضلا عن كبيرة تلعب دور محوري في تخليق الحيوي والحفاظ على سلامة هيكل الخلية6. وهناك دليل على وجود مجمعات البروتين-بروتين و ribonucleoprotein لحاء موبايل7من4،، ولكن حتى الآن هو يعرف سوى القليل عن وظيفتها. في عناصر غربال لحاء تورطت البروتين: البروتين ومجمعات رنب مع النقل مسافات طويلة و/أو إشارات8،9. مطلوب لكشف المهام للمجمعات ذوبانها، دراسة تركيبتها تحت اختلاف البيئة أو التشديد على الظروف. ولتحقيق ذلك، مجمعات السكان الأصليين يجب أن تكون معزولة ومكوناتها يجب أن تكون مفصولة بالقرار كافية.
لعزل مجمعات عالية الوزن الجزيئي من لحاء، أنها الأولى اللازمة للحصول على عينات ساب كافية كما وكيفا. هذه التقنية التي يمكن استخدامها لأخذ العينات لحاء يعتمد على الأنواع النباتية للفائدة. توجد ثلاثة أساليب رئيسية للحصول على ساب لحاء 10: ستيليكتومي الحشرات11ويسرت يدتا نتحه12نتحه عفوية13.
يمكن الحصول على عينات لحاء من نبات التمويل (ألف-التمويل)، المصنع النموذجي الرئيسية في المختبرات في جميع أنحاء العالم، فقط بتيسير يدتا نتحه أو المن ستيليكتومي14،15. كلتا الطريقتين تؤدي إلى ساب لحاء مخففة جداً أو كميات منخفضة جداً من العينة. يسر يدتا نتحه هو أيضا عرضه للتلوث، وقد لا تمثل تركيبة لحاء الحقيقي16. نتحه لحاء عفوية يقتصر على زراعة الأنواع مثل والقرعيات وترمس أو يوكا، حيث قطع أجزاء النبات يؤدي إلى انبعاث ساب لحاء التي يمكن جمعها بسهولة13،،من1718عفوية، 19. أنشأنا مؤخرا الاغتصاب البذور الزيتية (كرنب نابوس) كنظام نموذج مناسب لتحليل لحاء، وأنه يمكن الحصول على قريب من ألف-التمويل وميكروليتيرس عدة من لحاء ساب من الشقوق الصغيرة التي قد تبين أن أن درجة نقاء عالية4،،من820. وعلاوة على ذلك، تسلسل الجينوم نابوس (ب) صدر في عام 201421.
باستثناء ستيليكتومي أولاً بأول، تشمل جميع أساليب جمع لحاء وصف الأضرار المحيطة بالانسجة في الموقع لأخذ العينات، وقد تتغير تركيبة ساب لحاء استجابة للإصابة. ولذلك من الضروري للتحقق من جودة عينات لحاء، بغض النظر عن طريقة أخذ العينات المطبقة. وهناك أساليب مختلفة لمراقبة الجودة لجمع لحاء ساب، مثلاً بتحديد نشاط22،23رناسي، الرايت-بكر مع الإشعال ضد روبيسكو8،24أو تحليل السكر تكوين8.
يمكن تطبيق أساليب مختلفة لعزل وفصل مجمعات البروتين، بما في ذلك حجم الاستبعاد اللوني أو تنبيذ فائق الكثافة السكروز أو نموذج الترشيح من خلال الأغشية مع خفض الوزن الجزيئي متميزة العرضية. ومع ذلك، لا تسمح هذه النهج عالية الدقة. تقنية تسمى الصفحة الأصلية الزرقاء (BN-صفحة)، وصف لأول مرة من Schägger وآخرون. 25، أعلى فيما يتعلق بالقرار. أنها استخدمت بنجاح لتحديد الأوزان الجزيئية للمجمعات الكبيرة من البروتين الأصلي من العضيات المختلفة أو من ليساتيس الخلوية وعلى وفرة نسبية26،27.
لتوضيح تكوين مجمع من مجمعات البروتين، من الضروري فصل المكونات الفردية تحت يشوه الشروط، مما يؤدي إلى التفكيك الكامل لمكونات معقدة. ويمكن تحقيق ذلك ببعد ثاني من الحزب الديمقراطي الصربي صفحة 28،29 ، أو لتحقيق دقة أعلى، ببعد ثاني isoelectric التركيز (الضمنية) تليها third dimension من الحزب الديمقراطي الصربي صفحة30 وتحديد اللاحقة البروتينات باستخدام الطيف الكتلي.
