Summary
यहाँ हम vivo मेंजिगर के ऊतकों में प्लाज्मा जमावट का आकलन करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद. एक सुअर का मॉडल में, microcirculation लेजर डॉपलर द्वारा जांच की है, जमावट गहराई histologically मापा जाता है, अवरक्त थर्मामीटर और thermographic कैमरा द्वारा जमावट स्थल पर तापमान, और वाहिनी सीलिंग प्रभाव फट दबाव द्वारा प्रलेखित है प्रयोगों.
Abstract
electrocautery के एक फार्म के रूप में प्लाज्मा जमावट दशकों के लिए जिगर की सर्जरी में प्रयोग किया जाता है प्रमुख hepatectomy के बाद बड़े जिगर कट सतह सील करने के लिए एक बाद की अवस्था में नकसीर को रोकने के । जिगर ऊतक पर प्लाज्मा जमावट के सटीक प्रभाव ही खराब जांच कर रहे हैं । हमारे सुअर का मॉडल में, जमावट प्रभाव नैदानिक आवेदन के करीब की जांच की जा सकती है । एक संयुक्त लेजर डॉपलर flowmeter और spectrophotometer दस्तावेजों 8 मिमी ऊतक गहराई में जमावट के दौरान परिवर्तन microcirculation, रक्तस्तम्भन के बारे में quantifiable जानकारी प्रदान व्यक्तिपरक नैदानिक छाप परे. जमावट स्थल पर तापमान एक अवरक्त थर्मामीटर से पहले और जमावट के बाद और जमावट के दौरान एक thermographic कैमरा के साथ मूल्यांकन किया गया है, गैस बीम तापमान का एक माप उपकरणों की ऊपरी दहलीज के कारण संभव नहीं है । जमावट की गहराई एक वस्तु माइक्रोमीटर के साथ अंशांकन के बाद hematoxylin/eosin सना हुआ वर्गों पर microscopically मापा जाता है और बिजली की स्थापना-जमावट गहराई-संबंध के बारे में एक सटीक जानकारी देता है । सीलिंग प्रभाव पित्त नलिकाओं पर जांच के रूप में यह एक प्लाज्मा coagulator के लिए बड़ा रक्त वाहिकाओं सील करने के लिए संभव नहीं है । फट दबाव प्रयोगों explanted अंगों पर बाहर रक्त दबाव से संबंधित प्रभाव शासन करने के लिए किया जाता है ।
Introduction
आर्गन प्लाज्मा जमावट (APC) तीन से अधिक दशकों1,2के लिए पेट की सर्जरी में एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया साधन है । यह जिगर की कटौती की सतह को सील करके बाद में रक्तस्राव को रोकने के लिए प्रमुख hepatectomy के बाद माध्यमिक रक्तस्तम्भन की उपलब्धि के लिए एक मानक तकनीक है3. प्लाज्मा जमावट रेडियोफ्रीक्वेंसी electrocautery का एक विशेष रूप है, जो एक चाप के माध्यम से बिजली की ऊर्जा बचाता है । monopolar electrothermal रक्तस्तम्भन प्रदान करना, इस संपर्क तकनीक इलेक्ट्रोड को रोकने के लिए ऊतक4छड़ी करने का लाभ है । सुखाना गैस बीम स्वचालित रूप से सबसे कम विद्युत प्रतिरोध के क्षेत्र के लिए निर्देशित किया जाता है और दूर कर दिया जाता है जब प्रतिरोध अन्य क्षेत्रों में अभी तक नहीं शुष्क के कारण बढ़ जाती है । इस जमावट5,6के एक समान सीमित गहराई पैदा करता है । जमावट प्रभाव को प्रभावित करने वाले कारकों सक्रियण समय, जमावट डिवाइस की शक्ति की स्थापना और ऊतक के लिए जांच से दूरी कर रहे हैं । हीलियम एक और वाहक गैस है, जो प्लाज्मा जमावट7के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हाल के नैदानिक अध्ययन नैदानिक परिणामों पर ध्यान केंद्रित बजाय ऊतकवैज्ञानिक और कार्यात्मकनिष्कर्षों 3,8,9, जबकि प्रयोगात्मक अध्ययन इन विट्रो में पर ध्यान केंद्रित जांच10 या पृथक perfused अंगों पर प्रयोग11.
