Summary
इस प्रोटोकॉल एक सरल और उपयोगी विधि का वर्णन करने के लिए परिधीय रक्त और सीरम की दुकान ऐसे एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपता (SNP) मूल्यांकन और एलिसा परख के रूप में बहाव के विश्लेषण के लिए/
Abstract
रक्त नमूना गुणवत्ता वास्तविक समय पीसीआर या एलिसा के रूप में सटीक बहाव का विश्लेषण सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है । जैविक सामग्री का सही भंडारण reproducible और विश्वसनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए प्रारंभिक बिंदु है । सभी नमूनों का इसी तरह से ब्लड कलेक्शन से लेकर स्टोरेज तक में इलाज होना चाहिए । विश्लेषण करने के लिए किया जा करने के लिए पर निर्भर करता है, पूरे रक्त और सीरम नमूने-20 डिग्री सेल्सियस या-८० ° c उपयोग तक संग्रहित किया जाना चाहिए. मल्टीपल फ्रीज-गल से बचने के लिए रक्त/सीरम के नमूने भी aliquoted होने चाहिए । एक अंय महत्वपूर्ण मुद्दा शिपमेंट के दौरान एक प्रयोगशाला से दूसरे करने के लिए नमूना शर्तों है । यदि सूखी बर्फ उपलब्ध नहीं है या शिपमेंट कुछ दिनों से अधिक समय लेता है, वैकल्पिक दृष्टिकोण की जरूरत है । एक विकल्प के लिए रक्त संग्रह के लिए फिल्टर पेपर का उपयोग है । यहां, हम रक्त और सीरम नमूना संग्रह है कि सूखे रक्त धब्बे (डीबीएस) और सूखे सीरम स्पॉट (DSS) का लाभ लेता है के लिए एक विधि का प्रस्ताव । हम प्रक्रिया विकसित वास्तविक समय पीसीआर द्वारा कुछ एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपताओं (SNPs) के बहाव मूल्यांकन के लिए डीबीएस से डीएनए निकालने के लिए । हम भी एक एलिसा DSS से eluted प्रोटीन से शुरू परख अनुकूलित । इस विधि अंय एलिसा परख या प्रोटीन का मूल्यांकन प्रक्रियाओं के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है ।
Introduction
कैंसर जैव मार्क्स में अनुसंधान का मुख्य उद्देश्य नए जैविक मापदंडों की पहचान है कि निदान के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, रोगी पूर्वानुमान की भविष्यवाणी के लिए, और निर्धारित करने के लिए कि क्या एक मरीज को एक विशिष्ट उपचार का जवाब होगा । यह अनुसंधान क्षेत्र अभिनव कैंसर उपचार की खोज के लिए मौलिक है और सिलवाया उपचार में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है ।
प्रक्रिया के दौरान बाहर किया गया है के प्रत्येक कदम के लिए मार्की पहचान और मांयता विश्वसनीय और reproducible होना चाहिए । शोधों के अनुसार शोध की सफलता के लिए एक आधारशिला रक्त और सीरम जैसे जैविक नमूनों का सही भंडारण है । यह उच्च गुणवत्ता जैविक सामग्री है कि आणविक जीव विज्ञान प्रयोगों या प्रोटीन परख प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता प्राप्त करने की दिशा में पहला कदम है ।
