Aneuploidy जीनोम अस्थिरता है, जो अंततः कोशिका चक्र-गिरफ्तार जटिल karyotypes के साथ कोशिकाओं का उत्पादन होता है । यह पेपर जटिल karyotypes के साथ aneuploid कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक सरल और सुविधाजनक तरीका प्रदान करता है जो विभाजित करने के लिए संघर्ष ।
गुणसूत्र एमआईएस-अलगाव aneuploidy, एक शर्त है जो कोशिकाओं में एक असंतुलित गुणसूत्र संख्या बंदरगाह की ओर जाता है । सबूत के कई लाइनें दृढ़ता से संकेत मिलता है कि aneuploidy जीनोम अस्थिरता से चलाता है, अंततः जटिल karyotypes है कि उनके प्रसार को गिरफ्तार करने के साथ कोशिकाओं पैदा । अलगाव और जटिल karyotypes बंदरगाह कोशिकाओं के लक्षण वर्णन कोशिका शरीर क्रिया विज्ञान पर एक असंतुलित गुणसूत्र संख्या के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण हैं । तिथि करने के लिए, कोई विधियां मज़बूती से ऐसे aneuploid कोशिकाओं को अलग करने के लिए स्थापित किया गया है । इस पेपर संवर्धन और जटिल मानक, सस्ती ऊतक संस्कृति तकनीक का उपयोग karyotypes के साथ aneuploid कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करता है । इस प्रोटोकॉल उनके प्रेरित वार्धक्य-जुड़े स्रावी phenotype, समर्थक भड़काऊ गुणों, और प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ बातचीत करने की क्षमता सहित जटिल karyotypes के साथ aneuploid कोशिकाओं की कई सुविधाओं का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । क्योंकि कैंसर की कोशिकाओं अक्सर गुणसूत्र संख्या में असंतुलन बंदरगाह, यह समझने के लिए महत्वपूर्ण है कैसे aneuploidy प्रभावों कोशिका शरीर क्रिया विज्ञान सामांय कोशिकाओं में, दोनों अपने समर्थक और विरोधी tumorigenic प्रभाव को उजागर करने के अंतिम लक्ष्य के साथ ।
गुणसूत्र अलगाव की प्रक्रिया में त्रुटियों aneuploidy करने के लिए नेतृत्व, एक हालत एक गुणसूत्र संख्या है कि अगुणित के एक से अधिक नहीं है की विशेषता1,2,3,4। Aneuploid karyotypes ट्रिगर प्रतिकृति तनाव है कि आगे जीनोमिक अस्थिरता उत्पन्न करता है5,6,7,8,9,10, बढ़ाता है कैरयोटाइप जटिलता, और अंत में कोशिकाओं की एक उपआबादी के सेल चक्र गिरफ्तारी के लिए सुराग10. यहाँ प्रस्तुत विधि का उद्देश्य ऐसी उपआबादी को साइकल कोशिकाओं से उत्पन्ना और पृथक करना है. सस्ती ऊतक संस्कृति तकनीक को रोजगार से, इस प्रोटोकॉल अलगाव और सेल चक्र के लक्षण वर्णन की सुविधा-जटिल karyotypes के साथ aneuploid कोशिकाओं को गिरफ्तार किया । इन कोशिकाओं को ArCK के रूप में संदर्भित किया जाता है (जटिल कैरयोटाइप के साथ गिरफ्तार) कोशिकाओं और नियंत्रण के रूप में उनके euploid सायक्लिंग समकक्षों ।
इस प्रोटोकॉल पहले एक इस प्रयोजन के लिए स्थापित किया जा रहा है और अलगाव और सहित ArCK लाइनों के आगे के अध्ययन के लिए अनुमति देता है, लेकिन सीमित नहीं है, उनके प्रेरित वार्धक्य और वार्धक्य-एसोसिएटेड स्रावी phenotype (SASP), उनके समर्थक भड़काऊ सुविधाओं, और उनके प्रतिरक्षा कोशिकाओं के साथ संलग्न करने की क्षमता । यहाँ प्रस्तुत पद्धति को विपरिवर्तित, नश्वर मानव कोशिकाओं में विकसित किया गया है लेकिन अभी तक कैंसर लाइनों में परीक्षण नहीं किया गया है. कुछ रूपांतरित कोशिकाओं को सेल चक्र एक या कई रास्ते के दमन के कारण गिरफ्तारी के प्रति असंवेदनशील हो सकता है; इसलिए, आगे की मांयता अंय कक्ष पंक्तियों में किया जाना चाहिए ।
