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Chemistry

Regioselectiva O- glicosilación de nucleósidos a través de la temporal 2', 3'-Diol protección por un éster borónico para la síntesis de nucleósidos del disacárido

Published: July 26, 2018 doi: 10.3791/57897
Automatic Translation
1, 1, 1, 1,2
1Faculty of Pharmaceutical Sciences, Tokyo University of Science, 2Imaging Frontier Center, Tokyo University of Science

Summary

Aquí, presentamos los protocolos para la síntesis de nucleósidos disacárido por el regioselectiva O- glicosilación de ribonucleosides a través de una protección temporal de sus 2', 3'-diol fracciones utilizando un éster borónico cíclico. Este método se aplica a varios nucleósidos desprotegidos tales como adenosina, guanosina, citidina, uridina, 5 methyluridine y 5-fluorouridine para dar los correspondientes nucleósidos de disacárido.

Abstract

Nucleósidos de disacárido, que consisten en moléculas de disacáridos y nucleobase, han sido conocidos como un grupo valioso de los productos naturales tienen múltiples bioactividades. Aunque química O- glicosilación es una estrategia comúnmente beneficiosa para sintetizar nucleósidos disacárido, la preparación de sustratos como glycosyl donantes y aceptadores requiere tediosas manipulaciones protección de grupo y una purificación en el cada paso sintético. Mientras tanto, varios grupos de investigación han divulgado que borónico y ésteres de borinic sirven como una protección o activar el grupo de los derivados de carbohidratos para lograr el regio - y estereoselectiva de acilación, alquilación, silanización y glicosilación. En este artículo, se demuestra el procedimiento para la regioselectiva O- glicosilación de ribonucleosides sin protección utilizando ácido borónico. La esterificación de 2', 3'-diol de ribonucleosides con el ácido bórico hace que la protección temporal de diol y O- glicosilación siguiente con un donante glycosyl en presencia de p- toluenesulfenyl permisos triflate, cloruro y de plata la reacción regioselectiva del Grupo 5'-hidroxilo al permitirse el lujo de los nucleósidos de disacárido. Este método podría aplicarse a varios nucleósidos, como guanosina, adenosina, citidina, uridina, 5 metyluridine y 5-fluorouridine. Este artículo y el video que lo acompaña representan información útil (visual) de la O- glicosilación de nucleósidos no protegidos y sus análogos para la síntesis de no sólo nucleósidos disacárido, sino también una variedad de biológicamente relevantes derivados.

Introduction

Nucleósidos de disacárido, que son conjugados de un nucleósido y una molécula de carbohidrato ligado a través de un O-glucosídico bond, constituyen una valiosa clase de natural carbohidratos derivados1,2 ,3,4,5,6,7. Por ejemplo, se incorporan en las macromoléculas biológicas como el tRNA (ácido ribonucleico de transferencia) y poli (ADP = difosfato de adenosina), así como en algunos agentes antibacterianos y otras sustancias biológicamente activas (por ejemplo, adenophostins, amicetins, ezomycin)5,6,8,9,10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19. Por lo tanto, disacárido nucleósidos y sus derivados deben ser compuestos de plomo para la investigación de descubrimiento de drogas. Las metodologías para la síntesis de nucleósidos disacárido se clasifican en tres categorías; enzimática O- glicosilación20,21, químico N- glicosilación5,9,16,22,23, 24y químicos O- glicosilación7,9,14,16,18,19,24, 25,26,27,28,29,30,31,32,33, 34,35,36,37. En particular, O- glicosilación química sería un método eficiente para la Síntesis estereoselectiva y la síntesis a gran escala de nucleósidos de disacárido. Investigaciones anteriores han mostrado que la O- glicosilación de desoxinucleósidos 2' 2 con el thioglycosyl donante 1, utilizando la combinación de cloruro de p- toluenesulfenyl y plata triflate, ofrece la desea disacárido nucleósido 3 (figura 1A; Ar = aryl y PG = grupo de protección)38.

Tras estos resultados, se decidió desarrollar la O- glicosilación de ribonucleosides aplicación del sistema de triflate del promotor p- toluenesulfenyl/cloruro de plata. Mientras que varios ejemplos de la O- glicosilación de ribonucleosides parcialmente protegidas han demostrado7,9,14,16,18,19 ,24,32,33,34,35,36,37, el uso de desprotegida o protegida temporalmente ribonucleosides como un aceptador de glicosil de O- glicosilación se ha divulgado insignificante. Por lo tanto, el desarrollo de regioselectiva O- glicosilación de ribonucleosides desprotegidas o protegida temporalmente proporcionaría un método sintético más beneficioso sin la protección de la manipulación del grupo de ribonucleosides. Para lograr la regioselectiva O- glicosilación de ribonucleosides, nos hemos centrado en los compuestos de boro, ya que varios ejemplos de regio - y estereoselectiva de acilación, alquilación, silanización y glicosilación de hidratos de carbono derivados con la ayuda de bórico o ácido borinic han sido reportado39,40,41,42,43,44,45 ,46,47,48,49,50. En este artículo, se demuestra el procedimiento para la síntesis de nucleósidos del disacárido utilizando regioselectiva O- glicosilación en el Grupo 5'-hidroxilo de ribonucleosides a través de un éster borónico intermedio. En la estrategia presentada aquí, éster borónico intermedio 6 deben otorgarse por la esterificación de los ribonucleósidos 4 con el bórico ácido 5, que permite la regioselectiva O- glicosilación en el Grupo 5'-hidroxilo con thioglycosyl donantes 7 dar el disacárido nucleósido 8 (figura 1B)51. También se estudió la interacción de un ribonucleósido y ácido bórico por espectroscopia de resonancia magnética nuclear (RMN), para observar la formación de un éster borónico. Esterificación para hacer un éster borónico y una reacción de glicosilación requieren condiciones anhidras para evitar la hidrólisis de éster borónico y el donante glycosyl. En este artículo, nos demuestran los procedimientos típicos para obtener las condiciones anhidras para reacciones de glicosilación exitosa para investigadores y estudiantes de química, sino también en otros campos de investigación.

