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Neuroscience

कुतर के Cisterna Magna में प्रवेशनी आरोपण

Published: May 23, 2018 doi: 10.3791/57378
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1,2, 3, 3,4, 1,3
1Center for Translational Neuromedicine, Division of Glial Therapeutics, University of Copenhagen, 2Department of Anesthesiology, Yale School of Medicine, 3Center for Translational Neuromedicine, Division of Glial Therapeutics, University of Rochester Medical Center, 4Department of Experimental Medical Science, Wallenberg Center for Molecular Medicine, Lund University

Summary

यहां हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करने के लिए cisterna magna cannulation (सीएमसी), एक ंयूनतम इनवेसिव रास्ता अनुरेखकों, सब्सट्रेट और मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) में अणुओं संकेत देने के लिए प्रदर्शन करते हैं । विभिंन इमेजिंग विधियों के साथ संयुक्त, सीएमसी glymphatic प्रणाली और सीएसएफ गतिशीलता आकलन, साथ ही विभिन्न यौगिकों के मस्तिष्क व्यापक वितरण सक्षम बनाता है ।

Abstract

Cisterna magna cannulation (सीएमसी) एक सीधी प्रक्रिया है कि खोपड़ी या मस्तिष्क पैरेन्काइमा को ऑपरेटिव क्षति के बिना मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) के लिए सीधी पहुँच सक्षम बनाता है. anesthetized कुतर में, गले की मांसपेशियों के कुंद विच्छेदन से बाडी मेटर के जोखिम cisterna magna (सेमी) में एक प्रवेशनी के सम्मिलन की अनुमति देता है । प्रवेशनी, या तो एक ठीक बेवल्ड सुई या borosilicate केशिका द्वारा रचित, एक सिरिंज के लिए एक पॉलीथीन (पीई) ट्यूब के माध्यम से जुड़ा हुआ है । एक सिरिंज पंप का उपयोग करना, अणुओं तो सीधे सेमी में नियंत्रित दरों पर इंजेक्ट किया जा सकता है, जो अवजालतनिका अंतरिक्ष के साथ निरंतर है । अवजालतनिका अंतरिक्ष से, हम मर्मज्ञ धमनियों, जहां मध्य द्रव (ISF) के साथ घुला हुआ विनिमय होता है के आसपास perivascular अंतरिक्ष में संवहनी प्रवाह द्वारा सीएसएफ फ्लक्सs का पता लगा सकते हैं । सीएमसी तुरंत सर्जरी के बाद तीव्र इंजेक्शन के लिए किया जा सकता है, या जीर्ण आरोपण के लिए, anesthetized में बाद में इंजेक्शन के साथ या जाग, स्वतंत्र रूप से कुतर जाने. Quantitation में अनुरेखक वितरण के मस्तिष्क पैरेन्काइमा epifluorescence द्वारा किया जा सकता है, 2-फोटॉन माइक्रोस्कोपी, और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई), इंजेक्शन अणुओं के फिजिको-रासायनिक गुणों पर निर्भर करता है. इस प्रकार, विभिंन इमेजिंग तकनीकों के साथ संयोजन के रूप में सीएमसी glymphatic प्रणाली और सीएसएफ गतिशीलता और समारोह के आकलन के लिए एक शक्तिशाली उपकरण प्रदान करता है । इसके अलावा, सीएमसी तेजी से संकेत अणुओं और चयापचय सब्सट्रेट है कि अन्यथा रक्त मस्तिष्क बाधा (BBB) पार नहीं कर सका के लिए एक नाली के रूप में उपयोग किया जा सकता है.

Introduction

मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) वेंट्रिकुलर प्रणाली भर में केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) स्नान और अवजालतनिका रिक्त स्थान, निलय, जो मस्तिष्क और रीढ़ की हड्डी के चारों ओर से घेरे के साथ सातत्य में एक anatomically परिभाषित अंतरिक्ष के साथ । सीएसएफ के मुख्य कार्यों में से एक मस्तिष्क पैरेन्काइमा से चयापचयों और solutes के क्लीयरेंस के लिए एक मार्ग उपलब्ध कराना है. क्लीयरेंस हाल ही में खोजा glymphatic प्रणाली1के माध्यम से सुविधा है, मस्तिष्क परिधीय लसीका प्रणाली के अनुरूप । इस के साथ साथ, हम वर्णन और चर्चा cisterna magna cannulation (सीएमसी), सीएसएफ में अणुओं के प्रत्यक्ष वितरण के लिए एक न्यूनतम इनवेसिव विधि. सीएमसी glymphatic समारोह का अध्ययन करने के लिए महत्वपूर्ण तरीका है । इसके अलावा, सीएमसी भी सीएसएफ गतिशीलता के अध्ययन के लिए और गैर रक्त मस्तिष्क बाधा (BBB) मस्तिष्क पैरेन्काइमा में पारगंय अणुओं की एक तेजी से, मस्तिष्क व्यापक प्रसव के लिए, perivascular अंतरिक्ष के साथ लागू किया जा सकता है ।

सीएमसी cisterna magna (सेमी) के सीएसएफ-भरा अंतरिक्ष में लेबल अनुरेखक अणुओं या दवाओं को वितरित करने के लिए सीएनएस के माध्यम से सीएसएफ आंदोलन गतिशीलता के शारीरिक सिद्धांतों का शोषण । अणु एक प्रवेशनी शीर्षधर-पश्चकपाल ड्युल झिल्ली में प्रत्यारोपित सेमी को कवर के माध्यम से इंजेक्ट कर रहे हैं । अणु तो पैरेन्काइमा अंतरिक्ष1के माध्यम से मस्तिष्क paravascular में सीएसएफ थोक प्रवाह द्वारा किया जाता है । अनुरेखक या इसके विपरीत एजेंट सीएमसी के माध्यम से इंजेक्शन सीएसएफ के आंदोलन के बाद, जो कि मस्तिष्क पैरेन्काइमा में प्रवेश लेबल अणुओं की तीव्रता के स्तर को बढ़ाता है सीएसएफ आंदोलन और glymphatic आमद के आकलन की अनुमति देता है. सीएमसी epifluorescence, 2-फोटॉन माइक्रोस्कोपी, और चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) सहित विभिन्न इमेजिंग तकनीक के साथ संगत है । साथ ही, इस आकलन में vivo या ex vivoदोनों का प्रदर्शन किया जा सकता है । महत्वपूर्ण बात, सीएमसी संज्ञाहरण के तहत या प्राकृतिक नींद के दौरान glymphatic प्रणाली के दृश्य के लिए अनुमति देता है, के रूप में अच्छी तरह के रूप में जाग, स्वतंत्र रूप से चलती जानवरों.

