Ce protocole décrit la fabrication d’un système de culture cellulaire pour permettre à l’ensemencement des cellules souches sur un échafaudage de polymère conducteur pour in vitro la stimulation électrique et subséquent en vivo l’implantation de l’échafaudage graines cellules souches en utilisant un technique mini-invasive.
Un abonnement JoVE est requis pour visualiser ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre période d'essai gratuite.
Article de méthode
Échafaudage conductrice de moduler et de fournir des cellules souches
Dans cet article
Résumé
Résumé
Thérapie de cellules souches a émergé comme une course passionnante thérapeutique, mais la méthode de livraison optimale reste floue. Alors que la technique de microinjection a été utilisée pendant des décennies pour fournir des cellules souches dans des modèles de course, cette technique est limitée par le manque de capacité à manipuler les cellules souches avant l’injection. Ce livre présente en détail une méthode d’utilisation d’un échafaudage de polymère conductrice pour la livraison de cellules souches. La stimulation électrique des cellules souches à l’aide d’un échafaudage de polymère conducteur modifie les gènes de la cellule souches impliquées dans la survie cellulaire, réponse inflammatoire et remodelage synaptique. Après préconditionnement électrique, les cellules souches sur l’échafaud sont transplantés de données dans un modèle de rat occlusion distale artère cérébrale moyenne. Ce protocole décrit une technique puissante pour manipuler des cellules souches par un échafaudage de polymère conducteur et crée un nouvel outil pour développer la thérapie axée sur les cellules souches.
Introduction
L’AVC est la deuxième cause de décès dans le monde et la cinquième cause de décès aux États-Unis. Malgré ces taux de mortalité élevé, les traitements pour la récupération de l’AVC restent actuellement un défi avec aucune des options viables médicaux actuellement disponible1. On compte actuellement environ 300 essais cliniques traitant des accidents vasculaires cérébraux ischémiques, dont 40 seulement utiliser les cellules souches. Des études antérieures ont montré que les cellules souches ont un effet bénéfique sur AVC réparation2,3. Facteurs paracrines comme facteur neurotrophique déri....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Protocole
Toutes les procédures d’animaux et de cellules souches ont été approuvées par le Comité de surveillance de recherche de cellules souches de Stanford et de la Commission Administrative de l’Université de Stanford sur Laboratory Animal Care (SCRO-616 et APLAC-31909).
1. la gravure du verre ITO
- Préparer l’indium tin oxyde (ITO)-lame de verre couverte en plaçant un agent masquant sur le côté conducteur de la vitre.
NOTE : Les bandes transparentes plus commerciales peuvent servir comme un agent masquant.- Retirez le masque excès à l’aide d’une lame, laissant seulement la forme désirée de la conception finale de ITO couvert su....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Résultats
Le schéma de la Figure 1 représente le flux de travail global de la stimulation électrique des hNPCs et des éventuelles applications en aval. Une limitation de courant dans la thérapie de cellules souches, c’est que les cellules souches sont exposés à un environnement d’après la transplantation dur notamment l’inflammation et conditions ischémiques. Ces conditions difficiles susceptibles de limitent leur efficacité thérapeutique14.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Discussion
Plus en plus évident a démontré la promesse des cellules souches comme une thérapie de nouveaux accidents vasculaires cérébraux. Cette promesse a entraîné un effort majeur pour faire progresser la thérapeutique de cellules souches au chevet du malade au moins 40 essais cliniques en cours ou achevés. Pathologie de la course propose un trouble neurologique unique qui se prête à la thérapie de cellules souches, parce qu’après l’insulte aiguë, il n’y a aucun processus neurodégénératif empêchant la récupération. On ne sait pa.......
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont aucun conflit d’intérêts à déclarer avec ce travail.
Remerciements
Nous remercions le Dr Kati Andreasson (département de neurologie et des sciences neurologiques, l’Université de Stanford) pour une utilisation de la machine qRT-PCR. Le travaux ont été subventionnés par les instituts nationaux de santé subventions K08NS098876 (pour P.M.G.) et bourse de recherche postdoctorale du doyen de l’école de médecine de Stanford (au B.O.).
....Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| FGF-Basic | Invitrogen | CTP0261 | 20 ng/mL pour milieux de travail |
| Matrigel | Corning | cb40234a | dilution 1:200 |
| LIF Protein, Recom. Hum. (10 µ ; g/mL) | EMD Millipore | LIF1010 | 10 ng/mL pour fluides de travail |
| Sylgard 184 silicone 3,9 kg | Fisherbrand | NC0162601 | |
| Acide chlorhydrique | Fisherbrand | SA56-4 | |
| Concentré d’acide nitrique (certifié) ACS, Fisher Chemical | Fisherbrand | SA95 | |
| ITO Glass | Delta Technologies | CG-40IN-0115 | |
| Dodécylbenzènesulfonate de sodium | Sigma | 289957-1KG | |
| Pyrrole | Sigma | 131709-500ML | Protéger la solution de pyrrole de la lumière et de la température ambiante |
| Chambres à lames en verre à 8 puits | Thermo Sci Nuc ; | 125658 | Détachez la chambre cellulaire et conservez-la dans des conditions stérilisées |
| Support à surface plane, 3 po x 1 poMcMaster-Carr | . | 1030A4 | |
| PEINTURE ARGENT EN DEUX PARTIES 14G | Microscopie électronique Sciences ; | 1264214 | Mélanger deux parties (1:1) dans une plaque en plastique |
| DPBS, 1x, avec du Ca et du Mg, sans gène rouge de phénol | . | 25-508C | |
| AB2 ArunA Kit de milieux de culture de cellules neuronales | Aruna Biomedical ; | ABNS7013.2 | |
| hNP1 Kit d’extension de progéniteur neural humain | Aruna Biomedical ; | ; hNP7013.1 | |
| Vanne de réglage de débit sans contact, laiton nickelé, pour tube de 3/32 » à 5/8 » OD | McMaster-Carr ; | 5330K22 | |
| Multimètre | Keysight ; | E3641A | |
| Générateur de mousse d’onde | Keysight | 33210A-10MHz | |
| Pt mailles | Sigma-Aldrich ; | 298107-425MG | Électrode de référence avec dimensions, 1x1 cm |
| LIVE/DEAD Kit de viabilité/cytotoxicité, pour cellules de mammifères | Thermo Fisher Scientific ; | L3224 | |
| BDNF | Thermo Fisher Scientific ; | ||
| THBS1 | Thermo Fisher Scientific ; | ||
| GAPDH | Thermo Fisher Scientific ; | ||
| RNeasy Mini Kit (250) | Qiagen | 74106 | |
| QIAdestructeur (250) | Qiagen | 79656 | |
| Kit DNase sans RNase (50) | QIAGEN | 79254 | |
| Kit de synthèse d’ADNc iScript, 100 x 20 & micro ; L rxns | BIORAD | 1708891 | |
| TaqMan Gene Expression Master Mix | Thermo Fisher Scientific ; | ||
| 7-8 semaines, mâle, RNU Rats | NCI-Frederick | ||
| 4-0 Ethicon Suture en soie | eSutures.com | 683G | |
| Isoflurane | Henry Schein | 29405 | |
| V-1 Système d’anesthésie animale de laboratoire | de table VetEquip | 901806 | |
| Surgicel Original Absorbable Hemostat | Ethicon | 1952 | |
| Instrument stéréotaxique standard de laboratoire, Rat | Stoelting | 51600 | |
| Kimberly-Clark Professional ; Safeskin Gants d’examen stériles en nitrile violet | Fisherbrand | 19-063-130 | |
| Drapé stérile | Medline | DYNJSD1092 | |
| Thermo Scientific ; Manche de lame de scalpel en acier inoxydable Shandon, contient n° 20-25 lames | Fisherbrand | 53-34 | |
| Walter Stern Scalpel Blade Series 300 | Fisherbrand | 17-654-456 | |
| QuantStudio 6 Flex Système de PCR en temps réel | Thermo Fisher Scientific | 4484642 | |
| Frazier Micro Dissecting Hook | Harvard | Apparatus 52-2706 |
Références
- Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The Science of Stroke: Mechanisms in Search of Treatments. Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).
- George, P. M., et al. Electrical Preconditioning of Stem Cells with a Conductive Polymer Scaffold Enhances Stroke Recovery....
Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.
Réimpressions et autorisations