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Protocol

Nota: Todos los datos experimentales [NMR espectroscopías infrarrojas (IR), espectroscopías de masa (MS), rotación óptica datos y análisis elemental] de los compuestos sintetizados fueron registrados en un papel anterior de51.

1. procedimiento para reacciones de O- glicosilación

  1. Síntesis de compuestos α/β-12 (12 de entrada en la tabla 1)
    Nota: Las entradas 1-13 en la tabla 1 se llevaron a cabo usando un procedimiento similar.
    1. Protección temporal de 2', 3'-diol de ribonucleósido40
      1. De 10 mL frasco en forma de pera (frasco 1), disolver mannosyl donante α -9 (28,4 mg, 0.0486 mmol)52, uridina 10 (7,9 mg, 0.0324 mmol) y 4-(trifluorometil) ácido de phenylboronic 11 c (9,3 mg, 0.0490 mmol) en piridina anhidra (0.40 mL).
        Nota: Se recomienda el uso de un matraz de pera de 10 mL porque, en el paso 1.1.3.1, la mezcla de reacción se transferirá al matraz 2 (un 10 mL dos-cuello redondo-matraz de fondo con un tabique que se le atribuye) que contienen molecular tamices de polvo.
      2. Co se evapora la mezcla de reacción (obtenida en paso 1.1.1.1.) con piridina anhidra (0,40 mL, x 3) y anhidro 1, 4-dioxano (0,40 mL, x 3) a temperatura ambiente para aprox. 40 ° C para eliminar toda el agua.
      3. Disolver el residuo (obtenido en paso 1.1.1.2.) en 1, 4-dioxano anhidro (0,32 mL) y agitar la mezcla de reacción a la temperatura de reflujo durante 1 h formar un éster borónico (protección temporal).
      4. Eliminar el disolvente utilizando un rotavapor seguido por una bomba de vacío.
    2. Activación de tamices moleculares
      1. En un matraz de 10 mL dos cuello fondo redondo con un tabique unido a él (frasco 2), añadir 4 Å polvo tamices moleculares (64 mg).
        Nota: Tamices moleculares apropiadas deben seleccionarse según el solvente utilizado para la glicosilación (3 Å de acetonitrilo) y 4 Å para 1, 4-dioxano, diclorometano y propionitrilo.
      2. Los tamices moleculares en un horno de microondas bajo presión atmosférica de calor enfriar bajo presión reducida evacuada por una bomba de vacío (3 x) y luego secar con una pistola de calor a presión reducida mientras que substituye el aire con el gas argón varias veces.
    3. Glicosilación
      1. Disolver el residuo del paso 1.1.1.4. en el matraz 1 de propionitrilo (0,64 mL) u otros solventes y transferir esta solución al matraz 2.
        Nota: Acetonitrilo, 1, 4-dioxano, diclorometano y propionitrilo fueron utilizados para las entradas 1-7 y 9, entrada 10 y 11 de entrada entradas de 8, 12 y 13, respectivamente.
      2. Revuelva la mezcla de reacción en matraz 2 a temperatura ambiente durante 0,5 h seguido de enfriamiento a-40 ° C.
        Nota: La temperatura cambió según el solvente utilizado para la glicosilación (-40 ° C para el diclorometano y propionitrilo), temperatura ambiente durante 1, 4-dioxano y -20 ° C para el acetonitrilo.
      3. Añadir plata triflate (49,9 mg, 0.194 mmol) y p -cloruro de toluenesulfenyl (12,8 μl, 0.0968 mmol) a la mezcla de reacción a la misma temperatura según lo utilizado en el paso 1.1.3.2.
      4. Revuelva la mezcla de reacción a la misma temperatura durante 1,5 horas.
      5. Comprobar la reacción por cromatografía en capa fina (TLC) con acetato de etilo/hexano [3/1 (v/v)] para comprobar los donantes glycosyl [el factor de retención (Rf) (donantes α -9) = 0.63] y con Cloroformo/metanol [10/1 (v/v))] para comprobar la glicosil aceptadores y productos [Rf (aceptor 10) = 0.03, Rf (producto deseado) = 0.50].
      6. Apagar la mezcla de reacción con bicarbonato de sodio acuoso saturado (1,0 mL), diluir con cloroformo (2.0 mL), retirar los materiales insolubles con Celitey lavar cuidadosamente el Celite con cloroformo (20 mL).
      7. Lavar el filtrado (capa orgánica) con saturado bicarbonato de sodio acuoso (20 mL, x 3) y salmuera (20 mL), utilizando un matraz de 100 mL.
      8. Secar la capa orgánica resultante con sulfato de sodio, filtro los materiales insolubles y concentrar el filtrado utilizando un evaporador rotatorio.
      9. Aproximadamente purificar el residuo mediante cromatografía de columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 50/1 (v/v)] pagar crudo 5'-O-(6"-O- acetil-2", 3", 4"- tri-O- benzyl-α/β-ᴅ-mannopyranosyl) uridina que contiene un pequeña cantidad de subproductos (15,2 mg, jarabe incoloro).
    4. Acetilación
      1. En un frasco de 5 mL, disolver el compuesto crudo resultante preparado en el paso 1.1.3.9 piridina anhidra (0,20 mL).
      2. Añadir N,N-dimetil-4-aminopiridina (una cantidad catalítica) y anhídrido acético (20,4 μL, 0.0216 mmol: 10 equivalentes basan en el compuesto crudo) a la solución a 0 ° C.
      3. Revuelva la mezcla de reacción a la misma temperatura durante 0,5 h seguido por un calentamiento a la temperatura ambiente.
      4. Después de la agitación durante la noche, comprobar la reacción por el TLC con Cloroformo/metanol [30/1 (v/v)] [Rf (α/β-12) = 0.45].
      5. Diluir la mezcla de reacción con cloroformo (20 mL).
      6. Lave la capa orgánica con 1 M de ácido clorhídrico (20 mL, x 3), saturado bicarbonato de sodio acuoso (20 mL, x 3) y salmuera (20 mL), utilizando un matraz de 100 mL.
      7. Secar la capa orgánica resultante con sulfato de sodio, filtro los materiales insolubles y concentrar el filtrado utilizando un evaporador rotatorio.
      8. Purificar el residuo mediante cromatografía de columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 90/1 (v/v)] dar α/β-12 (α/β, el 61%, 15,8 mg = 1,6/1, descolorido sólido amorfo).
  2. Síntesis de compuestos β-22 β-30 (tabla 2) y β-33 (cuadro 3)
    Nota: La síntesis de β-22-Β-30y β-33se llevó a cabo usando un procedimiento similar.
    1. Síntesis de compuestos β-22 (1 de entrada en la tabla 2)
      1. Protección temporal de 2', 3'-diol de ribonucleósido
        1. De 10 mL frasco en forma de pera (matraz 3) disolver adenosina 13 (20,4 mg, 0.0763 mmol), galactosil donantes β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol)53y 4-(trifluorometil) ácido de phenylboronic 11 c (21,7 mg, 0.114 mmol) en anhidro piridina (0,76 mL).
          Nota: Se recomienda el uso de un matraz de pera de 10 mL ya que la mezcla de reacción se transfiere al matraz 4 (un 10 mL dos-cuello redondo-matraz de fondo con un tabique que se le atribuye) que contienen molecular tamices de polvo en el paso 1.2.1.3.1.
        2. Co se evapora la mezcla de reacción (obtenida en paso 1.2.1.1.1.) con piridina anhidra (0,76 mL, x 3) y anhidro 1, 4-dioxano (0,76 mL, x 3) a temperatura ambiente para aprox. 40 ° C para eliminar toda el agua.