सीएमसी तकनीक सीएसएफ में द्रव गतिशीलता के विभिन्न पहलुओं का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है, लेकिन glymphatic प्रणाली का अध्ययन करने के लिए विशेष रूप से उपयोगी साबित हो गया है. Glymphatic गतिविधि aquaporin-4 (AQP-4) पानी चैनलों, जो astrocytic संवहनी-लपेटन endfeet की झिल्ली में सीमित कर रहे हैं के माध्यम से periarterial अंतरिक्ष से सीएसएफ के संवहनी प्रवाह ड्राइव । संवहनी प्रवाह मस्तिष्क पैरेन्काइमा के भीतर सीएसएफ और मध्यवर्ती द्रव (ISF) के इंटरचेंज को सक्षम करता है । सीएसएफ/चयापचय अपशिष्ट और solutes युक्त ISF तो perivenous अंतरिक्ष2,3के माध्यम से मस्तिष्क पैरेन्काइमा से हटा दिया जाता है । अंत में, सीएसएफ/ISF हाल ही में वर्णित ड्युल लसीका वाहिकाओं4,5के माध्यम से परिधि तक पहुंचता है । glymphatic प्रणाली हानिकारक अपशिष्ट चयापचयों जैसे amyloid-β2की मंजूरी के लिए महत्वपूर्ण दिखाया गया है । इसके अलावा, glymphatic क्लीयरेंस6बुढ़ापे में ख़राब है, दर्दनाक मस्तिष्क चोट7के बाद, और मधुमेह के8 और अल्जाइमर रोग9के पशु मॉडल में. विशेष रूप से, glymphatic गतिविधि राज्य निर्भर है, जागना1की तुलना में नींद या संज्ञाहरण के दौरान काफी अधिक गतिविधि दिखा. दरअसल, युवा anesthetized जानवरों उच्चतम glymphatic गतिविधि का प्रदर्शन । इस प्रकार, glymphatic गतिविधि के प्रायोगिक ठहराव जब स्वास्थ्य और रोग में अपनी भूमिका का अध्ययन महत्वपूर्ण है ।

कई अध्ययनों से संबोधित किया है सीएसएफ गतिशीलता और मध्य द्रव के साथ अपने इंटरचेंज (ISF) मस्तिष्क पैरेन्काइमा में. हालांकि, तरीकों जो लेबल अणुओं दिया जाता है बल्कि आक्रामक हैं, मस्तिष्क पैरेन्काइमा क्षति ट्रिगर और intracranial दबाव में परिवर्तन (आईसीपी) (समीक्षा देखें10) । कुछ उदाहरण संवहन या intraparenchymal इंजेक्शन जो craniotomy या खोपड़ी में एक गड़गड़ाहट छेद की ड्रिलिंग शामिल हैं । इन प्रक्रियाओं आईसीपी परिवर्तन करने के लिए दिखाया गया है, इस प्रकार glymphatic समारोह2बाधित । इसके अलावा, इस तरह के इनवेसिव तरीकों astrogliosis प्रेरित और मस्तिष्क पैरेन्काइमा क्षतिग्रस्त क्षेत्र और उसके आसपास के11,12में AQP-4 immunoreactivity वृद्धि हुई है । के रूप में astrocytes और AQP-4 glymphatic प्रणाली के प्रमुख तत्व हैं, सीएमसी अपनी पढ़ाई के लिए पसंद की विधि है । अधिक इनवेसिव प्रक्रियाओं की तुलना में सीएमसी के प्रमुख लाभ, क्रमशः आईसीपी परिवर्तन और astrogliosis से परहेज, एक बरकरार खोपड़ी और मस्तिष्क पैरेन्काइमा के रखरखाव कर रहे हैं । इस प्रकार, सीएमसी अलग इमेजिंग उपकरण के साथ संयोजन के रूप में न केवल glymphatic प्रणाली का अध्ययन करने के लिए संभावनाओं की एक विस्तृत श्रृंखला के लिए खुलता है, लेकिन यह भी गतिशीलता और homeostasis में द्रव प्रवाह के तंत्र, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से मस्तिष्क संबंधी रोगों के पशु मॉडल में.

cisterna magna cannulation (सीएमसी) प्रक्रिया मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) के लिए आसान और सीधी पहुँच की अनुमति देता है । विभिंन अणुओं (जैसे फ्लोरोसेंट अनुरेखकों, एमआरआई इसके विपरीत एजेंटों इंजेक्शन द्वारा) प्रयोगकर्ता सीएसएफ डिब्बे के भीतर अपने आंदोलन को ट्रैक और glymphatic प्रणाली की गतिविधि का आकलन कर सकते हैं । निम्नलिखित प्रोटोकॉल तीव्र सीएमसी का वर्णन करता है, इंजेक्शन के लिए तुरंत सर्जरी के बाद, और प्रवेशनी के जीर्ण आरोपण, जिसमें एक बाद में इंजेक्शन के लिए शल्य प्रक्रिया से पशु ठीक. तीव्र और जीर्ण आरोपण के बीच सबसे महत्वपूर्ण अंतर यह है कि जीर्ण आरोपण जागे चूहों में glymphatic गतिविधि के अध्ययन के लिए अनुमति देता है.

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Protocol

सभी प्रक्रियाओं के अनुसार यूरोपीय निर्देशक 2010/63/यूरोपीय संघ के साथ पशु अनुसंधान के लिए प्रदर्शन किया गया और डेनिश पर्यावरण और खाद्य मंत्रालय (2015-15-0201-00535) के तहत पशु प्रयोगों परिषद द्वारा अनुमोदित किया गया ।