Multicenter अध्ययन अक्सर पर्याप्त मजबूत डेटा प्राप्त करने के लिए रोगियों की भर्ती करने की जरूरत है । नहीं सभी संस्थानों-८० डिग्री सेल्सियस पर नमूनों की दुकान या सूखी बर्फ में अंय अंतरराष्ट्रीय केंद्रों के लिए नमूने भेजने में सक्षम हैं । रक्त संग्रह के लिए फिल्टर पेपर का उपयोग रक्त और सीरम के भंडारण के लिए एक सरल तरीका है और इसके नमूनों की तत्काल जमने की आवश्यकता नहीं है1,2. रक्त या सीरम की एक बूंद कागज पर देखा जा सकता है, रात भर सूखी और फिर कमरे के तापमान1,2पर 14 दिनों के लिए संग्रहीत करने के लिए छोड़ दिया । इससे शोधकर्ताओं को नमूनों को अन्य प्रयोगशालाओं में भेजने का समय मिलता है । सूखे रक्त धब्बे (डीबीएस) और सूखे सीरम स्पॉट (DSS) का उपयोग इस प्रकार विकसित और विकासशील देशों में संस्थानों के बीच सहयोग को सरल कर सकता है ।
उपयोग की अपनी आसानी को देखते हुए, डीबीएस नमूना व्यापक रूप से सीरम वैज्ञानिक या आनुवंशिक बहाव के विश्लेषण के लिए परख के कई प्रकार में प्रयोग किया जाता है । उदाहरण के लिए, अतीत में, डीबीएस अक्सर विकासशील देशों में एचआईवी स्क्रीनिंग के लिए इस्तेमाल किया गया1,2,3,4,5। इस भंडारण विधि का एक और लाभ यह है कि रक्त के नमूनों को उंगली से एकत्र किया जा सकता है चुभन, इस प्रकार नवजात स्क्रीनिंग परीक्षण के लिए इसके उपयोग को सक्षम करने 6,7,8. आसान नमूना हैंडलिंग और परिवहन डीबीएस के आगे लाभ कर रहे हैं, विशेष रूप से दूरदराज के स्थलों में एकत्र नमूनों के लिए जहां कोई प्रयोगशाला उपकरण है । पिछले एक प्रकाशन में, हम डीबीएस और DSS का इस्तेमाल किया कोकेशियान और अफ्रीकी रोगियों9की एक श्रृंखला में विटामिन डी और विटामिन डी बाध्यकारी प्रोटीन (DBP) का परीक्षण । हमारे अफ्रीकी सहकर्मी सूखी बर्फ प्राप्त करने में सक्षम नहीं थे । जैविक मार्करों की तुलना करने के लिए दो जातीय आबादी के बीच विटामिन डी मार्ग में अंतर को समझने के लिए, हम आगे मानक शर्तों के तहत संग्रहीत नमूनों का उपयोग कर प्रक्रिया में सुधार और फिल्टर कागज पर । डीबीएस/DSS प्रक्रिया के अनुकूलन के बाद, हम दोनों साथियों में रोगी सीरम में DBP और विटामिन डी का विश्लेषण करने में सक्षम थे । हम भी कोकेशियान के लिए पूरे रक्त से डीएनए निष्कर्षण के बाद एकल न्यूक्लियोटाइड बहुरूपताओं (SNPs) के एक नंबर का मूल्यांकन किया और9अफ्रीकियों के लिए डीबीएस से । वर्तमान प्रोटोकॉल उच्च गुणवत्ता वाले रक्त के नमूनों की अनुमति देता है कि आणविक जीवविज्ञान से एलिसा परख को लेकर बहाव के विभिंन प्रकारों को प्रभावित किए बिना कमरे के तापमान पर संग्रहीत किया जाना है । यह उपयोग के लिए सिफारिश की है multicenter अध्ययन में जैविक सामग्री या केंद्रों है कि मानक भंडारण की स्थिति के लिए सुविधाएं नहीं है के लिए प्रबंधन । निम्न प्रोटोकॉल इन ऑप्टिमाइज़ की गई कार्यविधियों की परिणति का प्रतिनिधित्व करता है ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
परिधीय रक्त और सीरम एकत्र किए गए थे और स्वस्थ दाताओं और रोगियों को जो अध्ययन में भाग लेने के लिए लिखित सूचित सहमति दी से संग्रहीत । अध्ययन प्रोटोकॉल हेलसिंकी की १९६४ घोषणा में निर्धारित नैतिक मानकों के अनुसार स्थानीय नैतिकता समिति द्वारा अनुमोदित किया गया था ।
1. डीबीएस में रक्त संग्रहण
-
रक्त नमूना संग्रह