        3. Disolver el residuo (obtenido en paso 1.2.1.1.2.) en 1, 4-dioxano anhidro (0,76 mL) y remover la mezcla de reacción a la temperatura de reflujo durante 1 h formar un éster borónico (una protección temporal).
        4. Eliminar el disolvente utilizando un rotavapor seguido por una bomba de vacío.
      2. Activación de tamices moleculares
        1. En un matraz de 10 mL dos cuello fondo redondo con un tabique unido a él (matraz 4), añadir 4 Å polvo tamices moleculares (150 mg).
        2. Los tamices moleculares en un horno de microondas bajo presión atmosférica de calor enfriar bajo presión reducida evacuada por una bomba de vacío (3 x) y luego secar con una pistola de calor a presión reducida mientras que substituye el aire con el gas argón varias veces.
      3. Glicosilación
        1. Disolver el residuo del paso 1.2.1.1.4. en matraz 3 en propionitrilo (1,50 mL) y la transferencia de esta solución al matraz 4.
        2. Revuelva la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 0,5 h, seguido de un enfriamiento a-40 ° C.
        3. Añadir plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol) y p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol) a la mezcla de reacción a la misma temperatura como se menciona en el paso 1.2.1.3.2.
        4. Revuelva la mezcla de reacción, a la misma temperatura durante 1,5 horas.
        5. Comprobar la reacción por el TLC con acetato de etilo/hexano [2/1 (v/v)] para comprobar los donantes glycosyl [Rf (donante β -21) = 0,62] y con Cloroformo/metanol [10/1 (v/v)] para comprobar la glicosil aceptadores y productos [Rf (aceptador del 13 ) = 0.05, Rf (producto deseado) = 0.30].
        6. Apagar la mezcla de reacción con bicarbonato de sodio acuoso saturado (2.0 mL), diluir con cloroformo (3,0 mL), retirar los materiales insolubles a través de Celitey lavar cuidadosamente el Celite con cloroformo (30 mL).
        7. Lavar el filtrado (capa orgánica) con saturado acuoso bicarbonato de sodio (30 mL, x 3) y salmuera (30 mL) utilizando un matraz de 100 mL.
        8. Secar la capa orgánica resultante con sulfato de sodio, filtro los materiales insolubles y concentrar el filtrado utilizando un evaporador rotatorio.
        9. Purificar el residuo mediante cromatografía de columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 30/1 (v/v)] producir β -22 (27,4 mg, 42%, sólido descolorido).
    2. Síntesis de compuestos β-23 (entrada 2 en la tabla 2)
      1. Conducta la reacción usando 14 (28,4 mg, 0.0765 mmol)54, β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,8 mg, 0.458 mmol), anhidro 1, 4-dioxano (0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 50/1 (v/v)] para dar β–23 (21,9 mg, 30%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -23) = 0,37 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    3. Síntesis de compuestos β-24 (entrada 3 en el cuadro 2)
      1. Llevar a cabo la reacción utilizando 15 (21,6 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol), anhidro (1, 4-dioxano 0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 8/1 (v/v)] para dar β -24 (8,1 mg, 12%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -24) = 0.20 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    4. Síntesis de compuestos β-25 (4 de entrada en la tabla 2)
      1. Conducta la reacción usando 16 (27,0 mg, 0.0764 mmol)55, β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,8 mg, 0.458 mmol), anhidro 1, 4-dioxano (0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 20/1 (v/v)] para dar β -25 (31,4 mg, 44%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -25) = 0.27 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    5. Síntesis de compuestos β-26 (entrada 5 en la tabla 2)
      1. Llevar a cabo la reacción con 10 (18,6 mg, 0.0762 mmol), β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol), anhidro (1, 4-dioxano 0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 40/1 (v/v)] para dar β -26 (26,1 mg, 42% sólido descolorido). TLC: Rf (β -26) = 0.45 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    6. Síntesis de compuestos β-27 (6 de la entrada en la tabla 2)
      1. Llevar a cabo la reacción con 17 (19,7 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,5 mg, 0.115 mmol), 11 c (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol), anhidro (1, 4-dioxano 0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 40/1 (v/v)] para dar β -27 (33,8 mg, 53%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -27) = 0.50 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    7. Síntesis de compuestos β-28 (7 de entrada en la tabla 2)
      1. Llevar a cabo la reacción con 18 (20,0 mg, 0.0763 mmol), β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol), anhidro (1, 4-dioxano 0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, cloroformo y acetato de etilo/cloroformo = 1/1 (v/v)] para dar β–28 (38,8 mg, 61%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -28) = 0.33 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    8. Síntesis de compuestos β-29 (8 de la entrada en la tabla 2)
      1. Llevar a cabo la reacción con 19 (18,5 mg, 0.0761 mmol), β -21 (80,4 mg, 0.114 mmol), 11 c (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol), anhidro (1, 4-dioxano 0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 10/1 (v/v)] para dar β -29 (34,1 mg, 55%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -29) = 0.25 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    9. Síntesis de compuestos β-30 (entrada 9 en la tabla 2)
      1. Conducta la reacción usando 20 (26,6 mg, 0.0766 mmol)56, β -21 (80,6 mg, 0.115 mmol), 11 c (21,8 mg, 0.115 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,8 mg, 0.458 mmol), anhidro 1, 4-dioxano (0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 50/1 (v/v)] para dar β -30 (28,0 mg, 40%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -30) = 0,48 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].
    10. Síntesis de compuestos β-33 (1 de entrada en la tabla 3)
      1. Conducta la reacción usando 18 (20,0 mg, 0.0762 mmol), β -31 (80,4 mg, 0.114 mmol)57, 11 c (21,7 mg, 0.114 mmol), p- toluenesulfenyl cloruro (30,3 μl, 0.229 mmol), plata triflate (117,6 mg, 0.458 mmol), anhidro 1, 4-dioxano (0,76 mL), anhidro propionitrilo (1,50 mL) y tamices moleculares de 4 Å (150 mg). Purificar el residuo resultante de cromatografía en columna [gel de sílice, Cloroformo/metanol = 1/0 - 30/1 (v/v)] para dar β -33 (34,5 mg, 54%, sólido descolorido). TLC: Rf (β -33) = 0.33 [Cloroformo/metanol = 10/1 (v/v)].

