Summary
이 종이 여부를 평가 체 외에 고전적인 종양 신생 hemangioblastomas (HBs)와 HBs에서의 역할에 있는 포괄적인 절차를 제공 합니다. 결과 HB neovascularization의 복잡성을 강조 하 고는 것이 좋습니다이 일반적인 형태의 신생 HB neovascularization만 보완 메커니즘.
Abstract
폰 Hippel Lindau (VHL) 종양 억제기 유전자의 비활성화 인간 중앙 신경 시스템 (CNS) 내에서 hemangioblastomas (HBs)의 개발에 중요 한 역할을 하고있다. 그러나, cytological 근원 그리고 HBs (neovascularization 포함)의 진화 과정 남아 논란, 그리고 안티-신생 VHL-HBs, 고전적인 HB 신생에 기반에 대 한 임상 시험에서 실망 스러운 결과 생산 했습니다. 반대로 혈관 치료의 성공적인 임상 번역 한 주요 장애물이 neovascularization 혈관이 종양에의 한 철저 한 이해의 부족 이다. 이 문서에서는, 우리가 여부를 평가 체 외에 고전적인 종양 신생 HBs, HBs의 역할에 있는 포괄적인 절차 제시. 이 절차와 연구원 수 정확 하 게 HB neovascularization의 복잡성을 이해 하 고이 일반적인 형태의 HBs에 신생의 함수를 식별. 이러한 프로토콜 있는 잠재력이 높은 변환 종양 치료 또는 HBs에 대 한 안티-신생 치료의 최적화에 돕고 미래에 번역에 대 한 종양을 위한 가장 유망한 항 혈관 치료를 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다. 결과 HB neovascularization의 복잡성을 강조 하 고는 것이 좋습니다이 일반적인 양식 신생 HB neovascularization만 보완 메커니즘.
Introduction
Hemangioblastomas (HBs)는 독점적으로 인간 중앙 신경 시스템 (CNS) 내에서 발견 되는 양성 혈관 종양. 그들은 폰 Hippel Lindau (VHL) 질병 또는 산발적 병 변 환자에서 개발. VHL HBs 빈번한 재발으로 인해 수술 치료를 통해 치료 하기 어려운 고 발생이 유전자 여러 병 변 장애1. VHL 종양 억제기 유전자의 비활성화 VHL HBs tumorigenesis의 근본 원인을 고려 하고있다, 비록 HBs의 진화 과정과 cytological 근원 (를 포함 하 여 neovascularization) 크게 논란이2남아 있다. 따라서, HB-신생 생물 학적 메커니즘의 더 나은 이해 VHL HBs에 대 한 가장 유망한 항 혈관 전략에 유용한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
최근 연구는 건의 HB neovascularization가 vasculogenesis3,,45와 비슷합니다. 고전적인 혈관 내 피 성장 인자 (VEGF)-중재 신생 혈관 내 피에서 유래 하 고 그 기능의 VHL 손실에 의해 구동 됩니다 확산 귀착되 고 신생 형성 되었습니다 도전6. 1965 년, Cancilla와 짐머만, 전자 현미경 검사 법, HBs endothelium7에서 유래를 사용 하 여. 나중 stromal 세포 vasoformative 요소8에서 파생 됩니다 발견 했다. 1982 년에, Jurco 그 외 여러분 발견 stromal 세포 내 피 기원9. 따라서, 우리는 인간의 혈관 내 피 세포는 HB neovascularization10의 원래 세포 가설. HB 셀 VHL 환자 수술에서 파생 된에서 기본 문화권을 사용 하는 것이 낫다, 비록 우리의 이전 연구 표시는 HB에서 주 문화는, 셀 라인 설립된3수 없습니다. 또한, 3D 환경에서 주 문화는 HB 혈관 재료10,11의 창시자를 포함 하기 때문 HB neovascularization cytological 원산지를 식별 하지 수 없습니다. 따라서, 내 피 세포의 원시적이 고 고전적인 모델 인간의 혈관 내 피 세포 (HUVEC) 대체 세포 모델 HBs에 대 한 될 수 있습니다.
회전 타원 체 돋 아 분석 결과 조직 공학12,13에 새로운 모델입니다. 이 문서에는 3D 콜라겐 기반의 coculture 시스템에서 생체 외에서 분석 결과 돋 아 회전 타원 체를 사용 하 여 개발 되었다, 고전적인 종양 신생 HBs, HBs의 역할에 있는지 여부를 평가 하는 전반적인 목표.