अंतर्निहित प्रोटोकॉल एक बड़े जानवर मॉडल में प्लाज्मा जमावट के प्रभाव का अध्ययन करने की अनुमति देता है सूअरों पर मानक मानव उपकरणों का उपयोग नैदानिक आवेदन के करीब: Microcirculation एक लेजर डॉपलर flowmeter द्वारा आक्रामक आकलन किया है और spectrophotometer, जो इस संकेत12,13के लिए एक मानक नैदानिक उपकरण है । जमावट के दौरान तापमान परिवर्तन एक अवरक्त थर्मामीटर और एक thermographic कैमरा के साथ नजर रखी हैं । जमावट की गहराई ऊतक नमूनों की कटाई के बाद ऊतकवैज्ञानिक hematoxylin/eosin सना हुआ वर्गों पर मापा जाता है । माध्यमिक रक्तस्तम्भन के लिए अंय साधनों के साथ तुलना के लिए, फट दबाव प्रयोगों प्रदर्शन कर रहे हैं । पहले वर्णित14तकनीकों के विपरीत, इन explanted अंगों पर आयोजित किया जाता है रक्तचाप से संबंधित प्रभाव को बाहर करने के लिए । प्लाज्मा जमावट के स्थानीय प्रभावों पर वर्णित जांच के अलावा, सुअर का मॉडल में मानक रक्त परीक्षण भी किए जा सकते हैं ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
नियम पशु अध्ययन के लिए जर्मन कानून के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रयोगशाला पशु देखभाल के सिद्धांतों (राष्ट्रीय स्वास्थ्य प्रकाशन एड. 8 के संस्थानों, २०११) का पालन किया गया । कार्यालयीन अनुमति अशासकीय पशु परिचर्या कार्यालय (Landesamt फर नत्र, Umwelt und Verbraucherschutz Nordrhein-Westfalen, Recklinghausen, जर्मनी) से दी गई है.
1. पशु
- उपयोग महिला जर्मन landrace सूअरों (25-30 किग्रा वजनी) खुले पिंजरों में ईमारत ।
- समूह प्रति 5 जानवरों (आर्गन और हीलियम) का प्रयोग करें ।
- प्रयोग करने से पहले जानवरों को acclimatize के लिए परिवेश में कम से एक सप्ताह के लिए अनुमति दें । पानी के लिए स्वतंत्र पहुँच के साथ सर्जरी से पहले 24 एच के लिए तेजी से जानवरों.
2. संज्ञाहरण
- ketamine के एक इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन (15 मिलीग्राम/किलो शरीर के वजन [BW]), xylazine (10 मिलीग्राम/kg BW), और atropine (०.१ mg/किलो BW) 10 मिनट संज्ञाहरण के प्रेरण से पहले के साथ जानवरों की औषधि ।
- परिधीय शिरापरक पहुँच एक कान की नस में एक 22 गेज प्रवेशनी की नियुक्ति द्वारा स्थापित किया गया है ।
- propofol 2 मिलीग्राम/kg शरीर के वजन के i.v. इंजेक्शन द्वारा सामान्य संज्ञाहरण प्रेरित ।
- लापरवाह स्थिति में पशु प्लेस और 2 सेमी की लंबाई पर jugular नाली में एक अनुदैर्ध्य त्वचा चीरा प्रदर्शन करते हैं । चमड़े के नीचे ऊतक के कुंद तैयारी के माध्यम से नस का पता लगाएं । प्रवेशनी डालें, फिर Seldinger तार ।
- प्रवेशनी वापस लेना और गाइड वायर पर 14 Fr. कैथेटर डालें । retract गाइड वायर । विस्तार करने के लिए कैथेटर कनेक्ट और एक पट्टा या एक टांका द्वारा कैथेटर निर्धारण ।
- जीभ बाहर खींचो और सीधे laryngoscope डालें । उपकंठ के नीचे खींचने के लिए laryngoscope की नोक का प्रयोग करें । मुखर डोरियों के माध्यम से ट्यूब डालें । glottis और फुलाना के तहत कफ प्लेस ।
- ३६ और ४२ mm पारा के बीच अंत ज्वार आंशिक कार्बन डाइऑक्साइड तनाव रखने के लिए 20-26 सांसों/मिनट और 10 मिलीलीटर/किग्रा के ज्वार की मात्रा पर ४०% ऑक्सीजन के साथ हवादार ।
- 1 की एकाग्रता पर isoflurane के साथ संज्ञाहरण बनाए रखने-1.5% और fentanyl की एकाग्रता पर 3-4 µ g/kg/एच ।
- आपूर्ति रिंगर स्तनपान समाधान की एक प्रारंभिक दर पर 4 मिलीलीटर/kg/h, और वृद्धि के बाद laparotomy एक निरंतर अर्क दर करने के लिए 8 मिलीलीटर/kg/h ।
3. शल्य चिकित्सा और प्लाज्मा जमावट
- एक मानक शल्य मेज पर एक लापरवाह स्थिति में पशु प्लेस ।
- एक मानक शल्य चिकित्सा विसंक्रमित (2-Propanol ४५ g/१०० g, 1-Propanol 10 g/100g, Biphenyl-2-राजभाषा ०.२ ग्राम/१०० ग्राम) के लिए एक शल्य झाड़ू के साथ 3 बार लागू करके त्वचा को संक्रमित ।
- एक स्केलपेल के साथ जघनरोम करने के लिए असिरूप प्रक्रिया से एक व्यापक midline laparotomy प्रदर्शन और शल्य रिट्रेक्टर स्थापित करें ।
- इस्तेमाल वाहक गैस पर निर्भर करता है, प्लाज्मा जमावट उपकरण, खुला आर्गन या हीलियम गैस की बोतल पर स्विच करें । गैस के प्रवाह को समायोजित 3 L/जमावट डिवाइस आउटपुट पावर इच्छित के रूप में का चयन करें ।
नोट: दोनों नोबल गैसों, आर्गन या हीलियम, प्लाज्मा जमावट के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । जमावट प्रभाव तुलना कर रहे हैं. विवरण के लिए संदर्भ7 देखें । - पहले7वर्णित के रूप में छोड़ दिया जिगर पालि पर प्लाज्मा जमावट प्रदर्शन । जमावट क्षेत्र को मानकीकृत करने के लिए एक टाइटेनियम मोल्ड (स्क्वायर एपर्चर 1 x 1 cm2) का उपयोग करें । 1 सेमी की जांच दूरी के साथ 5 एस के लिए Coagulate । विभिन्न शक्ति सेटिंग्स के साथ जमावट 5 मिमी (चित्रा 1) के जमावट के बीच एक छोटी दूरी के साथ पक्ष द्वारा किया जा सकता है.