في هذا البروتوكول، يصف لنا لأخذ عينات ساب لحاء نقية من النباتات نابوس (ب) وتحليل البروتين المجمعات من هذه العينات لحاء استخدام نهج الغرواني الكهربي 3D الجمع بين الجبهة الوطنية-الصفحة مع تريس-تريسيني-اليوريا-الصفحة، والحزب الديمقراطي الصربي صفحة. يتم تعريف مكونات معقدة البروتين المنفصلين عن ذويهم في وقت لاحق استخدام الطيف الكتلي. وبالإضافة إلى ذلك، نقدم الأزرق الأصلي شمال النشاف كأسلوب يسمح الكشف عن الكشف في كبيرة رنب المجمعات4، توسيع نطاق تطبيق النهج.
لحاء حجرة الفوائد المرتفعة، حيث يشكل مسار النقل الرئيسية فوتواسيميلاتيس، وأيضا ضروري ليشير إلى مسافات طويلة بين مصنع مختلف أجزاء9،،من2034، 35. بالإضافة إلى جزيئات صغيرة، قد تورط الجزيئات الكبيرة مثل البروتينات والكشف مع صيانة لحاء وإرسال الإشارات4،7،8. تحليل تكوين لحاء مقيد بإمكانية وصول محدودة إلى عينات لحاء في معظم الأنواع النباتية. تقنية ستيليت الحشرات هو التطبيق على نطاق واسع، ولكن تجريبيا تطلبا وينتج كميات صغيرة جداً من لحاء عينات11. هو أسلوب سهل واحد يستخدم لأخذ العينات لحاء نتحه يدتا-ويسرت12. يدتا يخلب أيونات ديفالينت مثل الكالسيوم وهكذا يمنع إغلاق لوحات غربال فالبروتينات وكلوس. أنها سهلة الاستخدام، ولكن هو عرضه للتلوث بواسطة الخلايا التالفة وهي تضعف العينات. المستنفدة الأيونات divalent حسب يدتا يمكن أن يؤدي أيضا إلى انهيار للمجمعات القائمة. ومع ذلك، فإنه يسمح أخذ العينات من مجموعة واسعة من الأنواع بما في ذلك المصنع النموذجي التمويل (أ)15. نتحه عفوية من لحاء ساب يحدث فقط في عدد قليل من الأنواع النباتية. هو أسلوب الغازية التي تنطوي على ضرر ذي شأن من الأنسجة النباتية10. أنشأنا مؤخرا نابوس (ب) كنوع نموذج لدراسة النقل مسافات طويلة4،8،20. هنا، ساب لحاء يمكن تذوق من شقوق صغيرة، مما يقلل من آثار إصابة ومصادر التلوث.
باستخدام تقنيات أخذ العينات المختلفة، تم التحقيق في البروتين من لحاء عينات من الأنواع النباتية المختلفة في السنوات الأخيرة7،،من817،،من3637، 38،39. هذه الدراسات البروتين، استخرجت البروتينات وعجلت تحت ظروف يشوه و ولذلك لا تسمح باستنتاجات حول البروتين: البروتين والبروتين: التفاعلات الحمض النووي الحالية تحت ظروف السكان الأصليين. Co-إيمونوبريسيبيتيشن (كويب) وفحوصات تراكب أشارت إلى أن ريبونوكليوبروتين رئيسية معقدة قد تكون موجودة في لحاء sap من اليقطين40، لكنه وثبت عدم وجود أي مجمعات الجزيئات تحت ظروف أصلي داخل نظام لحاء.