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Protocol
이 메서드는 연구 윤리 위원회의 Huashan 병원, 복 단 대학교의 승인 된 지침에 따라 수행 되었다. 해당 표준 안전 조치는 각 단계에 따라 했다. 도식 프레 젠 테이 션, 그림 1을 참조 하십시오.
1. 세포 배양 및 플라스 미드 구조
- 정기적으로 유지 하는 Dulbecco에서 인간의 탯 줄 정 맥 내 피 세포 (HUVEC)이 글의 중간 (DMEM) 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS), 페니실린, 100 단위/mL와 100 µ g/mL 스 습도 5%에서의 보완 수정의 CO2 배양 기 37 ° c.에
- PLKO.1 플라스 ApaI와 EcoRI shRNA 조각의 합성에 대 한 다이제스트. VHL shRNA 벡터의 oligonucleotide 시퀀스 CCGGGATCTGGAAGACCACCCAAATCTCGAGA TTTGGGTGGTCTTCCAGATCTTTTTG14인지 확인 합니다.
- 다음, 20 µΜ 시스템 올리고, 역방향 올리고의 5 µ L, 코 버퍼 x 10의 5 µ L ddH2O 함께 (총 볼륨은 50 µ L)의 35 µ L의 앞으로 5 µ L 믹스. 몇 시간에서 4 분, 그리고 천천히 실내 온도 아래로 냉각을 위한 98 ° C에 혼합물을 열.
- 하룻밤을 위해 단련된 oligos 및 4 ° C에서 T4 리가 함께 PLKO.1 플라스 미드를 선. 16 h는 나중에, 25 µ L 유능한 DH5α 세포에 결 찰 믹스의 5 µ L를 추가 합니다. 그리고 성공적으로 합자 플라스 미드를 화면 연속 삽입 된 부분을 확인 합니다.
2. lentivirus 패키지 및 감염
- 총, PLKO.1-shVHL 또는 PLKO.1 shScramble 벡터의 10 µ g, 7.5 µ g의 플라스 미드 psPAX2, 포장 및 봉투 플라스 미드 pMD2.G 태아 둔감 한 혈 청 (FBS) 25 분 없이 DMEM 미디어의 500 µ L에서의 2.5 µ g을 혼합.
- 위의 준비 솔루션 FBS 없이 7 mLDMEM를 추가 합니다.
- 10 cm 직경 조직 문화 요리에서 FBS 없이 DMEM 293 피트 셀 문화. 293 피트 셀 수 1 x 107 셀 카운터를 사용 하 여 있는지 확인 합니다.
- Transfection 293 피트 셀의 매체에 위의 준비 솔루션의 1 mL를 추가 합니다.
참고: 293 피트 셀 라인 293F 셀 라인에서 파생 되 고 안정적으로 SV40 큰 T 항 원을 표현 한다. 따라서, 그것은 lentiviral 생산을 위한 적합 한 호스트입니다. - 10% 포함 된 DMEM 문화 매체를 바꿉니다 6 h 후 FBS.
- Transfection 후 48 h에는 피 펫을 사용 하 여 미디어를 수집 합니다.
참고: 10% 포함 된 DMEM에 존재 하는 바이러스 FBS. 죽은 세포는 매체에 부동. 사용 하 여 0.45 μ m 살 균 막 죽은 세포 및 불순물 필터링. 일반적으로, 감염 (MOI)의 다양성을 확인할 필요가 있다. 이것은 안정 된 세포 선 확립 하입니다. 마지막 단계에서 성공적인 감염 없이 모든 살아있는 세포 puromycin에 의해 죽을 것 이다. ShScramble 그룹 및 HUVEC 세포는 제어 그룹. 모든 HUVEC 셀 72 h 사용된 puromycin 농도로 죽을 확인 합니다. 모든 잘 동일한 셀 수가 있다. - HUVEC 셀 72 h lentiviral 미디어에 문화. 그런 다음 컨트롤 그룹으로 치료 없이 24 h. 사용 HUVEC 셀 2 µ g/mL의 농도에서 HUVEC 셀의 미디어를 puromycin를 추가 합니다. 모든이 시간 셀 다 제어를 확인 합니다.
참고: 살아있는 세포 VHL 최저의 세포와 shSramble 세포의 안정적인 셀 라인을 나타냅니다. 도금 밀도가입니다 96 잘 접시에 5000/잘.