- जिगर की कटाई के लिए, जिगर के लिए सभी बंधन कनेक्शन विभाजित । अलग और बेहतर ग्रहणी flexure पोर्टल नस और आम पित्त नलिका के लंबे भाग छोड़ने के ऊपर यकृत pedicle विभाजित । जिगर के ऊपर और नीचे caval नस विभाजित और अंग पुनः प्राप्त ।
- जिगर की कटाई के बाद, सूअरों ०.१६ ग्राम BW pentobarbital के i.v. प्रशासन द्वारा euthanized थे ।
- फट दबाव प्रयोगों के लिए, तेज कैंची के साथ छोड़ दिया औसत दर्जे का जिगर पालि के कीट आधा । प्लाज्मा-coagulate कटौती सतह (100W उत्पादन शक्ति) या फाइब्रिन सीलेंट (चित्रा 2) के साथ कटौती की सतह सील ।
4. Microcirculation मापन
नोट: लेजर डॉपलर स्पेक्ट्रोस्कोपी एरिथ्रोसाइट्स के आंदोलन की वजह से डॉपलर बदलाव को मापने के माध्यम से ऊतक में रक्त के प्रवाह को निर्धारित कर सकते हैं. लेजर संकेत चलती एरिथ्रोसाइट्स की संख्या के साथ संबद्ध । लेजर डॉपलर स्पेक्ट्रोस्कोपी नैदानिक उपयोग में है (जैसे प्रत्यारोपण चिकित्सा) और कई बार पुष्टि की गई है15.
- लेजर डॉपलर flowmeter और spectrophotometer पर स्विच करें । फ्लैट की जांच का प्रयोग करें ।
- प्रवाह और वेग के लिए आधारभूत माप ले लो । मान सहेजें या नोट करें ।
- ३.५ के अंतर्गत वर्णित जमावट निष्पादित करें ।
- जमावट स्थलों और माप प्रवाह और वेग पर फ्लैट जांच प्लेस । फिर से, सहेजें या नोट मान ।
- coagulator डिवाइस के सभी पावर सेटिंग्स के लिए दोहराएँ ।
5. तापमान माप
- (thermographic कैमरा, नोटबुक, और अवरक्त थर्मामीटर) पर सिस्टम स्विच और यह माप प्रदर्शन से पहले कम से 1 ज के लिए चला रहे हैं ।
- जमावट स्थल पर thermographic कैमरे पर फ़ोकस और दृश्य फ़्रेम समायोजित करें । अवरक्त अनुक्रम 20 मनोज से बड़ा एक तापमान संकल्प के साथ १०२४ x ७६८ पिक्सल के स्थानिक संकल्प के साथ पता लगाया जा सकता है । ध्यान में रखना, कि जमावट के क्षेत्र और आसपास के ऊतकों-गर्मी हस्तांतरण से प्रभावित-दृश्य के बीच में स्थित है ।
नोट: यह एक इष्टतम स्थानिक संकल्प के लिए संभव के रूप में फ्रेम के कई पिक्सल के रूप में शामिल करना चाहिए । - एक 2-ंयूनतम अवधि में thermographic कैमरा के साथ जिगर की सतह पर प्लाज्मा coagulator के साथ रिकार्ड जमावट प्रक्रिया ।
- थर्मोग्राफी विश्लेषण सॉफ्टवेयर के साथ छवि दृश्यों का विश्लेषण करें: रुचि के क्षेत्रों को परिभाषित करें ।
नोट: सॉफ्टवेयर समय के साथ इसी माध्य तापमान के पाठ्यक्रम की गणना करता है ।
6. जमावट गहराई माप
- तेज कैंची के साथ छोड़ दिया औसत दर्जे का जिगर पालि फसल ।
- 1 सेमी मोटाई के साथ जमावट स्थलों उत्पाद । आगे की प्रक्रिया के लिए 3 मिमी मोटी अनुदैर्ध्य खंडों में कटौती ।
- 4 डिग्री सेल्सियस पर तटस्थ 10% buffered formalin के साथ ऊतक नमूने ठीक । हीट 2 डिग्री सेल्सियस से अधिक पिघलने बिंदु और एंबेड स्लाइसें । रात भर की प्रक्रिया ।
- प्रदर्शन Hematoxylin/Eosin धुंधलाना ।
- Deparaffinize और बाद में 2x Xylene, १००% इथेनॉल (ेतोः), ९५% ेतोः, ७०% ेतोः में डूबा द्वारा ऊतक हाइड्रेट, 2 मिनट के लिए प्रत्येक एच2हे ।
- 3 मिनट के लिए है मेयेर Hematoxylin समाधान के साथ ऊतक नमूने दाग ।
- अब 5 मिनट के लिए नल के पानी में कुल्ला ।
- 3 मिनट के लिए Eosin समाधान के साथ ऊतक दाग ।
- 2x ेतोः ९५% में कुल्ला और फिर 3 मिनट प्रत्येक के लिए Xylene । मानक बढ़ते माध्यम के साथ माउंट ।
- (माइक्रोस्कोप कनेक्टेड कैमरा, इमेजिंग सॉफ्टवेयर) पर सिस्टम स्विच । 40X आवर्धन के साथ सभी अनुभागों को देखें ।