इस उपंयास विधि को उत्पंन करने और जटिल karyotypes (ArCK) के साथ गिरफ्तार कोशिकाओं के लिए समृद्ध कोशिकाओं है कि कई गुणसूत्र लाभ या हानि और विभाजन के लिए संघर्ष किया है के अध्ययन के लिए अनुमति देता है । विधि सेटअप एक त्वरित और विश्वसनीय तरीके से ArCK कोशिकाओं के अलगाव की सुविधा के लिए डिजाइन किया गया है ।
इस परख में सबसे महत्वपूर्ण कदम कड़ाई से नशीली दवाओं के उपचार की समयरेखा को नियंत्रित करने और सबसे महत्वपूर्ण बात, aneuploid सायक्लिंग कोशिकाओं को हटाने । इष्टतम परिणामों के लिए, nocodazole उपचार के समय और शेक बंद विशेष महत्व का है सुनिश्चित करने के लिए कि साइकिल चालन कोशिकाओं थाली से हटा रहे हैं, जबकि वे अभी भी गोल और mitotic हैं, G1 में mitotic कोशिका मृत्यु या फिसलन की संभावना को रोकने, संभावित रूप से एक tetraploid जनसंख्या बना रहा है । यह अनुशंसित नहीं है कि शेक के समय की सिफारिश की 12-एच nocodazole की मशीन से दो घंटे से अधिक विचलित ।
ArCK कोशिकाओं पर भविष्य के अध्ययन के लिए कैसे जटिल karyotypes कोशिका शरीर क्रिया विज्ञान को प्रभावित की गहरी समझ को सुविधाजनक बनाने की क्षमता है । विशेष रूप से, एक ताजा अध्ययन में दिखाया गया है कि प्रतिरक्षा प्रणाली की कोशिकाओं के साथ बातचीत और ArCK कोशिकाओं के प्रतिरक्षा मंजूरी ट्रिगर करने में सक्षम हैं10. विधि यहां वर्णित ArCK कोशिकाओं के आगे लक्षण वर्णन के लिए एक उत्कृष्ट प्रारंभिक बिंदु प्रदान करता है, आणविक unट्रांस्फ़ॉर्म कोशिकाओं और कैसे oncogenic परिवर्तन के अध्ययन में निहित प्रतिरक्षा मंजूरी तंत्र के स्पष्टीकरण सहित इस निगरानी तंत्र,14,15क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण सवाल बाईपास कर सकते हैं ।
The authors have nothing to disclose.
यह काम कोच संस्थान सहायता (कोर) अनुदान P30-CA १४०५१ राष्ट्रीय कैंसर संस्थान, स्वास्थ्य अनुदान के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा (CA206157-22 और GM118066) और रूखा संगमरमर कैंसर अनुसंधान कोष द्वारा एंजलिका आमोन के हिस्से में समर्थित किया गया था । एंजलिका आमोन भी हावर्ड ह्यूजेस चिकित्सा संस्थान के एक अंवेषक और जैव चिकित्सा अनुसंधान के लिए ग्लेन फाउंडेशन है । एस. एस. अमेरिकी इतालवी कैंसर फाउंडेशन (एआईसीएफ) द्वारा, मैरी क्यूरी क्रियाएं और कैंसर रिसर्च के लिए इतालवी एसोसिएशन (AIRC) से कैंसर अनुसंधान में एक फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था, और एक KI Quinquennial कैंसर रिसर्च फैलोशिप द्वारा । E.M. हावर्ड ह्यूजेस चिकित्सा संस्थान से एक फैलोशिप द्वारा समर्थित था ।
DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) | Thermofisher | 11995-073 | |
Thymidine | Sigma Aldrich | T1859 | |
Reversine | Cayman Chemical Company | 10004412 | |
Nocodazole | Sigma Aldrich | M1410 | |
Anti-p53 antibody | Santa Cruz | sc-126 | |
Anti-p21 antibody | Santa Cruz | sc-6246 | |
Anti-p16 antibody | BD | 554079 | |
Senescence b-Galactosidase Staining Kit | Cell Signaling Technology | 9860 | |
Proteome Profiler Human Cytokine Array Kit | R&D Systems | ARY005B |