Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה In Vivo

Published: August 4, 2018 doi: 10.3791/57355
Automatic Translation
1, 2, 3, 1, 2
1Department of Surgery, University of Bonn, 2Institute for Laboratory Animal Science & Experimental Surgery, RWTH Aachen University, 3Department of Anesthesiology, RWTH Aachen University

Summary

כאן אנו מציגים פרוטוקול להעריך השפעול קרישה בפלסמה רקמת הכבד ויוו. במודל חזירי, מנתחי מיקרו נבדק ע י לייזר דופלר, קרישה עומק נמדד בהיסטולוגיה, טמפרטורה באתר קרישת הדם על ידי מד חום אינפרא אדום, מצלמה תרמוגרפיים צינור איטום אפקט מתועדת על ידי לחץ פרץ ניסויים.

Abstract

קרישה בפלסמה כסוג של electrocautery משמש בניתוח כבד במשך עשרות שנים כדי לאטום את השטח גדול לחתוך הכבד לאחר hepatectomy העיקרי למניעת שטפי דם בשלב מאוחר יותר. ההשפעות המדויק של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד נבדקים רק לקוי. במודל שלנו חזירי, אפשר לבחון את ההשפעות קרישה קרוב היישום הקליני. לייזר משולב דופלר זרימה, ספקטרופוטומטרים מסמכים microcirculation משתנה במהלך קרישה בעומק הרקמה 8 מ"מ noninvasively, מתן מידע הניתנת לכימות על hemostasis מעבר הרושם הקליני סובייקטיבית. הטמפרטורה באתר קרישת דם בבדיקות קרישה פריור, פוסט של מד חום אינפרא אדום, עם מצלמה תרמוגרפיים קרישת הדם, מידת הטמפרטורה קרן גז אינו אפשרי עקב הסף העליון של המכשירים. העומק של קרישת הדם נמדד ברמה המיקרוסקופית ב hematoxylin/אאוזין מוכתמים מקטעים לאחר כיול מיקרומטר אובייקט ונותן מידע מדויק על כוח הגדרה-קרישה העומק-הזיקה. האפקט איטום נבדק על צינורות המרה כמו זה לא אפשרי coagulator פלזמה לחסום כלי דם גדולים יותר. פרץ לחץ ניסויים מתבצעות בחוץ אברים explanted כדי לשלול את לחץ הדם הקשורים אפקטים.

Introduction

ארגון קרישה בפלסמה (APC) הוא כלי נפוץ בניתוח בטן במשך יותר משלושה עשורים1,2. זה טכניקה סטנדרטית עבור ההישג של hemostasis המשני אחרי hepatectomy מז'ור מאת איטום הכבד לחתוך משטח למניעת שטפי דם מאוחר יותר3. קרישה בפלסמה היא צורה מיוחדת של גלי רדיו electrocautery, אשר מספק את האנרגיה החשמלית באמצעות קשת של גז מיונן. מתן hemostasis אלקטרותרמי monopolar, אסטמה של טכניקה זו יש את היתרון של מניעת האלקטרודה לדבוק רקמות4. קרן גז מיונן מכוונת באופן אוטומטי לאזור של ההתנגדות החשמלית הנמוכה, היא מפנה את מבטה כאשר ההתנגדות עולה עקב לייבוש לאזורים אחרים עדיין לא desiccated. זה מייצר לעומק מוגבל אחיד של קרישה5,6. גורמים המשפיעים על האפקט קרישת הדם הם ההפעלה זמן, את הגדרת צריכת חשמל של המכשיר קרישת הדם ואת המרחק בין החללית אל הרקמה. הליום הוא גז מנשא אחר, אשר יכול לשמש עבור פלזמה קרישה7. מחקרים אחרונים שהיו בשימוש קליני מרוכז על התוצאות הקליניות מאשר ממצאים היסטולוגית ופונקציונליים3,8,9, בעוד מחקרים ניסיוניים התמקדו במבחנה חקירות10 או ניסויים מבודד איברים perfused11.

