Summary
Qui usiamo bioluminescenti, raggi x ed emissione di positroni tomografia/computato tomografia imaging per studiare l'attività come inibitore di mTOR urta i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in un modello dello xenotrapianto. Questo permette analisi fisiologicamente pertinenti, non invasivo e multimodale dell'effetto anti-mieloma di terapie designando i tumori del midollo osseo-engrafted mieloma in vivo.
Abstract
Mieloma multiplo (MM) tumori attecchire nel midollo osseo (BM) e la loro sopravvivenza e la progressione dipendono da complesse interazioni molecolari e cellulari che esistono all'interno di questo microambiente. Ancora il microambiente BM non può essere facilmente replicato in vitro, che potenzialmente limita la rilevanza fisiologica di molti modelli sperimentali in vitro ed ex vivo . Questi problemi possono essere superati utilizzando un modello di xenotrapianto in cui luciferasi (LUC)-cellule trasfettate 8226 MM saranno specificamente interdigitate nello scheletro del mouse. Quando questi topi sono dato il substrato appropriato, D-luciferina, gli effetti della terapia sulla crescita del tumore e la sopravvivenza può essere analizzata misurando i cambiamenti nelle immagini bioluminescenti (BLI) prodotto dai tumori in vivo. Questi dati BLI combinato con analisi di tomografia (PET/CT) emissione positronica tomografia/calcolo utilizzando l'indicatore metabolico 2-deoxy - 2-(18F) fluoro-D-glucosio (18F-FDG) è utilizzato per monitorare i cambiamenti nel metabolismo del tumore nel tempo. Queste piattaforme imaging consentono misurazioni non invasive più all'interno del microambiente del tumore/BM.
Introduction
MM è una malattia incurabile costituita da plasma maligno B-cellule che infiltrano il BM e causare la distruzione dell'osso, l'anemia, insufficienza renale e infezione. MM rende fino al 10% - 15% di tutte le neoplasie ematologiche1 ed è il cancro più frequente di coinvolgere lo scheletro2. Lo sviluppo del MM deriva dalla trasformazione oncogena longeve delle cellule di plasma che vengono stabilite in centri germinali dei tessuti linfoidi prima alla fine homing al BM3. Il BM è caratterizzata da nicchie altamente eterogenei; tra cui componenti cellulari diversi e critici, regioni di basso pO2 (ipossia), ricca vascolarizzazione, complesse matrici extracellulari e reti di citochine e fattori di crescita, che contribuiscono a MM dimostato4. Così, lo sviluppo di un modello di xenotrapianto MM diffuso caratterizzato da tumori che sono rigorosamente innestati in BM sarebbe uno strumento molto potente e clinicamente rilevante per lo studio MM patologia in vivo5,6. Tuttavia, numerosi ostacoli tecnici possono limitare l'efficacia della maggior parte dei modelli dello xenotrapianto, che li rende costosi e difficili da applicare. Questo include problemi connessi con il engraftment coerenti e riproducibili del tumore all'interno della nicchia di BM, un tempo prolungato per lo sviluppo del tumore e le limitazioni nella capacità di direttamente osservare e misurare le variazioni della crescita del tumore/sopravvivenza senza dover sacrificio di topi nel corso dell'esperimento7,8.
Questo protocollo utilizza un modello di xenotrapianto modificate che inizialmente è stato sviluppato da Miyakawa et al. 9, in cui una sfida per via endovenosa (IV) con cellule di mieloma si traduce in "diffusi" tumori che costantemente e riproducibile attecchire nei topi BM di NOD/SCID/IL-2γ(null) (NOG)10. La visualizzazione in situ di questi tumori è raggiunto mediante la trasfezione stabile della 8226 umano linea cellulare MM con un allele LUC e in serie misurano l'evoluzione della BLI prodotta da queste cellule di tumore engrafted6. D'importanza, questo modello può essere ampliato per utilizzare vari altri che esprimono LUC MM linee cellulari umane (ad es., U266 e OPM2) con una tendenza simile a specificamente interdigitate nello scheletro dei topi NOG. L'identificazione dei tumori da bioluminescenti imaging dei topi è seguita misurando la captazione del radiofarmaci sonde (ad esempio 18F-FDG) di PET/CT. insieme, in questo modo ulteriore caratterizzazione dei critici biochimico vie (cioè, le alterazioni nel metabolismo, cambiamenti in ipossia e l'induzione di apoptosi) all'interno del microambiente del tumore/BM. I principali punti di forza di questo modello può essere evidenziate dalla disponibilità di una vasta gamma di sonde radioattive, bioluminescenti e fluorescente e marcatori che possono essere usati per studiare la progressione MM e patologia in vivo.
