体检导致基因组不稳定, 最终产生细胞周期-被捕获的细胞与复杂的核型。本文提供了一种简单方便的分离异倍体细胞的方法。
染色体错误隔离导致体检, 这种情况下细胞的染色体数目不平衡。几行证据有力地表明, 体检引发基因组不稳定, 最终产生具有复杂核型的细胞, 从而阻止其增殖。对具有复杂核型的细胞进行分离和表征, 对于研究染色体数目不平衡对细胞生理学的影响至关重要。迄今为止, 还没有建立可靠隔离这种异倍体细胞的方法。本文提供了一种利用标准的、廉价的组织培养技术对复杂核型异倍体细胞进行富集和分析的协议。该协议可用于分析具有复杂核型的异倍体细胞的几种特征, 包括其诱导的衰老相关的分泌形态、炎症性质和与免疫细胞相互作用的能力。因为癌细胞常常会造成染色体数量的失衡, 所以破译体检如何影响正常细胞的细胞生理学是至关重要的, 最终目的是揭露其亲和抗癌变的作用。
染色体分离过程中的错误导致体检, 这种情况的特征是染色体数不是单倍体补充的倍数1,2,3,4。异倍体核型触发复制重音产生进一步的基因组不稳定5, 6, 7, 8, 9, 10, 增加核型复杂性, 并最终导致细胞周期逮捕的细胞亚群10。这里提出的方法的目的是生成和分离这样的亚群从循环细胞。通过使用廉价的组织培养技术, 该协议促进了细胞周期被捕获的复杂核型异倍体细胞的分离和鉴定。这些细胞被称为 ArCK (以复杂的核型) 细胞及其 euploid 循环对应物作为对照。
该议定书是第一个为此目的建立, 并允许隔离和进一步研究 ArCK 线包括, 但不限于, 其诱发衰老和衰老相关分泌表型 (SASP), 他们的亲炎特征, 以及它们与免疫细胞接触的能力。这里提出的方法已经在未变形, 永生化的人类细胞, 但尚未在癌症线测试。由于抑制一个或多个通路, 某些转化细胞可能对细胞周期停止敏感;因此, 应在其他单元格行中执行进一步的验证。
这种新的方法生成和丰富的被逮捕的细胞与复杂的核型 (ArCK) 允许研究的细胞, 有多个染色体的增益或损失, 并停止分裂。该方法的设置是为了方便快速、可靠地隔离 ArCK 细胞。
这项试验中最关键的一步是严格控制药物治疗的时间线, 最重要的是清除异倍体循环细胞。为了获得最佳结果, nocodazole 治疗和抖动的时机特别重要, 以确保循环细胞从板块中移除, 而它们仍然是圆形和有丝分裂, 防止有丝分裂细胞死亡或滑入 G1 的可能性,可能造成二、四倍体杂交人口。不建议在12小时 nocodazole 孵化时, 抖动的时间偏离两个以上的时间。
未来对 ArCK 细胞的研究有可能有助于更深入地了解复杂的核型对细胞生理学的影响。特别是, 最近的一项研究表明, 免疫系统的细胞能够与 ArCK 细胞的免疫清除功能进行交互并触发10。这里描述的方法为 ArCK 细胞的进一步表征提供了一个良好的出发点, 包括澄清未变形细胞免疫清除的分子机制和致癌转化的研究可以绕过此监视机制, 这是字段14、15中的关键问题。
The authors have nothing to disclose.
这项工作得到部分支持, 由科氏研究所支助 (核心) 赠款 P30-CA 14051 从国家癌症研究所, 由国家卫生补助研究所 (CA206157-22 和 GM118066) 和生硬的大理石癌症研究基金安洁莉卡阿蒙。安洁莉卡还是霍华德休斯医学研究所和格伦生物医学研究基金会的研究员。在美国意大利癌症基金会 (AICF) 的支持下, 由玛丽居里行动和意大利癌症研究协会 (AIRC) 的癌症研究奖学金, 以及五年期癌症研究奖学金。他得到了霍华德休斯医学研究所的一份奖学金的支持。
DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle Medium) | Thermofisher | 11995-073 | |
Thymidine | Sigma Aldrich | T1859 | |
Reversine | Cayman Chemical Company | 10004412 | |
Nocodazole | Sigma Aldrich | M1410 | |
Anti-p53 antibody | Santa Cruz | sc-126 | |
Anti-p21 antibody | Santa Cruz | sc-6246 | |
Anti-p16 antibody | BD | 554079 | |
Senescence b-Galactosidase Staining Kit | Cell Signaling Technology | 9860 | |
Proteome Profiler Human Cytokine Array Kit | R&D Systems | ARY005B |