פרוטוקול המשמש כבסיס מאפשר חקר ההשפעות של קרישה בפלסמה במודל בעלי חיים גדולים קרוב היישום הקליני באמצעות ציוד סטנדרטי אנושי על חזירים: Microcirculation מוערך noninvasively על ידי זרימה דופלר לייזר ו ספקטרופוטומטרים, אשר הוא כלי קליני סטנדרטי עבור12,זו אינדיקציה13. שינויי טמפרטורה במהלך קרישה מנוטרים של מד חום אינפרא אדום, מצלמה תרמוגרפיים. העומק של קרישת הדם נמדד על היסטולוגית hematoxylin/אאוזין צבעונית מקטעים לאחר קציר של דגימות רקמה. עבור ההשוואה עם אמצעים אחרים עבור hemostasis המשני, מתבצעים ניסויים לחץ פרץ. בניגוד טכניקות שתואר לעיל14, אלה נערכות על האיברים explanted כדי לא לכלול את לחץ הדם הקשורים אפקטים. בנוסף החקירות שתואר השפעות מקומיות של קרישה בפלסמה, בדיקות דם רגיל גם ניתן לבצעם במודל חזירי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

כללים נשלטת על ידי החקיקה הגרמנית מחקרים שנעשו בבעלי חיים, כמו גם עקרונות של מעבדה חיה טיפול (מכוני הבריאות הלאומיים הפרסום עורך 8, 2011) עקבו אחריך ניתנה ההרשאה רשמי ממשרד ממשלתי טיפול בבעלי חיים (Landesamt לדנציג נאטור, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, אסן, גרמניה).

1. בעלי חיים

  1. משתמשים בחזירים נשי צמחי תרבות מסורתיים גרמני (במשקל של 25-30 ק"ג) שוכן בתוך כלובים פתוח.
  2. השתמש חיות 5 לכל קבוצה (ארגון והליום).
  3. לאפשר את החיות להתאקלם בסביבה למשך לפחות שבוע לפני הניסויים. חיות מהירות עבור 24 שעות לפני הניתוח עם גישה חופשית למים.

2. הרדמה

  1. Premedicate החיות עם זריקה תוך שרירית של קטאמין (15 מ"ג/ק"ג משקל גוף [BW]), חריגות השירותים הווטרינריים (10 mg/kg BW) אטרופין (0.1 mg/kg BW) 10 דקות לפני אינדוקציה של הרדמה.
  2. גישה ורידית היקפיים היא הוקמה על ידי הצבת בצינורית 22-מד לתוך הווריד האוזן.
  3. לגרום הרדמה כללית על ידי הזרקת עירוי propofol 2 מ"ג/ק"ג משקל גוף.
  4. למקם את החיה במצב פרקדן, לבצע חתך אורכי העור ב- groove צוואר מעל באורך של 2 ס מ. וריד אתר דרך ההכנה בוטה של רקמת השומן התת עורית. הכנס בצינורית, ואז Seldinger תיל.
  5. . משכי בצינורית והכנס קטטר בצרפתית 14 מעבר לגדר מדריך. תמשוך את החוט. להתחבר קטטר הסיומת, שמלמדות את הצנתר על ידי רצועה או התפר.
  6. . תוציא את הלשון והכנס laryngoscope ישר. השתמש את קצה laryngoscope כדי להוריד את הגרון. הכנס את הצינורית בתוך מיתרי. למקם את השרוול תחת glottis ונפח.
  7. לאוורר עם 40% חמצן ב 20-26 נשימות לדקה, נפח ענק של 10 מ"ל/ק"ג כדי לשמור על המתח דו תחמוצת פחמן חלקי קצה-גאות בין 36 ל 42 מ מ כספית.
  8. לשמור על הרדמה עם איזופלוריין-ריכוז של 1-1.5%, פנטניל-ריכוז של 3-4 µg/ק ג/שעה.
  9. לספק תמיסת רינגר לקטט בשיעור התחלתי של 4 מ"ל/ק"ג/h, ולהגדיל לאחר פתיחת בטן כדי שיעור קבוע אינפוזיה של 8 מ"ל/ק"ג/שעה.

