Summary
만능 줄기 세포 유래 teratomas 위한 치료 전략에 대 한 연구는 줄기 세포 치료의 임상 번역 중요 합니다. 여기, 우리 첫째, 쥐에서 그리고, 선택적으로 대상 줄기 세포 유래 teratomas를 생성 하 고 생체 조건 작은 동물 irradiator를 사용 하 여 이러한 종양을 치료 하는 프로토콜을 설명 합니다.
Abstract
"줄기 세포 관광," 전세계 줄기 세포의 관계가 없는 이식의 피해자의 증가 줄기 세포 이식의 안전에 대 한 우려를 제기 했다. Teratomas 아직도 이식 시 잔여 미 분화 줄기 세포의 존재에서 발생할 수 있습니다 또는에 자발적인 돌연변이에서 분화의 이식 분화 보다는 미 분화 세포는 일반적인 관행, 비록 셀입니다. 줄기 세포 치료는 종종 해부학 민감한 사이트에 전달 됩니다, 때문에 작은 종양 임상, 실명, 마비, 인지 이상, 그리고 심장 혈관 장애의 결과로 파괴 될 수 있습니다. 이 사이트에 대 한 외과 액세스 제한, 몇 가지 치료 옵션과 함께 환자를 떠나 있을 수 있습니다. 줄기 세포 비행 제어는, 따라서, 줄기 세포 치료의 임상 번역에 대 한 중요 한입니다.
외부 빔 방사선 장기 주변에 부상을 최소화 하면서 기형종 부담을 줄이려면 타겟된 치료 제공의 효과적인 수단을 제공 합니다. 또한,이 방법은 유전자 조작 방지 또는 줄기 세포는 바이러스 성 변환 추가 임상 안전성 및 효능 우려와 관련 된. 여기, 우리는 쥐에 있는 pluripotent 줄기 세포 유래 teratomas를 만들려고 하 고 선택적으로 이러한 종양 vivo에서 ablate을 외부 빔 방사선 치료를 적용 하는 프로토콜을 설명 합니다.
Introduction
조직 재생을 위한 줄기 세포 치료의 개발이 발생 했습니다 장벽 수를 지난 몇 십년에 효율적인 임상 배포에 대 한 노력을 방해. 이러한 장애물에 전달, 줄기 세포 immunogenicity 및 양식 teratomas1종양 약 잠재력의 사이트에서 가난한 셀 보존을 포함 됩니다. Tumorigenicity은 특정 임상 관심사의 줄기 세포 이식 받는 사람2를 손상 시킬 수 있습니다. 종양의 형성 때문에 관계가 없는 줄기 세포 주사의 계정은 이미 여러 임상 설정3,,45에 보고 되었습니다. 기형종 형성을 위한 잠재력은 가장 자주 만능 줄기 세포 (PSC) 개발에서 임상 관심사를 인용 했다 지연 및 여러 높은 프로필 배아 줄기 세포 (ESC)의 취소 귀착되 고 유도 만능 줄기 세포 (iPSC) 실험6,7,,89. 따라서, 이러한 의원 성 종양 발생 해야 적절 한 치료를 제공 하는 쪽으로 전용 변환 조사에 대 한 긴급 한 필요는 있다.
날짜 하려면, 줄기 세포 비행 제어를 대부분 전략 tumorigenic 잠재적인2,10Psc의 수를 줄임에 집중 했다. 불행 하 게도, (예를 들어., 1 x 104 1 x 105 셀11) 잔여 세포 수가 적은 검출 한계 보다 훨씬 현재 사용할 수 있는 분석12, 에 의해 인용 된다 기형종 형성에 필요한 13. 이러한 preseparation 메서드를 사용 하 여 다른 제한 등 낮은 효율 및 높은 비용, 새로운 조직 공학 접근, 및 세포의 잠재적인 손상에 대 한 적절 하지 않을 수 있습니다 단일 셀 정지에 대 한 의존도 생존 그리고 engraftment입니다.