3입니다. 세대 내 피 세포 Spheroids의
- HUVECs 셀 trypsinize 및 10 %DMEM 매체에 resuspend FBS. 10 cm 문화 접시에 있는 세포의 적당 한 수, typsin-EDTA의 1 mL를 추가 합니다.
- 셀 셀 밀도 1 × 103 셀/3D 라운드 아래 96 잘 접시에 씨앗 회전 타원 체를 일시 중단 하려면 0.50 µ L의 회전 타원 체를 수용할 수 있는 우물을 사용 합니다. 제조업체의 지침에 따라 셀 카운터 시스템을 사용 하 여 셀을 계산 합니다.
- 37 ℃에서 72 h에 대 한 지속적으로 5% CO2 셀을 품 어. 이러한 조건에서 일시 중단 된 세포 형성 자동으로 셀 spheroids 확인 합니다. 36 h 후 문화 매체의 절반을 교체 합니다.
4. 체 외에서 신생 분석 결과
- 4 ° C에서 젤 솔루션을 해 동 하 고 희석 비율 1: 5의에 감소 된 혈 청 매체와 그것을 희석.
- Spheroids는 micropipette와 DMEM 배양에서 빨 아. 세척 후 감소 된 혈 청 매체의 5 mL와 함께 spheroids 일시 중지는 spheroids 부드럽게 그리고 조심 스럽게 희석된 젤에서. 없음 기포 확인 합니다.
- 15-잘 접시에 혼합된 액체의 300 µ L를 포함 합니다. 37 ° C, 5% CO2 1 h에서 부 화, 후 각 우물에 400 µ L 감소 된 혈 청 매체를 추가 합니다. 메 마른 물 증발을 방해 하는 습도 환경 생성 우물 주위를 작성 합니다.
- 그 후, 5% CO2 1 h 100% 습도에서 37 ° C에서 격판덮개 문화.
- 신중 하 게 오래 된 매체를 발음 하 고 감소 된 혈 청 매체에 각 잘 1% 내 피 세포 성장 보충제와의 600 µ L로 합니다.
- 12 시간 또는 24 시간 후 거꾸로 가벼운 현미경 이미지를 받아 (40 *).
5. 데이터 분석
- 새싹 길이 데이터 (테이블의 재료)를 얻기 위해 온라인 이미지 분석 플랫폼에는 이미지를 업로드.
- 웹 페이지에 전자 메일 계정을 만듭니다.
- 다음 업로드 버튼을 클릭 하 여 이미지를 업로드 합니다.
- 다운로드 버튼을 클릭 하 여 결과 다운로드 합니다.
참고: 소프트웨어 처리 이미지와 데이터를 생성 합니다. 5 부분을 포함 하는 데이터: 누적 새싹 길이, 평균 새싹 길이 길이 새싹, 새싹 영역 및 회전 타원 체 지역의 표준 편차. 처리 된 이미지에서 각 매개 변수 처리 이미지에서 식별을 쉽게 하기 위해 다른 색상으로 설명 하는: 빨간 나타냅니다 해골 콩나물, 콩나물의 수 노란, 파란 새싹 구조, 백색 새싹 끝, 및 오렌지 회전 타원 체.
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Representative Results
거꾸로 가벼운 현미경에 의해 원래 이미지를 가져옵니다. VHL 그룹과 컨트롤 그룹의 전형적인 이미지는 그림 2에 표시 됩니다-A1 및 그림 2-A2. 컨트롤 그룹의 돋 아 길이 VHL 그룹 보다 짧습니다.
이미지를 업로드 후 온라인 플랫폼 직접 분석 결과 제공 합니다. 출력 두 부분으로 구성: 처리 된 이미지와 해당 분석 결과. 처리 된 이미지는 컨트롤 그룹과 VHL 유전자 침묵 그룹의 서로 다른 색상으로 표시 됩니다 (그림 2-A3 및 그림 2-A4). 평균 새싹 길이 65 µ m 및 제어 그룹 및 VHL 침묵 그룹에서 125 µ m 각각, 고 평균 누적 새싹 길이 680 µ m 및 제어 그룹 및 VHL 침묵 그룹에 1250 µ m 각각, 그 새싹 길이 증가 나타내는 제어 그룹 (그림 2B)에 비해 VHL 침묵 그룹에서 약 2 폴드. 이 결과 VHL 결핍 인간 내 피 세포의 혈관 형성 능력 증진을 나타냅니다.
