Summary
Здесь мы используем биолюминесцентных, рентген и позитрон выбросов/компьютерная томография томография изображений изучить как ингибирующих активность mTOR воздействия опухолей костного мозга-прижившимися миеломы в ксенотрансплантата модели. Это позволяет для анализа физиологически соответствующих, неинвазивная и смешанных эффекта анти миеломе терапии миеломы костный мозг прижившимися опухоли в естественных условиях.
Abstract
Множественная миелома (мм) опухоли привито в костном мозге (БМ) и их выживание и прогрессирования зависят от сложных молекулярных и клеточных взаимодействий, которые существуют в рамках этой микроокружения. Тем не менее BM микроокружения не может быть легко реплицируемых в пробирке, что потенциально ограничивает физиологическая значимость многих экспериментальных моделях in vitro и ex vivo . Эти проблемы могут быть преодолены путем использования ксенотрансплантата модель, в которой Люцифераза (Люк)-transfected клеток 8226 мм будет специально привито в мыши скелета. Когда эти мыши даны соответствующие субстрата, D-люциферин, эффекты терапии опухолевого роста и выживания могут быть проанализированы путем измерения изменений в биолюминесцентных изображения (BLI) производимые опухоли в естественных условиях. Этот BLI данных в сочетании с позитронный выбросов томография/вычислительной томографии (ПЭТ/КТ) анализ с использованием метаболических маркер 2-deoxy - 2 - (18F) фтор D-глюкоза (18F-ФДГ) используется для мониторинга изменений в метаболизме опухоль со временем. Эти изображения платформы позволяют несколько неинвазивного измерения в пределах микроокружения опухоли/BM.
Introduction
ММ является неизлечимой болезни состоит из плазмы злокачественное B-клетки, которые проникают BM и вызвать разрушение кости, анемии, почечной недостаточностью и инфекции. ММ составляет 10% - 15% всех гемобластозами1 и является наиболее часто рак привлечь скелет2. Разработка мм проистекает из онкогенных трансформации долгоживущих плазматические клетки, которые устанавливаются в зародышевых центров лимфоидных тканей прежде чем в конечном итоге самонаведения для БМ3. BM характеризуется весьма разнородных ниши; включая разнообразных и критических клеточных компонентов, регионы низкой Ро2 (гипоксии), обширные васкуляризации, сложных внеклеточной матрицы и цитокинов и фактор роста сети, все из которых способствуют мм tumorgenesis4. Таким образом развитие рассеянного мм гранулы ксенотрансплантата модель характеризуется опухолей, которые являются строго прижившимися, в BM бы очень мощный и клинически значимых инструмент для изучения мм патологии в vivo5,6. Однако многочисленные технические препятствия может ограничить эффективность большинства ксенотрансплантата моделей, что делает их дорогостоящим и трудным применять. Это включает в себя проблемы, связанные с последовательной и воспроизводимые опухоли приживления в нише, БМ, длительное время для развития опухоли и ограничения в возможность непосредственно наблюдать и измерять изменения роста/выживания опухоли без необходимости Пожертвуйте мышей в ходе эксперимента7,8.
Этот протокол использует изменение ксенотрансплантата модель, которая была первоначально разработана Миякава et al. 9, в котором внутривенно (IV) проблема с миеломой клетки приводит к «распространение» опухоли, которые последовательно и герметизации привито в БМ NOD/SCID/IL-2γ(null) (Нагель) мышах10. Визуализация на месте этих опухолей достигается стабильная трансфекции 8226 человека мм клеточной линии с люк аллелей и серийно измерения изменений в BLI производства эти прижившимися опухолевых клеток6. Важно отметить, что эта модель может быть расширена для использования различных других Люк выражая человеческие мм клеточных линий (например, U266 и OPM2) с аналогичные склонности специально привить в скелет NOG мышей. Выявление опухолей у биолюминесцентных Вообразимый мышей следуют измерения поглощения радиофармацевтические зонды (например 18F-ФДГ), ПЭТ/КТ вместе, это позволяет дополнительные характеристики важнейших биохимических пути (то есть, изменения в метаболизме, изменения в гипоксии и индукции апоптоза) в пределах микроокружения опухоли/BM. Основные преимущества этой модели можно выделить наличие широкого круга radiolabeled, биолюминесцентных и флуоресцентных зондов и маркеры, которые могут быть использованы для изучения мм прогрессии и патологии в естественных условиях.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все животные процедуры, описанные ниже были утверждены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) системы более здравоохранения ва Лос-Анджелес и были исполнены в стерильных и свободной от возбудителя условиях.