- ५.४ मिलीग्राम ethylenediaminetetraacetic एसिड (EDTA) के साथ एक 3 मिलीलीटर ट्यूब में परिधीय रक्त के नमूने के 3 मिलीलीटर लीजिए ।
नोट: जितनी जल्दी हो सके डीबीएस के रूप में रक्त की दुकान और 8 घंटे के भीतर । - सेवर कार्ड के नीचे दाहिने हाथ के कोने पर रोगी कोड संख्या लिखें ।
- ध्यान से एक 5 मिलीलीटर पिपेट के साथ रक्त reसस्पेंड ।
- ५.४ मिलीग्राम ethylenediaminetetraacetic एसिड (EDTA) के साथ एक 3 मिलीलीटर ट्यूब में परिधीय रक्त के नमूने के 3 मिलीलीटर लीजिए ।
-
डीबीएस पर खून खोलना
- पिपेट और रक्त की एक जगह (५० µ एल) सेवर कार्ड (सामग्री की मेज) पर एक 50-200 µ एल टिप के साथ हस्तांतरण ।
- दोहराएँ चरण 1.2.1. के लिए कुल 3 – 5 खून के धब्बे हैं । पुराने टिप त्यागें और प्रत्येक रक्त aliquot के लिए एक नया एक ले ।
- डीबीएस छोड़ एक खुले गैर शोषक सतह पर एक क्षैतिज स्थिति में कमरे के तापमान पर रात भर सूखी, सीधे धूप से परहेज । ब्लड सुखाने की सुविधा के लिए सेवर कार्ड का कवर खुला छोड़ दें ।
नोट: किसी भी हवा या धूल में इस सुखाने कदम के दौरान कण बहाव अनुप्रयोगों को प्रभावित नहीं करता है । - जलशुष्कक के साथ एक प्लास्टिक बैग में कमरे के तापमान पर कार्ड का उपयोग जब तक स्टोर ।
2 डीएनए निष्कर्षण के अनुसार डीबीएस से शुरू डीएनए निष्कर्षण किट डेटापत्रक (खंड सूखे रक्त स्थानों के लिए)
-
नमूना तैयारी
- कार्ड से 3 सूखे रक्त धब्बे का प्रयोग करें । कार्ड से सूखे खून के धब्बे के प्रत्येक कट और चिमटी के साथ कार्ड से अलग । अलग सूखे खून के धब्बे छोटे टुकड़ों में काटें (लगभग 1 मिमी का व्यास) ।
- एक १.५ मिलीलीटर केंद्रापसारक ट्यूब में छोटे टुकड़े प्लेस ।
-
नमूना पाचन
- lysis बफर 1 के १८० µ एल जोड़ें किट में प्रदान की (सामग्री की मेज) ट्यूब के लिए । Proteinase K के 20 µ l को जोड़ें । १.५ एमएल ट्यूब रक्त देखा कार्ड के साथ में pipetting से पहले Proteinase कश्मीर के साथ lysis बफर 1 मिश्रण नहीं है । भंवर द्वारा मिक्स ।
- एक thermoincubator में ट्यूब प्लेस और ६० मिनट के लिए ५६ ° c पर मशीन । यदि thermoincubator एक शेखर के साथ सुसज्जित नहीं है, भंवर के लिए हर 10-15 मिनट के लिए ंयूनतम 10 एस, देखभाल नहीं करने के लिए नमूना कमी के तापमान चलो । संक्षेप में ट्यूबों के ढक्कन से बूँदें हटाने के लिए ।
-
धो कदम
- जोड़ें २०० µ lysis बफर 2 के एल (सामग्री की मेज) और भंवर के लिए 10 एस ।
- एक thermomixer या गर्म कक्षीय मशीन में ट्यूबों प्लेस और 10 मिनट के लिए ७० ° c में मशीन । thermoincubator एक शेखर के साथ सुसज्जित नहीं है, तो नमूने के नमूनों की कमी के तापमान को कम करने के लिए नहीं होने की देखभाल करने के लिए एक बार के नमूनों के लिए ।
- दोहराएँ चरण 2.3.1. lysate के ४०० µ l को १.५ एमएल ट्यूब से रेफरेंस कॉलम (टेबल ऑफ मटेरियल्स) में ट्रांसफर करें । 1 मिनट के लिए ६,००० x g पर स्तंभ केंद्रापसारक ।
- एक नया 2 मिलीलीटर संग्रह ट्यूब में रेफरेंस कॉलम प्लेस और पुराने एक त्याग ।
- जोड़ें ५०० µ धो 1 1 मिनट के लिए (सामग्री की तालिका) और ६,००० x g पर केंद्रापसारक बफर ।