그림 1 . 분석 결과 돋 아 회전 타원 체에 대 한 스키마. 단계 1는 HUVEC 세포 배양 접시를 보여 줍니다. 단계 2에서 HUVEC 셀 3 단계에서는 HUVEC 셀 폼 내 피 세포 spheroids 자동으로 3D 판 72 헤에 대 한 3D 라운드 하단 96 잘 접시로 이동 됩니다. 4 단계에서에서 셀 회전 타원 체 희석된 젤을 추가 합니다. 단계 5에서 15-잘 접시 위에 준비 하는 혼합물을 추가 합니다. 6 단계 회전 타원 체 15-잘 접시에 돋 아을 보여줍니다. 단계 7 거꾸로 가벼운 현미경 촬영 돋 아 이미지를 보여 줍니다. 업로드 된 이미지를 표시 하는 8 단계와 9 단계는 플랫폼에서 출력 이미지 (바 = 100 µ m). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 . VHL 유전자 분석 결과 돋 아 회전 타원 체에 HUVEC 세포의 신생 능력에 침묵의 효과. (A) (A1) 컨트롤과 VHL 침묵 HUVEC spheroids (A2)에 12 h 후 오 르네 파생물의 대표 이미지 (바 = 100 µ m). 그림 a 3와 A4 분석 플랫폼에서 그림 a 1과 A2, 각각 이미지를 보여줍니다. 빨간 나타내는 콩나물 해골, 싹 수 노란, 파란 새싹 구조, 백색 새싹 끝, 및 오렌지 회전 타원 체. (B) 는 콩나물의 길이. 통계 분석은 짝이 없는 학생의 t-검정을 사용 하 여 수행 되었다. * 대표 P < 0.05. 콘, 제어; HUVEC, 인간 탯 줄 정 맥 내 피 세포 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
최근, 혈관 생물학 연구의 여러 분야는 신생 endothelium15의 연구에 의해 자극 되었다. 이 문서에서는, 우리는 내 피 회전 타원 체의 소설 후보 분자 식별 하 조작 내 피 세포에서 기능의 VHL 유전자의 손실에서 유래 혈관 형성을 연구 하는 실험 모델 기법을 돋 아 개발에 신생 캐스케이드입니다. 우리의 지식 최선을이 endogenic 수정 된 내 피 세포의 신생 효과 검사 하는 첫 번째 보고서 이다.
(를 포함 하 여 종양 조직) 조직을 neovascularization 통해 신생 및 vasculogenic 메커니즘 두 생리 및 병 적인 조건12,15 에서 뿐만 아니라 개발 하는 동안 발생 하는 복잡 한 과정은 , 16. 회전 타원 체 분석 결과 돋 아 이벤트17,18, 돋 아에서 결과 3D 셀 매트릭스 문화 시스템에 포함 되어 있는 내 피 세포의 각자 집계를 포함 한 복잡 한 캐스케이드 특징 이다 그리고 모세 혈관19의 3 차원 네트워크의 재생산. 이 3D 젤 포함 회전 타원 체 모델 혈관 형성을 연구 하 고 그 메커니즘에 적합 한 매트릭스 mimicking 더 나은 환경을 제공 하는 기능 때문에 조직 공학에서 널리 사용 되는 시스템 되고있다. 그러나,이 생물 학적 과정의 가장 중요 한 단계는 무부하 내 피 세포17,20,,2122의 활성화 이다. 이 절차에서는 내 피 세포 되었다 VHL 유전자, neovessels23,24의 레 귤 레이 터 성장 유전자의 endogenic 입을 활성화 됩니다. 고전적인 endothelium 개시 를 통해 매트릭스와 해당 extracellular 환경 (포함 세 혈관 성장 인자)의 외 인 유도에서 다른,이 수정된 방법은 확장할 수 있습니다에 수많은 endogenic 유전자 메커니즘을 해명 하는 응용 프로그램. 다음, 외 인 매트릭스의 영향을 점감 하는 프로토콜 실험에 간단한 단계는 젤을 diluting 하 여 최적화 되었다. 또한, 그것은 플랫폼에 이미지를 업로드 하 고 분석 결과를 분만 했다. 플랫폼 목표, 분석 결과 이미지를 온라인을 돋 아의 비교, 그리고 자동화 된 이미지 분석 하도록 실험을 허용 하는 이미지 분석 서비스를 제공 합니다. 따라서, 프로토콜 인공 요인에 의해 발생 하는 측정 및 계산 오류를 극복 한다.