1. Cannulation के लिए प्रक्रिया

  1. प्रवेशनी तयारी
    नोट: गैर बाँझ दस्ताने के साथ प्रवेशनी छूने से बचें.
    1. एक सुई धारक का उपयोग कर एक 30G दंत सुई के बेवल धातु टिप को तोड़ने ।
    2. एक सुई धारक का उपयोग करना, aCSF (१२६ मिमी NaCl, २.५ मिमी KCl, १.२५ मिमी के साथ भर PE10 टयूबिंग (पॉलीथीन ट्यूबिंग ०.०२४ "ओडी एक्स ०.०११" आईडी) के एक 30 सेमी लंबाई में बेवल धातु टिप (लगभग ०.३ सेमी) डालने के द्वारा प्रवेशनी तैयार करें2पीओ4 , 2 मिमी MgSO4, 2 मिमी CaCl2, 10 मिमी ग्लूकोज, 26 मिमी NaHCO3; पीएच ७.४ जब ९५% ओ2 और 5% कं2) के साथ मार डाला ।
    3. एक 1 मिलीलीटर एक 30G सुई (30 जी एक्स ½ "०.३ x 12) के साथ सज्जित सिरिंज का उपयोग aCSF के साथ प्रवेशनी फ्लश ।
  2. सर्जिकल प्रक्रिया
    नोट: जीर्ण सेमी cannulation जानवरों शल्य प्रक्रिया से उबरने के लिए अनुमति देता है । मुख्यमंत्री इंजेक्शन प्रवेशनी आरोपण के बाद दिन बना रहे हैं और, महत्वपूर्ण बात, या तो anesthetized या जाग जानवरों में प्रदर्शन किया जा सकता है. चूंकि यह एक वसूली सर्जरी है, प्रक्रियाओं बाँझ शर्तों के तहत किया जाना चाहिए ।
    1. माउस (C57BL/6JRj, दोनों लिंगों, 8 सप्ताह) वजन और ketamine और xylazine के मिश्रण के साथ anesthetize (१०० मिलीग्राम/किग्रा; 10 मिलीग्राम/किग्रा, क्रमशः) via intraperitoneal (आईएफसआई) इंजेक्शन । यदि आवश्यक हो, शल्य प्रक्रिया के दौरान ketamine की एक आधा खुराक के साथ माउस की खुराक (५० मिलीग्राम/ वैकल्पिक रूप से, जीर्ण cannulation के लिए, anesthetize माउस यह एक isoflurane प्रेरण कक्ष में २.५-3% isoflurane में रखकर, लगभग 1 L/ इस मामले में, सर्जरी भर में १.५-2% पर isoflurane संज्ञाहरण बनाए रखने के लिए एक नाक शंकु का उपयोग करें ।
    2. जब पैर की अंगुली चुटकी सजगता संघर्ष, और श्वसन धीमी गति से और स्थिर हो जाता है, एक हीटिंग पैड पर एक stereotaxic फ्रेम में पशु जगह है ।
    3. नेत्र मरहम लागू करें । जब भी आवश्यक सर्जरी के दौरान दोहराएं ।
    4. सिर और माउस की गर्दन दाढ़ी, फर निकालें, और एक शराब झाड़ू के साथ पहले उजागर त्वचा निष्फल और फिर दो बार chlorhexidine के साथ (०.५%) या आयोडीन समाधान (2%) । नसबंदी को दो बार दोहराएं ।
      नोट: शेविंग के बाद मलबे और बालों को हटाने के लिए सर्जिकल कपड़े बदलें । तो जानवर कपड़े बाँझ क्षेत्र की रक्षा करने के लिए ।
    5. जीर्ण cannulation के लिए, प्रशासन ०.५-1 मिलीलीटर lidocaine/bupivacaine (1 मिलीग्राम/एमएल और ०.२५ मिलीग्राम/एमएल, क्रमशः) चमड़े के नीचे (एस॰सी॰) चीरा साइट पर । buprenorphine (०.०५ मिलीग्राम/kg; एस॰सी॰) के बाद सर्जिकल analgesia के लिए व्यवस्थापित ।
    6. माउस को stereotaxic फ़्रेम में ठीक करें । निर्धारण सुनिश्चित करने के बाद, या तो intraural या zygomatic आर्क द्वारा, सिर थोड़ा झुकाव इतना है कि यह शरीर के लिए १२० ° का एक कोण रूपों (चित्रा 1E) ।
    7. गर्दन की मांसपेशियों के ऊपर तुरंत फैला हुआ खोपड़ी का हिस्सा खोजें-पश्चकपाल शिखा । ऊपर चिमटी की एक जोड़ी का उपयोग कर त्वचा लिफ्ट, और midline साथ लगभग 1 सेमी की त्वचा के एक बादाम के आकार का टुकड़ा काट । किसी भी परिणामी रक्तस्राव को नियंत्रित करने के लिए सूती झाड़ू या नेत्र स्पीयर्स का उपयोग करें ।
    8. एक संदर्भ बिंदु के रूप में पश्चकपाल शिखा का उपयोग करना, नीचे गर्दन की मांसपेशियों को बेनकाब करने के लिए सतही संयोजी ऊतक खींचो ।
    9. midline में सावधानी से पूर्वकाल में चीरा साइट के बीच नीचे संदंश चलाने से मांसपेशियों को अलग-पीछे धुरी । प्रत्येक हाथ में घुमावदार संदंश की एक जोड़ी के साथ, खोपड़ी के नीचे के पास बीच में सुझावों में शामिल होने और मांसपेशियों को एक तरफ खींच ।
      नोट: यह मुख्यमंत्री है, जो एक छोटे औंधा त्रिकोण के रूप में प्रकट होता है, ऊपर और नीचे मज्जा, पारदर्शी ड्युल झिल्ली (चित्र 1b और 1C) के पीछे सेरिबैलम द्वारा उल्लिखित बेनकाब करना चाहिए ।
    10. एक शल्य आंख भाला या कपास झाड़ू का उपयोग, ड्युल झिल्ली को कवर सेमी पोंछ ।
  3. मुख्यमंत्री में प्रवेशनी के सम्मिलन
    1. aCSF-भरा सिरिंज से प्रवेशनी निकालें, ट्यूबिंग के पीछे के छोर से जुड़ी 30G सुई को रखते हुए.
    2. एक आसुत पानी से 30G सुई संलग्न १०० µ एल एक सिरिंज पंप से जुड़ा सिरिंज ।
    3. एक सिरिंज पंप की सहायता से हवा वापस लेने के द्वारा प्रवेशनी में लगभग 1 सेमी की एक हवा बुलबुला डालें ।
    4. एक सिरिंज पंप का प्रयोग, प्रवेशनी में वांछित सीएसएफ अनुरेखक के 12 μL को वापस ले.
    5. प्रवेशनी समझ, सीएसएफ अनुरेखक के साथ भरा, ट्यूब के पास-घुमावदार चिमटी प्रमुख हाथ में आयोजित की एक जोड़ी के साथ सुई कवर. विपरीत पक्ष के कान पट्टी पर गैर प्रमुख हाथ के मध्यम उंगली आराम और यह प्रवेशनी के लिए एक आराम के रूप में बाद में उपयोग के लिए स्थिर पकड़ ।
    6. ४५ ° के एक कोण पर प्रवेशनी डालें माउस सिर के सापेक्ष, सेमी के केंद्र में पासिंग, बाडी के माध्यम से देखा अपने त्रिकोणीय पहलू से पहचाना । सेरिबैलम या मज्जा के किसी भी प्रवेश से बचें । यह सुनिश्चित करें कि सुई केवल 1-2 mm की गहराई तक डाली गई है , यानी उस बिंदु पर जहां बेवल पूरी तरह से बाडी के नीचे है । प्रवेशनी पकड़े चिमटी जारी है, और गैर प्रमुख हाथ पर प्रवेशनी आराम करते हैं ।
      नोट: चिकित्सकीय सुइयों के बेवल्ड अंत CM को कवर ड्युल झिल्ली पियर्स करने के लिए कुछ बल के आवेदन की आवश्यकता होगी ।
    7. यदि आवश्यक हो, एक शल्य आंख भाला या कपास झाड़ू का उपयोग कर प्रवेश पर किसी भी सीएसएफ रिसाव बंद सूखी ।
    8. प्रवेशनी आसपास ड्युल झिल्ली पर cyanoacrylate गोंद के ड्रॉप 2-3 बूंदें । गोंद त्वरक की एक बूंद जोड़ने के लिए तुरंत चिपके इलाज । खोपड़ी और दंत सीमेंट (लगभग ०.५ मिलीग्राम) और cyanoacrylate गोंद (3-5 बूंदें) का एक मिश्रण के साथ सुई कवर । तुरंत बाद, इलाज के लिए गोंद त्वरक की एक बूंद लागू होते हैं ।
    9. जीर्ण cannulation के लिए, ट्यूबिंग काट (लगभग 2-3 सेमी प्रवेशनी से जुड़ी) और यह एक शल्य वेल्ड के साथ सील intracranial दबाव (आईसीपी) के स्तर को बनाए रखने के लिए, टयूबिंग के माध्यम से सीएसएफ रिसाव को रोकने के द्वारा ।
    10. जीर्ण cannulation के लिए, प्रशासन carprofen (5 मिलीग्राम/kg; एस॰सी॰)
    11. जीर्ण cannulation के लिए, एक पिंजरे में माउस जगह है, यह एक हीटिंग पैड पर रखने के लिए शरीर के तापमान को बनाए रखने जब तक जानवर पूरी तरह से संज्ञाहरण से बरामद किया है ।
      नोट: जानवरों को उनके पिंजरों में घर का बना होना चाहिए ताकि यह विश्वास दिलाया जा सके कि प्रवेशनी बरकरार है । सुनिश्चित करें कि नाक बिस्तर के एक कागज तौलिया या अंय ठोस सब्सट्रेट पर माउस रखकर साफ है ।