1. Подготовка Люцифераза выражая 8226 клеток (8226-люк)
- Поддерживать линии клеток человека мм 8226, в среде RPMI 1640, дополненная плода бычьим сывороточным (ФБС) 10% и 1% пенициллин стрептомицина при 37 ° C в атмосфере увлажненные, содержащих 95% воздуха и 5% двуокиси углерода (CO2).
- Генерировать стабильные Люк выражая репортер 8226 клетки transfecting 1 x 106 8226 клетки с вектором репортер Люцифераза, следуют выбор с hygromycin (100-350 мг/мл), как ранее описанные6.
- Сохранить клетки стандартных стерильных условиях культивирования для 2-3 недели, изменения среды каждый день, пока не сгенерированы создание стабильно transfected клеток 8226 линии.
- Подтвердите действие Люцифераза в пробирке в 1 x 10-6 transfected клеток/100 мкл-фосфатный буфер (PBS), добавив Люцифераза субстрата, D-Люциферин (150 мкг/мл рабочего раствора в подогретую питательной среды) и измерения биолюминесценции в пробирке или 96-луночных пластины с помощью люминометра6клеток.
2. ортотопическая гранулы ксенотрансплантата модель
- Сохранить мыши Нагель (4-6 недель, старый, мужчина или женщина) стерильные/возбудитель свободно в условиях объекта соответствующего ухода за животными.
- Подготовьте 8226 Люк transfected клеток для IV инъекции в NOG мышей (~ 5 x 106 клеток/мыши) в день эксперимента. Вымыть клетки 3 x в ледяной PBS, считать их и Ресуспензируйте их в ледяной PBS (минус антибиотики и FBS) в конечной концентрации 5 х 106 клеток/200 мкл PBS) в стерильную пробирку. Держите клетки на льду и вызов мыши как можно скорее (в течение 30-120 мин).
- Анестезировать мыши (с изофлюрановая, 1% - 3% в воздухе на 0,5 - 1 Л/мин) и поместите животное в лежачем положении на грелку с головой, стоящих перед прочь. Проверьте уровень анестезии, защемления ног. Применить глазной мази в глаза.
- Придать 8226-Люк клетки в мышей через Вену хвост (200 мкл/инъекции), с помощью инсулина 1 мл шприц и игла 26-G.
Примечание: Тепла лампы может использоваться для подогрева хвост, тем самым расширяя Вены и повышая эффективность инъекции. - Вернуть их домой клетка животного и контролировать животных до тех пор, пока они полностью выздоровел.
- Подтвердите приживления 8226-Люк клеток мыши скелета, измеряя BLI наркотизированных мышей (описано ниже и показано на рисунке 1A).
Примечание: BM экссудат также могут быть окрашены для человека CD45 выражения с помощью проточной цитометрии (рис. 1B) или по иммуногистохимия собранные кости (рис. 1 c).
3. Измерение BLI в естественных условиях
Примечание: Как правило, измеримые BLI от прижившимися опухолей у мышей может наблюдаться первый между postchallenge 10-20 дней, но это, возможно, потребуется быть экспериментально определены.
