Summary
نقدم هنا بروتوكولا تجريبيا تقييم تخثر البلازما في أنسجة الكبد في الجسم الحي. في نموذج الخنزير، يتم فحص دوران الأوعية الدقيقة بواسطة الليزر دوبلر، ويقاس عمق التخثر الأشيع، درجة الحرارة في موقع تخثر الدم بحرارة الأشعة تحت الحمراء وكاميرا حرارية، ولاصق ختم أثر الموثق بضغط الانفجار التجارب.
Abstract
تخثر البلازما كشكل من أشكال اليكتروكاوتيري يستخدم في جراحة الكبد على مدى عقود لختم سطح قطع الكبد كبيرة بعد ظهرت الرئيسية لمنع نزيف في مرحلة لاحقة. وتبحث فقط سيئة الآثار الدقيقة تخثر البلازما في أنسجة الكبد. في نموذجنا الخنزير، ويمكن النظر في آثار التخثر قريبة من التطبيق السريري. التغيرات ليزر مجتمعة دوبلر مقياس التدفق وجهاز المطياف الضوئي وثائق دوران الأوعية الدقيقة خلال التخثر في عمق النسيج 8 مم نونينفاسيفيلي، توفير المعلومات القابلة للقياس عن الأرقاء يتجاوز الانطباع السريري ذاتية. هو تقييم درجة حرارة الموقع التخثر مع تخثر قبل وبعد حرارة الأشعة تحت حمراء وكاميرا حرارية أثناء تخثر الدم، وقياس درجة حرارة الغاز شعاع ليس ممكناً بفضل العتبة العليا للأجهزة. يقاس مجهريا على الهيماتوكسيلين/ويوزين ملطخة كائن ميكرومتر المقاطع بعد معايرة عمق تخثر الدم ويعطي معلومات دقيقة عن قوة الإعداد-التخثر العمق-العلاقة. يتم فحص أثر الختم على الصفراوية حيث أنه من غير الممكن بالنسبة كواجولاتور بلازما لختم الأوعية الدموية الكبيرة. إجراء تجارب الضغط انفجر خارجاً على أجهزة اكسبلانتيد لاستبعاد ضغط الدم المتعلقة بالآثار.
Introduction
تخثر بلازما الأرغون (APC) أداة تستخدم على نطاق واسع في عملية جراحية في البطن لأكثر من ثلاثة عقود1،2. وأسلوب قياسي لتحقيق الأرقاء الثانوي بعد أن ظهرت الرئيسية بختم الكبد قطع السطح لمنع نزيف بعد3. تخثر البلازما شكل متخصصة من اليكتروكوتيري الترددات الراديوية، التي توفر الطاقة الكهربائية عن طريق قوس الغاز المتأين. توفير الأرقاء اليكتروثيرمال أحادي القطب، هذا الأسلوب noncontact له ميزة منع مسرى إلى التمسك الأنسجة4. شعاع الغاز المتأين تتجه تلقائياً إلى منطقة أدنى المقاومة الكهربائية وتشغيل بعيداً عندما ترتفع المقاومة بسبب الجفاف إلى مناطق أخرى لم مبشور. وهذا ينتج عمق محدودة موحدة تجلط الدم5،6. العوامل المؤثرة على أثر تخثر يتم التفعيل الوقت، إعداد الطاقة جهاز التخثر والمسافة من التحقيق إلى الأنسجة. الهيليوم هو آخر الغاز الناقل، التي يمكن أن تستخدم ل تخثر البلازما7. الدراسات السريرية الأخيرة مركزة على النتائج السريرية بدلاً من غذائها والفنية نتائج3،8،9، بينما الدراسات التجريبية التي تركز على التحقيقات في المختبر 10 أو تجارب على الأجهزة المعزولة perfused11.