      नोट: अगले दिन, जब पशु शल्य चिकित्सा प्रवेशनी प्रविष्टि के लिए प्रदर्शन प्रक्रिया से बरामद कर रहे हैं, वे सीएसएफ अनुरेखकों के साथ इंजेक्ट किया जा सकता है । संज्ञाहरण के तहत इंजेक्शन के लिए, ketamine/xylazine का एक मिश्रण प्रशासन (१०० मिलीग्राम/किग्रा; 10 मिलीग्राम/किग्रा, क्रमशः; आईएफसआई) और खंड 2में वर्णित चरणों के लिए आगे बढ़ें । जाग पशुओं में इंजेक्शन के लिए, धारा 3के लिए आगे बढ़ें ।

2. Anesthetized पशुओं में तीव्र प्रत्यारोपित CM प्रवेशनी के माध्यम से सीएसएफ अनुरेखकों के इंजेक्शन

नोट: anesthetized पशुओं में तीव्र प्रत्यारोपित CM प्रवेशनी के द्वारा सीएसएफ अनुरेखकों के इंजेक्शन के लिए, तुरंत पिछले अनुभाग से 8 कदम के बाद, के रूप में नीचे वर्णित सीएसएफ अनुरेखक इंजेक्शन के लिए आगे बढ़ें.

  1. एक सिरिंज पंप का उपयोग करना, 5 या 10 मिनट के लिए 1 μL/मिनट की दर से सीएसएफ अनुरेखकों के CM में इंजेक्शन शुरू, 5 µ एल या 10 µ एल की कुल मात्रा में जिसके परिणामस्वरूप, क्रमशः. इंजेक्शन के अंत में, सीएसएफ अनुरेखक प्रवेशनी अबाधित के साथ 30 मिनट के लिए मस्तिष्क भर में प्रसारित करने की अनुमति.
  2. 30 मिनट के बाद, प्रवेशनी (सुई टिप से लगभग 4 सेमी दूरी) से जुड़े टयूबिंग काट और एक शल्य वेल्ड का उपयोग कर अपने अंत सील ।
  3. गहरी संज्ञाहरण के तहत, decapitation द्वारा पशु euthanize । जल्दी से मस्तिष्क काटना और 4% में विसर्जन द्वारा ऊतक ठीक paraformaldehyde (पीएफए) फॉस्फेट बफर खारा में पतला (पंजाब; 0.01 m; pH ७.४) रातोंरात (o/n) 4 डिग्री सेल्सियस पर ।

3. सीएसएफ अनुरेखकों के द्वारा लंबे प्रत्यारोपित मुख्यमंत्री प्रवेशनी के माध्यम से पशु जागर में इंजेक्शन

  1. एक सिरिंज पंप का उपयोग कर, 7 µ एल या 12 µ के एक प्रवेशनी के एक बेवल दंत सुई टिप के साथ PE10 टयूबिंग के लगभग 30 सेमी की रचना में वांछित सीएसएफ अनुरेखक के एल वापस ले लो ।
  2. धीरे पशु और प्रवेशनी से जुड़ी टयूबिंग के लगभग 1 सेमी की कटौती को नियंत्रित ।
  3. फिर भी कोमल निरोधक के तहत, जल्दी से मुख्यमंत्री प्रत्यारोपित प्रवेशनी को सीएसएफ अनुरेखक से भरा प्रवेशनी कनेक्ट ।
  4. एक सिरिंज पंप का प्रयोग, 1 µ एल की दर पर सीएसएफ अनुरेखकों के CM में इंजेक्शन शुरू/7 µ एल या 12 µ एल इंजेक्षन, 5 µ एल या 10 µ एल के सीएसएफ इंजेक्ट अनुरेखक के एक अंतिम मात्रा प्राप्त करने के लिए, इस प्रकार प्रत्यारोपित aCSF में शेष प्रवेशनी क्षतिपूर्ति. इंजेक्शन के अंत में, सीएसएफ अनुरेखक प्रवेशनी अबाधित के साथ 30 मिनट के लिए मस्तिष्क भर में प्रसारित करने की अनुमति. सुनिश्चित करें कि टयूबिंग इंजेक्शन और संचलन अवधि के दौरान संलग्न रहता है ।
  5. सीएसएफ अनुरेखक परिसंचरण समय के अंत में, decapitation द्वारा इच्छामृत्यु के लिए आगे बढ़ना, आश्वस्त है कि पशु गहराई से anesthetized है । जल्दी से मस्तिष्क काटना और 4% में विसर्जन द्वारा ऊतक ठीक paraformaldehyde (पीएफए) फॉस्फेट बफर खारा में पतला (पंजाब; 0.01 m; pH ७.४) रातोंरात (o/n) 4 डिग्री सेल्सियस पर ।