몇 연구 치료 옵션 다음 기형종 형성 언급. 아마도 가장 잘 공부 전략으로 줄기 세포14,15"자살" 유전자의 결합 이다. 이 방법은 유전자 줄기 세포를 유도할 수 있는 apoptosis 활성화 유전자 주입된 셀 teratomas를 생산 하는 경우 그로 인하여 구조 접근을 제공 하는 약리 자극 postinjection에 의해 활성화 될 수 있는 통합 조작 포함. 그러나이 방법은,,의 Psc와 약물 저항16의 점진적 개발에 대 한 잠재력의 유전 수정 오프 대상 결과 포함 하 여 중요 한 단점이 있습니다 겪고 있다. 이와 비슷한 방식을 안티 apoptotic 통로17의 억제를 통해 Psc의 선택적 세포 죽음을 유도 하는 작은 분자를 이용 한다. 다른 그룹의 세포 죽음 같은 podocalyxin 같은 단백질 1 (PODXL)18pluripotency 표면 표식에 대 한 항 체를 사용 하 여 Psc의 대상 있다. 작은 분자 또는 항 체의 타이밍 너무 일찍 배달 하 고 있습니다 너무 늦게 전달 하는 경우 치료 효능 부족 Psc의 치료 가능성에 상당한 영향을 의미 합니다. 또한, 작은 분자와이 패션에 사용 되는 항 체의 조직 효과 하지 공부 되었습니다.
이러한 종양을 치료 하는 대체 접근 외부 광속 방사선 요법 (EBRT)를 사용 하 여 의존 하고있다. EBRT 현재19단단한 종양 치료에 고용 기본 형식 중 하나입니다. 등각 EBRT 기형종 주소 지정을 위해 이상적이 게 만들어서 정상 조직에 손상을 피하고 있는 동안 병 적인 구조의 향상 된 타겟팅 EBRT, 양성자 빔과 정위 적 radiosurgery의 개발을 포함 하 여 혁신 활성화 해부학 적인 몸의 민감한 구조20에 형성입니다. 또한,이 방법은 유전자 조작 이나 둘 다 추가적인 임상 안전 함께 고민 하는, 줄기 세포의 바이러스 성 변환 방지 및 효능 우려15. 마지막으로, 마이크로-균 장치에 진보는 설치류21에 EBRT의 응용 프로그램을 사용할 수 있습니다.
이 문서에서 우리는 인간의 Ipsc 쥐에 주입 하 여 기형종 형성의 작은 동물 모델을 만드는 방법을 보여 줍니다. 우리 다음 선택적으로 이러한 종양 vivo에서 주위 조직에 최소한의 피해를 근절 하기 위해 EBRT를 적용 하는 방법을 보여 줍니다. 이 방법은 생물학 분자 및 펩 티 드의 조직 배달은 Psc의 유전자 조작의 대상 오프 효과 피하는 동안 PSC 파생 teratomas에 대 한 타겟된 치료를 제공 합니다. 조사 가능한 목적, 생물 발광 영상 (씨)를 통해 방사선 치료 종양 응답을 추적 취재 원 유전자와 줄기 세포 transduce 위해를 제공 합니다.
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Protocol
이 동물 실험 승인 하 고 제도적 검토 보드와 스탠포드 대학에서 실험실 동물 관리에 관리 패널에서 수행 했다.
1. Ipsc의 세포 배양
- 인간의 Ipsc lentiviral 프로그래밍 6 잘 플레이트 지하실 멤브레인 매트릭스 (예: matrigel, 라고도 매트릭스 hereon) 코팅에 의해 파생 된 성장.
- 매일 변경 풍부한 문화 매체와 Ipsc의 미디어 (참조 테이블의 자료) 37 ° C, 5% CO2배양.