يسمح البروتوكول الأساسية دراسة آثار تخثر البلازما في نموذج حيوان كبير قريب من التطبيق السريري باستخدام المعدات البشرية الموحدة على الخنازير: يتم تقييم دوران الأوعية الدقيقة نونينفاسيفيلي بمقياس دوبلر التدفق على ليزر و جهاز المطياف الضوئي، التي أداة قياسية سريرية لهذا دلالة12،13. يتم رصد التغيرات في درجة الحرارة أثناء التخثر مع حرارة الأشعة تحت حمراء وكاميرا حرارية. يقاس عمق التخثر في غذائها الهيماتوكسيلين/ويوزين الملون المقاطع بعد الحصاد لعينات الأنسجة. للمقارنة مع الوسائل الأخرى للارقاء الثانوي، تجري تجارب ضغط الانفجار. على النقيض من التقنيات الموصوفة سابقا14، هذه تجري على أجهزة اكسبلانتيد لاستبعاد ضغط الدم المتعلقة بالآثار. بالإضافة إلى التحقيقات وصف الآثار المحلية تخثر البلازما، يمكن أيضا القيام باختبارات الدم القياسية في الطراز الخنزير.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تم اتباع القواعد التي تحكمها التشريعات الألمانية لدراسات أجريت على الحيوانات، فضلا عن "مبادئ لمختبر الحيوان الرعاية" (المعاهد الوطنية للصحة المنشور الطبعة 8، 2011). يتم منح إذن رسمي من مكتب رعاية الحيوان الحكومية (لانديسامت für Natur، أومويلت und فيربراوتشيرشوتز نوردراين-فيستفالن، ركلينغهاوزن، ألمانيا).
1-الحيوانات
- استخدام الخنازير landrace الألمانية الإناث (وزنها 25-30 كجم) يسكنون في أقفاص مفتوحة.
- استخدام الحيوانات 5 كل مجموعة (الأرجون والهيليوم).
- السماح للحيوانات على التأقلم للمناطق المحيطة بها لمدة أسبوع واحد على الأقل قبل التجارب. الحيوانات بسرعة من أجل 24 ساعة قبل الجراحة مع حرية الوصول إلى المياه.
2-التخدير
- بريميديكاتي الحيوانات مع حقنه عضليا الكيتامين (15 مغ/كغ من وزن الجسم [و])، إكسيلازيني (10 مغ/كغ وزن الجسم) والاتروبين (0.1 مغ/كغ وزن الجسم) 10 دقيقة قبل تنظيم دورات تعريفية للتخدير.
- وصول الوريدية المحيطية تنشأ بموجب تنسيب قنية 22-قياس الوريد إذن.
- حمل التخدير العام بالحقن رابعا بروبوفول 2 مغ/كغ من وزن الجسم.
- وضع الحيوان في موقف ضعيف وأداء شق جلد طولية في أخدود جوجولار على طول من تحديد موقع الوريد 2 سم. من خلال إعداد حادة في النسيج تحت الجلد. إدراج قنية، ثم Seldinger الأسلاك.
- التراجع عن القنية وإدراج 14 fr. القسطرة عبر الأسلاك دليل. سحب سلك الدليل. توصيل قسطرة للتمديد وثبت القسطرة بحزام أو خياطة الجروح.
- سحب اللسان وإدخال المنظار على التوالي. استخدام تلميح المنظار لهدم في ابيجلوتيس. إدراج أنبوب عن طريق الاحبال الصوتية. ضع الكفة تحت المزمار وتضخيم.
- يحققوا مع الأكسجين 40% في الدقيقة 20-26 الأنفاس وحجم المد 10 مل/كغ إبقاء التوتر ثاني أكسيد الكربون الجزئي نهاية-المد والجزر بين 36 و 42 ملم زئبق.
- المحافظة على التخدير مع إيسوفلوراني بتركيز 1-1.5% وشيفتشنكو بتركيز 3-4 ميكروغرام/كغ/ساعة.
- توفير حل لاكتات في المسابقة أولى بمعدل 4 مل/كغ/h، وزيادة بعد فتح البطن لتسريب مستمر بمعدل 8 مل/كغ/ساعة.