3. ניתוח ו קרישה בפלסמה

  1. מקם את החיה במצב פרקדן על שולחן כירורגי סטנדרטי.
  2. לחטא את העור על-ידי החלת מחטא כירורגי רגיל (2-פרופנול 45 גרם/100 גרם, 1-פרופנול 10 גרם/100 גרם, Biphenyl-2-ol 0.2 גרם/100 גרם) עם מקלון כירורגי עבור 3 פעמים.
  3. לבצע פתיחה של קו האמצע רחב הבטן מן הסרעפת כדי לחיקו עם איזמל ולהתקין רטרקטורים כירורגיים.
  4. לעבור על המכשיר קרישה פלזמה, לפתוח בקבוק גז ארגון או הליום, בהתאם הגז המוביל בשימוש. להתאים את זרימת הגז לשלטון 3 L לדקה קרישה בחר התקן פלט כרצונכם.
    הערה: שני הגזים האצילים, ארגון או הליום, יכול לשמש עבור קרישה בפלסמה. קרישה תופעות דומות. ראה התייחסות7 לקבלת פרטים.
  5. מבצע קרישה בפלסמה הכבד האונה השמאלית כפי שתואר לעיל7. השתמש תבנית טיטניום (1 x 1 ס מ מרובע צמצם2) כדי לתקנן את אזור קרישת הדם. מצב של קרישת חסר עבור 5 s עם מרחק בדיקה של 1 ס מ. ניתן לבצע את coagulations עם הגדרות צריכת חשמל שונה לצד מרחק קצר בין coagulations של 5 מ מ (איור 1).
  6. עבור קציר של הכבד, לחלק כל החיבורים ligamentous אל הכבד. לבודד ולחלק pedicle הכבד מעל flexure תריסריון מעולה להשאיר חלקים ארוכים של וריד שער הכבד, צינור המרה המשותף. לחלק את הווריד בכליות מעל ומתחת הכבד ולאחזר את האיבר.
  7. לאחר המסיק הכבד, החזירים היו מורדמים על ידי עירוי מינהל 0.16 g/kg BW פנטוברביטל.
  8. על הניסויים לחץ פרץ, נכרות חצי של האונה השמאלית של הכבד המדיאלי עם מספריים חדות. פלזמה-מצב של קרישת חסר החתך על פני השטח (הספק 100W) או לאטום את המשטח לחתוך עם דבק פיברין (איור 2).

4. פיפטות מדידה

הערה: לייזר ספקטרוסקופיה דופלר ניתן לקבוע את זרימת הדם בתוך הרקמה באמצעות מדידה של דופלר הנגרמת על ידי התנועה של אריתרוציטים. האות לייזר עולה בקנה אחד עם המספר של אריתרוציטים נע. ספקטרוסקופית לייזר דופלר נמצא בשימוש קליני (למשל השתלת ברפואה) ומאז לאמת מספר פעמים15.

  1. . הפעילי את לייזר דופלר זרימה ואת ספקטרופוטומטרים השתמש בדיקה שטוח.
  2. קח למדידות בסיסית עבור זרימת והמהירות. לשמור או הערה הערכים.
  3. לבצע קרישת הדם כמתואר תחת 3.5.
  4. במקום המכשיר שטוח על אתרי קרישת הדם, מדד תזרים והמהירות. שוב, לשמור או הערה ערכים.
  5. חזור על כל הגדרות צריכת החשמל של ההתקן coagulator.