- 40X के एक आवर्धन पर माइक्रोमीटर एक वस्तु की एक छवि ले लो । उद्देश्य विंडो में बटन पुनः जांचना दबाएँ. मैनुअल अंशांकन का चयन करें । १०० µm की माइक्रोमीटर छवि पर एक पंक्ति आरेखित करें । संवाद बॉक्स में 0, 1 मिमी दर्ज और ठीक दबाएँ.
- दृश्य > विश्लेषण नियंत्रण > एनोटेशन और माप विंडो में लंबाई का चयन करें । जिगर की सतह से माउस के साथ जमावट मार्जिन के लिए उपाय । परिणाम निर्यात करें या नोट करें । समान स्लाइड पर किसी अंय स्थान पर माप दोहराएं ।
नोट: जमावट गहराई आसानी से सामान्य hepatocyte डोरियों और सिकुड़ा कोशिका द्रव्य, pyknotic नाभिक, और नकसीर क्षेत्रों के साथ परिगलन के क्षेत्र के बीच तेज मार्जिन से सामान्य जिगर ऊतक से विभेदित किया जा सकता है । - दो माप से बाहर मतलब गणना ।
7. फट दबाव माप
- (स्वचालित पंप, दबाव मीटर) पर सिस्टम स्विच । चरण ३.७ के अनुसार लिवर के नमूने तैयार करें ।
नोट: एक 3-way-टोंटी के माध्यम से जुड़े दो समानांतर पंपों का उपयोग करें । १,५०० mm पारा के अधिक से अधिक दबाव एक भी पंप के साथ प्राप्त नहीं किया जा सकता है । - haptic pedicle में कैंची के साथ पोर्टल नस, आम यकृत धमनी और पित्त नलिका को अलग करें । एक overholt संदंश और एक monofil टांका 4-0 के साथ ligate के साथ पोर्टल नस दबाना । क्लैंप आम यकृत धमनी एक overholt संदंश और एक monofil टांका 4-0 के साथ ligate ।
- एक 2-0 रेशम सीवन के साथ आम पित्त नलिका और ligate में Ch-16 कैथेटर डालें । स्वचालित पंपों के लिए कैथेटर कनेक्ट, दबाव मीटर (चित्रा 3) के साथ 3 तरह टोंटी स्थापित करें ।
- खारा के साथ छिड़काव सिरिंज भरें ।
- ९९ मिलीलीटर की एक वितरण दर के साथ स्वचालित पंप शुरू/
- निगरानी जिगर कटौती की सतह और रिसाव और रिकॉर्ड फट दबाव के लिए दबाव मीटर ।
नोट: रिसाव की आसान मान्यता के लिए, पेटेंट ब्लू खारा करने के लिए जोड़ा जा सकता है (2 मिलीलीटर पेटेंट नीले + 18 मिलीलीटर खारा). यह दबाव मीटर पर दबाव के नुकसान के समय देख कर फट दबाव का निरीक्षण करने के लिए आसान है ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Microcirculation: प्लाज्मा जमावट के बाद रक्तस्तम्भन के लिए नैदानिक उपकरण का उपयोग microcirculation परिवर्तन द्वारा प्रदर्शन किया जा सकता है । केशिका रक्त प्रवाह (के रूप में प्रदर्शित की मनमानी इकाइयों (AU)) १४२.७ ± ७६.०८ au के एक आधारभूत मूल्य से ५७.७८ ± ४९.५७ au के लिए 25 डब्ल्यू डिवाइस उत्पादन शक्ति में, ४८.५ ± ७.२६ au पर ५० डब्ल्यू और ५.०४ ± १.३१ au पर १०० w (चित्रा 4) ।
तापमान: जमावट स्थलों पर तापमान एक thermographic कैमरा (चित्रा 5) के साथ मापा गया था । केवल तुच्छ तापमान परिवर्तन एक अवरक्त थर्मामीटर के साथ प्रलेखित थे । यह ३२.४२ ± २.२७ डिग्री सेल्सियस की एक आधारभूत तापमान दिखाया । 25 डब्ल्यू के साथ जमावट के बाद, तापमान ३३.३३ ± १.८१ डिग्री सेल्सियस था । एक ५० डब्ल्यू लेजर के साथ जमावट ३१.१७ ± २.१३ डिग्री सेल्सियस का तापमान झुकेंगे १०० डब्ल्यू के अधिक से अधिक शक्ति की स्थापना के साथ जमावट के बाद, तापमान ३०.१७ ± ३.१९ डिग्री सेल्सियस (चित्रा 6) के साथ ज्यादातर अपरिवर्तित था ।
जमावट गहराई: प्लाज्मा जमावट परिगलन के एक सतही क्षेत्र आसानी से सामांय जिगर पैरेन्काइमा (चित्रा 7) से प्रतिष्ठित किया जा सकता है बनाता है । परिगलन की गहराई कई वर्गों में मापा जा सकता है और प्लाज्मा coagulator के बढ़ते बिजली के स्तर के साथ एक नहीं पूरी तरह से रैखिक वृद्धि से पता चलता है । हीलियम प्लाज्मा जमावट के बाद, जमावट गहराई २३०.२ ± ५७.८३ µm पर 25W, ३१४.६ ± ८७.३९ µm पर ५० डब्ल्यू, २९२.२ ± ४५.६५ µm पर 75W और ४१२.९ ± १६०.९ µm पर १०० डब्ल्यू डिवाइस उत्पादन शक्ति (8 चित्रा) । डिवाइस के उत्पादन शक्ति स्वतंत्र रूप से चुना जा सकता है और जमावट गहराई7के साथ एक सकारात्मक संबंध चुना.