2. desprotección de β-28 (figura 2)

  1. En un frasco de 5 mL, añadir β -28 (25,2 mg, 0.0300 mmol) y metilamina de 10 M en metanol (2.0 mL)58.
  2. Revuelva la mezcla de reacción a 0 ° C por 2 h seguido de calentamiento a la temperatura ambiente.
  3. Después de revolver la mezcla para las 13 h, comprobar la reacción por el TLC con Cloroformo/metanol [10/1 (v/v)] [Rf (β -35) = 0.20].
  4. Concentrar la mezcla de reacción utilizando un evaporador rotatorio.
  5. Disolver el residuo resultante en agua (15 mL) y lavar la capa acuosa con diclorometano (15 mL, 3 x) utilizando un matraz de 50 mL.
  6. Concentrado de la capa acuosa utilizando un evaporador rotatorio.
  7. Purificar el residuo por cromatografía líquida preparativa de alto rendimiento (HPLC) [columna: ODS columna (octadecylsilane) (20Φ x 250 mm), eluyente: agua (contiene 0.1% [v/v] de ácido trifluoroacético), caudal: 8,0 mL/min, detección: 266 nm, temperatura: 25 ° C, tiempo de retención: 20 min] para dar β -35 (7,9 mg, 62%, descolorido sólido amorfo)59.

3. RMN estudios de éster borónico cíclico (figura 3 y 4)

  1. Preparación y medida de 36
    1. En matraz de pera de 10 mL, disolver uridina 10 (34,3 mg 0.140 mmol) y 4-(trifluorometil) ácido de phenylboronic 11 c (40,0 mg, 0,211 mmol) en piridina anhidra (1,00 mL).
    2. Co, evaporar la mezcla de reacción con piridina anhidra (1,00 mL, x 3) y anhidro 1, 4-dioxano (1,00 mL, x 3) a temperatura ambiente para aprox. 40 ° C para eliminar toda el agua.
    3. Disolver el residuo en anhidro 1, 4-dioxano (1,40 mL) y remover la mezcla de reacción a la temperatura de reflujo durante 1 h formar un éster borónico (una protección temporal).
    4. Distribuir la mezcla de reacción (0,14 mL) a un vial de 5 mL.
    5. Eliminar el solvente del frasco de 5 mL mediante un rotavapor seguido por una bomba de vacío.
    6. Disolver el residuo resultante 36 en acetonitrilo -d3 (0,64 mL).
    7. Medir 1H, 11B y espectroscopías de RMN F 19usando un cuarzo tubo NMR a 25 ° C.
  2. Preparación y medición de 38
    1. Preparar la mezcla de reacción 38 de 11 c (40,0 mg, 0,211 mmol) utilizando el procedimiento similar como la del paso 3.1.