5. הטמפרטורה מדידה

  1. להחליף את המערכת (המצלמה תרמוגרפיים המחברת, מד חום אינפרא אדום) ולתת לו לרוץ במשך לפחות שעה לפני ביצוע מדידות.
  2. כוונון פוקוס ולהציג מסגרת על המצלמה תרמוגרפיים באתר קרישת הדם. רצפים אינפרא-אדום יכול להתגלות עם הרזולוציה המרחבית של 1024 x 768 פיקסלים עם טמפרטורה רזולוציה גדולה יותר 20 ח"כ. לקחת בחשבון, זה האזור של קרישת הדם ואת הרקמה הסובבת — מושפעים על-ידי העברת החום – ממוקם באמצע הנוף.
    הערה: זה צריך לכלול פיקסלים רבים של המסגרת ככל האפשר עבור המרחבי של פתרון אופטימלי.
  3. תהליך קרישת הדם רשומה עם coagulator פלזמה על פני הכבד עם המצלמה תרמוגרפיים על פני תקופה 2-מין.
  4. לנתח את רצפי תמונות עם התוכנה ניתוח הדמאה תרמית: להגדיר אזורים מעניינים.
    הערה: תוכנות מחשב הקורס לטמפרטורה המתאימה רשע לאורך זמן.

6. מדידת העומק קרישה

  1. הקציר האונה השמאלית של הכבד המדיאלי עם מספריים חדות.
  2. לסלק את האתרים קרישה עם עובי 1 ס מ. חותכים למקטעים האורך בעובי 3 מ מ עיבוד נוסף.
  3. תיקון דגימות רקמה ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה עם נייטרלי 10% buffered פורמלין. חום שעוות פרפין 2 ° C מעל נקודת ההיתוך ולהטביע פרוסות. תהליך בן לילה.
  4. לבצע צביעת Hematoxylin/אאוזין.
    1. Deparaffinize ומעניק הרקמה בטבילת לאחר מכן 2 x קסילן, 100% אתנול (EtOH), 95% EtOH, 70% EtOH, יונים H2O למשך 2 דקות.
    2. כתם דגימת הרקמות של מאייר פתרון Hematoxylin למשך 3 דקות.
    3. עכשיו לשטוף במי ברז למשך 5 דקות.
    4. כתם הרקמה אאוזין פתרון במשך 3 דקות.
    5. לשטוף ב 2 x EtOH 95% ולאחר מכן קסילן למשך 3 דקות. הר עם המדיום הרכבה סטנדרטי.
  5. . הפעילי את המערכת (מיקרוסקופים המחוברים מצלמה, תוכנות ליצירת תמונות) הצג את כל המקטעים עם 40 X הגדלה.
  6. קח תמונה של מיקרומטר אובייקט בהגדלה גדולה של 40 X. לחץ לחצן כיול מחדש החלון מטרות. בחר כיול ידני. צייר קו על התמונה מיקרומטר של 100 מיקרומטר. הזן 0, 1 מ מ, בתיבת הדו-שיח ' ולחץ על ' אישור '.
  7. בחר אורך בתצוגה > ניתוח פקדים > חלון מדידות וביאורים. למדוד מהמשטח הכבד לשוליים קרישה עם העכבר. ייצוא או הערה התוצאה. חזור על המדידה על מיקום אחר לאותה השקופית.
    הערה: עומק קרישה יכול בקלות להיות מבודלים מהקבצים רקמת הכבד נורמלי על ידי השוליים חדים בין חבלים hepatocyte נורמלי באזור של נמק עם ציטופלזמה הגמדי, גרעינים pyknotic אזורי דימום.
  8. חישוב ממוצע מתוך שתי מדידות.