फट दबाव: फट दबाव माप explanted की कटौती की सतह पर किए गए छोड़ दिया औसत दर्जे का जिगर पालि हीलियम (1254 ± 578.7 mmHg) या आर्गन (१००३ ± ५५४.४ mmHg) प्लाज्मा जमावट (9 अंक) के बाद कोई अंतर नहीं दिखाता है । फट दबाव फाइब्रिन sealants7 की तुलना में कम कर रहे हैं, लेकिन नैदानिक उपयोग के लिए उपयुक्त लगते हैं ।
चित्रा 1: आर्गन प्लाज्मा जमावट के बाद औसत दर्जे का जिगर पालि छोड़ दिया है । बाईं औसत दर्जे का जिगर पालि पर आठ जमावट साइटों (ऊपर से नीचे सही करने के लिए छोड़ दिया: 10 डब्ल्यू, 15 डब्ल्यू, 20 डब्ल्यू, 25 डब्ल्यू, 30 डब्ल्यू, ५० डब्ल्यू, ७५ डब्ल्यू, १०० डब्ल्यू) । मोल्ड के साथ मानकीकृत जमावट की हद तक । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 2: फट दबाव माप के लिए जिगर भ्रष्टाचार की तैयारी । जिगर पालि के आधा resect है, और जिगर की कटौती की सतह के साथ बंद है सीलेंट । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 3: फट दबाव माप के लिए उपकरण । स्वचालित पंप (खारा से भरा सिरिंज) और दबाव मीटर एक 3 तरह से टोंटी के माध्यम से जुड़ा हुआ है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 4: Microcirculation परिवर्तन । रक्त प्रवाह में परिवर्तन (मनमाना इकाइयों के रूप में प्रदर्शित) से पहले और 25 डब्ल्यू, ५० डब्ल्यू और १०० डब्ल्यू उपकरण उत्पादन शक्ति (n = 3-6) में आर्गन प्लाज्मा जमावट के बाद । * = P< 0.05, 1-way ANOVA । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 5: जमावट स्थलों पर तापमान एक thermographic कैमरा के साथ मापा. 40W डिवाइस उत्पादन शक्ति के साथ हीलियम प्लाज्मा जमावट के दौरान एक thermographic कैमरा के साथ अनुकरणीय चित्र । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 6: जमावट एक अवरक्त थर्मामीटर के साथ मापा साइटों पर तापमान । जमावट साइटों पर तापमान से पहले और आर्गन प्लाज्मा जमावट (n = 3-6) के बाद एक अवरक्त थर्मामीटर के साथ मापा । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 7: हीलियम प्लाज्मा जमावट के बाद सतही परिगलन के क्षेत्र । Hematoxylin/Eosin सना हुआ जिगर 40X आवर्धन पर अनुभाग । परिगलन क्षेत्र hepatocyte गर्भनाल वास्तुकला, सिकुड़ा कोशिका द्रव्य और नकसीर क्षेत्रों के साथ कोशिकाओं की हानि से पता चलता है । तीर दो अलग स्थानों पर जमावट की गहराई से संकेत मिलता है । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्रा 8: हीलियम प्लाज्मा जमावट के बाद जमावट गहराई । विभिन्न शक्ति स्तर पर जमावट गहराई (25W, 50W, 75W और 100W, n = 6). * = p< 0.05, * * * = p< 0.001, 1-way ANOVA । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 9: फट दबाव । या तो आर्गन या हीलियम प्लाज्मा जमावट के बाद जिगर में कटौती सतह पर फट दबाव माप । कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
चित्र 10: रक्त परीक्षण के परिणाम । नैदानिक जैव रसायन और रक्त गैस परिणामों के चयनित मापदंडों से पहले और आर्गन प्लाज्मा जमावट निम्नलिखित दिखाया जाता है. कोई महत्वपूर्ण परिवर्तन होते हैं, प्लाज्मा जमावट के प्रभाव का प्रदर्शन जमावट स्थल पर स्थानीय परिवर्तन करने के लिए सीमित. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