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Representative Results

Los resultados de la O- glicosilación de uridina 10 con thiomannoside α -9 se resumen en la tabla 160,61. En la entrada 1, la O- glicosilación de 10 con α -9 en la ausencia de derivados del ácido Borónicos dio lugar a la formación de una mezcla complicada. En la entrada 2, 10 y phenylboronic ácidos 11a se mezclaron y evaporados junto con piridina y 1, 4-dioxano y, luego, generó en 1, 4-dioxano a su temperatura de reflujo para formar la protección temporal de 2', 3'-cis- diol seguido de un adición de α -9 para llevar a cabo la glicosilación.

En las entradas 3-13, O- glycosylations se realizaron según el protocolo descrito aquí (paso 1.1). El efecto de los sustituyentes sobre el ácido arylboronic fue investigado en las entradas 4 - 9. Arylboronic deficientes en electrones ácidos tales como 4-(trifluorometil) phenylboronic 11 c y 2, 4-difluorophenylboronic ácido 11 d dio lugar a mayores rendimientos químicos de α/β-12 que el de ácido 4-methoxyphenylboronic 11b , posiblemente debido a la mayor estabilidad del éster borónico intermedio preparada de ácido deficiencia de electrones arylboronic62. Sin embargo, el uso de 4-nitrophenylboronic ácido 11e, que cuenta también con un grupo electrón-retirarse, dio como resultado un bajo rendimiento químico de α/β-12 debido a la baja solubilidad del éster borónico intermedio en acetonitrilo. En la entrada 8, la O- glicosilación utilizando 4-hexylphenylboronic ácido 11f en propionitrilo (para mejorar la solubilidad de los ésteres Borónicos intermedio) no mejoró el rendimiento químico. En la entrada 9, alkylboronic (ácido cyclopentylboronic 11 g) fue utilizado en vez de ácido arylboronic, que se tradujo en un menor rendimiento químico de α/β-12 que en el de los ácidos arylboronic.

Se estudió el efecto solvente para el rendimiento químico y la estereoselectividad de los productos de glicosilación en las entradas de 10-12. En la entrada 10, el uso de 1, 4-Dioxano como solvente permitido una más α-estereoselectiva O- glicosilación que el uso de acetonitrilo hizo63,64, mientras que la producción de α/β-12 era insuficiente. En la entrada 11, la O- glicosilación en diclorometano dio una cantidad insignificante de α/β-12 debido a la baja solubilidad de los intermedios. En la entrada 12, utilizando propionitrilo como disolvente resultó en un mayor rendimiento químico de α/β-12 que cuando utilizando otros disolventes (entradas 5, 10 y 11) con casi el mismo estereoselectividad en comparación con el uso de acetonitrilo (entrada 5). En la entrada 13, los equivalentes de cloruro de p- toluenesulfenyl y plata triflate fueron reducidos a 1.8 y 3.6 contra 10, respectivamente (en las entradas 1-12, 3.0 y 6.0 equivalentes de cloruro de p- toluenesulfenyl y plata triflate eran utilizado contra 10, respectivamente) para permitirse el lujo de α/β-12 en el resultado similar.

En la tabla 2, el O- glycosylations del 10 y 13 - 20 con thiogalactoside β -21 se llevaron a cabo en las condiciones de reacción optimizadas establecidas en tabla 1 (entrada 12) (en este papel, adenina, guanina, citosina, uracilo, timina y 5-fluorouracilo se abrevian como Ade, Gua, Cyt, Ura, tu y 5-FUra, respectivamente, no como A, G, C, U, T y 5-FU, que son su abbriviations general para evitar malentendido [por ejemplo, C-nucleósidos por lo general significa C (carbono)-enlaces glucosídicos]). En el caso de la adenosina, desprotegida 13 otorgada la correspondiente nucleósido disacárido en un rendimiento mayor que N- protegido 14 podría, posiblemente debido a la depurinación de 14 o β -23 similares a nuestro anterior informe (entradas 1 y 2)38. La O- glicosilación de N- guanosina protegida 16 suministradas β -25 en un mejor rendimiento en comparación con la glicosilación de sin protección 15 debido a la mayor solubilidad de los intermedios de 16 que de 15 (entradas 3 y 4). En las entradas de 5-7, el O- glycosylations de uridina 10 y análogos como 5-metyluridine 17 y 18 de la 5-fluorouridine fueron examinados. El uso de 10 que ofrece el β -26 (42% de rendimiento) con una reacción de lado para dar un subproducto en el que la posición 5 de la molécula de uracilo se sustituyó con un p- tolylthio grupo (entrada 5)65. Por otra parte, 17 y 18, en el que la posición 5 de la molécula de uracilo es un grupo metilo o fluoro, dieron el disacárido correspondiente nucleósidos β -27 y β -28 en el moderado produce, respectivamente (las entradas 6 y 7). Por otra parte, una reacción a gran escala con 250 mg de 18 (0,95 mmol) y 1,01 g de β -21 (1.43 mmol) otorgada β -28 en un 58% de rendimiento (461,0 mg), que es casi el mismo rendimiento que el de una reacción en pequeña escala (61% en la entrada 7 de tabla 2 ). En el caso de la citidina, la O- glicosilación de desprotegida 19 dio β -29 en un rendimiento un poco mejor que el uso de N- protegido 20 resultando en β -30 ha.

Se utilizaron varios donantes glycosyl, como glucosil donantes β -31, galactosil donantes β -21y mannosyl donante α -32, en la O- glicosilación de la 5-fluorouridine 18 (tabla 3)66. El resultado de entrada 2 es igual a la de entrada 7 de la tabla 2 de este manuscrito. De estos resultados, el uso de donantes de galactosil β -21 que ofrece el producto correspondiente β -28 en un alto rendimiento en comparación con el uso de β -31 y α -32. En la entrada 3, la reacción utilizando α -32 dio una mezcla de α -34 con un subproducto no identificado, que posiblemente tiene un peso molecular similar como la de 34 (se supone que podría ser un regio - o stereoisomer de 34), porque estos compuestos no podrían ser separados por cromatografía de gel permeación (GPC), que separa los compuestos de peso molecular diferente. Por otra parte, la mezcla demostró cambios químicas similares en el espectro de RMN F 19(164.0 y 165,2 ppm). La desprotección de la glicosilación producto β -28 con metilamina dio β -35 (62%) (Figura 2).