الأزرق في الصفحة الأصلية، عرضته Schägger et al. 26، بالاقتران مع الخطوات اللاحقة جل الاستبانة التفريد تمكين فصل المكونات الفردية للمجمعات الكبيرة من البروتين. استخدام تحليلات 3D-الصفحة الأصلية نابوس باء- لحاء نضحة، نحن يمكن أن مؤخرا تثبت أن عدة الوزن الجزيئي عالية البروتين: البروتين ومجمعات رنب موجودة في لحاء عينات وهي نشطة انزيماتيكالي4. أساليب بديلة لعزل البروتين المجمعات فضلا عن رنبس مثل حجم الاستبعاد اللوني قد تكون موجودة، ولكن الفشل فيما يتعلق بالقرار بالمقارنة مع الجبهة الوطنية-الصفحة. علاوة على ذلك، لنوعية معقولة من الفصل المعقدة، حجم الاستبعاد العمود المصفوفات يتعين تكييف وفقا للأوزان الجزيئية المعقدة الشاملة قيد التحقيق. تحليل مجمعات مختلفة الحجم ولذلك تتطلب أنواع مختلفة من الأعمدة التي هي تكلفة مكثفة ولا يسمح كقوة تركيز عالية كصفحة الجبهة الوطنية.
وتشمل الخطوات الحاسمة لتحليل المجمعات من نابوس (ب) المبلغ الإجمالي لساب لحاء المستخدمة كابتداء من المواد. على الأقل 600 ميليلتر من عينة لحاء ضرورية، ويمكن الحصول عليها من خمس محطات الرطبة جيدا. 3D-صفحة والجبهة الشمالية النشاف من الضروري بدء هلام BN الأولية مع كمية كافية من عينات لحاء. ولتحقيق ذلك، عينات لحاء تتركز حتى يمكن تحميل 20 إلى 30 ميكروغرام من البروتين في كل منهما جيدا وعلى الأقل تريبليكاتيس من نفس العينة يتم تشغيلها في نفس الوقت. خفض تركيزات منخفضة جداً أو مرتفعة جداً في الكشف عن مجمعات (الشكل 3). عينات لحاء حاجة يمكن جمعها في أنابيب رد فعل على الجليد وينبغي تخزين المجمدة لاستخدامها لاحقاً لتجنب تدهور البروتين ودوران. مثبطات البروتياز عثر عليها في جميع بروتيوميس لحاء تحليلها، ولكن أيضا وصف بروتوزوم نشط بشكل كامل في لحاء نابوس باء-4. وعلاوة على ذلك، حجم وتكوين عينات لحاء تعتمد على الوقت-نقطة العينة، والظروف البيئية10. ولذلك يجب الحرص على جمع اليوم في ظروف مماثلة وفي الوقت نفسه. علاج الإجهاد (مثل الجفاف) يمكن أن تقلل من مقدار لحاء التي يمكن جمعها. لتحديد البروتينات وحيدة من الطيف الكتلي، وملزمة للحد من التلوث الكيراتين ممكن عن طريق ارتداء القفازات طوال الوقت. الكيراتين يؤدي إلى إشارات إضافية من خلال التحليل الشامل المواصفات ويعرقل تحديد البروتين. تشغيل BN-الصفحة في جهد العالي أو في درجة حرارة الغرفة يمكن أن تؤدي إلى تدفئة جل الذي قد يؤدي إلى تفكيك مجمعات الهشة.
البروتوكول المعروضة هنا مناسبة لتحليل البروتين: البروتين المجمعات. نعرض أيضا أنه يمكن استخدامه للكشف عن الكشف المحددة الواردة في المجمعات بالتوازي. ولتحقيق ذلك، قدمنا مؤخرا بروتوكولا للجبهة الشمالية النشاف4. الكشف معرضة للتدهور بالتلوث رناسي. للحد من هذا التدهور ديبك المعالجة، المياه ينبغي أن تستخدم.
وتشمل القيود الرئيسية أسلوب عرض تقدير الوزن الجزيئي للبروتين المجمعات مفصولة بواسطة BN-الصفحة، حيث يعتمد سلوك الهجرة في الحجم والشكل وحتى على تعديلات مجمعات31، بوسترانسلاشونال 41. تقدير حجم مجمعات رنب أكثر تعقيداً بسبب تأثير الأحماض النووية على سلوك الهجرة. فإنه يمكن أيضا عدم منع أن المجمعات من نفس حجم ترحيل شارك في الفرقة واحد واحد. وهذا يمكن أن يؤدي إلى التنبؤ الخاطئ بالتراكيب المعقدة. وللتحقق من التفاعلات الملاحظة مع تقنيات تكميلية، مثل فحوصات الفنية4، قد يكون ضروريا. أيضا قد فقدت البروتينات المرتبطة فقط ضعيف أو عابر لمجمع الجزيئات في المخزن المؤقت للجبهة الوطنية المستخدمة. لتجنب هذا الأمر، يمكن أن تكون العينات كروسلينكيد، ما يمكن أن يؤدي أيضا إلى النتائج الملموسة، أو يمكن أن يمنع تحديد البروتين، أو يمكن أن يكون الأمثل شروط المخزن المؤقت.