3-الجراحة وتخثر البلازما
- وضع الحيوان في موقف ضعيف على طاولة العمليات جراحية قياسية.
- تطهير الجلد بتطبيق مطهر جراحي قياسية (2-بروبانول ز 45/100 غرام، 1-بروبانول ز 10/100 غرام، ثنائي الفينيل-2-الرتب الأخرى 0.2 غ/100 غ) مع مسحه جراحية 3 مرات.
- القيام فتح البطن خط الوسط واسعة من عملية الرهابه إلى العانة مع مشرط وتثبيت الكامشات الجراحية.
- التبديل على جهاز تخثر البلازما، وفتح زجاجة غاز الأرجون أو الهليوم، اعتماداً على الغاز الناقل المستخدمة. ضبط تدفق الغاز إلى طاقة 3 لتر/دقيقة التخثر حدد جهاز الإخراج كما هو مطلوب.
ملاحظة: يمكن استخدام كلا من الغازات الخاملة، الأرجون أو الهليوم، تخثر البلازما. آثار التخثر قابلة للمقارنة. راجع مرجع7 لمزيد من التفاصيل. - أداء تخثر البلازما في فص الكبد الأيسر كما هو موضح سابقا7. استخدام قالب تيتانيوم (فتحه مربعة 1 × 1 سم2) إلى توحيد منطقة التخثر. يتجمد 5 s مع مسبار لمسافة 1 سم. يمكن أن يؤديها تخثر مع إعدادات طاقة مختلفة جنبا إلى جنب مع مسافة قصيرة بين تخثر 5 مم (الشكل 1).
- لحصاد الكبد، تقسيم كل وجود اتصالات للكبد. عزل وتقسيم بيديكلي كبدي أعلاه flexure الإثناعشرية متفوقة ترك أجزاء طويلة من الوريد البابي والقناة الصفراوية المشتركة. تقسيم على المنوال كابل أعلى وأسفل الكبد واسترداد الجهاز.
- بعد الحصاد في الكبد، كان euthanized الخنازير بالإدارة رابعا من 0.16 غرام/كغ وزن الجسم بينتوباربيتال.
- لإجراء تجارب الضغط الاندفاع، يرسخ نصف الفص الكبد الآنسي الأيسر مع مقص حاد. بلازما-يتجمد القطع السطح (100W إنتاج الطاقة) أو ختم على سطح قطع مع تسرب فيبرينوجين (الشكل 2).
4. قياس دوران الأوعية الدقيقة
ملاحظة: يمكن تحديد مطيافية الليزر دوبلر تدفق الدم في الأنسجة من خلال قياس التحول دوبلر الناجم عن حركة الكريات الحمراء. وترتبط إشارة الليزر بعدد الكريات الحمراء تتحرك. مطيافية دوبلر الليزر في الاستخدام السريري (مثل زرع الطب)، وقد تم التحقق من صحة عدة مرات15.
- التبديل على مقياس التدفق دوبلر الليزر وجهاز المطياف الضوئي. استخدام مجس مسطحة.
- أخذ قياسات أساسية للتدفق والسرعة. حفظ أو ملاحظة القيم.
- تنفيذ تخثر الدم كما هو موضح تحت 3.5.
- مكان المسبار شقة في مواقع التخثر وقياس التدفق والسرعة. ومرة أخرى، حفظ أو ملاحظة القيم.
- كرر كافة إعدادات الطاقة لجهاز كواجولاتور.
5. قياس درجة الحرارة
- تبديل النظام (كاميرا حرارية ودفتر الملاحظات والحرارة الأشعة تحت الحمراء) والسماح لها بخوض ح 1 على الأقل قبل إجراء القياسات.