- Проверить уровень анестезии, защемления ног и анестезировать мыши (с изофлюрановая, 1% - 3% в воздухе на 0,5 - 1 Л/мин). Применить глазная мазь на его глазах.
- Дать животным IP инъекций (200 мкл /) из «в vivo-класс «D-люциферин субстрата (30 мг/мл разбавленной в стерильного физиологического раствора).
- Измерить BLI в течение 5-10 мин, после инъекции люциферин субстрата (хотя BLI активность может быть наблюдаемой в мышей до 45-60 мин), размещая наркотизированных животного в лежачем положении в съемочной системы малых животных (Рисунок 2 ). Выберите светящиеся и рентгеноструктурного анализа и получить изображения (рис. 3).
- Измерьте средний сияние (/steradian фотоны/s/см2) в отдельных регионах, представляющих интерес (ROI) с помощью изображений программное обеспечение (рис. 4).
- Вернуть его домой клетка животного и контролировать его, до тех пор, пока он полностью выздоровел (приблизительно 15-20 мин).
4. Лечение мышей с целенаправленной терапии
- Измерить базовые BLI и рандомизировать животных в группах (4-8 мышей/группа).
- Лечить мышей с IP инъекции temsirolimus (0,2 - мыши 40 мг/кг) с использованием режима пяти ежедневных инъекций IP, затем 2 дня отдыха и еще пять ежедневных инъекций11(200 мкл/инъекции).
- Измерения активности Люцифераза (/steradian фотоны/s/см2) 2 раза в неделю, как описано в разделе 3 и сюжет изменение BLI с течением времени. Изменения в опухоли BLI могут быть представлены как последовательные изображения мышей (Рисунок 5B).
Примечание: Рекомендуется, что ежедневный мониторинг животных выполняться до тех пор, пока они представляют следующие симптомы (обычно в течение 45-60 дней первоначального вызова): вес потеря (потеря более 10% по сравнению с весом до имплантации) и/или Хинд паралич конечностей, в это время они должны быть euthanized, используя камеру2 CO, следуют шейки матки дислокации.
5. PET/CT анализ с использованием 18F-ФДГ для измерения изменения в метаболизме опухоли
- Быстро животных в их дома клетки путем удаления их питание за 24 часа до эксперимента, чтобы избежать избыточного поглощения неспецифической 18F-ФДГ.
- Подготовка 18F-radiolabeled ФДГ-ПЭТ зонды (50-100 Μки/инъекции в стерильного физиологического раствора) в день эксперимента. Запись времени и деятельности 18F-ФДГ зонда с дозы калибратора.
Примечание: Поскольку 18F имеет относительно короткий период полураспада (~ 2 h), тщательной подготовки и планирования для использования этих датчиков должны создаваться. - Анестезировать животное (с изофлюрановая, 1% - 3% в воздухе на 0,5 - 1 Л/мин) и поместите его в лежачем положении на грелку с головой, стоящих перед прочь. Проверьте уровень анестезии, защемления ног. Применить глазная мазь на его глазах.
- Вводить зонд через Вену хвост (100 мкл/инъекции), с помощью экранированных 1 мл инсулин шприц и игла 26-G.
Примечание: Тепла лампы может использоваться для подогрева хвост, тем самым расширяя Вены и повышая эффективность инъекции. - Измерить остаточная радиоактивность в иглы/шприца в дозе калибратор и обратите внимание на активность и время.
Примечание: Стандартизация мыши инкубации, дозировки и сроки необходимо обеспечить воспроизводимость данных и сопоставимости. - Сохранить мыши под наркозом и при 37 ° C, с помощью грелку на весь период поглощения зонд (~ 45-90 мин).
Примечание: Важно, что мышей остаются покоя и при 37 ° C, чтобы избежать неспецифических поглощение зонда. - Разнесите инъекции 18F-ФДГ зонд промежутки около 20 - 30 мин для обеспечения аналогичного маркировки раз в мышей.