- एक नया 2 मिलीलीटर संग्रह ट्यूब में कॉलम प्लेस और पुराने एक त्यागें ।
- धो 2 बफर के ५०० µ एल जोड़ें (सामग्री की मेज) और 1 मिनट के लिए ६,००० x g पर केंद्रापसारक ।
- एक नया 2 मिलीलीटर संग्रह ट्यूब में कॉलम प्लेस और पुराने एक त्यागें ।
- २०,००० एक्स जी में 3 मिनट के लिए झिल्ली सूखी केंद्रापसारक ।
-
रेफरेंस स्टेप
- एक नया १.५ एमएल केंद्रापसारक ट्यूब में कॉलम प्लेस और संग्रह ट्यूब त्यागें ।
- जगह आसुत जल के ५० µ एल झिल्ली के केंद्र पर । कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए मशीन ।
- 1 मिनट के लिए २०,००० x g पर ट्यूब केंद्रापसारक. eluate इकट्ठा और यह झिल्ली के केंद्र पर फिर से जगह है ।
- 1 मिनट के लिए २०,००० x g पर ट्यूब केंद्रापसारक. झिल्ली त्यागें ।
- एक spectrophotometer का उपयोग डीएनए एकाग्रता उपाय ।
- का उपयोग करें जब तक-20 डिग्री सेल्सियस पर डीएनए स्टोर ।
नोट: डीबीएस से निकाले गए डीएनए वास्तविक समय पीसीआर या डीएनए सैंज अनुक्रमण द्वारा SNP मूल्यांकन के रूप में कई विश्लेषण प्रदर्शन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है ।
3. DSS के लिए सीरम भंडारण
-
रक्त नमूना संग्रह
- EDTA बिना 7 मिलीलीटर ट्यूब में परिधीय रक्त के नमूने के 7 मिलीलीटर लीजिए । कमरे के तापमान पर 30 मिनट के लिए coagulate के लिए रक्त का नमूना छोड़ दें ।
- सेवर कार्ड के नीचे दाहिने हाथ के कोने पर रोगी कोड संख्या लिखें ।
- ९८० x g पर 15 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर रक्त का नमूना केंद्रापसारक ।
नोट: जितनी जल्दी हो सके और 8 एच के भीतर DSS के रूप में सीरम स्टोर । - ध्यान से ट्यूब से supernatant निकालें और एक नया 15 एमएल ट्यूब करने के लिए स्थानांतरण । ध्यान से एक 5 मिलीलीटर पिपेट के साथ रक्त reसस्पेंड ।
-
DSS में सीरम खोलना
- पिपेट और सेवर कार्ड पर सीरम (५० µ एल) के एक स्थान हस्तांतरण । इस चरण को दोहराने के लिए कुल 3 – 5 खून के धब्बे हैं ।
नोट: प्रत्येक स्थान में सीरम के बिल्कुल ५० µ l को पिपेट करने के लिए बहुत सावधान रहें. सीरम कार्ड की डैश्ड लाइन से आगे नहीं जाना चाहिए । - DSS को कमरे के तापमान पर रात भर सूखने के लिए छोड़ दें । ब्लड सुखाने की सुविधा के लिए सेवर कार्ड का कवर खुला छोड़ दें ।
- जलशुष्कक के साथ एक प्लास्टिक बैग में कमरे के तापमान पर कार्ड का उपयोग जब तक स्टोर । यदि संग्रहण 14 दिनों से अधिक है, तो कार्ड को-20 ° c पर संग्रहीत करें ।
- पिपेट और सेवर कार्ड पर सीरम (५० µ एल) के एक स्थान हस्तांतरण । इस चरण को दोहराने के लिए कुल 3 – 5 खून के धब्बे हैं ।
4. एलिसा परख DSS से शुरू
-
DSS से Elute प्रोटीन ।
- यदि आवश्यक हो, तो प्रत्येक नमूने के लिए एक DSS गल । छोटे टुकड़ों (व्यास में लगभग 1 मिमी) में DSS काटें । टुकड़ों को १.५ मिलीलीटर ट्यूब में डालकर पंजाब के ४०० µ एल.
- 4 डिग्री सेल्सियस पर रातोंरात नमूने हिला ।
नोट: उन्हें कम तीव्रता पर हिला. पंजाबियों को मिलाने के दौरान ट्यूब का कवर गीला नहीं करना चाहिए.