- ضبط التركيز وعرض إطار كاميرا حرارية على موقع تخثر الدم. ويمكن الكشف عن تسلسل الأشعة تحت الحمراء مع القرار المكانية من 1024 × 768 بكسل بدقة درجة حرارة أكبر من 20 عضو الكنيست. تأخذ في الاعتبار، أن المنطقة من تجلط الدم والأنسجة المحيطة – المتأثرين بنقل الحرارة – يقع في وسط الرأي.
ملاحظة: ينبغي أن يشمل العديد من بكسل للإطار ممكن للتوصل إلى حل أمثل مكانية. - تسجيل عملية التخثر مع كواجولاتور بلازما على سطح الكبد مع كاميرا حرارية على مدى فترة 2 دقيقة.
- تحليل تسلسل الصور مع برامج التحليل الحراري: تحديد المناطق ذات الاهتمام.
ملاحظة: يحسب البرمجيات مجرى المقابلة متوسط درجة الحرارة مع مرور الوقت.
6-تخثر قياس العمق
- حصاد الفص الكبد الآنسي الأيسر مع مقص حاد.
- المكوس المواقع التخثر بسمك 1 سم. مقطعة شرائح طولية سميكة 3 مم لمزيد من المعالجة.
- معزولة فيكس عينات الأنسجة في 4 درجات مئوية بين عشية وضحاها مع المحايد 10% فورمالين. الحرارة 2 درجة مئوية فوق نقطة انصهار البارافين وتضمين الشرائح. العملية بين عشية وضحاها.
- القيام بتلوين الهيماتوكسيلين/ويوزين.
- ديبارافينيزي وهيدرات الأنسجة بالغمس في وقت لاحق في 2 × زيلين نفط، 100 ٪ الإيثانول (EtOH)، 95% EtOH، 70% EtOH، منزوع ح2س لكل 2 دقيقة.
- وصمة عار عينة الأنسجة مع توضع حل ماير لمدة 3 دقائق.
- الآن الشطف بماء الصنبور لمدة 5 دقائق.
- وصمة عار في الأنسجة مع الحل ثم لمدة 3 دقائق.
- شطف في x EtOH 2 95% ومن ثم زيلين نفط لمدة 3 دقائق. جبل مع المتوسطة تصاعد القياسية.
- تبديل النظام (مجهر توصيل الكاميرا، برامج التصوير). عرض جميع الأقسام مع 40 X التكبير.
- التقاط صورة ميكرومتر الكائن في بير 40 س. اضغط على زر تعديل في إطار الأهداف. حدد المعايرة اليدوية. رسم خط على صورة ميكرومتر 100 ميكرومتر. أدخل 0، 1 مم في مربع الحوار ثم اضغط موافق.
- حدد طول في العرض > "ضوابط تحليل" > نافذة الشروح والقياسات. قياس من سطح الكبد إلى الهامش التخثر باستخدام الماوس. تصدير أو ملاحظة النتيجة. كرر القياس على موقع آخر على نفس الشريحة.
ملاحظة: يمكن أن تكون متباينة العمق تخثر الدم بسهولة من نسيج الكبد الطبيعي بفارق حاد بين الحبال تتمثل العادي ومنطقة نخر السيتوبلازم منكمش ونوى متنكرزه ومناطق نزيف. - حساب يعني الخروج من القياسات اثنين.
7-انفجار قياس الضغط
- تبديل النظام في (المضخات التلقائية، ومقياس الضغط). إعداد عينات الكبد وفقا للخطوة 3.7.
ملاحظة: استخدام مضختين متوازية متصلة عبر 3-طريقة-محبس الحنفية. لا يمكن الحصول على أقصى ضغط 1,500 ملم زئبق مع مضخة واحدة. - عزل الوريد البابي والشريان الكبدي شيوعاً والقناة الصفراوية بالمقص في بيديكلي haptic. المشبك الوريد البابي مع ملقط أوفيرهولت واضطر مع خياطة مونوفيل 4-0. المشبك الشريان الكبدي الشائعة ملقط أوفيرهولت واضطر مع خياطة مونوفيل 4-0.