Примечание: Надлежащего процесса и сроков проведения инъекции зонд приведет к оптимальным и воспроизводимых изображений условий. - Измерения активности 18F-ФДГ в PET/CT малых животных тепловизионные системы в отдельных регионах интереса, которые соответствуют прижившимися опухоли (рис. 6).
Примечание: Первоначально, рекомендуется 10-мин статические PET воздействия и воздействия CT 2-мин, но точное воздействие раз может потребоваться экспериментально определены. - Вернуть их домой клетки животных и следить за ними до тех пор, пока полностью выздоровел. Дом мышей в комнате выделенный возврата для 24 часа во время зонд разлагается на фоновых уровнях.
Примечание: Из-за короткий период полураспада 18F, несколько измерений, используя свежие зонд можно сделать так часто, как 2 раза в неделю.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В первоначальных экспериментальных исследований IV инъекции клеток 8226-люк в кивок/SCID мышей не развиваться опухоли БМ прижившимися мм, хотя плоскоклеточный мм опухоли были легко сформирована (100% успеха). В противоположность этому IV проблемы с 8226 клеток в NOG мышей сгенерирована (в течение 15-25 дней) опухоли скелета (и только редко сформированных опухоли в не скелетные ткани, например, печени или селезенки). Так как опухоли в скелета могут не быть подтверждены визуально физически изучения животных, другие методы должны рассматриваться для подтверждения успешного опухоли приживления и расположения опухоли в пределах BM (рис. 1). Аналогичные доклады Миякава и др. 9, IgG человека, производимые 8226 клеток, могут быть обнаружены в сыворотке оспаривается NOG мышей с помощью ИФА (данные не показаны), хотя эти данные только подтвердили приживления и не местоположение или степени опухолей. Последовательных изображений несколько животных показывает распределение опухоли БМ прижившимися мм (рис. 4). BLI, производимых этими прижившимися опухолевых клеток может затем быть серийно и неинвазивным измеряется оценивать изменения в опухолевого роста и выживания у мышей, получавших mTOR ингибитор temsirolimus (рис. 5). Наконец анализ PET/CT для поглощения 18F-ФДГ в опухоли был использован для демонстрации temsirolimus опосредованной изменения метаболизма глюкозы и что это коррелирует с изменениями в опухолевого роста (рис. 6). Однако в стабильно transfecting 8226 клетки с Люцифераза аллеля, в сочетании с оптических изображений/X-рентген анализ, точное местоположение и распределение мм опухолей в скелет мыши можно быстро и неинвазивным определяться.
Рисунок 1: подтверждение приживления 8226-Люк клеток в мыши скелет. (A) NOG мышей были оспорены с 5 х 106 клеток 8226-LUC2 IV (мышь слева) или физиологического раствора (мыши справа). После 15 дней мышей были укол IP D-люциферин субстрата и образы с помощью системы обработки изображений малых животных. (B) мышей были принесены в жертву, бедра были собраны, и было собрано BM сотовой экссудата. Выражение человека CD45 определяется проточной цитометрии с помощью PE-конъюгированных антител CD45 антинародным. (C) Эта группа показывает иммуногистохимия последовательных секций мыши бедра, витражи для гипоксии с помощью pimonidazole (верхней панели) или человека CD45 (внизу панели) у мышей с 8226 (правой панели) или физиологическим (контроль; левой панели). Звездочка указывает местоположение большой кровеносный сосуд в последовательных секциях. Шкалы бар = 100 µm. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: наркотизированных NOG мышей показаны позиционирования в системе визуализации до измерения BLI сигнал от опухолей костного мозга-прижившимися мм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: установка оптических изображений и рентгеноструктурного анализа биолюминесцентных сигнала собранные от мышей NOG. После того, как животные были успешно оспорены и было подтверждено приживления опухоли в БМ, мышей может рандомизированных в группы лечения. В разное время в ходе эксперимента животные могут отслеживаться изменения в BLI. Поскольку процедура неинвазивной, частота мониторинга могут быть изменены с учетом ожидаемого роста опухоли, а также как быстро раковые клетки будет реагировать на терапию. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: Serial изображения несколько животных, показывающий распределение опухолей костного мозга-прижившимися мм. Регионы интереса (ROI) для каждой мыши определены. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: изменения в BLI прижившимися опухолей у мышей NOG во время анти мм терапевтический режим. (A) Эта группа показывает изменения в среднем сияние (p/s/см2/ser) в temsirolimus (20 мг/кг мышь)-обработанных мышей NOG оспорено IV с 5 х 106 клеток. Как только мышей наблюдались быть положительным для прижившимися опухоли, они были рандомизированы в различные группы лечения. Мышей были приведены пять инъекции IP ежедневно, затем 2 дня отдыха и, затем, еще пять инъекции IP temsirolimus (баров на оси x указывают дни лечения) или управления транспортного средства. В различные дни, мышей были даны IP инъекции » в естественных условиях-класс «D-люциферин и BLI была измерена с помощью оптических изображений платформы. Значения представляют средний сияние (/ser p/s/см2) ± 95% доверительного интервала. (B) это Каплана-Мейера сюжет показывает изменение в процентах от живых мышей со временем. Мышей, которые достигли критерии конечной точки (например, потеря массы тела > 10% или задних конечностей паралич) были гуманно euthanized. (C) Эта группа показывает представитель изображения мышей на дни 28, 35 и 40, показаны изменения в деятельности люк. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 6: Последовательных изображений и относительные изменения в 18F-ФДГ поглощение ПЭТ/КТ (A) Эта группа показывает серийный изображений же мыши для изображений биолюминесценции (оптических изображений/X-рентген) и 18F-ФДГ поглощение BLI ПЭТ/КТ была измерена в наркотизированных мышей, и ПЭТ/КТ и та же мышь была проведена 24 часа позже. Мышь на ночь и постился, в день исследования, получил укол IV 50 Μки 18F-ФДГ. Мышей были сохранены под наркозом во время инкубации поглощение зонд (60 мин) и, затем, были проанализированы для поглощения 18F-ФДГ PET/CT анализа. Указываются туморы (T1 и T2). H = сердце, K = почек и B = мочевого пузыря. (B) Эта группа показывает относительные изменения (в процентах от необработанных управления опухоли) в 18F-ФДГ поглощения в управления мышей (без лечения) или temsirolimus (20 мг/кг мышь)-лечение мышей (измеряется в дни 22, 35 и 40). Данные представлены как среднее (n = 5 мышей) ± 1 с.д. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Несмотря на разнообразие моделей доклинических ксенотрансплантата мм6,9,11,12,13возможность изучить взаимодействия опухоли/BM в BM микроокружения остается сложной 14. описанные здесь методы позволяют для быстрого и воспроизводимые приживления 8226-Люк клеток опухоли в скелет NOG мышей.
Важнейшие шаги в этом протоколе участвует создание Люцифераза выражая мм клеточных линий и проверке стабильной выражение Люцифераза в vitro15. После были созданы клеточных линий, NOG мышей оспариваются IV инъекции и приживления опухоли к скелету подтверждается путем измерения BLI деятельность в vivo (обычно в течение 10-20 дней postchallenge) (рис. 1A). Использование мыши NOG имеет важное значение, потому что другие иммунодефицитных штаммы (например NOD/ТКИД) обычно не образуют БМ прижившимися опухоли. Относительно высокий уровень успеха имплантации (> 90%) и короткий интервал для наблюдения за позитивный сигнал BLI делает эту модель идеально подходит для высокой пропускной способности и продольного анализа терапевтических методов анти мм (рис. 4). Еще одним очень важным аспектом этой модели является, что БМ прижившимися мм клеточных линий поддерживать их морфологических и иммунологических особенностей родительского клеточных линий (например, 8226, U266); они имеют последовательную и воспроизводимые роста и экспонат характеристик пациента заболеваний, таких как увеличение парапротеина человека IgG в сыворотке и формирование костей поражений.