على النقيض من صفحة 2D الكلاسيكية، المزيج من اليوريا، والحزب الديمقراطي الصربي-صفحة يسمح الفصل وفقا هيدروفوبيسيتي والوزن الجزيئي بدلاً من نقطة isoelectric (pI) والوزن الجزيئي 28، ولا يحد من الانفصال إلى البروتينات وتتراوح بي محددة. بروتينات مماثلة إلى الكلاسيكية 2D-صفحة، مفصولة تظهر كبقع واحدة، ولكن على قطري خط 4،28 (الشكل 5، الشكل 6). البروتينات مسعور أكثر تظهر في بقع أعلاه هذا قطري، في حين تم العثور على أكثر من البروتينات ماء أسفل السطر28. تركيزات بولياكريلاميدي المستخدمة في هذا البروتوكول سيتم فصل البروتينات بين 25 إلى 80 كاتشين جيدا. للسماح بفصل البروتينات أصغر أو أكبر في بولياكريلاميدي يمكن أن تختلف تركيز أو يمكن استخدام المواد الهلامية المتدرجة في البعد الثالث. مكونات مجمع الرابع (الشكل 3) مفصولة بواسطة 3D-صفحة (الشكل 6) تم قطع، التربسين هضمها وتحليلها بواسطة الطيف الكتلي. وادي هذا إلى تحديد عدة الحمض الريبي النووي النقال ليجاسيس. مكونات المجمعات الأخرى قد نشرت مؤخرا 4. 3D-الصفحة مكن الفصل بين ليجاسيس مختلفة، هي: اسبارتاتي، أسباراجين، ثريونين، ligases يسين وجليكاين، مع الأوزان الجزيئية مماثلة (الجدول 3). استخدام تحقيق خاصة بالحمض الريبي النووي النقال ميثيونين، نحن كانت قادرة على الكشف عن منضم يحتمل أن الحمض الريبي النووي النقال داخل الرابع معقدة، ولكن لا تميز إذا كان طول كامل الحمض الريبي النووي النقال أو أجزاء الحمض الريبي النووي النقال في المجمع مع المجسات المستخدمة. قد عينات للتحقق إذا كانت الأحماض النووية ملزمة حقاً داخل المجمع وعدم ترحيل المشترك، مبطلات يهضم ساب لحاء بمثابة ضوابط الهجرة مناسبة.
كان قد تردد في وقت سابق أن ترجمة البروتين يمكن أن يحدث داخل الأنابيب غربال لحاء، حيث وجدت تقريبا معظم مكونات الريبوسوم كاملة، فضلا عن العوامل استطالة في لحاء عينات4،7. ويبدو لنا العثور على الحمض الريبي النووي النقال و ligases الحمض الريبي النووي النقال لدعم هذه الفكرة. ومع ذلك، الحمض الريبي النووي النقال الشظايا موجودة في لحاء العينات من اليقطين قد أظهرت أن تكون مثبطات قوية للترجمة42 وريبوسوم الفنية ويبدو أن غياب4، مما يوحي بأن الترجمة لا يمكن أن يحدث.
أخذت معا، يسمح البروتوكول المعروضة هنا فصل البروتين: البروتين الأصلي وحتى رنب في مجمعات من عينات لحاء وفصل وتحديد المكونات الفردية الخاصة بهم بدقة عالية. تطبيق هذا الأسلوب يتيح اكتشاف البروتين رواية ومجمعات رنب في عينات لحاء ولذلك يمكن توضيح مهام جديدة في هذه المقصورة محطة متخصصة للغاية.
The authors have nothing to disclose.
ونحن نشكر جنيفر Deke وزارزينسكا Urszula للدعم العلمي. هذا العمل كان يدعمها ماليا “منحة التكامل الوظيفي” (CIG، 0734 PCIG14-GA-2013-63) من “المفوضية الأوروبية” ضمن البرنامج الإطاري السابع ومنح لف-GK06 ‘ديليجرة’ (Landesforschungsförderung هامبورغ)، ومنحة DFG (كه DFG 856_6-1) منحت لكية.