- एलिसा किट निर्देशों के अनुसार गुप्त प्रोटीन/विकास कारक विश्लेषण के लिए एक सीरम नमूने के रूप में प्रोटीन eluate का प्रयोग करें, उपयुक्त कमजोर पड़ने के बाद ।
नोट: यह कार्यविधि DBP डिटेक्शन9के लिए अच्छी तरह से काम करता है । अंय एलिसा परख के लिए, एक अनुकूलन कदम की जरूरत हो सकती है ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
हमने डीबीएस और DSS प्रक्रियाओं का लाभ उठाकर जैविक सामग्री की गुणवत्ता को प्रभावित किए बिना कमरे के तापमान पर रक्त और सीरम की दुकान लगा ली । चित्रा 1 रक्त के बिना और रक्त संग्रह के बाद प्रोटीन कार्ड सेवर का एक उदाहरण से पता चलता है । यह पुष्टि करने के लिए कि फ़िल्टर काग़ज़ पर संग्रह और elute करने के लिए प्रक्रिया रक्त नमूना गुणवत्ता के साथ हस्तक्षेप नहीं करते हैं, हम मानक संग्रहण विधियों के साथ तुलना किया । हम एक 2 मिलीलीटर ट्यूब में एकत्र या डीबीएस के रूप में संग्रहीत पूरे रक्त के 3 मिलान नमूनों से डीएनए निकाले, के रूप में प्रोटोकॉल अनुभाग में रिपोर्ट । पांच SNPs रीयल टाइम पीसीआर द्वारा विश्लेषण किया गया । मिलाए गए नमूनों के लिए प्राप्त आंकड़ों में १००% की ही बेताल थी ।
एलिसा विश्लेषण के संबंध में, हम एक 2 मिलीलीटर ट्यूब में एकत्र सीरम के 8 नमूने संग्रहीत (और पर तुरंत संग्रहीत-८० ° c) और DSS के रूप में (एक सप्ताह के लिए कमरे के तापमान पर संग्रहीत और फिर-20 डिग्री सेल्सियस) । हम DSS से प्रोटीन eluted, के रूप में प्रोटोकॉल अनुभाग में वर्णित है, और फिर DBP के लिए 8 नमूनों के लिए निर्माता के डेटापत्रक के अनुसार एलिसा प्रदर्शन किया । परिणाम तालिका 1में दिखाए जाते हैं । मिलान नमूनों के बीच भिन्नता (CV) का गुणांक 2% से लेकर 24% तक होता है. मतलब CV ९.६% थी ।
चित्रा 1: पहले और रक्त संग्रह के बाद डीबीएस का उदाहरण । (क) प्रोटीन सेवर कार्ड । (ख) रक्त के नमूने के बाद प्रोटीन सेवर कार्ड । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
| DBP (µ g/mL) | |||
| नमूने | सीरम (st) | Dss | CV |
| 1 | ६६.४७ | ६५.२८ | 2 |
| 2 | २१३.३१ | २१६.५१ | 1 |
| 3 | १६४.९६ | १४५.२१ | 14 |
| 5 | १०९.८१ | १२०.२८ | 9 |
| 6 | १६२.७० | १३०.६० | 24 |
| 7 | १२४.६३ | ११७.१३ | 6 |
| 8 | १४९.४७ | १३२.६९ | 12 |
तालिका 1: मिलान DSS और सीरम नमूनों में DPB स्तर । DBP स्तरों एलिसा परख द्वारा विश्लेषण किया । CV 2 प्राप्त मूल्यों के बीच की गणना भिंनता के गुणांक है । सीवी प्रतिशत निम्नानुसार परिकलित की जाती है: ((DSS value-सीरम मान)/DSS value) x १००%.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
इस प्रोटोकॉल फिल्टर कागज पर रक्त और सीरम भंडारण के लिए क्षमता की जांच जब प्रयोगशालाओं स्टाफ या रक्त के नमूनों की सही हैंडलिंग के लिए आवश्यक कने नहीं है । विशेष रूप से, पूरे रक्त या सीरम मानक ट्यूबों में एकत्र या उंगली से चुभन इस विधि का उपयोग कर संग्रहीत किया जा सकता है और रक्त संग्रह के बाद तुरंत-20 डिग्री सेल्सियस या-८० डिग्री सेल्सियस पर नमूने फ्रीज करने के लिए कोई जरूरत नहीं है । डीबीएस/DSS रक्त/सीरम