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Representative Results

एक stereotaxic फ्रेम में चूहों या चूहों के निर्धारण पर, पश्चकपाल शिखा क्षेत्र के आसपास गर्दन की मांसपेशियों को कुंद cisterna magna (सेमी) बेनकाब करने के लिए विच्छेदित कर रहे हैं । CM का त्रिकोणीय ढांचा सेरिबैलम के caudal भाग और मज्जा (figure 1a-1C) के बीच आसानी से पहचाना जाता है । प्रवेशनी शीर्षधर-पश्चकपाल झिल्ली (चित्रा 1 डी) धीरे भेदी द्वारा मुख्यमंत्री में 1-2 मिमी डाला जाता है. बाडी झिल्ली एक कठिन संरचना है और प्रवेशनी के सम्मिलन शरीर के संबंध में एक १२० डिग्री द्वारा पशु सिर झुका द्वारा सुधार हुआ है । एक इंजेक्शन पंप की सहायता के साथ, अलग तरह से अणुओं लेबल तो नियंत्रित दरों पर cisterna magna में इंजेक्शन (चित्रा 1E) कर रहे हैं । एक अंतराल के बाद सीएसएफ अनुरेखक संचलन की अनुमति देने के लिए, जानवरों euthanized हैं. मस्तिष्क को ध्यान से विच्छेदित है और 4% पीएफए o/n में विसर्जन द्वारा ४ डिग्री सेल्सियस पर तय किया जाता है । Macroscopic से काटा दिमाग के पृष्ठीय विचार मुख्यमंत्री इंजेक्शन कुतर दिखाने के सेरिबैलम के अवजालतनिका cisterns में सीएसएफ अनुरेखकों के वितरण, घ्राण बल्ब में और मध्यम मस्तिष्क धमनियों (paravascular) के साथ MCAs अंतरिक्ष में (चित्रा 1F ). मस्तिष्क के ventral भाग में, macroscopic विचार विलिस के सर्कल के साथ सीएसएफ अनुरेखक वितरण दिखाएँ (चित्रा 1G). सेमी के ऊतकवैज्ञानिक वर्गों दिमाग इंजेक्शन आगे पैरेन्काइमा के भीतर खोजकर्ताओं के paravascular वितरण से पता चलता है । चूहों संज्ञाहरण के तहत इंजेक्शन (चित्रा1) (या प्राकृतिक नींद के दौरान, देखने के लिए१) पैरेन्काइमा में मस्तिष्क में खोजकर्ता वितरण में उल्लेखनीय वृद्धि दिखाने के चूहों की तुलना में जबकि जाग और स्वतंत्र रूप से अपने घर पिंजरे में चलती (चित्रा 1I) ।

Figure 1
चित्रा 1: cisterna magna में अनुरेखकों के इंजेक्शन. (क) मस्तिष्क और कपाल संरचनाओं के संबंध में cisterna magna (सेमी) के स्थान को दर्शाते हुए माउस के सिर और मस्तिष्क का योजनाबद्ध अवलोकन. (ख) Photomicrograph के बाद उजागर सेमी की गर्दन की मांसपेशियों को कुंद कर दिया गया है और पक्षों को धक्का दिया । (ग) बी (काली आयत) में दर्शाए गए क्षेत्र का उच्च आवर्धन, सेमी (डैश्ड लाइन) की उल्टी त्रिकोणीय संरचना और आसपास की संरचनाओं के संबंध में उसके स्थान को दर्शाते हुए, यानी पश्चकपाल शिखा, सेरिबैलम, और मज्जा. (D) CM में संमिलित की गई प्रवेशनी की Photomicrography । (ङ) माउस के पार्श्व दृश्य की योजना तय की सिर, थोड़ा शरीर के संबंध में १२० डिग्री के कोण पर झुका । डैश्ड आयत के इनसेट सीमांकित क्षेत्र में डाला प्रवेशनी के साथ माउस मस्तिष्क के एक parasagittal दृश्य की एक parasagittal दृश्य योजना की योजना से पता चलता है, के रूप में ई में उल्लिखित । एक सिरिंज, जो एक इंजेक्शन पंप करने के लिए युग्मित है, एक ठीक 30G सुई से जुड़ा एक ट्यूब के माध्यम से मुख्यमंत्री में सीएसएफ अनुरेखकों या इसके विपरीत एजेंटों देने के लिए प्रयोग किया जाता है. एक फ्लोरोसेंट पृष्ठीय (एफ) और ventral (जी) पहलुओं से देखा अनुरेखक के साथ मुख्यमंत्री इंजेक्शन के अंत के बाद 30 मिनट में एक पूरे माउस मस्तिष्क के प्रतिनिधि छवियों । (H, I,) प्रतिनिधि कोरोनर मस्तिष्क वर्गों के साथ counterstained DAPI (4 ', 6-diamidino-2-phenylindole; 1 µ जी/anesthetized के तहत मुख्यमंत्री में सीएसएफ खोजकर्ताओं के साथ इंजेक्शन चूहों का) (एच) और जागना (I), 30 मिनट की दर से मुख्यमंत्री इंजेक्शन के अंत के बाद 1 µ l/एक 5 µ l के मिनट ovalbumin के मिश्रण की मात्रा-AF647 संयुग्मी (OA, 45kDa; aCSF में 2%) और dextran-FITC संयुग्मी (DEX, 3kDa; 2% aCSF में) । स्केल बार्स, बी, सी, एफ, जी के लिए 5 मिमी; डी के लिए 2 मिमी, और एच के लिए ५०० µm, मैं सीबी, सेरिबैलम; CM, cisterna magna; Ctx, प्रांतस्था; और ओबी, घ्राण बल्ब. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण को देखने के लिए ।

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Discussion

हम एक प्रोटोकॉल है कि cisterna magna cannulation (सीएमसी) के लिए एक विस्तृत प्रक्रिया का वर्णन प्रस्तुत किया है, जो एक सीधी विधि सीएसएफ डिब्बे के लिए लेबल अणुओं देने के लिए प्रदान करता है । सीएमसी सीएसएफ गतिशीलता के बाद के दृश्य की अनुमति देता है, दोनों vivo में और पूर्व vivo, अलग इमेजिंग मोडल या प्रोटोकॉल का उपयोग कर.