1.5 mL reaction tubes | Eppendorf | 30120086 | |
10 well comb for SDS PAGE, thickness 1 mm | BioRad | 1653359 | |
2-Propanol | AppliChem | 131090 | |
30 % Acrylamide-bisacrylamide solution (29:1) solution | BioRad | 1610156 | |
30 % Acrylamide-bisacrylamide solution (37.5:1) solution | BioRad | 1610158 | |
96 % Ethanol | Carl Roth | P075 | |
Acetic acid | Carl Roth | 6755 | |
Agarose | Lonza | 50004 | |
Aluminum sulfate-(14-18)-hydrate | AppliChem | 141101 | |
Ammonium peroxodisulfate (APS) | Carl Roth | 9592.3 | |
Bis-Tris | AppliChem | A3992 | |
Boric acid | AppliChem | A2940 | |
Bromophenol blue | AppliChem | A2331 | |
Centrifugal concentrators e.g. Vivaspin 500 (Mwco 10 kDa) | Sartorius | VS0102 | |
Chemiluminescent Nucleic Acid Detection Module Kit | Thermo Fisher Scientific | 89880 | |
Chromatography papers e.g. 3 mm CHR | Whatman | 3030-153 | |
CoolBox M30 System | Biocision | BCS-133 | |
Coomassie brilliant Blue G-250 | AppliChem | A3480 | |
Diethyl pyrocarbonate (DEPC) | AppliChem | A0881 | |
Dithiothreitol (DTT) | AppliChem | A1101 | |
DNase I | AppliChem | A3778 | |
Ethanol abs. | AppliChem | A3693 | |
Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA) | AppliChem | A1103 | |
Gel Imaging system e.g. Chemidoc Touch | BioRad | 1708370 | |
GeneRuler 1kb plus | Thermo Fisher Scientific | SM1331 | |
Glycerol | AppliChem | 141339 | |
Glycine | AppliChem | 131340 | |
Heating block TS1 | Biometra | 846-051-500 | |
Hybridization oven e.g. GFL Hybridization Incubator 7601 | GFL | 7601 | |
Hypodermic needle (0.8 mm) | B Braun | 4658309 | |
IPG gel comb, thickness 1 mm | BioRad | 1653367 | |
Labeling of RNA e.g.Biotin 3'end DNA Labeling Kit | Thermo Fisher Scientific | 89818 | |
Native gradient gel e.g. Novex NativePAGE 4–16% Bis-Tris protein gel | Invitrogen | BN1002BOX | |
Nylon membrane e.g. Hybond-N+ | Amersham Pharmacia | RPN203B | |
Ortho-phosphoric acid | Carl Roth | 6366.1 | |
PageRuler prestained protein ladder | Thermo Fisher Scientific | 26616 | |
Power supply for Gel electrophoresis EPS | Amersham Pharmacia | 18-1130-01 | available from GE Healthcare |
RNA Cleanup Kit | Qiagen | 74204 | |
Semi dry blot e.g. Fastblot 43B semi dry Blot | Biometra | 846-015-100 | |
Sodium chloride (NaCl) | AppliChem | A1149 | |
Sodium dodecyl sulfate (SDS) | AppliChem | 142363 | |
Synthesis of cDNA e.g. RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit | Thermo Fisher Scientific | K1621 | |
Tetramethylethylenediamine (TEMED) | AppliChem | A1148 | |
Tricine | AppliChem | A3954 | |
Tris | AppliChem | A1086 | |
Tri-sodium citrate dihydrate | AppliChem | A3901 | |
TRIzol Reagent | Thermo Fisher Scientific | 15596026 | |
ULTRAhyb Ultrasensitive Hybridization Buffer | Thermo Fisher Scientific | AM8670 | |
Urea | AppliChem | A1360 | |
UV Crosslinker e.g. Stratalinker 2400 | Agilent | NC0477671 | from Fisher Scientific |
Vertical electrophoresis apparatus e.g.The XCell SureLock Mini-Cell or Mini-Protean III System | Thermo Fisher Scientific or BioRad | EI0001 or 1658004 | |
Wipers e.g. KIMWIPES Delicate Task Wipers | Kimberly-Clark | 34120 |