- إدخال قسطرة Ch-16 في القناة الصفراوية المشتركة، واضطر مع خياطة حرير 2-0. الاتصال القسطرة بالمضخات التلقائية، وتركيب محبس الحنفية 3-الطريقة مع الضغط متر (الشكل 3).
- ملء المحاقن التروية مع المالحة.
- بدء تشغيل المضخات التلقائية مع معدل إنجاز لمل 99/ح.
- مراقبة الكبد متر قطع السطح والضغط للتسرب وسجل ضغط الانفجار.
ملاحظة: لتسهيل الاعتراف بالتسرب، الأزرق البراءات يمكن إضافة إلى المحلول الملحي (2 مل البراءات الأزرق + المالحة مل 18). أنه من الأسهل لمراقبة ضغط الانفجار التي يلاحظ وقت فقدان الضغط على مؤشر الضغط.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
دوران الأوعية الدقيقة: استخدام جهاز التشخيص للارقاء بعد تخثر البلازما ويمكن البرهنة بالتغيرات في دوران الأوعية الدقيقة. الدم الشعرية تدفق (عرض كوحدات التعسفي (الاتحاد الأفريقي)) يقلل من قيمة خط أساس من 142.7 ± 76.08 الاتحاد الأفريقي إلى 57.78 ± 49.57 الاتحاد الأفريقي في 25 ث جهاز إنتاج الطاقة، إلى 48.5 ± 7.26 الاتحاد الأفريقي في 50 ث وإلى 5.04 ± 1.31 الاتحاد الأفريقي في 100 W (الشكل 4).
درجة الحرارة: وتم قياس درجة الحرارة في مواقع التخثر مع كاميرا حرارية (الشكل 5). تم توثيق التغيرات في درجات الحرارة ضئيلة فقط مع حرارة الأشعة تحت حمراء. قد أظهرت درجة حرارة أساس 32.42 ± 2.27 درجة مئوية. بعد تخثر الدم مع 25 ث، وكانت درجة الحرارة 33.33 ± 1.81 درجة مئوية. تخثر الدم مع ليزر ث 50 أسفرت عن درجة حرارة 31.17 ± 2.13 درجة مئوية. بعد تخثر الدم مع إعداد الطاقة القصوى من 100 W، معظمها كانت درجة الحرارة دون تغيير مع ± 30.17 3.19 درجة مئوية (الشكل 6).
عمق تخثر الدم: تخثر البلازما يخلق منطقة سطحية من نخر مع يمكن يمكن تمييزها بسهولة لحمه الكبد العادي (الشكل 7). عمق نخر يمكن أن يقاس في مقاطع متعددة ويبين زيادة غير خطية تماما مع ارتفاع مستويات الطاقة كواجولاتور البلازما. بعد تخثر البلازما الهليوم، هو عمق التخثر ± 230.2 57.83µm في 25W، 314.6 ± 87.39 ميكرومتر في 50 ث، 292.2 ميكرومتر ± 45.65 في 75W و 412.9 ± 160.9 ميكرومتر في 100 ث جهاز إنتاج الطاقة (الشكل 8). إنتاج الطاقة للجهاز يمكن اختيارها بحرية، واختيار علاقة إيجابية مع تخثر عمق7.
انفجر الضغط: قياسات ضغط انفجار نفذت على سطح قطع من اكسبلانتيد الفص الأيسر من الكبد الآنسي ويظهر أي فرق بعد الهليوم (1254±578.7 ملم زئبق) أو تخثر البلازما (1003 ± 554.4 ملم زئبق) الأرجون (الشكل 9). الضغوط انفجر هي أقل مقارنة ب السدود فيبرينوجين7 ولكن يبدو مناسباً للاستخدام السريري.