अखंडता में किसी भी परिवर्तन के बिना कमरे के तापमान पर 14 दिनों के लिए रह सकते हैं । भंडारण के लिए एक महत्वपूर्ण मुद्दा नमी की उपस्थिति है जो जैविक सामग्री के तापमान से अधिक के गुणों को प्रभावित करता है । जलशुष्कक के साथ प्लास्टिक की थैलियों के प्रयोग से इस समस्या से बचा जा सकता है । नमी भंडारण जब कार्ड प्लास्टिक की थैलियों के अंदर है के दौरान एक मुद्दा बन जाता है । हवा में कण से उत्पंन समस्याओं/बूंदें/धूल या नमी रात के दौरान10मशीन नहीं देखा गया । हम पहले फिल्टर कागज इस्तेमाल के लिए इतालवी और अफ्रीकी साथियों11में जैविक मार्करों के एक अध्ययन में रक्त और सीरम की दुकान । हम डीबीएस से डीएनए निष्कर्षण अनुकूलित और दोनों मामले श्रृंखला में SNPs के एक नंबर का विश्लेषण किया । जैसा कि हम भी प्रोटीन के स्तर का मूल्यांकन करने में रुचि रखते थे, हम DSS से elute प्रोटीन के लिए एक विधि अनुकूलित क्रम में एलिसा परख प्रदर्शन के लिए । एलिसा के लिए DSS में सीरम भंडारण गुणात्मक विश्लेषण के लिए पूरे रक्त भंडारण की तुलना में अधिक नाजुक है क्योंकि प्रयोगशाला शोधकर्ताओं के सभी नमूनों में सीरम के बिल्कुल समान मात्रा पिपेट करने के लिए सुनिश्चित किया जाना चाहिए । यदि pipetting सटीक नहीं है, तो बहाव विश्लेषण से समझौता हो जाएगा । Whilst डीएनए निष्कर्षण प्रक्रिया अंय आणविक विश्लेषण करने के लिए लागू किया जा सकता है, प्रोटीन प्रक्रिया प्रत्येक नए cytokine के लिए नमूने के नमूनों में अनुकूलित किया जाना चाहिए/ यह बहुत छोटे टुकड़ों में DSS में कटौती महत्वपूर्ण है और ताश के पत्तों के टुकड़ों को रातोंरात गर्मी के दौरान पंजाबियों के साथ अच्छी तरह से गीला करने के लिए कुशल प्रोटीन रेफरेंस सुनिश्चित करते हैं । यह रक्त रेफरेंस की तुलना में अधिक नाजुक कदम है क्योंकि एलिसा एक मात्रात्मक मूल्यांकन है ।
हाल के वर्षों में, इस भंडारण दृष्टिकोण व्यापक रूप से (के रूप में इस प्रोटोकॉल में वर्णित) आण्विक जीवविज्ञान से प्रोटीन विश्लेषण12,13को लेकर विभिंन अनुप्रयोगों के लिए इस्तेमाल किया गया है । विशेष रूप से, अच्छी गुणवत्ता बड़े पैमाने पर सीरम से शुरू परिणाम सेवर कार्ड में देखा14, उच्च लचीलापन और विधि की विश्वसनीयता की पुष्टि की गई है ।
हमारे परिणाम, साहित्य के साथ समझौते में, डीबीएस के रूप में नमूनों के भंडारण की उपयोगिता पर प्रकाश डाला और मानक भंडारण विधियों के संबंध में इस प्रक्रिया की विश्वसनीयता की पुष्टि करें । हम पिछले परिणामों की पुष्टि की है और यह हमारे भंडारण तरीकों के साथ एक साथ का उपयोग करके एक एलिसा परख के अनुकूलन की संभावना को रेखांकित किया । अपनी सादगी के लिए धंयवाद, विकासशील देशों को भी कैंसर अनुसंधान में योगदान कर सकते हैं । उदाहरण के लिए, अफ्रीका पर अध्ययन के बहुमत के रूप में अफ्रीकी अमेरिकियों पर प्रदर्शन कर रहे हैं, बहुत कुछ डेटा देशी अफ्रीकियों9पर उपलब्ध हैं । डीबीएस के इस्तेमाल से इस खाई को पाटने में मदद मिल सकती है ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों के हित का खुलासा करने का कोई टकराव नहीं है.