- 일단 셀 도달 80-90% 합류 (약 매 4 일), 추가 재조합 세포 분리 효소의 1 mL ( 재료의 표참조) 당 잘 하 고 5 분 동안 37 ° C에서 품 어.
- 5 분 후 pipetting으로 우물에서 세포를 분리 하 고 15 mL 튜브에 그들을 전송 300 x g에서 원심.
- 원심, 후는 상쾌한 발음 고 풍부한 문화 매체로 셀 펠 릿 resuspend 1:1,000 희석에서 Y27632 억제 물 농축 ( 재료의 표참조).
- 천연된 셀의 셀 수를 수행 하 고 4 × 1052 x 105 의 밀도에서 매트릭스 코팅 6 잘 플레이트에 셀 replate.
2. 더블-퓨전 취재 원 유전자와 Ipsc의 변환
- Ipsc 루틴에 의하여 6 잘 플레이트에 통과 하 고 풍부한 문화 매체 추가 (참조 테이블의 재료) 포함 6 µ g/mL hexadimethrine 평범한 사람.
참고: 이상적인 식민지 크기는 200-400 셀/식민지 최고 변환 효율을 얻을. - 자동 비활성화 lentivirus 들고 반딧불 luciferase 및 녹색 형광 단백질 (FLuc eGFP) 남서 29 회전자 앙금 원심 분리에 의해 인간의 유비퀴틴 promotor-c 구동 50000 x g 2 h 4 ° c.에 대 한 집중
- 6 잘 플레이트 10의 감염 (MOI)의 다양성에 있는 Ipsc을 바이러스 집중을 추가 하 고 5% CO2에서 37 ° C에서 밤새 품 어.
참고: 감염의 다양성 (FACS) 스캔 정렬 형광 활성화 된 세포에 의해 분석 하는 단위체 형광 단백질의 식에 의해 결정 되었다. - 다음 날, 실 온에서 6 분에 대 한 300 x g 에서 iPSC 6 잘 플레이트의 원심 분리 하 여 바이러스를 제거 합니다.
- 매일 풍부한 문화 매체와 미디어를 변경 ( 재료의 표참조) 및 프로토콜에 의하여 통행. EGFP에 대 한 대략적인 변환 효율을 결정 하는 형광 현미경을 사용 합니다.
- 30-40%의 효율성은 FACS 정렬에 충분 합니다. 경우 30-40% 이상 익스프레스 eGFP eGFP 표현 hiPSCs FACS를 진행 합니다.
- Ex vivo FLuc 활동 확인을 잘 당 5000 세포의 밀도에 FACS에 의해 정렬 GFP를 표현 하는 셀 접시.
- 품 어 transduced 셀 및 비 불리고 세포 (부정적인 제어 될 것입니다) 생물 발광 기자와 프로브 D-소 (100 μmol/L) 6 헤 미 판 spectrofluorometer와 생물 발광을 측정.
3. Immunodeficient 쥐에서 기형종 형성 등 측면에서 Psc의 이식
- 재조합 세포 분리 효소 혼합 문화 (섹션 2 참조)에서 더블-퓨전 취재 원 유전자 (GFP FLuc)으로 불리고 인간의 Ipsc를 포함 하는 6-잘 접시 당 1 mL을 추가 하 고 5 분 동안 품 어.
- 잠복기, 후 피 펫 포부와 식에 의해 셀 분산. 문화 매체의 동일한 볼륨을 추가 하 고 4 분 250 x g 에서 원심.
- 원심 분리를 완료 한 후 표면에 뜨는 솔루션을 발음 하 고 행렬의 30 µ L에서 셀 펠 릿 resuspend 한 주입 전에 그것의 생존 능력을 유지 하기 위해 얼음에 놓습니다. hemocytometer를 사용 하 여 1 x 106 셀의 수확을 확인 합니다.
- 더블-퓨전 리포터 유전자 transfected 세포를 활용 하 여, 매트릭스의 30 µ L에서 (2 절)에서 더블-긍정적인 FACS 세포를 일시 중단 합니다.