लिवर की सर्जरी के लिए कुतर मॉडलों को लंबे समय तक16बार स्थापित किया जाता है । फिर भी, बड़े पशु मॉडल कुछ लाभ प्रदान करते हैं: कोई microsurgical उपकरण मानव के लिए मानक ऑपरेटिव उपकरण के रूप में की जरूरत है लागू किया जा सकता है, शल्य चिकित्सा तकनीक नैदानिक उपयोग और मानक नैदानिक मूल्यांकन विधियों से तुलना कर सकते है प्रयोगों के लिए हस्तांतरित । उदाहरण के लिए, मानक नैदानिक रक्त परीक्षण विशेष प्रयोगशाला परीक्षण विधियों (चित्रा 10) के लिए आवश्यकता के बिना किया जा सकता है ।
सूअर cardiorespiratory अनुसंधान के लिए उपयुक्त प्रयोगशाला जानवरों के रूप में उनके शरीर विज्ञान बारीकी से मानव17जैसा दिखता है । आकार में समानता की वजह से, खंड संरचना और प्रोटोकॉल, सूअरों भी प्रयोगात्मक यकृत सर्जरी के लिए मानक प्रयोगशाला जानवरों में से एक है18। प्लाज्मा जमावट सुअर का मॉडल में मूल्यांकन किया गया था क्योंकि लाभ (मानव शरीर क्रिया विज्ञान और मानक नैदानिक उपकरणों के मूल्यांकन के लिए समानता)7. सर्जिकल तकनीक के विपरीत anesthesiologic प्रबंधन को आसानी से extrapolated नहीं किया जा सकता । विशेष रूप से airway प्रबंधन मुश्किल हो सकता है17। glottis के लिए कृन्तक से दूरी बहुत लंबी है और शरीर रचना विज्ञान अनुभवहीन शोधकर्ता के लिए orotracheal इंटुबैषेण मुश्किल बना मनुष्यों के लिए अलग है. इसके अलावा, मुखौटा वेंटिलेशन सूअरों में लगभग असंभव है, तो उबार रणनीतियों (जैसे tracheostomy) मौजूद होना चाहिए ।
प्लाज्मा जमावट में तुलनीय परिणाम प्राप्त करने के लिए, शोधकर्ता कड़ाई से जांच दूरी और जमावट की अवधि के मानकीकरण करने के लिए ध्यान रखना चाहिए. हालांकि यह जांच दूरी बनाए रखने के लिए अपेक्षाकृत आसान है, एक स्टॉपवॉच जमावट के 5 एस गिनती करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । जिगर की सतह पर प्लाज्मा जमावट के वर्णित तकनीक के बुनियादी अनुसंधान में इस्तेमाल किया गया था पर प्लाज्मा जमावट के अंतर्निहित प्रभाव में जिगर पर vivo7. इसके बाद के संस्करण-सूअर संज्ञाहरण, शल्य चिकित्सा की तकनीक वर्णित है, और प्लाज्मा जमावट भी प्रमुख यकृत लकीर की जांच करने के लिए और उसके बाद कटौती की सतह सील के विभिंन तकनीकों की तुलना किया जा सकता है ।
लेजर डॉपलर flowmeter और microcirculation माप के लिए spectrophotometer एक मानक नैदानिक उपकरण है19 और सीधे अंग पैरेन्काइमा पर संचलन के आकलन के लिए अत्यधिक उपयोगी साबित. रक्त प्रवाह और रक्त प्रवाह वेग के लिए मूल्यों गैर invasivity के लाभ के साथ गणना कर रहे हैं । Microcirculation मानकों जमावट प्रभाव के केवल अप्रत्यक्ष उपाय कर रहे हैं, तो डॉपलर माप जमावट के लिए एक उद्देश्य पैरामीटर के साथ संबद्ध किया जाना चाहिए. हमारे प्रयोगों में, हम सहसंबंध के लिए ऊतकवैज्ञानिक जमावट गहराई का इस्तेमाल किया ।
तापमान माप की एक कमी के कारण प्लाज्मा बीम के तापमान दोनों उपकरणों की ऊपरी दहलीज के ऊपर है क्योंकि जमावट के दौरान प्लाज्मा बीम के तापमान को मापने के लिए अक्षमता है । अवरक्त थर्मामीटर लागू करने के लिए आसान है, जबकि thermographic कैमरा सेटअप अधिक जटिल है, लेकिन अधिक सटीक डेटा प्रदान करता है । जमावट से पहले आधारभूत तापमान की उम्मीद से कम है (सुअर का शरीर तापमान ~ ३८.