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Protocol
Tutte le procedure degli animali descritte di seguito sono state approvate dal istituzionale Animal Care e uso Committee (IACUC) del sistema Greater Los Angeles VA sanitario e sono state eseguite in condizioni sterili ed esenti da patogeni.
1. preparazione di cellule che esprimono Luciferase 8226 (8226-LUC)
- Mantenere la linea cellulare umana MM, 8226, in RPMI-1640 supplementato con 10% siero bovino fetale (FBS) e 1% di penicillina-streptomicina a 37 ° C in atmosfera umidificata contenente 95% aria e 5% di anidride carbonica (CO2).
- Generare cellule reporter 8226 LUC-esprimendo stabili di transfezione 1 x 106 8226 cellule con un vettore reporter luciferasi seguita da una selezione con igromicina (100-350 mg/mL) come precedentemente descritto6.
- Mantenere le cellule in condizioni coltura sterile standard per 2-3 settimane, cambiando il mezzo ogni altro giorno, fino a quando l'istituzione di una linea cellulare 8226 stabilmente trasfettate è stato generato.
- Confermare l'attività in vitro luciferasi in 1 x 106 transfettate cellule/100 µ l di tampone fosfato salino (PBS) aggiungendo il substrato di luciferasi, D-luciferina (150 µ g/mL soluzione di lavoro nel terreno di coltura preriscaldato) e misurando la bioluminescenza delle cellule in una provetta o in piastra a 96 pozzetti utilizzando un luminometro6.
2. modello dello xenotrapianto Orthotopic
- Mantenere i topi NOG (4-6 settimane vecchie, maschile o femminile) in condizioni sterili/patogeno-gratuito in una struttura appropriata cura degli animali.
- Preparare i 8226 LUC-transfettati per iniezione IV in topi NOG (~ 5 x 106 cellule/mouse) il giorno dell'esperimento. Lavare le cellule 3 x in PBS ghiacciata, contarli e li risospendere in PBS ghiacciata (meno antibiotici e FBS) ad una concentrazione finale di 5 x 106 cellule/200 µ l di PBS) in una provetta sterile. Mantenere le cellule sul ghiaccio e sfidare i topi più presto (entro 30-120 min).
- Anestetizzare il mouse (con isoflurano, 1% - 3% in aria a 0,5 - 1 L/min) e posizionare l'animale in posizione supina su una piastra elettrica con la testa rivolta verso via. Controllare il livello di amputate pizzicando la punta. Applicare unguento oftalmico agli occhi.
- Iniettare le cellule 8226-LUC in topi tramite la vena di coda (200 µ l/iniezione) utilizzando una siringa da insulina 1 mL e un ago 26-G.
Nota: Una lampada di calore può essere utilizzata per riscaldare la coda, quindi dilatare la vena e aumentando l'efficacia delle iniezioni. - Restituire l'animale alla loro gabbia e monitorare gli animali fino a quando non hanno pienamente recuperato.
- Confermare il engraftment delle cellule 8226-LUC nello scheletro del mouse misurando la BLI in topi anestetizzati (descritto di seguito e illustrato nella Figura 1A).
Nota: Gli essudati BM possono essere macchiati anche per espressione di CD45 umano mediante citometria a flusso (Figura 1B) o mediante immunoistochimica di osseo prelevato (Figura 1).
3. misurazione di BLI In Vivo
Nota: In genere, BLI misurabili da engrafted tumori in topi possono essere osservati prima tra postchallenge di 10-20 giorni, ma questo potrebbe essere necessario essere determinati sperimentalmente.
- Anestetizzare il mouse (con isoflurano, 1% - 3% in aria a 0,5 - 1 L/min) e controllare il livello di amputate pizzicando la punta. Applicare unguento oftalmico ai suoi occhi.
- Dare l'animale un'iniezione di IP (200 µ l/iniezione) di "in vivo-grade" substrato D-luciferina (30 mg/mL diluito in soluzione salina sterile).