La mezcla de reacción 36 preparados de 10 y 11 c según el paso 3 del Protocolo (figura 3) se observó por 1H, 11B y espectroscopía de RMN F 19para investigar la formación de éster borónico intermedio 37 (figura 4). También se preparó la mezcla de reacción 38 de 11 c para la comparación. Los resultados de los espectros de 1H NMR indicaron que la señal de 2'- y protones 3'-hidroxilo desaparecieron, y el de protones 2' y 3' cambió de puesto dramáticamente upfield en presencia de 11 c (figuras 4A y 4B). En los espectros de RMN de la B 11, asumimos que los picos de éster borónico 37, 11 c o boroxine 40 (que es un trímero cíclico generado por la condensación de deshidratación de tres ácidos Borónicos) y boroxine piridina complejo 39 (que es una estructura propuesta basada en los datos reportados espectros de boroxine complejos de piridina) se observaron 32 ppm, 28 ppm, y 21 ppm, respectivamente (figuras 4 - 4E)67,68, 69. En espectros de RMN F 19, presumimos que los picos de 37, c 11 o 40y 39 corresponden a-63,30 ppm,-63,20 ppm y-62,80 ppm, respectivamente (figuras 4F - 4 H).

Figure 1
Figura 1 : Trabajos anteriores y esta. (A) este panel muestra la O- glicosilación de desoxinucleósidos 2′ con un thioglycoside promovido por el cloruro de p- toluenesulfenyl (p- TolSCl) y plata triflate (AgOTf). (B) este panel muestra la regioselectiva O- glicosilación de un ribonucleósido sin protección utilizando un éster borónico cíclico como un grupo de protección temporal. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 2
Figura 2 : Desprotección de β-28. Se llevó a cabo la separación de grupos de benzoilo con metilamina (MeNH2) permitirse β -35. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 3
Figura 3 : Preparación de las mezclas de reacción 36 y 38. Se prepararon mezclas 36 y 38 de uridina 10 y 4-(trifluorometil) ácido de phenylboronic 11 c y 11 c, respectivamente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure 4
Figura 4: estudio de NMR del éster borónico cíclico intermedio 37 preparado del ácido de phenylboronic uridina 10 y 4-(trifluorometil) 11 c por 1H, 11B, y 19F RMN las mediciones en acetonitrilo -d3 a 25 ° C. El 37, 39 y 40 estructuras propuestas, véase la figura 3. (A) este panel muestra 10 observado por 1H NMR. (B) este panel muestra mezcla 36 observado por 1H NMR. (C) este panel muestra 11 c observado por 11B RMN. (D) este panel muestra mezcla 38 observado por 11B RMN. (E) este panel muestra mezcla 36 observado por 11B RMN. (F) este panel muestra los 11 c observado por 19F NMR. (G) este panel muestra mezcla 38 observado por 19F NMR. (H) este panel muestra mezcla 36 observado por 19F NMR. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.

Figure of Table 1

Entrada De ácido bórico b Solvente Condición Rendimiento (3 pasos) c
1 un - MeCN −20 ° C, 1,5 h < % 16 (mezcla compleja)
2 a,d PhB(OH)2 (11a) MeCN −20 ° C, 1,5 h 41% (Α/Β = 1,6/1)
3 a,e 11a MeCN −20 ° C, 1,5 h 45% (Α/Β = 1,6/1)
4 a,e 4-MeOC6H4B(OH)2 (11b) MeCN −20 ° C, 1,5 h 39% (Α/Β = 1,8/1)
5 a,e 4 CF3C6H4B(OH)2 (11 c) MeCN −20 ° C, 1,5 h 51% (Α/Β = 1,8/1)
6 a,e 2, 4-F2C6H4B(OH)2 (11 d) MeCN −20 ° C, 1,5 h 46% (Α/Β = 1,8/1)
7 a,e 4-NO2C6H4B(OH)2 (11e) MeCN −20 ° C, 1,5 h 24% (Α/Β = 1,6/1)
8 a,e 4-CH3(CH2)5C6H4B(OH)2 (11f) EtCN −40 ° C, 1,5 h 30% (Α/Β = 1,6/1)
9 a,e Cyclopentylboronic ácido (11 g) MeCN −20 ° C, 1,5 h 8% (Α/Β = 1.7/1)
10 a,e 11c 1, 4-dioxano r.t., 1,5 h 27% (Α/Β = 3.3/1)
11 a,e 11c CH2Cl2 −40 ° C, 1,5 h traza
12 a,e 11c EtCN −40 ° C, 1,5 h 61% (Α/Β = 1,6/1)
13 e, f 11c EtCN −40 ° C, 1,5 h 57% (Α/Β = 1.5/1)

Tabla 1. Condiciones de reacción para regioselectiva O- glicosilación de uridina 10 con thiomannoside α-9. un Glycosylations se realizaron utilizando 1,5 equivalentes de α -9, 3,0 equivalentes de cloruro de p- toluenesulfenyl y 6,0 equivalentes de plata triflate contra 10. Los productos resultantes fueron acetilados con aprox. 10 equivalentes de anhídrido acético (Ac2O) en presencia de una cantidad catalítica de N,N-dimetil-4-aminopiridina (DMAP). b ácido bórico 11 fue 1,5 equivalentes contra 10. c la relación α/β de α/β-12 fue facturado por 1H NMR. d una mezcla de 10 y 11a fue evaporada junto con piridina y 1, 4-dioxano y luego revolvió en 1, 4-dioxano en su temperatura de reflujo, seguida por la adición de una solución de α -9 en acetonitrilo para llevar a cabo la glicosilación. e una mezcla de α -9, 10y 11 fue evaporada junto con piridina y 1, 4-dioxano y luego revolvió en 1, 4-dioxano a su temperatura de reflujo seguido por un tratamiento con cloruro de p- toluenesulfenyl y plata triflate. f una reacción de glicosilación se realizó con 1,5 equivalentes de α -9, 1,8 equivalentes de cloruro de p- toluenesulfenyl y 3,6 equivalentes de plata triflate contra 10. Los productos resultantes fueron acetilados con aprox. 10 equivalentes de anhídrido acético en presencia de una cantidad catalítica de N,N-dimetil-4-aminopiridina. CA = acetilo, Bn = bencilo, Ph = fenilo.