५ डिग्री सेल्सियस17), शरीर के तापमान पर laparotomy के विघटनकारी प्रभाव का प्रदर्शन. मापा तापमान के दौरान और जमावट के बाद वृद्धि नहीं करता है, जिगर की उत्कृष्ट छिड़काव का प्रदर्शन. जिगर की इस थर्मल चोरी प्रभाव रेडियो फ्रीक्वेंसी पृथक20से जाना जाता है । फट दबाव प्रबंधन के बजाय यकृत जहाजों पर एक सरल कारण के लिए पित्त वाहिनी प्रणाली पर आयोजित किया गया: यह प्लाज्मा coagulators के लिए असंभव है (के रूप में यह फाइब्रिन sealants के लिए है) के लिए बड़ा जहाजों सील । द्वितीयक रक्तस्तम्भन के दोनों साधन प्रतिच्छेदित अंग की काट सतह को सील करते हैं, जबकि बड़े जहाजों को लकीर के दौरान ligated जाता है । हमारे फट दबाव प्रयोगों थोड़ा रिपोर्ट तकनीक14की तुलना में संशोधित किया गया । हम संगठनात्मक कारणों के लिए explanted अंगों पर फट दबाव मापा । इन नियमों के बाहर रक्तचाप से संबंधित प्रभाव और perfused या में-vivo अंगों का उपयोग करने के लिए से लागू करने के लिए बहुत आसान कर रहे हैं. दबाव प्रयोगों के मूल्यों, इसलिए, बदल जिगर की संरचना (आमतौर पर explanted अंगों पर उच्च दबाव) के कारण perfused/in-vivo माप से अलग हो सकता है । ऊपर वर्णित फट दबाव तकनीक में भी किया जा सकता है -vivo।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
लेखकों को कोई पावती नहीं है ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Xylazine 20 mg/mL | Vetoquinol GmbH | Xylapan | |
| Ketamine 100 mg/mL | Ceva GmbH | Ceva Ketamine Injection | |
| Atropine 100 mg / 10 mL | Dr. Franz Köhler Chemie GmbH | Atropinsulfat Köhler 100mg Amp. | |
| Propofol | Fresenius Kabi GmbH | Propofol 1% MCT Fresenius | |
| Fentanyl | KG Rotexmedica GmbH | Fentanyl 0,5mg Rotexmedica | |
| Isoflurane | Abbot GmbH | Forene 100% (V/V) 250 mL | |
| Ringer's lactate solution | Baxter Deutschland GmbH | sodium 131mmol/l, potassium 5 mmol/l, calcium 2 mmol/l, cloride 111 mmol/l, lactate 29 mmol/l | |
| Surgical disinfactant | Schülke & Mayr GmbH | Kodan Tinktur forte gefärbt 1l 104804 | |
| Motorized microscope | Nikon Instruments Europe | Eclipse TE2000-E | |
| Microscope camera | Nikon Instruments Europe | Digitalsight DS-Qi1Mc | |
| Imaging software | Nikon Instruments Europe | NIS elements Vers. 4.40 | |
| Plasma coagulator | Söring GmbH | CPC-1000 | |
| Argon gas | Linde AG | Argon 4.8 | |
| Helium gas | Linde AG | Helium 4.8 | |
| O2C | LEA Medizintechnik GmbH | O2C Version 1212 | with LF-2 or LF-3 probe |
| Infrared thermometer | Voltcraft | VOLTCRAFT IR 260-8S | |
| Thermographic camera | InfraTec GmbH | VarioCAM HD head 820 | |
| Thermographic analysis software | InfraTec GmbH | IRBIS 3 | |
| Mayer's Hematoxylin solution | Merck 1.09249 | ||
| Eosin solution | VWR International GmbH | Merck 1.09844 | |
| Rollerpump Masterflex L/S easy Load | Cole-Parmer Instrument Company | model 7518-10 | |
| Perfusorpump | B. Braun Melsungen AG | Perfusor secura FT | |
| Digital pressure meter | Greisinger electronic | GMH 3161 | |
| Perfusorsyringe, 50 mL | B. Braun Melsungen AG | REF 8728810 F | |
| Perfusor line, Type IV Standard, PVC Luer lock | B. Braun Melsungen AG | REF 8722960 | |
| 3-Way stopcock, Dicofix C35C | B. Braun Melsungen AG | REF 16494 C | |
| Silk 2-0. 3 metric | Resorba | REF H5F | |
| Vicryl 4-0 Sutupak | Ethicon | V1224H | |
| NaCl 0.9 % | B. Braun Melsungen AG |
References
- Link, W. J., Incropera, F. P., Glover, J. L. A plasma scalpel: comparison of tissue damage and wound healing with electrosurgical and steel scalpels. ArchSurg. 111, 392-397 (1976).