- 8-10 주 athymic 누드 마우스 1 L/min 산소 2 %isoflurance 사용 하 여 마 취를 유발 하 고 산소의 1 L/min로 유지 보수 2 %isoflurane 날짜를 사용 하 여.
- 셀/매트릭스 혼합물을 주사 28.5 G 주사기를 사용 하 여 총 5 x 103 5 x 106 셀 (주입 당 약 100 ul)를의 주사에 대 한 목표 측면에서 피하 공간으로 (참조 테이블의 재료) 서 스 펜 션.
- 연장된 기간 및 큰 종양의 성장 예측에 대 한 마우스를 유지 하려는 경우 더 꼬리 사출 사이트를 고려 하십시오.
- 마 취 동물 외래까지 온수 패드에 복구할 수 있습니다 (일반적으로 < 1 h) 호흡 속도의 모니터링, 외래까지 발가락의 색깔을 피부.
4. 생물 발광 기형종 성장 및 세포 생존을 평가 하기 위해 이식된 세포의 (BLI) 이미징
- 접종 후 원하는 timepoints에 375 mg/kg는 쥐로 기자 프로브 D 소의의 복 (IP) 주사를 수행 합니다.
- IP 주사, 이미지는 생물 발광 후 10 분 30 분 1 분 수집 윈도우를 사용 하 여 5 분 간격에 대 한 마 취 동물 (3.5에 설명 된 단계로 수행 됨)에 신호.
참고: 주간 이미지 인수 하는 것이 좋습니다. 마 취 동안 유지 영상 제공 함으로써 isoflurane 통해 코 콘 흡입. - 데이터 분석에 대 한 관심 (ROI) 영역 씨 신호에 그리고, 다음, 계량 단위로 스테라디안 (/sr 광자/s/cm2) 당 평방 센티미터 당 초당 최대 광자의 방출에 수집 시간에 대 한 정상화.
5. 기형종 방사선 전 임상 이미지 기반 Irradiator (그림 1)를 사용 하 여
- 100% 산소 1 L/min의 유량에서 isoflurane 2%를 사용 하 여 최저의 상자에 마우스 anesthetize 마우스는 완전히 마 취 후 이미지 기반 사전 임상 irradiator의 침대에 전송 ( 재료의 표참조). 2 %isoflurane 마 취 유지 지속적으로 통해 코 콘.
- 400 프로젝션 이미지 40 kVp, 2 mA x 선 빔를 사용 하 여 360 ° 이상으로 마이크로-CT 이미지를 수집 하 고 그 0.2 m m의 등방성 픽셀 크기와 체적 이미지로 재구성.
- RT_Image 소프트웨어 패키지 (http://rtimage.sourceforge.net/)를 사용 하 여 마이크로-CT 이미지를 사용 하 여 방사선 치료를 계획 하 고 치료를 수행 합니다.
참고: 두 개의 225 kVp x 선 광선, 마우스의 나머지의 표면 굽 도리 널 고 살려주는 기본 내장 하면서 표면 대상 기형종 통과 지향 사용 된 치료 계획에 의하여 이루어져 있다. 광선에 대 한 노출 시간이 대상 종양의 센터에서 복용량은 6 Gy를 분기별 시스템 교정 데이터에 따라 조정 됩니다. - 대상 종양에 18 Gy의 총을 제공 하는 3 연속적인 일에 처리 과정을 반복 합니다.
- 동물 들 표준 치료 후 유지 합니다.
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Representative Results
일반적으로 주입 된 쥐 씨 (그림 2)를 영상으로 확인 4-8 주 후 기형종 성장 형성을 시연할 예정 이다. 종양은 luciferase 신호 (그림 2)에서 크게 감소의 결과로 주어진 셀 납품 후 1 개월 18 Gy의 누적 복용량 방사선 때 극적으로 축소 됩니다. 중요 한 것은, 정상 조직의 조사 사이트에서 5mm를 가져온 어떤 상당한 피해 (그림 3)에 표시 되지 않습니다.