Figure of Table 2

Entrada un Aceptador de Producto Rendimiento (2 pasos)
1 13 (Nucleobase = Ade) Β -22 42%
2 14 (Nucleobase = AdeBz) Β -23 30%
3 15 (Nucleobase = Gua) Β -24 12%
4 16 (Nucleobase = GuaiBu) Β -25 44%
5 10 (Nucleobase = Ura) Β -26 42% (ca. 15%: Nucleobase = 5-STol-Ura)
6 17 (Nucleobase = tu) Β -27 53%
7 18 (Nucleobase = 5-FUra) Β -28 61%
8 19 (Nucleobase = Cyt) Β -29 55%
9 20 (Nucleobase = CytBz) Β -30 40%

Tabla 2. O -Glycosylations de nucleósidos 10 y 13-20 con la β-21 de thiogalactoside de la síntesis del disacárido nucleósidos β-22-β-30. un Glycosylations se llevaron a cabo utilizando 1,5 equivalentes de β -21, equivalentes a 1,5 4-(trifluorometil) ácido de phenylboronic 11 c, 3,0 equivalentes de cloruro de p- toluenesulfenyl y 6,0 equivalentes de plata triflate contra el aceptante (10 y 13 - 20). Una mezcla de β -21el aceptador (10 y 13 - 20) y 11 c fue evaporada junto con piridina y 1, 4-dioxano y luego revolvió en 1, 4-dioxano en su temperatura de reflujo, seguida de un tratamiento con p - toluenesulfenyl cloruro y plata triflate. BZ = benzoílo, Bu = isobutyryl, Tol = tolilo, Ade = adenina, Gua = guanina, Ura = uracilo, tu = timina, FUra 5 = 5-fluorouracilo, Cyt = citosina.

Figure of Table 3

Entrada un Donantes Producto Rendimiento (2 pasos)
1 Β -31 (Glc) Β -33 54%
2 b Β -21 (Gal) Β -28 61%
3 Α -32 (hombre) Α -34 < % 39 (mezcla)

Tabla 3. O -Glycosylations de glicosil donantes β-21, β-31 y α-32 5-fluorouridine 18 para la síntesis del disacárido nucleósidos β-28, β-33 y α-34. un Glycosylations se llevaron a cabo usando 1,5 equivalentes de un donante (β -21, β -31 o α -32), equivalentes a 1,5 4-(trifluorometil) ácido de phenylboronic 11 c, 3,0 equivalentes de p- toluenesulfenyl el cloruro y 6,0 equivalentes de plata triflate contra 18. Una mezcla de un donante (β -21, β -31o α -32), 18y 11 c fue evaporada junto con piridina y 1, 4-dioxano y luego revolvió en 1, 4-dioxano en su temperatura de reflujo, seguida de un tratamiento con p - toluenesulfenyl cloruro y plata triflate. b Este es el mismo resultado que la entrada 7 del cuadro 2. GLC = glucósido, Gal = galactoside, hombre = manosida, 5-FUrd = 5-fluorouridine.

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Discussion

El objetivo de este manuscrito es mostrar un método sintético conveniente preparar nucleósidos disacárido con ribonucleosides sin protección sin tediosas manipulaciones protección de grupo. Divulgamos aquí sobre el regioselectiva O- glycosylations de nucleósidos a través de la temporal 2', 3'-diol protección por un éster borónico cíclico (figura 1B)51.

La preparación de los ésteres Borónicos cíclico intermedio es uno de los pasos importantes. Disolventes anhidros deben ser usados para la la evaporación de la mezcla de reacción (pasos 1.1.1.2 y 1.2.1.1.2 del Protocolo) y para el paso de esterificación (pasos 1.1.1.3 y 1.2.1.1.3) porque los ésteres Borónicos preparados de análogos de los nucleósidos y de ácido borónico puede se hidroliza fácilmente. Las O- glicosilación reacciones también requieren condiciones anhidras para evitar la hidrólisis de los donantes de glicosil. Por lo tanto, los tamices moleculares (pasos 1.1.2 y 1.2.1.2), el matraz de fondo redondo de dos del cuello y los solventes anhidros (pasos 1.1.3.1 y 1.2.1.3.1) deben ser suficientemente seca antes de su uso para la O- glicosilación.

El p -toluenesulfenyl cloruro preparado según nuestro papel anterior38 - deben almacenarse en la oscuridad a-20 ° C, para ser utilizado dentro de 3 meses. Si la plata triflate está húmeda, debe ser secado en vacío antes de su uso para la O- glicosilación.

Este método podría aplicarse a varios nucleósidos y glicosil donantes (tabla 1, 2y 3). La síntesis a gran escala de β -28 un gran éxito, excepto algunos ejemplos como la combinación de α -32 y 18 (tabla 3, entrada 3), en la que el aislamiento de los nucleósidos de disacárido deseada no es fácil. Además, este método se aplica a la construcción de 1", 5'-glicosidic vinculación de nucleósidos disacárido (la construcción de un 1", 2'- y 1'', acoplamiento de 3'-glicosidic está aún por estudiarse).