- Kwon, A. H., Inui, H., Kamiyama, Y. Successful laparoscopic haemostasis using an argon beam coagulator for blunt traumatic splenic injury. EurJSurg. 167, 316-318 (2001).
- Frilling, A., et al. Effectiveness of a new carrier-bound fibrin sealant versus argon beamer as haemostatic agent during liver resection: a randomised prospective trial. Langenbecks ArchSurg. 390, 114-120 (2005).
- Raiser, J., Zenker, M. Argon plasma coagulation for open surgical and endoscopic applications: state of the art. J Phys Appl Phys. 39 (16), 3520-3523 (2006).
- Farin, G., Grund, K. E. Technology of argon plasma coagulation with particular regard to endoscopic applications. EndoscSurgAllied Technol. 2, 71-77 (1994).
- Grund, K. E. Argon plasma coagulation (APC): ballyhoo or breakthrough? Endoscopy. 29, 196-198 (1997).
- Glowka, T. R., Standop, J., Paschenda, P., Czaplik, M., Kalff, J. C., Tolba, R. H. Argon and helium plasma coagulation of porcine liver tissue. J Int Med Res. , (2017).
- Dowling, R. D., Ochoa, J., Yousem, S. A., Peitzman, A., Udekwu, A. O. Argon beam coagulation is superior to conventional techniques in repair of experimental splenic injury. JTrauma. 31, 717-720 (1991).
- Go, P. M., Goodman, G. R., Bruhn, E. W., Hunter, J. G. The argon beam coagulator provides rapid hemostasis of experimental hepatic and splenic hemorrhage in anticoagulated dogs. JTrauma. 31, 1294-1300 (1991).
- Brand, C. U., Blum, A., Schlegel, A., Farin, G., Garbe, C. Application of argon plasma coagulation in skin surgery. Dermatology. 197, 152-157 (1998).
- Carus, T., Rackebrandt, K. Collateral tissue damage by several types of coagulation (monopolar, bipolar, cold plasma and ultrasonic) in a minimally invasive, perfused liver model. ISRNSurg. , 518924 (2011).
- Bludau, M., Vallbohmer, D., Gutschow, C., Holscher, A. H., Schroder, W. Quantitative measurement of gastric mucosal microcirculation using a combined laser Doppler flowmeter and spectrophotometer. DisEsophagus. , (2008).
- Beckert, S., Witte, M. B., Konigsrainer, A., Coerper, S. The impact of the Micro-Lightguide O2C for the quantification of tissue ischemia in diabetic foot ulcers. Diabetes Care. 27, 2863-2867 (2004).
- Erdogan, D., de Graaf, W., van Gulik, T. M. Adhesive strength of fibrinogen-coated collagen patch or liquid fibrin sealant in an experimental liver resection model in pigs. Eur Surg Res Eur Chir Forsch Rech Chir Eur. 41 (3), 298-302 (2008).
- Knobloch, K., et al. Microcirculation of the sternum following harvesting of the left internal mammary artery. ThoracCardiovascSurg. 51, 255-259 (2003).
- Kanzler, S., et al. Recommendation for severity assessment following liver resection and liver transplantation in rats: Part I. Lab Anim. 50 (6), 459-467 (2016).
- Pehböck, D., Dietrich, H., Klima, G., Paal, P., Lindner, K. H., Wenzel, V. Anesthesia in swine optimizing a laboratory model to optimize translational research. Anaesthesist. 64 (1), 65-70 (2015).
- Nykonenko, A., Vávra, P., Zonča, P. Anatomic Peculiarities of Pig and Human Liver. Exp Clin Transplant Off J Middle East Soc Organ Transplant. 15 (1), 21-26 (2017).
- Fechner, G., von Pezold, J., Luzar, O., Hauser, S., Tolba, R. H., Müller, S. C. Modified spectrometry (O2C device) of intraoperative microperfusion predicts organ function after kidney transplantation: a pilot study. Transplant Proc. 41 (9), 3575-3579 (2009).
- Patterson, E. J., Scudamore, C. H., Owen, D. A., Nagy, A. G., Buczkowski, A. K. Radiofrequency ablation of porcine liver in vivo: effects of blood flow and treatment time on lesion size. AnnSurg. 227, 559-565 (1998).