- Misurare la BLI entro 5-10 min, dopo l'iniezione del substrato luciferina (anche se l'attività BLI può essere osservabile nei topi per fino a 45-60 min), mettendo l'animale anestetizzato in posizione supina in un sistema di imaging di piccoli animali (Figura 2 ). Selezionare luminescenti e analisi dei raggi x e acquisire immagini (Figura 3).
- Misurare la radianza media (/steradian di fotoni/s/cm2) in determinate regioni di interesse (ROI) utilizzando software di imaging (Figura 4).
- Restituire l'animale alla sua gabbia e monitorarlo finché non ha recuperato completamente (circa 15-20 min).
4. trattamento dei topi con terapia mirata
- Misurare la previsione BLI e randomize gli animali in gruppi di trattamento (4-8 topi/gruppo).
- Trattare i topi con un'iniezione di IP (200 µ l/iniezione) di temsirolimus (0,2 - 40 mg/kg topo) usando un regime di cinque iniezioni giornaliere di IP seguita da 2 giorni di riposo e un ulteriori cinque iniezioni quotidiane11.
- Misurare l'attività luciferasica (/steradian di fotoni/s/cm2) 2 volte a settimana come descritto nella sezione 3 e trama la variazione del BLI nel tempo. Cambiamenti nel tumore BLI può essere presentato come immagini di serie dei topi (figura 5B).
Nota: È consigliabile che il monitoraggio quotidiano degli animali essere eseguita fino a quando essi presentano i seguenti sintomi (in genere entro 45-60 giorni la sfida iniziale): peso perdita (perdita di oltre il 10% rispetto al peso prima dell'impianto) e/o posteriori paralisi degli arti, momento in cui essi dovrebbero essere euthanized utilizzando una camera di CO2 seguita da dislocazione cervicale.
5. PET/CT analisi utilizzando 18F-FDG su misura cambia nel metabolismo del tumore
- Veloce gli animali nella loro gabbia a casa togliendo loro cibo per 24 h prima dell'esperimento per evitare l'assorbimento di 18F-FDG in eccesso-non specifico.
- Preparare 18sonde radiomarcate F FDG PET (50-100 µ ci/iniezione in soluzione fisiologica sterile) il giorno dell'esperimento. Registrare il tempo e l'attività della sonda 18F-FDG con un calibratore di dose.
Nota: Perché 18F ha un'emivita relativamente breve (~ 2 h), è necessario stabilire una preparazione accurata e la pianificazione per l'utilizzo di queste sonde. - Anestetizzare l'animale (con isoflurano, 1% - 3% in aria a 0,5 - 1 L/min) e posizionarlo in posizione supina su una piastra elettrica con la testa rivolta verso via. Controllare il livello di amputate pizzicando la punta. Applicare unguento oftalmico ai suoi occhi.
- Iniettare la sonda tramite vena caudale (100 µ l/iniezione) utilizzando una siringa da insulina schermato 1 mL e un ago 26-G.
Nota: Una lampada di calore può essere utilizzata per riscaldare la coda, quindi dilatare la vena e aumentando l'efficacia delle iniezioni. - Misurare la radioattività residua in ago/siringa in un calibratore di dose e annotare l'attività e il tempo.
Nota: La standardizzazione di incubazione del mouse, dosaggio e tempi è essenziale per assicurare la comparabilità e la riproducibilità dei dati. - Mantenere i topi sotto anestesia e a 37 ° C, con un rilievo di riscaldamento durante l'intero periodo dell'assorbimento della sonda (~ 45-90 minuti).
Nota: È importante che i topi rimangono quiescenti e a 37 ° C per evitare l'assorbimento non specifico della sonda. - Scaglionare le iniezioni della sonda 18F-FDG si verificano a intervalli di circa 20 - 30 min per garantire tempi di etichettatura simili nei topi.
Nota: Il corretto flusso di lavoro e la tempistica delle iniezioni sonda si tradurrà in condizioni ottimale e riproducibile imaging. - Misurare l'attività di 18F-FDG in un sistema imaging piccoli animali di PET/CT in determinate regioni di interesse che corrispondono ai tumori engrafted (Figura 6).