सीएमसी तकनीक का मुख्य लाभ में से एक craniotomy द्वारा मस्तिष्क को बेनकाब करने की आवश्यकता के बिना अवजालतनिका अंतरिक्ष के लिए अपनी सीधी पहुँच में निहित है. एक कपाल खिड़की या एक सुई टिप के साथ मस्तिष्क पैरेन्काइमा के प्रवेश की आवश्यकता नहीं से, सीएमसी सीएसएफ के डिब्बे में अणुओं के वितरण और एक न्यूनतम इनवेसिव प्रक्रिया द्वारा glymphatic प्रणाली के आकलन की अनुमति देता है, केवल संक्षिप्त अशांति के साथ intracranial दाब (आईसीपी) ।

विशेष रूप से, सेमी में इंजेक्शन सीएसएफ के मुख्य स्रोतों के बहाव है, रंजित plexi वेंट्रिकुलर प्रणाली में स्थित (पार्श्व, तीसरे और चौथे निलय). पार्श्व निलय से, सीएसएफ संवहन foramina के माध्यम से तीसरे निलय के लिए बहती है (Monro के फोरमेन) और तीसरे से चौथी निलय के माध्यम से सेरेब्रल जलसेतु (जलसेतु के Sylvius) मस्तिष्क स्टेम और रीढ़ की हड्डी के लिए (3 में समीक्षा की ). सीएसएफ माध्य एपर्चर (या Magendie के फोरमेन) के माध्यम से बह द्वारा मुख्यमंत्री के माध्यम से अवजालतनिका अंतरिक्ष में पहुंचता है, और इस तरह सीएमसी इंजेक्शन पूरे वेंट्रिकुलर प्रणाली बाईपास । हालांकि, जबकि इस के कुछ मॉडलों में समस्याग्रस्त हो सकता है सीएसएफ के माध्यम से ISF गतिशीलता, निलय में खोजकर्ताओं के प्रत्यक्ष इंजेक्शन इस तरह के खोपड़ी खिड़कियों में गड़गड़ाहट छेद की ड्रिलिंग के रूप में आक्रामक शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं की आवश्यकता है, और के आवेदन वेंट्रिकुलर इंजेक्शन काफी आईसीपी13को बाधित । इसी तरह, अवजालतनिका अंतरिक्ष13में अनुरेखकों के दबाव इंजेक्शन,14 हमारे हाथ में paravascular अंतरिक्ष के साथ सीएसएफ अनुरेखकों के प्रवाह को समाप्त. इसके विपरीत, भले ही सीएमसी ड्युल झिल्ली के पंचर पर जोर देता है, आईसीपी केवल क्षणिक परेशान है और जल्दी से2बहाल है ।

सीएमसी का प्रयोग, glymphatic गतिविधि तीव्र सीएमसी के बाद anesthetized जानवरों में मापा जा सकता है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से जाग जानवरों में, प्रवेशनी आरोपण पर एक 24 घंटे की वसूली अवधि देख. एक्यूट सीएमसी 2-फोटॉन इमेजिंग के साथ संयोजन के लिए अनुकूल है, जो लगभग २०० µm1,2की गहराई के लिए प्रांतस्था के भीतर glymphatic गतिविधि के बारे में विस्तृत जानकारी प्रदान करता है । महत्वपूर्ण बात, तीव्र सीएमसी भी निष्पक्ष एमआरआई अध्ययन, जहां अनुरेखक वितरण गतिशील रूप से पालन किया जाता है का समर्थन करने का लाभ affords, एक व्यक्तिगत आधारभूत छवि के सापेक्ष सीएसएफ अनुरेखक इंजेक्शन15की दीक्षा से पहले अधिग्रहीत की गई, 16 , 17. एमआरआई के लिए, दंत सुई सीएमसी के लिए इस्तेमाल किया एक borosilicate केशिका द्वारा प्रतिस्थापित किया जाना चाहिए (लगभग 1 सेमी लंबाई, लगभग 20 µm के टिप व्यास) पीई टयूबिंग से जुड़ी.

तीव्र cannulation के विपरीत, क्रोनिक सीएमसी प्रयोगकर्ता प्राकृतिक नींद के दौरान या संज्ञाहरण के तहत पशुओं में सीएसएफ अनुरेखक इंजेक्शन प्रदर्शन करने के लिए अनुमति देता है, साथ ही जाग में, स्वतंत्र रूप से जानवरों को ले जाने. यह एक महत्वपूर्ण कारक के बाद से glymphatic गतिविधि उच्च राज्य निर्भर है; अनुरेखक पैरेन्काइमा के लिए आमद बहुत पशुओं कि जाग राज्य में इंजेक्शन थे कि में से संज्ञाहरण या सो के तहत इंजेक्शन थे में अधिक से अधिक है1. इसके अलावा, एक लंबे प्रत्यारोपित प्रवेशनी के साथ पशुओं को अपने घर पिंजरे में सीएसएफ अनुरेखक प्राप्त कर सकते हैं, इस प्रकार तनाव और glymphatic गतिविधि पर कामोत्तेजना के प्रभाव के कारण कारकों को कम करने की स्थापना । संज्ञाहरण के तहत पुरानी इंजेक्शन के लिए, ketamine/xylazine का एक मिश्रण (१०० मिलीग्राम/किग्रा; 10 मिलीग्राम/किग्रा, क्रमशः) की सिफारिश की है । १.५% ऊपर सांद्रता पर Isoflurane मस्तिष्क सूजन लाती है और जाग राज्य की तुलना में glymphatic गतिविधि में वृद्धि नहीं करता है1। ध्यान दें कि सीएमसी आरोपण के बाद, जानवरों को एक दूसरे के प्रवेशनी को नुकसान नहीं होगा कि सीएमसी प्रत्यारोपित जानवरों को आश्वस्त करने के लिए, एकल ईमारत होना चाहिए । इसके अलावा, के बाद से सीएमसी पुरानी आरोपण एक वसूली शल्य प्रक्रिया है, यह बाँझ शर्तों के तहत प्रदर्शन किया जाना चाहिए और जानवरों के बाद ऑपरेशनल एनाल्जेसिक प्राप्त करना चाहिए.