رقم 1: الفص الأيسر من الكبد الآنسي بعد تخثر بلازما الأرغون. ثمانية مواقع تخثر الدم في الفص الكبد الآنسي الأيسر (من أعلى اليسار أسفل اليمين: 10 ث، 15 ث، 20 ث، 25 ث، 30 ث، 50 ث، 75 ث، 100 واط). مدى التخثر موحدة مع العفن. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 2: إعداد الاختلاس الكبد لقياسات الضغط انفجر. نصف فص الكبد هو مستأصل، وأغلقت سطح قطع الكبد مع تسرب فيبرينوجين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 3: المعدات لقياسات الضغط انفجر. مضخة التلقائي (حقنه مليئة بالمياه المالحة) ومقياس الضغط متصلة عبر 3-طريقة-محبس الحنفية. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 4: التغيرات في دوران الأوعية الدقيقة- التغيرات في تدفق (عرض كوحدات التعسفي) الدم قبل وبعد تخثر بلازما الأرغون في 25 ث، 50 ث و 100 ث جهاز إنتاج الطاقة (n = 3-6). * ف= < 0.05، 1-طريقة ANOVA. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الرقم 5: قياس درجة الحرارة في مواقع التخثر مع كاميرا حرارية. الصورة المثالية مع كاميرا حرارية أثناء تخثر البلازما الهليوم مع 40W جهاز إنتاج الطاقة. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 6: قياس درجة الحرارة في مواقع التخثر مع حرارة الأشعة تحت حمراء- قياس درجة الحرارة في مواقع التخثر مع حرارة الأشعة تحت حمراء قبل وبعد تخثر بلازما الأرغون (n = 3-6). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 7: منطقة سطحية نخر بعد تخثر البلازما الهليوم- الهيماتوكسيلين/ويوزين الملون قسم الكبد في 40 X التكبير. منطقة نخر يظهر خسارة تتمثل سلك الهندسة المعمارية والخلايا التي تحتوي على السيتوبلازم منكمش ومناطق نزيف. تشير الأسهم إلى عمق التخثر في موقعين مختلفين. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 8: عمق التخثر بعد تخثر البلازما الهليوم- العمق تخثر الدم في مستويات طاقة مختلفة (25W، 50W، 75W و 100W، n = 6). * ف= < 0.05، * * * ف= < 0.001، 1-طريقة ANOVA. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
الشكل 9: انفجار الضغط. انفجر قياسات الضغط على سطح قطع الكبد بعد تخثر بلازما الأرغون أو الهليوم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
رقم 10: نتائج اختبار الدم. تحديد معلمات الغاز الكيمياء الحيوية والدم السريرية تظهر النتائج قبل وتخثر بلازما الأرغون التالية. لم تطرأ أي تغيرات تحدث، مما يدل على آثار تخثر البلازما محدودة للتغييرات المحلية في موقع تخثر الدم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
أن يتم إنشاء نماذج القوارض لجراحة الكبد ل وقت طويل16. ومع ذلك، نماذج حيوانية كبيرة تقدم مزايا معينة: هناك حاجة إلى أي معدات microsurgical معدات المنطوق القياسي للبشر يمكن أن تطبق، والتقنيات الجراحية قابلة للاستخدام السريري ويمكن أن تكون أساليب التقييم السريري القياسي نقل للتجارب. على سبيل المثال، يمكن أن تنفذ اختبارات الدم السريرية القياسية دون الحاجة إلى طرق الاختبار في المختبرات الخاصة (الشكل 10).
الخنازير هي الحيوانات المختبرية المناسبة للبحوث القلبية ما يشبه علم وظائف الأعضاء البشرية17. بسبب التشابه في الحجم والهيكل القطاعي وعلم الأنسجة، الخنازير أيضا واحدة من الحيوانات المختبرية القياسية لجراحة الكبد التجريبي18. وتم تقييم تخثر البلازما في نموذج الخنزير بسبب الفوائد (التشابه مع علم وظائف الأعضاء البشرية وتقييم المعدات الطبية القياسية)7. وعلى النقيض من التقنيات الجراحية، لا يمكن أن يطبق بسهولة إدارة أنيسثيسيولوجيك. ويمكن إدارة مجرى الهواء وبخاصة الصعب17. المسافة من القواطع للمزمار طويلة جداً ويختلف التشريح للبشر صعوبة تنبيب أوروتراتشيل الباحث عديمي الخبرة. وباﻹضافة إلى ذلك، قناع التهوية من المستحيل تقريبا في الخنازير، حيث استراتيجيات الإنقاذ (مثل القصبة الهوائية) يجب أن تكون موجودة.