La O- glicosilación utilizando nucleósidos sin protección fuentes de nucleósidos disacárido en un proceso más corto que los métodos anteriores con nucleósidos protegidas.

La O- glicosilación de nucleósidos sin protección utilizando la protección temporal de un éster borónico cíclico podría aplicarse a la preparación de varios nucleósidos biológicamente activos disacárido y sus análogos. Especialmente, β -35 y sus análogos se espera que sean los nuevos candidatos de drogas ya que se ha sabido que 5-fluorouridine y 5-fluorouracilo tienen actividades anticáncer, antivirus y antibacterianos24,59, 70,71,72,73,74,75,76. También creemos que la aplicación de una protección temporal de grupos hidroxilo por un éster borónico será útil para la síntesis de una variedad de compuestos naturales y artificiales, así como nucleósidos de disacárido.

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Disclosures

Los autores no tienen nada que revelar.

Acknowledgments

Este trabajo fue financiado por subvenciones del Ministerio de educación, cultura, deportes, ciencia y tecnología (MEXT) de Japón (núms. 15K 00408, 24659011, 24640156, 245900425 y 22390005 para Shin Aoki), por una beca de la investigación bioquímica de Tokio Fundación, Tokio, Japón y por el fondo TUS (Universidad de Ciencias de Tokyo) para áreas de investigación estratégicas. Nos gustaría dar las gracias Noriko Sawabe (Facultad de ciencias farmacéuticas, Universidad de Tokio de la ciencia) para las medidas de los espectros de NMR, Fukiko Hasegawa (Facultad de ciencias farmacéuticas, Universidad de Tokio de la ciencia) para las mediciones de la masa espectros y Tomoko Matsuo (Instituto de investigación de ciencia y tecnología, Universidad de Tokio de la ciencia) para las mediciones de análisis elementales.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Silver trifluoromethanesulfonate Nacalai Tesque 34945-61
Phenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry B0857
p-Methoxyphenylboronic acid Wako Pure Chemical Industries 321-69201
4-(Trifluoromethyl)phenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry T1788
2,4-Difluorophenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry D3391
Cyclopentylboronic acid (contains varying amounts of Anhydride) Tokyo Chemical Industry C2442
4-Nitrophenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry N0812
4-Hexylphenylboronic acid (contains varying amounts of anhydride) Tokyo Chemical Industry H1489
Adenosine Merck KGaA 862.
Guanosine Acros Organics 411130050
Cytidine Tokyo Chemical Industry C0522
Uridine Tokyo Chemical Industry U0020
5-Fluorouridine Tokyo Chemical Industry F0636
5-Methyluridine Sigma M-9885
Methylamine (40% in Methanol, ca. 9.8mol/L) Tokyo Chemical Industry M1016
N,N-dimethyl-4-aminopyridine Wako Pure Chemical Industries 044-19211
Acetic anhydride Nacalai Tesque 00226-15
Pyridine, Dehydrated Wako Pure Chemical Industries 161-18453
Acetonitrile Kanto Chemical 01031-96
1,4-Dioxane Nacalai Tesque 13622-73
Dichloromethane Wako Pure Chemical Industries 130-02457
Propionitrile Wako Pure Chemical Industries 164-04756
Molecular sieves 4A powder Nacalai Tesque 04168-65
Molecular sieves 3A powder Nacalai Tesque 04176-55
Celite 545RVS Nacalai Tesque 08034-85
Acetonitrile-D3 (D,99.8%) Cambridge Isotope Laboratories DLM-21-10
Trifluoroacetic acid Nacalai Tesque 34831-25
TLC Silica gel 60 F254 Merck KGaA 1.05715.0001
Chromatorex Fuji Silysia Chemical FL100D
Sodium hydrogen carbonate Wako Pure Chemical Industries 191-01305
Hydrochloric acid Wako Pure Chemical Industries 080-01061
Sodium sulfate Nacalai Tesque 31915-96
Chloroform Kanto Chemical 07278-81
Sodium chloride Wako Pure Chemical Industries 194-01677
Methanol Nacalai Tesque 21914-74
JEOL Always 300 JEOL Measurement of NMR
Lamda 400 JEOL Measurement of NMR
PerkinElmer Spectrum 100 FT-IR Spectrometer Perkin Elmer Measurement of IR
JEOL JMS-700 JEOL Measurement of MS
PerkinElmer CHN 2400 analyzer Perkin Elmer Measurement of elemental analysis
JASCO P-1030 digital polarimeter JASCO Measurement of optical rotation
JASCO PU-2089 Plus intelligent HPLC pump JASCO For HPLC
Jasco UV-2075 Plus Intelligent UV/Vis Detector JASCO For HPLC
Rheodyne Model 7125 Injector Sigma-Aldrich 58826 For HPLC
Chromatopac C-R8A Shimadzu For HPLC
Senshu Pak Pegasil ODS Senshu Scientific For HPLC
p-Toluenesulfenyl chloride Prepared  Ref. 38
Phenyl 6-O-acetyl-2,3,4-tri-O-benzyl-1-thio-a-D-mannopyranoside (a-9) Prepared  Ref. 52
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-galactopyranoside (b-21) Prepared  Ref. 53
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-b-D-glucopyranoside (b-31) Prepared  Ref. 57
4-Metylphenyl 2,3,4,6-tetra-O-benzoyl-1-thio-a-D-Mannopyranoside (a-32) Prepared  Ref. 67
6-N-Benzoyladenosine (14) Prepared  Ref. 54
2-N-Isobutyrylguanosine (16) Prepared  Ref. 55
4-N-Benzoylcytidine (20) Prepared  Ref. 56

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References

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