Neovascularization 캐스케이드의 개별 단계의 기계적 이해 현재 종양학에서 임상 응용 프로그램에 대 한 승인 되 고 반대로 혈관 치료의 개발에 대 한 합리적인 기초를 제공 합니다. 이 문서는 neovascularization에 대 한 소설 후보 분자 식별 VHL 유전자의 기능의 손실 가진 조작된 내 피 세포에서 유래 혈관 형성을 공부 하는 간단 하 고 강력한 회전 타원 체 기반 분석 결과 모델 설립 폭포가 있는 수많은 신생 및 vasculogenesis 관련 응용 프로그램에 대 한 이용 될 수 있다. 저자는이 체 외에 모델 일부 고체 종양 (예를 들어, 종양 vasculogenic 흉내)에서 신생의 역할을 평가 하 고 다른 가능한 조상 세포의 잠재적인 역할을 조사할 수 있도록 추가 정보를 제공할 수 있습니다 추측 생성 종양 neovessels에서 vivo에서, 특히 환자 종양, 그룹으로, 안티-신생 작용만 치료에 반응 하지 않습니다.
회전 타원 체 돋 아 분석 결과 신생 및 관련된 메커니즘 연구에 널리 사용 되는 방법 되고있다. 분석 결과 클래식 2D 문화 보다 더 나은 모방 환경을 제공 하 여 중요 한 장점이 있다. 최근, 3D 공동 문화 모델이 고 종양 microenvironment25내 신생의 복잡성을 종양 혈관 신생 연구 개발 되었습니다. 이 모델에서는 내 피 세포는 암 세포 뿐만 아니라 3D 환경에서 stromal 구성 요소와 직접 교양. 또한, 문화 시스템 3 차원 생체 외에서 기존의 세포 배양 시스템 보다 치료제 vivo에서 응답 더 정확 하 게 반영 하기 위해 표시 되었습니다. 또한,이 메서드는 배아 줄기 세포, 조직 성장, 상처 치유, 허 혈, 및 염증의 감 별 법을 위해 사용 됩니다. 전통적인 방법에 비해, 우리의 접근은 효과적이 고 쉽게 구현할 수 있습니다. 우리는 신생에서 생체 외에서연구를 위한 유용한 도구입니다 그것은 더 나은이 과정을 이해 하는 새로운 방법을 엽니다 것을 믿습니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 작품은 상하이 과학 위원회 및 기술 (15411951800, 15410723200)에서 교부 금에 의해 지원 되었다. 저자 교수 YuMei 원 및 그들의 기술 지원에 대 한 병원 성 미생물과 복 단 대학 교수 차오 Zhao 감사 하 고 싶습니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| human umbilical vein endothelial cell | Fudan IBS Cell Center | FDCC-HXN180 | |
| dulbecco’s modified eagle’s medium | Gibco | 11995040 | |
| fetal bovine serum | Gibco | 26400044 | |
| PLKO.1-puro vector | Addgene | #8453 | |
| packing plasmid psPAX2 | Addgene | #12260 | |
| envelope plasmid pMD2.G | Addgene | #12259 | |
| 3D round-bottom 96-well plates | S-Bio | MS-9096M | |
| matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
| Opti-MEM medium | Gibco | 31985-070 | reduced serum medium |
| 15-well plate | Ibidi | 81501 | Air bubbles in the gel can be reduced by equilibrating the μ–Slide angiogenesis before usage inside the incubator overnight |
| endothelial cell growth supplements | Sciencell | #1052 | |
| 10-cm culture dish | Corning | Scipu000813 | |
| Puromycin | Gibco | A1113802 | |
| typsin-EDTA | Gibco | 25200056 | |
| Automated Cell Counter System | BioTech | ||
| Image Analysis software | Winmasis | http://mywim.wimasis.com |
References
- Lonser, R. R., et al. von Hippel-Lindau disease. Lancet. 361 (9374), 2059-2067 (2003).
- Hussein, M. R. Central nervous system capillary haemangioblastoma: the pathologist's viewpoint. Int J Exp Pathol. 88 (5), 311-324 (2007).
- Ma, D., et al. Hemangioblastomas might derive from neoplastic transformation of neural stem cells/progenitors in the specific niche. Carcinogenesis. 32 (1), 102-109 (2011).