Nota: Inizialmente, si consiglia un'esposizione di PET statica di 10 min e un'esposizione di CT 2 min, ma i tempi di esposizione esatta potrebbero essere necessario essere determinati sperimentalmente. - Restituire gli animali ai loro gabbie casa e monitorarli fino a completamente recuperato. Casa i topi in una sala dedicata di ritorno per 24 h, mentre i decadimenti di sonda ai livelli di fondo.
Nota: A causa della breve emivita di 18F, misurazioni multiple usando una sonda fresca possono essere fatta con una frequenza 2 volte a settimana.
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Representative Results
Negli studi pilota iniziali, iniezioni IV delle cellule 8226-LUC in topi NOD/SCID non hanno sviluppato i tumori BM-engrafted MM, anche se squamose MM tumori erano facilmente formati (100% tasso di successo). Al contrario, sfide IV con 8226 cellule nei topi NOG generato (nel raggio di 15-25 giorni) tumori nello scheletro (e soli raramente formati tumori nei tessuti muscolo-scheletrici, come il fegato o la milza). Poiché i tumori nello scheletro visivamente non potrebbero essere confermati esaminando fisicamente gli animali, altri metodi dovevano essere considerate per confermare engraftment di successo del tumore e la posizione dei tumori all'interno del BM (Figura 1). Simile ai rapporti di Miyakawa et al. 9, IgG umane, prodotto dalle 8226 cellule, potrebbe essere rilevato nel siero dei topi NOG sfidati usando ELISA (dati non mostrati), anche se questi dati confermati solo attecchimento e non la posizione o la misura dei tumori. Formazione immagine di serie degli animali più Mostra la distribuzione dei tumori BM-engrafted MM (Figura 4). La BLI prodotto da questi engrafted tumore le cellule possono quindi misurare in serie e in modo non invasivo per valutare i cambiamenti nella crescita del tumore e la sopravvivenza in topi trattati con il temsirolimus inibitore di mTOR (Figura 5). Infine, analisi di PET/CT per l'assorbimento di 18F-FDG nei tumori è stata usata per dimostrare temsirolimus-mediata cambiamenti nel metabolismo del glucosio e che questo correlato con i cambiamenti nella crescita del tumore (Figura 6). Tuttavia, tramite trasfezione stabile 8226 cellule con un allele di luciferasi, in combinazione con una imaging/raggi X analisi ottica, la posizione esatta e la distribuzione dei tumori MM nello scheletro del mouse potrebbe essere rapidamente e in modo non invasivo determinate.
Figura 1: conferma del engraftment di 8226-LUC cellule nello scheletro del mouse. (A), NOG topi sono stati sfidati con cellule di 5 x 106 8226-LUC2 IV (mouse a sinistra) o con soluzione fisiologica (il mouse a destra). Dopo 15 giorni, i topi sono stati fatti un'iniezione di IP del substrato D-luciferina e imaging utilizzando un sistema di imaging di piccoli animali. (B) i topi sono stati sacrificati, i femori sono stati raccolti e l'essudato cellulare BM è stato raccolto. L'espressione di CD45 umano è stato determinato tramite flusso cytometry utilizzando un anticorpo di CD45 PE-coniugato anti-umano. (C), questo pannello mostra un esame immuno-istochimico delle sezioni di serie del mouse femori macchiati per ipossia utilizzando Pimonidazolo (pannello superiore) o CD45 umano (pannelli di fondo) in topi sfidati con 8226 (pannelli di destra) o salino (controllo; pannelli a sinistra). L'asterisco indica la posizione di un grande vaso sanguigno nelle sezioni seriali. La barra della scala = 100 µm. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: segnale di topi anestetizzati NOG risultati posizionamento nel sistema di imaging prima di misurare la BLI dal midollo osseo-engrafted tumori MM. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: set-up dell'imaging ottico e analisi dei raggi x del segnale bioluminescente raccolti da topi NOG. Una volta che gli animali si sono sfidati con successo e l'attecchimento dei tumori in BM è stata confermata, i topi possono essere randomizzati in gruppi di trattamento. In vari momenti durante il corso dell'esperimento, gli animali possono essere monitorati per i cambiamenti nella BLI. Perché la procedura è non invadente, la frequenza del monitoraggio potrebbe essere modificata per riflettere la prevista crescita dei tumori, così come rapidamente le cellule tumorali risponderà alla terapia. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: formazione immagine di serie di più animali mostrano la distribuzione dei tumori del midollo osseo-innestate di MM. Le regioni di interesse (ROI) per ogni mouse sono identificate. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5: modifiche in BLI di engrafted tumori in topi NOG durante un regime terapeutico anti-MM. (A), questo pannello mostra un cambiamento nella radianza media (p/s/cm2/ser) in temsirolimus (20 mg/kg del mouse)-topi trattati NOG sfidato IV con 5 x 106 cellule. Una volta che i topi sono stati osservati per essere positivo per i tumori engrafted, sono stati randomizzati in vari gruppi di trattamento. I topi sono stati dati cinque IP iniezioni al giorno, seguita da 2 giorni di riposo e, quindi, un ulteriore cinque iniezioni di IP di temsirolimus (le barre sull'asse x indicano i giorni di trattamento) o controllo del veicolo. Vari giorni, i topi sono stati dati IP iniezioni di "in vivo-grado" D-luciferina e la BLI è stata misurata utilizzando una piattaforma di imaging ottica. I valori rappresentano il ± medio radiance (p/s/cm2/ser) un intervallo di confidenza del 95%. (B) questo Kaplan-Meier trama Mostra la variazione percentuale dei topi sopravvissuti nel tempo. Umanamente sono stati eutanasizzati topi che avevano raggiunto i criteri di endpoint (cioè, una perdita di > 10% del peso corporeo o paralisi dell'arto posteriore). (C), questo pannello Mostra immagini rappresentative dei topi presi nei giorni 28, 35 e 40, mostrando i cambiamenti nell'attività LUC. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 6: Formazione immagine di serie e le variazioni relative all'assorbimento 18F-FDG PET/CT. (A), questo pannello spettacoli seriale imaging dello stesso mouse per l'imaging di bioluminescenza (optical imaging/raggi X) e assorbimento 18F-FDG PET/CT. BLI è stata misurata in topi anestetizzati, e l'imaging PET/CT del mouse stesso è stato effettuato 24 ore più tardi. Il mouse a digiuno durante la notte e, il giorno dello studio, hanno ricevuto un'iniezione IV di 50 µ ci 18F-FDG. I topi sono stati mantenuti nell'ambito dell'anestesia durante l'incubazione di assorbimento della sonda (60 min) e, quindi, sono stati analizzati per l'assorbimento di 18F-FDG da analisi PET/CT. Tumori (T1 e T2) sono indicati. H = cuore, K = rene e B = vescica. (B), questo pannello mostra variazioni relative (in una percentuale di tumori di controllo non trattato) l'assorbimento di 18F-FDG in controllo topi (nessun trattamento) o temsirolimus (20 mg/kg del mouse)-trattati topi (misurati nei giorni 22, 35 e 40). I dati sono presentati come media (n = 5 topi) ± 1 S.D. Clicca qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Nonostante una varietà di modelli preclinici dello xenotrapianto di MM6,9,11,12,13, la capacità di studiare le interazioni tumore/BM all'interno del microambiente BM rimane difficile 14. le tecniche qui descritte consentono il rapido e riproducibile engraftment delle cellule di tumori 8226-LUC nello scheletro dei topi NOG.
L'istituzione di linee cellulari di MM-esprimendo la luciferasi e la verifica di un'espressione stabile di luciferasi in vitro15coinvolti i passaggi critici in questo protocollo. Una volta che le linee cellulari sono state stabilite, topi NOG sono sfidati da iniezione IV e l'attecchimento dei tumori allo scheletro è confermata misurando la BLI attività in vivo (in genere entro 10-20 giorni postchallenge) (Figura 1A). L'uso di topi NOG è importante perché altri ceppi immunodeficienti (ad esempio di NOD/SCID) in genere non formano tumori BM-innestate. Il tasso di successo relativamente elevato dell'impianto (> 90%) e il breve intervallo di osservare un segnale positivo di BLI rendono questo modello ideale per un'analisi di alto-rendimento e longitudinale delle modalità terapeutiche anti-MM (Figura 4). Un altro aspetto molto importante di questo modello è che le linee cellulari MM BM-engrafted mantengano loro caratteristiche morfologiche ed immunologiche delle varietà di cellula genitore (ad es., 8226, U266); hanno modelli di crescita coerente e riproducibile e presentano caratteristiche di paziente malattie, quali l'aumento di livelli di paraproteina IgG umani del siero e la formazione di lesioni dell'osso.