महत्वपूर्ण बात, सीएमसी एक विधि के रूप में चूहों में के रूप में अच्छी तरह से चूहों में सीएसएफ अनुरेखक वितरित करने के लिए प्रोटोकॉल के लिए न्यूनतम संशोधनों के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है. उचित निश्चेतक खुराक और प्रशासित किया जाना चाहिए सीएसएफ अनुरेखक कि चूहों में इंजेक्शन है की अधिकतम मात्रा है 30 µ एल, दो प्रजातियों के बीच वेंट्रिकुलर और अवजालतनिका रिक्त स्थान के आकार में अंतर के कारण.

अपनी प्रक्रियात्मक सादगी के बावजूद, कुछ प्रशिक्षण और अभ्यास सफलतापूर्वक सीएमसी प्रदर्शन करने के लिए प्रयोगकर्ता के लिए आवश्यक है । के बाद से मुख्यमंत्री प्रजातियों और व्यक्तिगत जानवरों के बीच में आकार में बदलता है, यह अपनी संरचना की मांयता का अभ्यास करने के लिए सलाह दी जाती है । इवांस ब्लू (aCSF में 2%) का उपयोग कर प्रक्रिया अभ्यास सही सुई प्रविष्टि की पुष्टि करने के लिए प्रयोगकर्ता की अनुमति देता है. कभी-कभार, एक पोत सीधे मुख्यमंत्री के midline पर स्थित हो जाएगा, whereupon सुई पोत के बगल में डाला जाना चाहिए, लेकिन के रूप में midline के लिए संभव के रूप में बंद । इन मामलों का उल्लेख किया जाना चाहिए, बाद में पुष्टि के लिए है कि अनुरेखकों समान रूप से वितरित कर रहे हैं, सुई टिप के बंद केंद्र प्लेसमेंट के बावजूद. महत्वपूर्ण बात, सेमी को कवर शीर्षधर-पश्चकपाल झिल्ली यांत्रिक रूप से कठिन है, और बेवल्ड सुई टिप डालने के लिए पर्याप्त दबाव लागू किया जाना चाहिए । हालांकि, यह महत्वपूर्ण है कि दबाव लागू मज्जा या सेरिबैलम में सुई टिप डूबनेवाला में परिणाम नहीं है । सेमी में सुई प्रविष्टि की सुविधा के लिए, जानवरों के सिर के शरीर के सापेक्ष १२० डिग्री के कोण पर नीचे की और झुका जाना चाहिए, जो झिल्ली फैला । महत्वपूर्ण बात यह है कि इस सिर के फ्लेक्स द्वारा बाधा श्वसन में सावधानी नहीं बरती जानी चाहिए । यदि सुई टिप सेरिबैलम दर्ज करना चाहिए, अनुरेखक ऊतक में बनाए रखा जाएगा और अवजालतनिका अंतरिक्ष भर में वितरित करने के लिए असफल. मज्जा को नुकसान अक्सर घातक है, जबकि जीर्ण cannulations में सेरिबैलम क्षति रुक्न और पशुओं के व्यवहार में सामान्य विषमता में परिणाम कर सकते हैं । इस अंतिमता के जोखिम को कम करने के लिए, एक छोटे बेवल लंबाई के साथ सुइयों का इस्तेमाल किया जा सकता है ।

जब गर्दन क्षेत्र है कि बाडी झिल्ली में प्रवेशनी डालने के लिए शामिल की मांसपेशियों को ले जाने में सेमी, रक्तस्राव हो सकता है । कपास झाड़ू रक्तस्राव को अवशोषित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, लेकिन वैकल्पिक रूप से, घाट क्लोराइड समाधान लागू किया जा सकता है । घाट क्लोराइड एक hemostatic प्रभाव18है, और भी चीरा साइट के आसपास गर्दन की मांसपेशियों की stiffening से चलाता है, इस प्रकार सेमी में सुई की सही प्रविष्टि प्राप्त करने में मदद । घाट क्लोराइड भी खोपड़ी और ड्युल झिल्ली सूख जाता है, पेश प्रवेशनी के आसंजन के लिए बेहतर सतहों । सीएमसी के लिए, घाट क्लोराइड समाधान की 1-2 बूंदें लागू करें (10%) (लगभग 1 मिलीलीटर) एक कपास झाड़ू में और ढाब गर्दन की मांसपेशियों और पश्चकपाल शिखा । हालांकि, सामयिक घाट क्लोराइड संभवतः सीएसएफ में झिल्ली के माध्यम से रिसाव, मस्तिष्क homeostasis पर अज्ञात प्रभाव के साथ हो सकता है । यदि घाट क्लोराइड का उपयोग चिंता का विषय है, एक जगह घाव ट्रैक्टर का उपयोग करने के लिए चीरा साइट खुला रख सकते हैं । cyanoacrylate गोंद लागू करने के बाद घाव ट्रैक्टर के सावधान हटाने चीरा साइट के लिए अनजाने लगाव से बचा जाता है ।

सीएमसी सीधे सीएसएफ के डिब्बे में अणुओं को पहुंचाने के लिए एक सीधी और reproducible प्रक्रिया है । सीएमसी न्यूनतम इनवेसिव है के बाद से, यह glymphatic प्रणाली के दृश्य के लिए पसंदीदा तरीका है और इस तरह के epifluorescence और 2-फोटॉन माइक्रोस्कोपी या एमआरआई के रूप में विभिन्न इमेजिंग विधियों के साथ जोड़ा जा सकता है । इस प्रकार, सीएमसी द्रव गतिशीलता, अर्थात् सीएसएफ और ISF के अध्ययन के लिए एक महान उपकरण का प्रतिनिधित्व करता है, और मस्तिष्क द्रव निकासी की भी. glymphatic प्रणाली के macroscopic कवरेज के कारण, सीएमसी मस्तिष्क व्यापक अणुओं को वितरित करने के लिए इस्तेमाल किया जा करने की क्षमता है.