- Zhuang, Z., et al. Tumor derived vasculogenesis in von Hippel-Lindau disease-associated tumors. Sci Rep. 4, 4102 (2014).
- Glasker, S., et al.
- Wizigmann-Voos, S., Breier, G., Risau, W., Plate, K. H. Up-regulation of vascular endothelial growth factor and its receptors in von Hippel-Lindau disease-associated and sporadic hemangioblastomas. Cancer Res. 55 (6), 1358-1364 (1995).
- Cancilla, P. A., Zimmerman, H. M. The fine structure of a cerebellar hemangioblastoma. J Neuropathol Exp Neurol. 24 (4), 621-628 (1965).
- Kawamura, J., Garcia, J. H., Kamijyo, Y. Cerebellar hemangioblastoma: histogenesis of stroma cells. Cancer. 31 (6), 1528-1540 (1973).
- Jurco, S., et al. Hemangioblastomas: histogenesis of the stromal cell studied by immunocytochemistry. Hum Pathol. 13 (1), 13-18 (1982).
- Ma, D., et al. Identification of tumorigenic cells and implication of their aberrant differentiation in human hemangioblastomas. Cancer Biol Ther. 12 (8), 727-736 (2011).
- Ma, D., et al. CD41 and CD45 expression marks the angioformative initiation of neovascularisation in human haemangioblastoma. Tumour Biol. 37 (3), 3765-3774 (2016).
- Sharifpanah, F., Sauer, H. Stem Cell Spheroid-Based Sprout Assay in Three-Dimensional Fibrin Scaffold: A Novel In Vitro Model for the Study of Angiogenesis. Methods Mol Biol. 1430, 179-189 (2016).
- Cai, H., et al. Long non-coding RNA taurine upregulated 1 enhances tumor-induced angiogenesis through inhibiting microRNA-299 in human glioblastoma. Oncogene. 36 (3), 318-331 (2017).
- Xu, J., et al. Construction of Conveniently Screening pLKO.1-TRC Vector Tagged with TurboGFP. Appl Biochem Biotechnol. 181 (2), 699-709 (2017).
- Laib, A. M., et al. Spheroid-based human endothelial cell microvessel formation in vivo. Nat Protoc. 4 (8), 1202-1215 (2009).
- D'Alessio, A., Moccia, F., Li, J. H., Micera, A., Kyriakides, T. R. Angiogenesis and Vasculogenesis in Health and Disease. Biomed Res Int. 2015, 126582 (2015).
- Finkenzeller, G., Graner, S., Kirkpatrick, C. J., Fuchs, S., Stark, G. B. Impaired in vivo vasculogenic potential of endothelial progenitor cells in comparison to human umbilical vein endothelial cells in a spheroid-based implantation model. Cell Prolif. 42 (4), 498-505 (2009).
- Morin, K. T., Tranquillo, R. T. In vitro models of angiogenesis and vasculogenesis in fibrin gel. Exp Cell Res. 319 (16), 2409-2417 (2013).
- Blacher, S., et al. Cell invasion in the spheroid sprouting assay: a spatial organisation analysis adaptable to cell behaviour. PLoS One. 9 (5), 97019 (2014).
- Straume, O., et al. Suppression of heat shock protein 27 induces long-term dormancy in human breast cancer. Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (22), 8699-8704 (2012).
- Naumov, G. N., Akslen, L. A., Folkman, J. Role of angiogenesis in human tumor dormancy: animal models of the angiogenic switch. Cell Cycle. 5 (16), 1779-1787 (2006).
- Naumov, G. N., Folkman, J., Straume, O. Tumor dormancy due to failure of angiogenesis: role of the microenvironment. Clin Exp Metastasis. 26 (1), 51-60 (2009).
- Wang, Y., Yang, J., Du, G., Ma, D., Zhou, L. Neuroprotective effects respond to cerebral ischemia without susceptibility to HB-tumorigenesis in VHL heterozygous knockout mice. Mol Carcinog. 56 (10), 2342-2351 (2017).
- Stratmann, R., Krieg, M., Haas, R., Plate, K. H. Putative control of angiogenesis in hemangioblastomas by the von Hippel-Lindau tumor suppressor gene. J Neuropathol Exp Neurol. 56 (11), 1242-1252 (1997).
- Correa de Sampaio, P., et al. A heterogeneous in vitro three dimensional model of tumour-stroma interactions regulating sprouting angiogenesis. PLoS One. 7 (2), 30753 (2012).