Il vantaggio di questa strategia è l'utilizzo di queste tecniche di imaging potente per studiare ripetutamente componenti biochimici e molecolari del microambiente del tumore/BM nel corso della progressione della malattia e nella risposta alle terapie anti-tumorali. In questo esperimento, abbiamo trovato che attività di mTOR in topi con i tumori BM-engrafted mieloma di targeting ha provocato una diminuzione nelle misurazioni bioluminescenti che ha potuto essere osservato nel corso del tempo. Inoltre, abbiamo trovato che i cambiamenti nell'assorbimento della sonda 18F-FDG (Figura 6B) in questi stessi tumori sono stati correlati ai cambiamenti nel segnale bioluminescente (figura 5B). Un altro componente fondamentale di questa procedura è che più variabili biochimiche possono essere misurate all'interno del tumore nel tempo. Questo è particolarmente importante perché la progressione del tumore è un processo dinamico, caratterizzato da cambiamenti nelle caratteristiche di fisiologia e microambiente del tumore. Così, questa procedura, a causa della sua natura non invasiva e l'emivita relativamente breve delle sonde, consente per analisi multiple longitudinale di alterazioni della risposta del tumore alla terapia.
Dopo aver imparato la tecnica, le future applicazioni della tecnica presentano una notevole flessibilità. Ad esempio, l'uso di altri tag bioluminescenti o fluorescente (ad es., anticorpi fluorescente contrassegnati) anche poteva essere utilizzato, come potrebbero vari altri 18F-etichetta sonde e radiofarmaci composti per studiare specifici biochimici percorsi o processi nel microambiente del tumore/BM. A causa della breve emivita di molti di questi radionucleotides, più le misure di serie potrebbero essere fatto nel corso di uno specifico esperimento per studiare il decadimento, la distribuzione, cinetica e l'assorbimento del farmaco. Utilizzando questo modello dello xenotrapianto, la capacità di utilizzare la glicolisi anaerobica e altre vie metaboliche (cioè, sintesi dell'acido grasso) MM utilizzando altre sonde (ad es.,18F-fluoro-2deoxyglucose [18F-FDG] e 18 F-fluoro-4-Thia-palmitate [FTP])16,17, come pure la capacità di misurare gli effetti anti-proliferativi del trattamento usando un altro ampiamente utilizzato sonda (cioè, 3'-deoxy-3'-fluorothymidine [18F] [ 18F-FLT]) possono essere inclusi nei disegni sperimentali. Inoltre, è possibile misurare direttamente la morte delle cellule usando 18F-annessina B1 per misurare l'apoptosi in vivo18. Molti di questi composti sono disponibili in commercio.
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Disclosures
L'autore Kevin Francis è un dipendente della Perkin-Elmer.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato supportato da una grant1I01BX001532 di merito VA dagli Stati Uniti Dipartimento di veterani affari laboratorio ricerca biomedica e sviluppo servizio (uccelli) di P.F. ed E.C. riconosce il supporto dal servizio VA clinica scienza R & S ( I01CX001388 premio di merito) e riabilitazione VA R & D Service (Merit Award I01RX002604). Ulteriore supporto è venuto da una sovvenzione di seme facoltà di UCLA a J.K. Questi contenuti non rappresentano necessariamente le opinioni di US Department of Veterans Affairs o il governo degli Stati Uniti.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 8226 human myeloma cell line | ATCC | CCL-155 | |
| NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ Mice (NOG) | Jackson Labs | 5557 | |
| VivoGlo Luciferin substrate | Promega | P1041 | |
| Hypoxyprobe-1Kit | HPL | HP1-100 | |
| PE-CD45 (clone H130) | BD Biosciences | 555483 | Used for flow cytometry to identify human CD45+ tumor cells in BM exudate |
| rabbit anti-human CD45 (clone D3F8Q) | Cell Signaling Technology | 70527 | Primary antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Goat Anti-rabbit IgG (HRP conjugated) | ABCAM | ab205718 | Seconday antibody used for Immunohistochemistry of excised bone |
| Dual-Luciferase Reporter Assay System | Promega | E1910 | |
| pGL4.5 Luciferase Reporter Vector | Promega | E1310 | |
| IVIS Lumina XRMS In Vivo Imaging System | Perkin Elmer | ||
| Sofie G8 PET/CT Imaging System | Perkin Elmer |
References
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