7. מדידת לחץ פרץ

  1. . הפעילי את המערכת (משאבות אוטומטיים, נפיצות) הכינו את הדגימות כבד על פי השלב 3.7.
    הערה: השתמש שתי משאבות מקבילי מחובר דרך 3-דרך-צימוד. אין אפשרות לקבל את הלחץ המקסימלי של 1500 מ"מ כספית עם משאבה בודדת.
  2. לבודד וריד שער הכבד, עורק הכבד נפוץ, צינור המרה עם מספריים ב pedicle המספקת. תהדק את וריד שער הכבד עם מלקחיים אוברהולט, מאתרים ומפסיקים בתפר monofil 4-0. תהדק את עורק הכבד נפוץ מלקחיים אוברהולט, מאתרים ומפסיקים בתפר monofil 4-0.
  3. להכניס קטטר Ch-16 צינור המרה, מאתרים ומפסיקים בתפר משי 2-0. להתחבר הקטטר המשאבות אוטומטיים, להתקין 3-דרך צימוד עם מד לחץ (איור 3).
  4. למלא את המזרק זלוף עם תמיסת מלח.
  5. להתחיל משאבות אוטומטית עם קצב העברה של 99 mL/h.
  6. לפקח על הכבד לחתוך משטח ובלחץ מטר ללחץ פרץ זליגת ולהקליט.
    הערה: זיהוי קל של דליפה, פטנט כחול יכול להתווסף תמיסת מלח (2 מ"ל פטנט כחול + 18 מ ל תמיסת מלח). קל יותר להתבונן פרץ לחץ על ידי לב של אובדן הלחץ על מד לחץ.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

מנתחי מיקרו: ניצול בהתקן אבחון עבור hemostasis בעקבות קרישה בפלסמה ניתן להדגים על ידי מנתחי מיקרו שינויים. נימי דם זרימה (מוצג בתור יחידות שרירותי (AU)) תקטן מערך הבסיס של 142.7 ± 76.08 AU כדי 57.78 ± 49.57 AU-25 W התקן פלט כוח, כדי 48.5 ± 7.26 AU 50 W וכדי 5.04 ± 1.31 AU ב-100 W (איור 4).

טמפרטורה: טמפרטורה באתרים קרישת דם נמדדה באמצעות מצלמה תרמוגרפיים (איור 5). שינויי הטמפרטורה חשיבות רק תועדו עם מד חום אינפרא אדום. זה הראה לטמפרטורה בסיסית של 32.42 ± 2.27 ° C. לאחר קרישה עם 25 וואט, הטמפרטורה היתה 33.33 ± 1.81 ° C. קרישה עם לייזר W 50 הניב לטמפרטורה של 31.17 ± 2.13 ° C. לאחר קרישה עם ההגדרה כוח מקסימלי של 100 W, הטמפרטורה היתה בעיקר ללא שינוי עם 30.17 ± ° 3.19 C (איור 6).

קרישה עומק: קרישה בפלסמה יוצר אזור שטחית של נמק עם יכול להיות בקלות להבחין בין parenchyma בכבד נורמלי (איור 7). העומק של נמק ניתן למדוד על מקטעים מרובים, מציגה גידול לא לינארי לחלוטין עם רמות הכוח העולה coagulator פלזמה. בעקבות קרישה בפלסמה הליום, העומק קרישת הדם הוא 230.2 ± 57.83µm ב 25W מיקרומטר 314.6 ± 87.39 50 W, מיקרומטר 292.2 ± 45.65-75 ואט ומיקרומטר 412.9 ± 160.9-100 W התקן פלט חשמל (איור 8). הכוח פלט של המכשיר ניתן לבחור באופן חופשי ובחרת מתאם חיובי עם קרישה עומק7.

פרץ לחץ: מדידות לחץ פרץ ביצע על פני חתך של מראה explanted השמאלי המדיאלי בכבד באונה אין הבדל לאחר הליום (1254±578.7 מ מ כספית) או ארגון (1003 ± 554.4 מ מ כספית) קרישה בפלסמה (איור 9). פרץ לחצים נמוכה לעומת איטום פיברין7 אבל נראה מתאים לשימוש קליני.

