Förberedelse och transplantation av fettvävnad som härrör stamceller (ASC) ark på otillräckligt sys kolorektal anastomoser i en råtta modell presenteras. Den här romanen applikationen visar att ASC ark kan minska kolorektal anastomos läckage.
Anastomotic läckage är en katastrofal komplikation efter kolorektal kirurgi. Även nuvarande metoder för förebyggande av läckage har olika nivåer av klinisk effekt, är de förrän nu ofullkomlig lösningar. Stamcellsterapi använda ASC ark kan ge en lösning på problemet. ASCs betraktas som lovande kandidater för att främja vävnad healing på grund av deras trofiska och immunmodulerande egenskaper. Här, tillhandahåller vi metoder för att producera hög densitet ASC-ark, som transplanteras till en kolorektal anastomos i en råtta modell att minska läckaget. ASCs bildade cell ark i thermo-lyhörd kultur rätter som enkelt kan tas loss. På dagen för transplantation utfördes en partiell kolektomi med en 5-sutur kolorektal anastomos. Djur transplanterades omedelbart med 1 ASC ark per råtta. ASC ark följs spontant anastomos utan någon lim, sutur eller någon biomaterial. Djurgrupper offrades 3 och 7 dagar postoperativt. Jämfört med transplanterade djur, var incidensen av anastomotic bölder och läckage högre i kontrolldjur. I vår modell, transplantation av ASC ark efter kolorektal anastomos var lyckad och associerad med en lägre läckage.
Partiell kolektomi med en primär anastomos är en vanligen utförs operation som kan göras för många sjukdomar som påverkar tjocktarmen som kolorektal cancer, Crohns sjukdom och divertikulit1,2. Mest fruktade komplikationen efter kolorektal anastomos är anastomotic läckage3. Även om flera riskfaktorer associerade med anastomotic läckor har identifierats, fortfarande lösningar för att förhindra läckage okänt4,5.
Fettvävnad-derived stromaceller (ASCs) är associerade med antiinflammatoriska och trofiska egenskaper6,7, vilket gör dessa celler lovande kandidater för regenerativ terapier8. Effektiviteten i ASCs att främja läkning av vävnad visades i olika vävnader såsom hjärtmuskulatur, hud och matstrupe9,10,11,12,13. Men finns det några rapporter om användningen av ASCs att främja tarmens läkning. Lokala transplantation av ASCs till experimentella kolorektal anastomoser via ASC-belagd biosutures eller serös injektioner av ASCs visade antingen ingen förbättring i healing14 eller hindrade inte anastomotic läckage trots en gynnsammare anastomotic Healing15.
Lokala transplantation av ASCs i suspension eller kombineras med biomaterial kan vara associerad med otillräcklig cell lagring eller en otillräcklig fördelning av transplanterade celler11. Cell ark teknik16,17 erbjuder en innovativ metod för ASC leverans18,19. Därför, i en tidigare studie, en ny metod föreslogs i vilken ASCs organiserade i en cell blad skulle kunna tillämpas på experimentell kolorektal anastomos20. Denna studie visade att ASC ark transplantation är framgångsrik i att minska kolorektal anastomos läckage efter partiell kolektomi i en råtta modell. Denna artikel redovisar ASC blad beredning och kirurgisk transplantation teknik.
Anastomotic läckage är den allvarligaste biverkan efter kolon resektion med en primär anastomos. Optimal tekniker för att förhindra anastomotic störningar och läckage saknas fortfarande. Lokala tillämpningen av en array av biomaterial har genomförts, med varierande resultat25,26,27. Syftet med cellterapi är att underlätta vävnad reparera genom vävnad ersätter eller stimulering av lokala helande genom parakrin sekre…
The authors have nothing to disclose.
Författarna är tacksam till Prof. Dr. S.E.R. Hovius, Dr M.A.M. Mureaux och alla kirurger av Institutionen för plastikkirurgi för insamling av subkutan fettvävnad. P. Sukho stöds av ett bidrag från The Nederländerna Fellowship program (NFP-12/435), under genomförandet av studien. Y.M. Bastiaansen-Jenniskens stöds genom bidrag från holländska Arthritis Foundation (LP11).
LG DMEM | Gibco, Life technologies | 22320022 | ASC isolation and culture |
Collagenase type I | Gibco, Life technologies | 17100-01 | ASC Isolation |
Bovine Serum Albumin | Sigma-Aldrich | A9418 | ASC Isolation |
Fetal bovine serum | Gibco, Life technologies | 10270-106 | FBS, ASC isolation and culture |
3% acetic acid with methylene blue | Stemcell Technologies | 7060 | ASC Isolation |
Gentamicin | Gibco, Life technologies | 15750-037 | ASC isolation and culture |
Ampothericin B | Gibco, Life technologies | 15290-018 | ASC isolation and culture |
Shaker (Gallenkamp Environmental Shaker Model 10X 400) | Akribis Scientific | F240 | ASC Isolation |
Centrifuge | Hettichlab | Rotina380 | ASC isolation and culture |
Phosphate buffer saline | Gibco, Life technologies | 14190-094 | PBS, ASC isolation and culture |
Ascorbic acid-2-phosphate | Sigma-Aldrich | A8960 | ASC isolation and culture |
Human recombinant fibroblast growth factor 2 | AbD Serotec | AF-100-15 | FGF2, ASC isolation and culture |
Trypsin EDTA | Gibco, Life technologies | 25200-056 | ASC culture |
Dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650-5x | DMSO, ASC freezing |
Thermo-responsive culture dishes | Nunc Thermo scientific | 174904 | ASC sheet preperation |
Non-absorbable braided silk 4/0 | B Braun | 21151042 | surgery |
Non-absorbable monofilament polyamide 8/0 | B Braun | G1118170 | surgery |
Absorbable braided polyglycolic acid 5/0 | B Braun | C1048207 | surgery |