لتحقيق نتائج مماثلة في تخثر البلازما، أن الباحث دقة الانتباه إلى معايرة مسبار المسافة والمدة تجلط الدم. في حين أنه من السهل نسبيا للحفاظ على المسافة التحقيق، يمكن استخدام ساعة توقيت لعد 5 s تجلط الدم. واستخدمت تقنية وصف تخثر البلازما على سطح الكبد في البحوث الأساسية بشأن الآثار الكامنة تخثر البلازما في الكبد في فيفو7. يمكن أيضا استخدام التقنيات المذكورة أعلاه من الخنازير التخثر التخدير والجراحة، والبلازما لدراسة استئصال الكبد الرئيسية ومقارنة تقنيات مختلفة لقطع سطح الختم بعد ذلك.
مقياس التدفق دوبلر الليزر وجهاز المطياف الضوئي لقياسات دوران الأوعية الدقيقة هو أداة سريرية قياسية19 وأثبتت أنها مفيدة للغاية لتقييم الدورة الدموية مباشرة على حمة الجهاز. يتم حساب القيم لتدفق الدم وسرعة تدفق الدم مع الاستفادة من غير إينفاسيفيتي. معلمات دوران الأوعية الدقيقة هي فقط التدابير غير المباشرة تأثير تخثر الدم، ولذلك ينبغي أن ترتبط القياسات دوبلر مع معلمة موضوعية تجلط الدم. في تجاربنا، استخدمنا عمق التخثر النسيجي للارتباط.
عيبا لقياس درجة الحرارة هو عدم القدرة على قياس درجة حرارة شعاع البلازما أثناء التخثر نظراً لدرجة حرارة شعاع البلازما فوق العتبة العليا لكل من الأجهزة. ترمومتر الأشعة تحت الحمراء من السهل أن تطبق، بينما الإعداد كاميرا حرارية أكثر تعقيداً، ولكنها توفر بيانات أكثر دقة. درجة الحرارة الأساسية قبل تجلط الدم أقل مما كان متوقعا (جسم الخنزير درجة الحرارة ~38.5 ° ج17)، مما يدل على الآثار المدمرة لفتح البطن في درجة حرارة الجسم. لا تزيد درجة الحرارة المقاسة أثناء وبعد تخثر الدم، مما يدل على نضح ممتازة للكبد. يعرف هذا التأثير الحراري سرقة الكبد من الترددات الراديوية الاجتثاث20. انفجر الضغط إدارات أجريت على نظام القناة الصفراوية بدلاً من الأوعية الكبدية لسبب بسيط: من المستحيل للبلازما كواجولاتورس (كما للسدود فيبرينوجين) لختم السفن الأكبر حجماً. كل الوسائل من الأرقاء الثانوي ختم سطح قطع الجهاز ريسيكتيد، بينما السفن الأكبر حجماً هي متصلة أثناء الاستئصال. تم تعديل تجاربنا ضغط الاندفاع قليلاً مقارنة ب أسلوب الإبلاغ عن14. قمنا بقياس ضغط الانفجار على أجهزة اكسبلانتيد لأسباب تنظيمية. هذه القواعد بضغط الدم المتعلقة بالآثار وهي أسهل بكثير لتطبيق من استخدام perfused أو أجهزة في الجسم الحي . قيم الضغط ربما، لذلك، تختلف عن تجارب perfused/القياساتفي فيفو بسبب الكبد غيرت هيكل (عادة ما يكون أعلى من الضغوط على أجهزة اكسبلانتيد). تقنية ضغط انفجار الموصوفة أعلاه يمكن أيضا المؤداة في فيفو.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الكتاب ليس لها علاقة بالكشف عن.