Figure 1
איור 1: אונה בכבד המדיאלי השמאלי לאחר ארגון קרישה בפלסמה. שמונה אתרים קרישה על האונה השמאלית של הכבד המדיאלי (למעלה משמאל לימין ומלמעלה למטה.: W, W, W, W, W, W, 75 וואט, 100 W 50 30 25 20 15 10). היקף קרישה סטנדרטית עם העובש. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: הכנת הכבד שתל למדידות לחץ פרץ. מחצית האונה הכבד הוא resected, השטח לחתוך הכבד אטומה עם דבק פיברין. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: ציוד למדידות לחץ פרץ. משאבת אוטומטי (מזרק מלא עם תמיסת מלח), נפיצות מחובר דרך 3-דרך-צימוד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4: שינויים Microcirculation. שינויים דם זורם (מוצג בתור יחידות שרירותיות) לפני, לאחר ארגון קרישה בפלסמה על 25 וואט, 50 W ו 100 W התקן פלט חשמל (n = 3-6). * = P< 0.05, 1-way ANOVA. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 5
איור 5: טמפרטורה באתרים קרישת הדם נמדד עם מצלמה תרמוגרפיים. התמונה למופת עם מצלמה תרמוגרפיים במהלך הליום קרישה בפלסמה עם 40W התקן פלט חשמל. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 6
איור 6: טמפרטורה באתרים קרישת הדם נמדד עם מד חום אינפרא אדום. הטמפרטורה באתרים קרישת הדם נמדד עם מד חום אינפרא אדום לפני ואחרי ארגון קרישה בפלסמה (n = 3-6). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 7
איור 7: אזור של נמק שטחית בעקבות קרישה בפלסמה הליום. Hematoxylin/אאוזין מוכתם סעיף הכבד בהגדלה X 40. באזור של נמק מציגה הפסד של hepatocyte חוט אדריכלות, תאים עם ציטופלזמה הגמדי ואזורי דימום. חיצים מציינים את העומק של קרישה בשני מקומות שונים. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 8
איור 8: עומק קרישה בעקבות קרישה בפלסמה הליום. קרישה עומק ברמות עוצמה שונות (25W, 50W, 75 ואט של 100W, n = 6). * = P< 0.05, * * * = P< 0.001, 1-way ANOVA. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 9
איור 9: פרץ לחץ. פרץ מדידות לחץ על פני לחתוך הכבד בעקבות קרישה בפלסמה או ארגון או הליום. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 10
איור 10: תוצאות בדיקת דם- נבחרת פרמטרים של גז ביוכימיה ודם קלינית התוצאות יוצגו לפני, הבאים ארגון קרישה בפלסמה. ללא שינויים משמעותיים להתרחש, הממחיש את ההשפעות של קרישה בפלסמה מוגבל שינויים המקומיות באתר קרישת הדם. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

מכרסמים מודלים לניתוח בכבד נוצרים עבור זמן16. עם זאת, מודלים בעלי חיים גדולים מציעות יתרונות מסוימים: אין ציוד המיקרוכירורגית נדרש ציוד פעיל סטנדרטי עבור בני אדם יכול להיות מיושם, טכניקות ניתוחיות דומות לשימוש קליני, שיטות הערכה קלינית רגיל יכול להיות להעביר הניסויים. לדוגמה, תקן בדיקות דם קליני יכול להתבצע ללא צורך שיטות בדיקת מעבדה מיוחדים (איור 10).

החזירים הן חיות מעבדה המתאימה למחקר כך את הפיזיולוגיה שלהם דומה ה-17בני אדם. עקב הדמיון גודל, מבנה סגמנטלי, היסטולוגיה, חזירים הם גם אחד של חיות מעבדה סטנדרטיים עבור ניתוח ניסיוני הכבד18. קרישה בפלסמה הוערך במודל חזירי בגלל היתרונות (דמיון ל פיזיולוגיה אנושית והערכה של ציוד רפואי סטנדרטי)7. בניגוד טכניקות ניתוחיות, ניהול anesthesiologic לא יכול להיות בקלות אומדן. במיוחד את ניהול דרכי הנשימה יכולה להיות קשה17. המרחק החותכות glottis הוא ארוך מאוד, והוא האנטומיה שונים לבני orotracheal צנרור מקשה על החוקר לא מנוסים. בנוסף, המסכה איוורור הוא כמעט בלתי אפשרי של חזירים, כך הניצולת אסטרטגיות (למשל מיכשור וציוד) צריך להיות נוכח.