Acknowledgments
हम संपादकीय सहायता के लिए Gráinne Tierney शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Whatman protein saver cards 903 Protein saver card, 100/pk | Sigma | Z761575 | Useful to store samples at room temperature for downstream analyses |
| Falcon Serological Pipettes, 5 mL | Stem cell | #38003 | |
| 50-200 µL tips | Star-Lab | S1120-8810 | |
| 1.5 mL centrifuge tube | Eppendorf | 4036-3204 | |
| QIAamp DNA microkit | Qiagen | 56304 | This is a DNA extraction kit designed to isolate small quantities of DNA |
| Buffer ATL (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Lysis Buffer 1 in the text | |
| Buffer AL (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Lysis Buffer 2 in the text | |
| QIAamp mini elute column | Qiagen | This is reported as column in the text | |
| AW1 (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Wash Buffer 1 IN THE TEXT | |
| AW2 (included in QIAamp DNA microkit) | Qiagen | This is reported as Wash Buffer 2 in the text | |
| Human Vitamin D BP Quantikine ELISA Kit | R&D systems | DVDBP0 |
References
- Bertagnolio, S., et al. HIV-1 drug resistance surveillance using dried whole blood spots. Antivir Ther. 12 (1), 107-113 (2007).
- Mei, J. V., Alexander, J. R., Adam, B. W., Hannon, W. H. Use of filter paper for the collection and analysis of human whole blood specimens. J Nutr. 131 (5), 1631S-1636S (2001).
- Garrido, C., et al. Subtype variability, virological response and drug resistance assessed on dried blood spots collected from HIV patients on antiretroviral therapy in Angola. J Antimicrob Chemoth. 61 (3), 694-698 (2008).
- Steegen, K., et al. Feasibility of detecting human immunodeficiency virus type 1 drug resistance in DNA extracted from whole blood or dried blood spots. J Clin Microbiol. 45 (10), 3342-3351 (2007).
- Costenaro, P., et al. Viral load detection using dried blood spots in a cohort of HIV-1-infected children in Uganda: correlations with clinical and immunological criteria for treatment failure. J Clin Microbiol. 52 (7), 2665-2667 (2014).
- Gong, Z. H., Tian, G. L., Huang, Q. W., Wang, Y. M., Xu, H. P. Reduced glutathione and glutathione disulfide in the blood of glucose-6-phosphate dehydrogenase-deficient newborns. BMC Pediatr. 20 (17), 172 (2017).
- Lukacs, Z., Barr, M., Hamilton, J. Best practice in the measurement and interpretation of lysosomal acid lipase in dried blood spots using the inhibitor Lalistat 2. Clin Chim Acta. 471, 201-205 (2017).
- Skogstrand, P. T., Bent, N. P., Schendel, D. E., Sørensen, L. C., Hougaard, D. M. Simultaneous measurement of 25 inflammatory markers and neurotrophins in neonatal dried blood spots by immunoassay with xMAP technology. Clin Chem. 51 (10), 1854-1866 (2005).
- Amadori, D., et al. Vitamin D receptor polymorphisms or serum levels as key drivers of breast cancer development? The question of the vitamin D pathway. Oncotarget. 8 (8), 13142-13156 (2017).
- Gupta, B. P., Jayasuryan, N., Jameel, S. Direct detection of hepatitis B virus from dried blood spots by polymerase chain reaction amplification. J Clin Microbiol. 30 (8), 1913-1916 (1992).
- Colson, K. E., Potter, A., Conde-Glez, C., Hernandez, B., RíosZertuche, D., Zúñiga-Brenes, P. Use of a commercial ELISA for the detection of measles-specific immunoglobulin G (IgG) in dried blood spots collected from children living in low-resource settings. J Med Virol. 87 (9), 1491-1499 (2015).
- Drabe, C. H., Blauenfeldt, T., Ruhwald, M. ELISA-based assay for IP-10 detection from filter paper samples. Methods Mol Biol. 1172, 27-37 (2014).
- St Julien, K. R., et al. High quality genome-wide genotyping from archived dried blood spots without DNA amplification. PLoS One. 8 (5), e64710 (2013).
- Shaner, R. L., Schulze, N. D., Seymour, C., Hamelin, E. I., Thomas, J. D., Johnson, R. C. Quantitation of fentanyl analogs in dried blood spots by flow-through desorption coupled to online solid phase extraction tandem mass spectrometry. Anal Methods. 9, 3876-3883 (2017).