Acknowledgments
المؤلفين قد لا شكر وتقدير.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Xylazine 20 mg/mL | Vetoquinol GmbH | Xylapan | |
| Ketamine 100 mg/mL | Ceva GmbH | Ceva Ketamine Injection | |
| Atropine 100 mg / 10 mL | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | Atropinsulfat Köhler 100mg Amp. | |
| Propofol | Fresenius Kabi GmbH | Propofol 1% MCT Fresenius | |
| Fentanyl | KG Rotexmedica GmbH | Fentanyl 0,5mg Rotexmedica | |
| Isoflurane | Abbot GmbH | Forene 100% (V/V) 250 mL | |
| Ringer's lactate solution | Baxter Deutschland GmbH | sodium 131mmol/l, potassium 5 mmol/l, calcium 2 mmol/l, cloride 111 mmol/l, lactate 29 mmol/l | |
| Surgical disinfactant | Schülke & Mayr GmbH | Kodan Tinktur forte gefärbt 1l 104804 | |
| Motorized microscope | Nikon Instruments Europe | Eclipse TE2000-E | |
| Microscope camera | Nikon Instruments Europe | Digitalsight DS-Qi1Mc | |
| Imaging software | Nikon Instruments Europe | NIS elements Vers. 4.40 | |
| Plasma coagulator | Söring GmbH | CPC-1000 | |
| Argon gas | Linde AG | Argon 4.8 | |
| Helium gas | Linde AG | Helium 4.8 | |
| O2C | LEA Medizintechnik GmbH | O2C Version 1212 | with LF-2 or LF-3 probe |
| Infrared thermometer | Voltcraft | VOLTCRAFT IR 260-8S | |
| Thermographic camera | InfraTec GmbH | VarioCAM HD head 820 | |
| Thermographic analysis software | InfraTec GmbH | IRBIS 3 | |
| Mayer's Hematoxylin solution | Merck 1.09249 | ||
| Eosin solution | VWR International GmbH | Merck 1.09844 | |
| Rollerpump Masterflex L/S easy Load | Cole-Parmer Instrument Company | model 7518-10 | |
| Perfusorpump | B. Braun Melsungen AG | Perfusor secura FT | |
| Digital pressure meter | Greisinger electronic | GMH 3161 | |
| Perfusorsyringe, 50 mL | B. Braun Melsungen AG | REF 8728810 F | |
| Perfusor line, Type IV Standard, PVC Luer lock | B. Braun Melsungen AG | REF 8722960 | |
| 3-Way stopcock, Dicofix C35C | B. Braun Melsungen AG | REF 16494 C | |
| Silk 2-0. 3 metric | Resorba | REF H5F | |
| Vicryl 4-0 Sutupak | Ethicon | V1224H | |
| NaCl 0.9 % | B. Braun Melsungen AG |
References
- Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels. ArchSurg. 111, 392-397 (1976).
- Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury. EurJSurg. 167, 316-318 (2001).
- Frilling, A., et al. Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial. Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).
- Raiser, J., Zenker, M. Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art. J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).
- Farin, G., Grund, K. E. Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications. EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).
- Grund, K. E. Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough? Endoscopy. 29, 196-198 (1997).
- Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue. J Int Med Res. , (2017).
- Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury. JTrauma. 31, 717-720 (1991).
- Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs. JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).
- Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. Application of argon plasma coagulation in skin surgery. Dermatology. 197, 152-157 (1998).
- Carus, T., Rackebrandt, K. Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model. ISRNSurg. , 518924 (2011).
- Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer. DisEsophagus. , (2008).
- Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers. Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).
- Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs. Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).
- Knobloch, K., et al. Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery. ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).
- Kanzler, S., et al. Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I. Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).
- Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research. Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).
- Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver. Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).
- Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study. Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).
- Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size. AnnSurg. 227, 559-565 (1998).