כדי להשיג תוצאות דומות קרישה בפלסמה, החוקר צריך לקחת אך ורק תשומת לב לתקנן את המרחק בדיקה והמשך של קרישת דם. בזמן זה יחסית קל לשמור על המרחק בדיקה, סטופר יכול לשמש כדי לספור 5 s של קרישת דם. הטכניקה המתוארת של קרישה בפלסמה על פני הכבד שימש במחקר בסיסי על ההשפעות הבסיסית של קרישה בפלסמה על הכבד ויוו7. הטכניקות המתוארות לעיל של קרישת הדם, הרדמה, ניתוח, פלזמה, חזיר יכול לשמש גם כדי לבחון כריתה הכבד העיקריים וכדי להשוות טכניקות שונות של משטח חיתוך איטום לאחר מכן.

זרימה דופלר של לייזר ספקטרופוטומטרים למדידות microcirculation כלי קליני סטנדרטי19 ויש נוכחו להיות שימושי מאוד להערכה של מחזור הדם ישירות על parenchyma איברים. ערכים עבור זרימת הדם ומהירות זרימת דם מחושבים עם היתרון של אי-invasivity. מנתחי מיקרו פרמטרים הם רק אמצעי עקיף של אפקט קרישת הדם, כך מדידות דופלר צריך להיות בקורלציה עם פרמטר אובייקטיבי על קרישת הדם. בניסויים שלנו, השתמשנו קרישה היסטולוגית עומק עבור המתאם.

חסרונה של מדידת טמפרטורה הוא חוסר היכולת למדוד את הטמפרטורה של קרן פלזמה במהלך קרישה כי הטמפרטורה של קרן פלזמה מעל הסף העליון של שני ההתקנים. מד חום אינפרא אדום קל להחיל, ואילו הגדרת המצלמה תרמוגרפיים מורכבת יותר, אבל מספק נתונים יותר מדויקים. הטמפרטורה בסיסית לפני הקרישה היא נמוכה מהצפוי (הגוף חזירי טמפרטורה ~38.5 ° C17), הממחיש את ההשפעות משובש של פתיחת בטן על טמפרטורת הגוף. הטמפרטורה שנמדדה אינה מגדילה במהלך ואחרי קרישה, הממחיש את זלוף מעולה של הכבד. אפקט זה גניבת תרמי של הכבד ידוע תדר רדיו אבלציה20. פרץ לחץ הנהלות נערכו על מערכת צינור המרה, ולא על אוניות הכבד על מסיבה פשוטה: זה בלתי אפשרי עבור פלזמה coagulators (כפי שהיא אטימה פיברין) לסגירת כלי גדול יותר. שני אמצעים hemostasis משני לאטום את המשטח לחתוך איבר resected, בעוד כלי גדול יותר מאתרים במהלך כריתה. ניסויים הלחץ שלנו פרץ שונו במקצת לעומת הטכניקה דווח על14. מדדנו פרץ הלחץ על האיברים explanted מטעמים ארגוניים. כללים אלה את לחץ הדם הקשורים אפקטים, הרבה יותר קל ליישם מאשר שימוש perfused או ב- vivo איברים. ערכים של הלחץ ניסויים לכן, אולי, נבדלים perfused /ב- vivo מדידות בגלל הכבד שינו מבנה (בדרך כלל גבוה יותר לחצים על האיברים explanted). הטכניקה בלחץ פרץ המתואר לעיל ניתן גם שבוצעו ב- vivo.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