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Disclosures

लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम के नोवो Nordisk फाउंडेशन और राष्ट्रीय मस्तिष्क संबंधी विकार और स्ट्रोक के संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था, NINDS/NIH (M.N.) । A.L.R.X. और एस एच आर एक postdoctoral फैलोशिप और Lundbeck फाउंडेशन, क्रमशः से पीएचडी छात्रवृत्ति के प्राप्तकर्ताओं हैं ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
SOPIRA Carpule 30G 0.3 x 12mm Kulzer AA001
Polyethylene Tubing 0.024” OD x 0.011” ID Scandidact PE10-CL-500
30G x ½” 0.3 x 12 mm Luer-Lock Chirana T. Injecta CHINS01
Chlorhexidine 0.5% (chlorhexidine digluconate) Meda AS no catalogue number, see link in comments http://www.meda.dk/behandlingsomrader/desinfektion/desinfektion-af-hud/klorhexidin-sprit-medic-05/
Alcohol Swab 70% Isopropyl Alcohol 30 x 60mm Vitrex Medical A/S 520213
Viskoese Oejendraeber Ophtha Ophtha 145250
Wooden applicator, Double cotton bud (Ø appr. 4 - 5 mm, length appr. 12 mm) Heinz Herenz 1032018
Eye spears Medicom A18005
Ferric chloride 10% solution Algeos NV0382
Kimtech Science Precision Wipes Tissue Wipers Kimberly Clark Professional 05511
Loctite Super Glue Precision 5g Loctite no catalogue number, see link in comments http://www.loctite-consumer.dk/da/produkter/superglue-liquid.html 
Insta-Set CA Accelerator Bob Smith Industries BSI-152
Dental Cement Powder A-M Systems 525000
Surgical weld  Kent Scientific Corporation INS750391
Hamilton syringe GASTIGHT® , 1700 series, 1710TLL, volume 100 μL, PTFE Luer lock Hamilton syringes 1710TLL
LEGATO 130 Syringe pump KD Scientific 788130
Paraformaldehyde powder, 95% Sigma Aldrich 158127
Phosphate buffered saline (PBS; 0.01M; pH 7.4) Sigma Aldrich P3813
Ovalbumin, Alexa Fluor 647 Conjugate Thermo Fisher Scientific O34784

DAPI (diamidino-2-phenylindole) Solution (1 mg/mL)		 Thermo Fisher Scientific 62248
Dextran, Fluorescein, 3000 MW, Anionic Thermo Fisher Scientific D3305
E-Z Anesthesia EZ-7000 Classic System E-Z Systems EZ-7000
Attane Isofluran 1000 mg/g ScanVet 55226
Euthanimal 200mg/mL (sodium pentobarbital) ScanVet 545349
Ketaminol Vet 100 mg/mL (ketamine) Intervet International BV 511519
Rompin Vet 20 mg/mL (xylazin) KVP Pharma + Veterinär Produkte GmbH 148999
Xylocain 20 mg/mL (lidocain) AstraZeneca 158543
Marcain 2.5 mg/mL (bupivacain) AstraZeneca 123918
Bupaq Vet 0.3 mg/mL (buprenorphine) Richter Pharma AG 185159 

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References

  1. Xie, L., et al. Sleep Drives Metabolite Clearance from the Adult Brain. Science. , 373-377 (2013).
  2. Iliff, J. J., et al. A paravascular pathway facilitates CSF flow through the brain parenchyma and the clearance of interstitial solutes, including amyloid β. Sci. Transl. Med. 4, 147ra111 (2012).
  3. Jessen, N. A., Munk, A. S. F., Lundgaard, I., Nedergaard, M. The Glymphatic System: A Beginner's Guide. Neurochem. Res. 40, 2583-2599 (2015).
  4. Louveau, A., et al. Structural and functional features of central nervous system lymphatic vessels. Nature. , (2015).
  5. Aspelund, A., et al. A dural lymphatic vascular system that drains brain interstitial fluid and macromolecules. J. Exp. Med. 212, 991-999 (2015).
  6. Kress, B. T., et al. Impairment of paravascular clearance pathways in the aging brain. Ann. Neurol. 76, 845-861 (2014).
  7. Plog, B. A., et al. Biomarkers of Traumatic Injury Are Transported from Brain to Blood via the Glymphatic System. J. Neurosci. 35, 518-526 (2015).
  8. Jiang, Q., et al. Impairment of glymphatic system after diabetes. J. Cereb. Blood Flow Metab. , Under Revi (2016).
  9. Peng, W., et al. Suppression of glymphatic fluid transport in a mouse model of Alzheimer's disease. Neurobiol. Dis. 93, 215-225 (2016).
  10. Orešković, D., Klarica, M. The formation of cerebrospinal fluid: Nearly a hundred years of interpretations and misinterpretations. Brain Res. Rev. 64, 241-262 (2010).
  11. Dusart, I., Schwab, M. E. Secondary Cell Death and the Inflammatory Reaction After Dorsal Hemisection of the Rat Spinal Cord. Eur. J. Neurosci. 6, 712-724 (1994).
  12. Eide, K., Eidsvaag, V. A., Nagelhus, E. A., Hansson, H. -A. Cortical astrogliosis and increased perivascular aquaporin-4 in idiopathic intracranial hypertension. Brain Res. , (2016).
  13. Pullen, R. G., DePasquale, M., Cserr, H. F. Bulk flow of cerebrospinal fluid into brain in response to acute hyperosmolality. Am. J. Physiol. 253, F538-F545 (1987).
  14. Ichimura, T., Fraser, P. A., Cserr, H. F. Distribution of extracellular tracers in perivascular spaces of the rat brain. Brain Res. 545, 103-113 (1991).
  15. Iliff, J. J., et al. Brain-wide pathway for waste clearance captured by contrast-enhanced MRI. J. Clin. Invest. 123, 1299-1309 (2013).
  16. Ratner, V., et al. Optimal-mass-transfer-based estimation of glymphatic transport in living brain. Proc. SPIE--the Int. Soc. Opt. Eng. 9413, (2015).
  17. Lee, H., et al. The Effect of Body Posture on Brain Glymphatic Transport. J. Neurosci. 35, 11034-11044 (2015).
  18. Nouri, S., Sharif, M. R., Sahba, S. The effect of ferric chloride on superficial bleeding. Trauma Mon. 20, e18042 (2015).

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तंत्रिका विज्ञान अंक १३५ मस्तिष्कमेरु द्रव (सीएसएफ) मध्यवर्ती द्रव (ISF) अवजालतनिका अंतरिक्ष glymphatic प्रणाली cisterna magna (सेमी) cisterna magna cannulation (सीएमसी) कुतर चुंबकीय अनुनाद इमेजिंग (एमआरआई) epifluorescence 2-फोटॉन माइक्रोस्कोपी
कुतर के Cisterna Magna में प्रवेशनी आरोपण
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Xavier, A. L. R., Hauglund, N. L.,… More

Xavier, A. L. R., Hauglund, N. L., von Holstein-Rathlou, S., Li, Q., Sanggaard, S., Lou, N., Lundgaard, I., Nedergaard, M. Cannula Implantation into the Cisterna Magna of Rodents. J. Vis. Exp. (135), e57378, doi:10.3791/57378 (2018).

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