Преимущество этой стратегии является использование эти мощные методы визуализации неоднократно изучение биохимических и молекулярных компонентов микроокружения опухоли/BM течение прогрессирования заболевания и в ответ на противоопухолевой терапии. В этом эксперименте мы обнаружили, что ориентация mTOR активность мышей с БМ прижившимися миеломы опухоли привело к сокращению в биолюминесцентных измерений, которые могут наблюдаться с течением времени. Кроме того мы обнаружили, что изменения в поглощении 18F-ФДГ зонд (Рисунок 6B) в этих же опухоли были коррелирует с изменениями биолюминесцентных сигнала (Рисунок 5B). Другим важным компонентом этой процедуры является, что несколько биохимических переменных могут быть измерены в опухоль со временем. Это особенно важно, потому что опухолевой прогрессии представляет собой динамичный процесс, характерны изменения в характеристики физиологии и микроокружения опухоли. Таким образом эта процедура, из-за его неинвазивный характер и относительно короткий период полураспада зондов, позволяет несколько продольного анализа изменений в опухоли ответа на терапию.
После освоения техники, будущего применения техники представляют большую гибкость. Например использование других биолюминесцентных или флуоресцентные метки (например, дневно тегами антитела) может также использоваться, равно как и различные другие 18F-меченых зондов и радиофармацевтические соединений для изучения конкретных биохимических пути или процессов в микроокружения опухоли/BM. Из-за небольшой half-life многих из этих ингаляционного несколько последовательных измерений удалось в течение конкретного эксперимента для изучения поглощения наркотиков, распределение, кинетика и распада. С помощью этой модели ксенотрансплантата, мм способность использовать анаэробного гликолиза и других метаболических (то есть, синтез жирных кислот) с помощью других датчиков (например,18F-фтор 2deoxyglucose [18F-ФДГ] и 18 F-FLUORO-4-Thia-Palmitate [FTP])16,17, а также возможность измерения анти пролиферативные эффекты лечения с помощью другой широко используется зонд (т.е., 3'-deoxy-3'-[18F] fluorothymidine [ 18F-FLT]) могут быть включены в экспериментальных проектах. Кроме того она может быть непосредственно измерить смерть клетки с помощью 18F-Annexin B1 для измерения апоптоз в vivo18. Многие из этих соединений являются коммерчески доступных.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Автор Кевин Фрэнсис является сотрудником Perkin-Elmer.
Acknowledgments
Эта работа была поддержана ва ЗАСЛУГИ grant1I01BX001532 из Соединенных Штатов Америки Отдел ветеранов дел биомедицинских лабораторных исследований и развития службы (BLRDS) п.ф., и ЕС признает поддержки от ва клинические науки R & D службы ( Заслуживают награды I01CX001388) и реабилитации ва R & D службы (заслуга премии I01RX002604). Дальнейшая поддержка пришли из Грант Seed факультет UCLA в ж.к. Это содержание не обязательно отражают взгляды нас Департамент по делам ветеранов или правительства США.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 8226 human myeloma cell line | ATCC | CCL-155 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) | Jackson Labs | 5557 | |
| VivoGlo Luciferin substrate | Promega | P1041 | |
| Hypoxyprobe-1Kit | HPL | HP1-100 | |
| PE-CD45 (clone H130) | BD Biosciences | 555483 | Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate |
| rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) | Cell Signaling Technology | 70527 | Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) | ABCAM | ab205718 | Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | E1910 | |
| pGL4.5 Luciferase Reporter Vector | Promega | E1310 | |
| IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | ||
| Sofie G8 PET/CT Imaging System | Perkin Elmer |
References
- Raab, M. S., Podar, K., Breitkreutz, I., Richardson, P. G., Anderson, K. C. Multiple Myeloma. The Lancet. 374 (9686), 324-339 (2009).
- Galson, D. L., Silbermann, R., Roodman, G. D. Mechanisms of Multiple Myeloma Bone Disease. BoneKEy Reports. 1, 135 (2012).
- Anderson, K. C., Carrasco, R. D.
- Reagan, M. R., Rosen, C. J. Navigating the Bone Marrow Niche: Translational Insights and Cancer-Driven Dysfunction. Nature Reviews Rheumatology. 12 (3), 154-168 (2016).
- Frost, P., et al. Mammalian Target of Rapamycin Inhibitors Induce Tumor Cell Apoptosis in Vivo Primarily by Inhibiting Vegf Expression and Angiogenesis. Journal of Oncology. 2013, 897025 (2013).
- Mysore, V. S., Szablowski, J., Dervan, P. B., Frost, P. J. A DNA-Binding Molecule Targeting the Adaptive Hypoxic Response in Multiple Myeloma Has Potent Antitumor Activity. Molecular Cancer Research. 14 (3), 253-266 (2016).
- Podar, K., Chauhan, D., Anderson, K. C. Bone Marrow Microenvironment and the Identification of New Targets for Myeloma Therapy. Leukemia. 23 (1), 10-24 (2009).
- Campbell, R. A., et al. Laglambda-1: A Clinically Relevant Drug Resistant Human Multiple Myeloma Tumor Murine Model That Enables Rapid Evaluation of Treatments for Multiple Myeloma. International Journal of Oncology. 28 (6), 1409-1417 (2006).
- Miyakawa, Y., et al. Establishment of a New Model of Human Multiple Myeloma Using Nod/Scid/Gammac(Null) (Nog) Mice. Biochemical and Biophysical Research Communications. 313 (2), 258-262 (2004).
- Ito, M., et al. Nod/Scid/Gamma(C)(Null) Mouse: An Excellent Recipient Mouse Model for Engraftment of Human Cells. Blood. 100 (9), 3175-3182 (2002).
- Frost, P., et al. In Vivo Antitumor Effects of the Mtor Inhibitor Cci-779 against Human Multiple Myeloma Cells in a Xenograft Model. Blood. 104 (13), 4181-4187 (2004).
- Asosingh, K., et al. Role of the Hypoxic Bone Marrow Microenvironment in 5t2mm Murine Myeloma Tumor Progression. Haematologica. 90 (6), 810-817 (2005).
- Storti, P., et al. Hypoxia-Inducible Factor (Hif)-1alpha Suppression in Myeloma Cells Blocks Tumoral Growth in Vivo Inhibiting Angiogenesis and Bone Destruction. Leukemia. 27 (8), 1697-1706 (2013).
- Fryer, R. A., et al. Characterization of a Novel Mouse Model of Multiple Myeloma and Its Use in Preclinical Therapeutic Assessment. PLoS One. 8 (2), e57641 (2013).
- Gould, S. J., Subramani, S. Firefly Luciferase as a Tool in Molecular and Cell Biology. Analytical Biochemistry. 175 (1), 5-13 (1988).
- Czernin, J., Phelps, M. E. Positron Emission Tomography Scanning: Current and Future Applications. Annual Review Medicine. 53, 89-112 (2002).
- Pandey, M. K., Bhattacharyya, F., Belanger, A. P., Wang, S. Y., DeGrado, T. R. Pet Imaging of Fatty Acid Oxidation and Glucose Uptake in Heart and Skeletal Muscle of Rats: Effects of Cpt-1 Inhibition. Circulation. 122 (21), (2010).
- Wang, M. W., et al. An in Vivo Molecular Imaging Probe (18)F-Annexin B1 for Apoptosis Detection by Pet/Ct: Preparation and Preliminary Evaluation. Apoptosis. 18 (2), 238-247 (2013).