המחברים לא תודות לך

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Xylazine 20 mg/mL Vetoquinol GmbH Xylapan
Ketamine 100 mg/mL Ceva GmbH Ceva Ketamine Injection
Atropine 100 mg / 10 mL Dr. Franz Köhler Chemie GmbH Atropinsulfat Köhler 100mg Amp.
Propofol Fresenius Kabi GmbH Propofol 1% MCT Fresenius
Fentanyl KG Rotexmedica GmbH Fentanyl 0,5mg Rotexmedica
Isoflurane Abbot GmbH Forene 100% (V/V) 250 mL
Ringer's lactate solution Baxter Deutschland GmbH sodium 131mmol/l, potassium 5 mmol/l, calcium 2 mmol/l, cloride 111 mmol/l, lactate 29 mmol/l
Surgical disinfactant Schülke & Mayr GmbH Kodan Tinktur forte gefärbt 1l 104804
Motorized microscope Nikon Instruments Europe Eclipse TE2000-E
Microscope camera Nikon Instruments Europe Digitalsight DS-Qi1Mc
Imaging software Nikon Instruments Europe NIS elements Vers. 4.40
Plasma coagulator Söring GmbH CPC-1000
Argon gas Linde AG Argon 4.8 
Helium gas Linde AG Helium 4.8
O2C LEA Medizintechnik GmbH O2C Version 1212 with LF-2 or LF-3 probe
Infrared thermometer Voltcraft VOLTCRAFT IR 260-8S
Thermographic camera InfraTec GmbH VarioCAM HD head 820
Thermographic analysis software InfraTec GmbH IRBIS 3
Mayer's Hematoxylin solution Merck 1.09249
Eosin solution VWR International GmbH Merck 1.09844
Rollerpump Masterflex L/S easy Load Cole-Parmer Instrument Company model 7518-10
Perfusorpump B. Braun Melsungen AG Perfusor secura FT
Digital pressure meter Greisinger electronic GMH 3161
Perfusorsyringe, 50 mL B. Braun Melsungen AG REF 8728810 F
Perfusor line, Type IV Standard, PVC Luer lock B. Braun Melsungen AG REF 8722960
3-Way stopcock, Dicofix C35C B. Braun Melsungen AG REF 16494 C
Silk 2-0. 3 metric Resorba REF H5F
Vicryl 4-0 Sutupak Ethicon V1224H
NaCl 0.9 % B. Braun Melsungen AG

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels. ArchSurg. 111, 392-397 (1976).
  2. Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury. EurJSurg. 167, 316-318 (2001).
  3. Frilling, A., et al. Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial. Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).
  4. Raiser, J., Zenker, M. Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art. J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).
  5. Farin, G., Grund, K. E. Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications. EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).
  6. Grund, K. E. Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough? Endoscopy. 29, 196-198 (1997).
  7. Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue. J Int Med Res. , (2017).
  8. Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury. JTrauma. 31, 717-720 (1991).
  9. Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs. JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).
  10. Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. Application of argon plasma coagulation in skin surgery. Dermatology. 197, 152-157 (1998).
  11. Carus, T., Rackebrandt, K. Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model. ISRNSurg. , 518924 (2011).
  12. Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer. DisEsophagus. , (2008).
  13. Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers. Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).
  14. Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs. Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).
  15. Knobloch, K., et al. Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery. ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).
  16. Kanzler, S., et al. Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I. Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).
  17. Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research. Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).
  18. Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver. Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).
  19. Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study. Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).
  20. Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size. AnnSurg. 227, 559-565 (1998).

Tags

רפואה גיליון 138 ארגון קרישה נגמ"ש הליום פלזמה קרישה בפלסמה קרישה בפלסמה ניתוח כבד חזירי חזיר חזיר
הערכה של קרישה בפלסמה על רקמת הכבד במודל חיה גדולה <em>In Vivo</em>
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Glowka, T. R., Paschenda, P.,… More

Glowka, T. R., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. Assessment of Plasma Coagulation on Liver Tissue in a Large Animal Model In Vivo. J. Vis. Exp. (138), e57355, doi:10.3791/57355 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter