Summary
여기 우리가 사용 발광, x 선, 그리고 양전자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 이미징 공부 어떻게 억제 mTOR 활동 영향이 종이 식 모델에서 골 engrafted 발성 종양. 이로써 순수 관련, 비-침략 적, 및 복합 요법 골 engrafted 발성 종양에서 vivo에서대상의 안티 발성 효과의 분석.
Abstract
다중 골 수 종 (MM) 종양이 골 수 (BM)에 engraft 그리고 그들의 생존 및 진행이이 microenvironment 내 존재 하는 복잡 한 분자 및 세포 상호 작용에 따라 결정 됩니다. 그러나 BM microenvironment 쉽게 복제 생체 외에서잠재적으로 많은 생체 외에서 그리고 vivo 전 실험 모델의 생리 적인 관련성을 제한 될 수 없습니다. 이러한 문제는 luciferase (루크)의 종이 식 모델을 이용 하 여 극복 될 수 있다-transfected 8226 m M 세포 특히 마우스 뼈대에 engraft 것입니다. 이러한 마우스 적절 한 기판 주어진, D-소, 종양 성장 및 생존에 치료의 효과 종양 비보를 제작한 (BLI) 발광 이미지에 변화를 측정 하 여 분석할 수 있습니다. 이 씨 데이터 결합 2 대사 마커를 사용 하 여 양자 방출 단층 촬영/컴퓨터 단층 촬영 (PET/CT) 분석-의하여-2-(18F) 불 화-D-포도 당 (18F FDG)은 시간이 지남에 종양 물질 대사에 변화를 모니터링 하는 데 사용 됩니다. 이러한 이미징 플랫폼 종양/BM microenvironment 내의 여러 비 침 투 적인 측정을 허용 한다.
Introduction
MM 악성 플라스마 B 세포는 BM을 침투 하 고 뼈 파괴, 빈 혈, 신장 손상, 그리고 감염을 일으킬의 구성 하는 불 치의 질환입니다. MM 모든 혈액 악성 종양1 의 10%-15%를 만들고 뼈대2를 포함 하는 가장 빈번한 암 이다. MM의 개발은 결국 BM3귀환 하기 전에 림프 조직의 어린 싹 센터에 설정 되는 긴 플라즈마 세포의 종양 전이에서 유래한 다. 매우 이질적인 틈새;는 BM 특징 이다 다양 하 고 중요 한 세포 구성 요소, 낮은 포2 (hypoxia), 광범위 한 vascularization, 복잡 한 세포 외 매트릭스, 그리고 모두의 m M tumorgenesis4기여할 cytokine과 성장 인자 네트워크의 영역을 포함 하 여. 따라서, 엄격 하 게는 BM에 engrafted 종양 특징 전파 MM이 종이 식 모델의 개발 m M 병리학 vivo에서5,6공부를 매우 강력 하 고 임상 관련 도구 것입니다. 그러나, 수많은 기술적 장애물 적용 하기 어렵고 비용이 많이 드는 그들을 만드는 대부분의 종이 식 모델의 효과 제한할 수 있습니다. 이 능력을 직접 관찰 하 고 필요 없이 종양 성장/생존의 변화를 측정에 일관 되 고 재현 가능한 종양 engraftment BM 틈새 시장 내에서 종양 개발, 연장된 시간 제한과 관련 된 문제를 포함 실험7,8과정 쥐를 희생.
이 프로토콜 사용 하 여 Miyakawa 그 외 여러분 에 의해 처음 개발 된 수정된이 종이 식 모델 9, myeloma 세포는 정 맥 (IV) 도전 결과 "전파" 지속적으로 그리고 reproducibly BM의 NOD/SCID/IL-2γ(null) (노 그) 쥐10에 engraft 종양. 이 종양의 위치에 시각화 뤽 대립 유전자와 8226 인간의 MM 셀 라인의 안정 되어 있는 transfection에 의해 달성 하 고 이러한 engrafted 종양 세포6제작한 직렬로 씨에서 변화를 측정. 중요 한 것은,이 모델은 특히 노 그 쥐의 골격에 engraft 비슷한 성향을 가진 다양 한 다른 뤽 표현 인간의 MM 셀 라인 (예를 들어, U266 및 OPM2)를 활용 하 확장할 수 있습니다. 쥐의 발광 영상으로 종양의 식별 애완/코네티컷 함께 하 여 (예: 18F FDG) radiopharmaceutical 프로브의 이해를 측정 하 여 다음 수 있습니다 중요 한 추가 특성에 대 한 생화학 경로 (즉, 물질 대사, hypoxia, 변화 및 apoptosis 유도 변경) 종양/BM microenvironment 내. 이 모델의 주요 장점 다양 한 방사선, 발광 및 형광 프로브 및 m M 진행 및 병리학 비보를 공부 하는 데 사용할 수 있는 표시의 가용성에 의해 강조 될 수 있다.
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Protocol
아래 설명 하는 모든 동물 절차 기관 동물 관리 및 사용 위원회 (IACUC)의 큰 로스 앤젤레스 VA 의료 시스템에 의해 승인 하 고 살 균과 병원 체 없는 조건 하에서 수행 되었다.
1. 8226 셀 Luciferase 표현 (8226-루크)의 준비
- 8226, 10% 태아 둔감 한 혈 청 (FBS)와 95% 공기와 5% 이산화탄소 (CO2)를 포함 하는 습도 분위기에서 37 ° C에서 1% 페니실린 스 보충 RPMI 1640 매체에 인간의 MM 셀 라인을 유지 합니다.
- 안정적인 뤽 표현 기자 8226 세포 생성 transfecting 1 x 106 8226 셀 hygromycin (100-350 mg/mL)와 선택 이전 다음 luciferase 기자 벡터와 설명6.
- 표준 조건 하에서 무 균 자란 2-3 주 동안 매일, 안정적 transfected 8226 셀 라인의 설립을 생성 될 때까지 매체를 변경 셀을 유지 합니다.
- 버퍼링 하는 인산 염 (PBS)의 1 x 106 페 셀/100 µ L에서 생체 외에서 luciferase 활동 luciferase 기판, D-소를 추가 하 여 확인 (150 µ g/mL 작업 솔루션 prewarmed 문화 매체에서), 측정 하는 테스트 튜브 또는 96 잘 접시 루미 노6을 사용 하 여 셀의 생물 발광.
2. Orthotopic이 종이 식 모델
- 적절 한 동물 보호 시설에서 살 균/병원 체-무료 조건 노 그 마우스 (4-6 주 오래 된, 남성 또는 여성)을 유지 합니다.
- 실험 당일 노 그 쥐 (5 ~ 106 셀/마우스 x)로 IV 주입 8226 루크 페 셀을 준비 합니다. 3 세포를 씻어 얼음 처럼 차가운 PBS에 x, 고 PBS의 5 x 106 셀/200 µ L의 최종 농도에 그들을 (마이너스 항생제와 FBS) 얼음 처럼 차가운 PBS에 resuspend) 멸 균 시험관에. 얼음에 세포를 유지 하 고 최대한 빨리 (30-120 분) 내에서 마우스를 도전.
- Anesthetize (isoflurane, 0.5-1 L/min에 공기에 1%-3%)와 마우스와 향함을 멀리 머리와 생리대에 부정사 위치에 동물을 배치. 발가락을 곤란 하 게 하 여 anesthetization의 수준을 확인 합니다. 눈에 눈 연 고를 적용 합니다.
- 1 mL 인슐린 주사기 26 G 바늘을 사용 하 여 꼬리 정 맥 (200 µ L/분사) 통해 쥐로 8226 뤽 셀을 주입.
참고: 열 램프는 꼬리, 그로 인하여 혈관을 dilating 하 고 주사의 효능을 증가 하 고 따뜻하게 사용할 수 있습니다. - 그들의 가정 케이지를 동물을 그들은 완전히 복구 될 때까지 동물을 모니터링.
- 8226-뤽 셀 마우스 뼈대에 engraftment 라스 마 취 쥐 (아래 설명 및 그림 1A에 표시)를 측정 하 여 확인 합니다.
참고: 수확된 뼈 (그림 1C) immunohistochemistry 또는 cytometry (그림 1B)를 사용 하 여 인간의 CD45 식 BM exudates 또한 스테인드 수 있습니다.
3. 씨에서 Vivo에서 의 측정
참고: 일반적으로, 마우스에 engrafted 종양에서 측정 씨 10-20 일 postchallenge, 사이 처음 관찰 될 수 있다 하지만이 실험적으로 결정 될 필요가 있습니다.
- Anesthetize (isoflurane, 0.5-1 L/min에 공기에 1%-3%)와 마우스 하 고 발가락을 곤란 하 게 하 여 anesthetization의 수준을 확인 합니다. 그 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.
- 동물의 IP 주사 (200 µ L/주입)에 게 "vivo에서-학년" D 소 기판 (30mg/mL 멸 균 식 염 수에 희석).
- 측정 소 기판의 주입 (비록 씨 활동 최대 45-60 분 동안 쥐에서 관찰 될 수 있습니다) 다음 5-10 분, 내 씨, 마 취 동물 작은 동물 이미징 시스템 (그림 2에서에서 부정사 위치에 배치 하 여 ). 발광 및 x 선 분석을 선택 하 고 이미지 (그림 3).
- 이미징 소프트웨어 (그림 4)를 사용 하 여 관심사 (ROIs)의 선택한 영역에서 평균 빛 (광자/s/cm2/steradian)를 측정 합니다.
- 동물의 홈 케이지를 반환 하 고 (약 15-20 분)를 완은 때까지 그것을 모니터링.
4. 타겟된 치료와 쥐의 치료
- 기준 씨를 측정 하 고 동물 치료 그룹 (4-8 마우스/그룹)으로 무작위.
- IP 주사 (200 µ L/사출) temsirolimus (0.2-40 mg/kg 마우스)의 나머지는 추가 5 매일 주사11의 2 일 다음 5 일일 IP 주사 처방을 사용 하 여의 쥐를 취급 합니다.
- Luciferase 활동 (광자/s/cm2/steradian) 측정 / 주 섹션 3에 음모는 씨의 시간에 따른 변경 설명 하는 대로 2 배. 종양에 변화 씨 쥐 (그림 5B)의 직렬 이미지로 제시하실 수 있습니다.
참고: 것이 좋습니다 그들은 (일반적으로 초기의 45-60 일) 내에서 다음과 같은 현상이 현재까지 그를 수행 매일 동물의 모니터링: 무게 손실 (이식 전에 무게를 기준으로 10%의 손실) 및 뒷 다리 사지 마비, 어떤 시간에 그들은 한다 안락사 된다 자 궁 경관 탈 구 다음 공동2 챔버를 사용 하 여
5. PET/CT 분석 18를 사용 하 여 측정 F FDG 종양 물질 대사에 변화
- 18F FDG의 초과 일반적인 이해를 피하기 위해 실험 전에 24 h에 대 한 그들의 음식을 제거 하 여 그들의 집에 감 금 소에 있는 동물을 빨리.
- 실험 당일 18FDG 애완 동물 F 방사선 조사 (50-100 µCi/멸 균 식 염 수에 주입)을 준비 합니다. 복용량 교정기와 시간과 18F FDG 탐사선의 활동을 기록 합니다.
참고: 18F는 상대적으로 짧은 반감기 (~ 2 h) 있기 때문에, 주의 깊은 준비 및이 프로브를 사용 하 여 계획 해야 합니다 설립. - Anesthetize (isoflurane, 0.5-1 L/min에 공기에 1%-3%)와 동물 그리고 향함을 멀리 머리와 생리대에 부정사 위치에 놓습니다. 발가락을 곤란 하 게 하 여 anesthetization의 수준을 확인 합니다. 그 눈에 안과 연 고를 적용 합니다.
- 차폐 1 mL 인슐린 주사기 26 G 바늘을 사용 하 여 꼬리 정 (100 µ L/분사) 통해 프로브 주사.
참고: 열 램프는 꼬리, 그로 인하여 혈관을 dilating 하 고 주사의 효능을 증가 하 고 따뜻하게 사용할 수 있습니다. - 바늘/주사기 복용량 캘 리브레이 터에 있는 잔여 방사능을 측정 하 고 활동와 시간.
참고: 마우스 인큐베이션, 복용량, 및 타이밍의 표준화 데이터 재현성 및 comparability를 위해 필수적입니다. - 마 취 및 프로브 통풍 관 (~ 45-90 분)의 전체 기간 동안가 열 패드를 사용 하 여 37 ° C에서 생쥐를 유지 합니다.
참고: 쥐 무부하 및 프로브의 일반적인 이해를 피하기 위해 37 ° C에서 유지 중요 하다. - 쥐에서 비슷한 라벨 시간 되도록 약 20-30 분 간격으로 발생 하도록 18F FDG 프로브 주사를 엇갈리게 설정 합니다.
참고: 적절 한 워크플로 고 프로브 주사의 타이밍 최적의 재현성 이미징 조건에서 발생 합니다. - PET/CT 작은 동물 이미징 시스템에서 선택된 영역에 engrafted 종양 (그림 6)에 해당 하는 관심의 18F FDG 활동을 측정 합니다.
참고: 처음 10 분 정적 애완 동물 노출 및 2 분 CT 노출은 좋지만 정확한 노출 시간 실험적으로 결정 될 필요가 있습니다. - 자신의 집 새에 동물을 반환 하 고 완전히 복구 될 때까지 그들을 모니터링 합니다. 배경 레벨을 프로브 자연 붕괴 하면서 24 h에 대 한 전용 반환 방에 쥐를 집.
참고: 18F의 짧은 반감기 때문에 여러 측정 신선한 프로브를 사용 하 여 만들 수 있습니다 주당 2 배 만큼 자주.
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Representative Results
초기 파일럿 연구에서 끄 덕/SCID 쥐로 IV 주사 8226 뤽 셀의 개발 하지 않았다 BM engrafted MM 종양, 편평 MM 종양은 쉽게 형성 (100% 성공률) 비록. 반면, 노 그 쥐로 8226 셀 4 과제 생성 (15-25 일) 이내 종양에 해골 (간 또는 비장 등 비 골격 조직에만 거의 형성된 종양). 골격에 종양 실제로 동물을 검사 하 여 시각적으로 확인 수 없습니다, 이후 다른 방법 성공적인 종양 engraftment BM (그림 1) 내에서 종양의 위치를 확인 하 고 간주 했다. Miyakawa 그 외 여러분 에 의해 보고서와 마찬가지로 9, 인간의 IgG, 8226 세포에 의해 생산 ELISA (데이터 표시 되지 않음)를 사용 하 여 도전된 노 그 쥐의 혈 청에서 검출 될 수 있지만 이러한 데이터만 engraftment 하지 위치 또는 종양의 범위를 확인. 여러 동물의 직렬 이미징 BM engrafted MM 종양 (그림 4)의 분포를 보여 줍니다. 이들에 의해 생산 하는 씨 종양 세포 수 engrafted 다음 직렬 및 비 접촉 측정 종양 성장에 변화 mTOR 억제제 temsirolimus (그림 5)와 함께 치료 하는 쥐에 있는 생존을 평가 합니다. 마지막으로, 18F FDG 종양에서의 통풍 관에 대 한 PET/CT 분석 temsirolimus 중재 하는 포도 당 대사에 변화와이 종양의 성장 (그림 6)에서 변경 연관 보여 주기 위해 사용 되었다. 그러나, 함께 광학 이미징/X-레이 분석, luciferase 대립 유전자와 8226 셀을 안정적으로 transfecting에 의해 정확한 위치와 마우스 뼈대에 MM 종양의 분포 수 신속 하 고 비 접촉 정한다.
그림 1: 8226 뤽 engraftment 확인 셀 마우스 뼈대에. (A) 노 그 마우스는 5 x 106 8226 LUC2 셀 IV (왼쪽 마우스)와 함께 또는 식 염 수 (오른쪽 마우스)와 함께 전했다. 15 일 후에 쥐 D 소 기판의 IP 주사 받았다 고 작은 동물 이미징 시스템을 사용 하 여 몇 군데. (B) 생쥐 희생 했다는 화관, 수집 및 BM 셀룰러 exudate 수확 했다. 인간의 CD45 표현의 cytometry는 PE 활용 된 안티 인간 CD45 항 체를 사용 하 여 의해 결정 되었다. (C)이이 패널 표시 pimonidazole (상단 패널) 또는 인간 CD45를 사용 하 여 저 산소 증에 대 한 스테인드 마우스 화관의 직렬 부분의 immunohistochemistry (하단 패널) 8226 (오른쪽 패널)와 도전 하는 쥐에 있는 또는 식 염 수 (제어; 왼쪽된 패널). 별표는 직렬 섹션에 큰 혈관의 위치를 나타냅니다. 눈금 막대 = 100 µ m. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 마 취 노 그 마우스는 라스 측정 전에 이미징 시스템에서 위치를 보여주는 신호 골 engrafted MM 종양에서. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 광학 이미징의 설정 및 발광 신호의 x 선 분석 노 그 쥐에서 수집. 일단 동물에 성공적으로 도전 되었다 고는 BM에 종양의 engraftment 확인 되었습니다, 쥐 치료 그룹으로 무작위 수 있습니다. 실험의 과정에서 다양 한 시간에 변화는 씨에 대 한 동물을 모니터링할 수 있습니다. 절차는 비 침범 성, 모니터링의 주파수 암 세포 치료에 빠르게 응답 하는 방법 뿐만 아니라 종양의 예상된 성장을 반영 하기 위해 변경 될 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4: 골 engrafted MM 종양의 분포를 보여 주는 여러 동물의 직렬 이미징. 각 마우스에 대 한 (수익 ROI) 관심 영역 식별 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5: 변화는 안티-m M 치료 처방 중 노 그 쥐에 engrafted 종양의 씨에. (A)이이 패널에서는 평균 래 디 언스 (p/s/cm2/ser) temsirolimus (20 mg/kg 마우스)에 변화를-대우 노 그 쥐 도전 4 5 x 106 셀. 일단 쥐 engrafted 종양에 대 한 긍정적인 것으로 관찰 되었다, 그들은 다양 한 치료 그룹으로 무작위로 했다. 쥐 주어졌다 5 IP 주사 매일, 나머지의 2 일 및, (x 축에 막대 나타냅니다 치료 일) temsirolimus 또는 차량 제어의 추가 5 IP 주사. 다양 한 일에 쥐의 IP 주사를 부여 했다 "vivo에서-등급" D-소, 고은 씨는 광학 이미징 플랫폼을 사용 하 여 측정 되었다. 값은 평균 빛남 (p/s/cm2/ser) ±를 95% 신뢰 구간을 나타냅니다. (B)이 카 플 란-마이어 플롯 시간이 지남에 살아남은 쥐의 비율에서 변화를 보여줍니다. 끝점 기준 (즉, > 10% 체중 또는 뒷 다리 사지 마비의 손실)에 도달 했다 쥐 고통 없이 안락사 되었다. (C)이이 패널은 루크 활동에 변화를 보여주는 일 28, 35, 40에 쥐의 대표 이미지를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6: 직렬 이미징 및 애완/코네티컷에 의해 18F FDG 통풍 관에 상대 변경 (A)이이 패널 표시 직렬 생물 발광 (광학 이미징/X-레이) 이미징 및 애완/코네티컷 씨에 의해 18F FDG 이해에 대 한 동일한 마우스의 이미징 마 취 마우스에서 측정 되었다와 같은 마우스의 PET/CT 영상 24 h 후 수행 합니다. 마우스 하룻밤 금식 하 고, 연구의 날, 50 µCi 18F FDG의 IV 주사를 받았다. 쥐 취 프로브 글귀 외피 (60 분) 동안 유지 되었다 그리고, 다음, PET/CT 분석 18F FDG 통풍 관에 대 한 분석 했다. 종양 (T1 및 T2) 표시 됩니다. H = 심장, K = 신장, 및 B = 방광. (B)이이 패널 컨트롤에서 18F FDG 글귀 (치료 제어 종양의 비율)에서 상대 변경에서는 쥐 (치료) 또는 temsirolimus (20 mg/kg 마우스)-마우스 (22, 35, 40 일에서 측정)을 취급. 데이터 평균으로 표시 됩니다 (n = 5 쥐) ± 1 사 우 스 다코타 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
M M6,9,11,,1213의 전 임상이 종이 식 모델의 다양 한에 불구 하 고 BM microenvironment 내 종양/BM 상호 작용을 공부 하는 능력 유지 곤란 14. 여기서 설명 8226 루크 노 그 쥐의 골격에 종양 세포의 신속 하 고 재현성 engraftment 허용.
이 프로토콜의 중요 한 단계 참여 luciferase 표현 MM 셀 라인의 설립 및 체 외에서luciferase15의 안정적인 식의 확인. 일단 셀 라인 설립 되어, 노 그 쥐 IV 주입에 의해 도전 되 고 뼈대에 종양의 engraftment를 씨 활동에서 vivo에서 (일반적으로 10-20 일 postchallenge) 내에서 측정 하 여 확인 (그림 1A). (끄 덕 임/SCID) 같은 다른 immunodeficient 긴장 일반적으로 BM engrafted 종양을 형성 하지 않는다 노 그 쥐의 사용이 중요 합니다. 이식 (> 90%)의 상대적으로 높은 성공률 긍정적인 씨 신호를 관찰 하는 짧은 간격 하 게이 모델 안티-m M 치료 modalities (그림 4)의 높은 처리량 및 경도 분석에 이상적. 이 모델의 또 다른 매우 중요 한 측면은 BM engrafted MM 셀 라인 부모 셀 라인 (예를 들어, 8226, U266);의 그들의 형태학 적 및 면 역학적 기능 유지 그들은 일관 되 고 재현 가능한 성장 패턴 있고 혈 청 인간 IgG paraprotein 수준 및 뼈 병 변 형성 증가 등 환자 질병의 특성을 전시.
이 전략의 장점은 안티 종양 치료에 대 한 응답에서 및 질병 진행의 과정을 통해 종양/BM microenvironment의 생 화 학적 및 분자 구성 요소를 반복적으로 공부 이러한 강력한 이미징 기술 활용. 이 실험에서 우리는 그 시간 동안 관찰 될 수 있는 발광 측정 감소 결과 mTOR 활동 BM engrafted 발성 종양 생쥐에서를 대상으로 다는 것을 발견. 또한, 우리는이 같은 종양에서 18F FDG 프로브 (그림 6B)의 이해에 변화 변화 (그림 5B) 발광 신호에 상관 했다 발견. 이 절차의 다른 중요 한 구성 요소는 여러 생화학 변수 시간이 지남에 종양 내에서 측정 될 수 있다. 이것은 종양 진행은 동적 과정 변화 종양 생리학 및 microenvironment 특성에 의해 특징 때문에 특히 중요입니다. 따라서,이 절차는 비-침략 적 성격과 프로브의 비교적 짧은 반감기 때문에 수 있습니다 변화는 종양 치료에 응답을에 여러 개의 경도 분석.
기술 습득 후 기술의 미래 응용 프로그램 상당한 유연성을 제시. 예를 들어 다른 발광 또는 형광 태그 (예:, 붙일 태그가 항 체)를 사용 하 여 또한 활용할 수 있습니다., 다양 한 다른 18F 표시 된 프로브와 특정 생화학을 공부 하는 radiopharmaceutical 화합물을 수 경로 또는 종양/BM microenvironment에서 프로세스. 이 radionucleotides의 많은의 짧은 반감기 때문에 여러 직렬 측정 할 수 있었다 특정 실험의 과정에서 약물 이해, 유통, 활동, 및 감퇴를 공부 하. (예:18F-플 루 오로-2deoxyglucose [18F FDG], 18 다른 프로브를 사용 하 여이 종이 식 모델, 혐 기성 분해 및 다른 대사 경로 (즉, 지방산 합성)을 활용 하는 MM의 능력을 사용 하 여 [FTP] F-fluoro-4-thia-palmitate) 안티 증식 널리 다른을 사용 하 여 치료 효과 측정 하는 능력 뿐 아니라16,17, 프로브를 사용 (즉, 3'-의하여-3'-[18F] fluorothymidine [ 18F-FLT]) 실험 설계에 포함 될 수 있습니다. 또한, 18F Annexin B1 apoptosis vivo에서18를 측정을 사용 하 여 세포의 죽음을 직접 측정할 수 수 있습니다. 이 화합물의 많은 상업적으로 사용할 수 있습니다.
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Disclosures
저자 케빈 프랜시스 Perkin Elmer의 직원입니다.
Acknowledgments
이 작품 버지니아 장점 grant1I01BX001532에서 미국 학과의 재향 군인 담당 생물 의학 실험실 연구에 의해 지원 되었다과 개발 서비스 (BLRDS) P.F., 및 유럽 인정 버지니아 임상 과학 R & D 서비스 (에서 지원 수상 I01CX001388 장점)와 버지니아 재활 R & D 서비스 (공로 수상 I01RX002604). 조 앤 UCLA 교수 씨 그랜트에서 온 추가 지원 이러한 내용을 반드시 미국 재향 군인 담당 부서 또는 미국 정부의 의견을 대표 하지 않는다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 8226 human myeloma cell line | ATCC | CCL-155 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) | Jackson Labs | 5557 | |
| VivoGlo Luciferin substrate | Promega | P1041 | |
| Hypoxyprobe-1Kit | HPL | HP1-100 | |
| PE-CD45 (clone H130) | BD Biosciences | 555483 | Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate |
| rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) | Cell Signaling Technology | 70527 | Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) | ABCAM | ab205718 | Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | E1910 | |
| pGL4.5 Luciferase Reporter Vector | Promega | E1310 | |
| IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | ||
| Sofie G8 PET/CT Imaging System | Perkin Elmer |
References
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