그림 1: EBRT와 종양의 치료에 대 한 프로토콜의 도식. (A) 마 취 동물에 irradiator에 놓이고 움직일. (B) 스카우트 이미지 기형종 타겟된 치료에 대 한 지역화를 만들어집니다. (C) RT_Image 소프트웨어 패키지를 사용 하 여 x 선 빔 선택 된 종양을 대상으로 정렬 됩니다. 방사선 조사, 이전 동물과 겨냥 틀의 위치를 확인 합니다. (D) A 총 6 Gy의 방사선 조사 이벤트22당 종양 대상에 전달 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 결과 선택적으로 방사선으로 치료 될 수 있는 상당한 종양에서 세포의 성공적인 시드. (A) 대표 씨 (오른쪽) 치료와 치료 (왼쪽된) teratomas 표시 됩니다. 총 1 x 106 인간의 Psc constitutively FLuc/eGFP 표현 immunodeficient 마우스의 등 쪽 두 측면을 주입 했다. Unirradiated 측면에서 성장을 계속 하 고, 하는 동안 방사능된 측 luciferase 신호에 있는 쇠퇴에 의해 표시 된 것 처럼 극적으로 긴축 했다. (B)이 선 그래프의 방사능 대 unirradiated PSC 파생 된 종양에 luciferase 신호 감소를 보여 줍니다. (C) 변화 시간이 지남에 teratomas의 vivo에서 캘리퍼스 측정. Teratomas 비 반구 반구 teratomas 크기가 감소 하는 반면 시간이 지남에, 크기에서 증가 했다. (왼쪽) 치료와 치료 PSC 파생 종양 (오른쪽)의 (D) A 총 조직학 방사선2218 Gy의 총 후 크기에 표시 된 감소를 보여줍니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 간, 내장, 근육 등 주변 조직에 피해를 최소화에 배달 결과 대상으로. 주변 조직 세포 확산의 보존과 세포 노화 및 apoptosis의 부재를 포함 한 방사선 손상의 흔적이 있다. 조직 5 mm 14 일 postirradiation에서 조사 사이트에서 샘플을 했다. (A) 되며 & 오신 얼룩에서는 인접 조직의 정상적인 아키텍처를 보여 줍니다. (B) Ki67 얼룩 (에 표시 된 아쿠아) 간, 장, 그리고 근육 세포에서 세포질 확산 유지 됩니다 나타냅니다. 핵과 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI), 파란색으로 표시 된 counterstained는. (C) A β-galactosidase 노화 시험 세포 노화 (즉, 녹색 얼룩의 부재)의 증거를 보여줍니다. (D) 터미널 deoxynucleotidyl 전이 효소 (TdT) dUTP 닉-엔드 라벨 (TUNEL) 아무 apoptosis (즉, 핵에 빨간 얼룩의 부재)를 보여줍니다. 핵은 DAPI, 블루22에 표시와 함께 counterstained. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
전 임상 데이터와 "줄기 세포 관광"의 피해자에서 일화 적인 사례 teratomas를 개발의 위험 PSC 치료23와 관련 된 심각한 단점이 되는지 확인 합니다. 방지 하 고 치료 하는 줄기 세포 치료와 관련 된 종양 약 위험 주의 접근의 발달은, 그러므로, 재생 줄기 세포 치료의 임상 번역 촉진에 중요 한 단계. 이 문서에서 우리는 PSC 관련 teratomas EBRT를 사용 하 여 마우스 모델에서의 치료 대상으로 하는 방법을 설명 하 고 씨 이미지를 사용 하 여 조사 종양의 동적 위축 보여주었다.
우리 인간의 Ipsc 활용 lentivirus 메서드를 프로그래밍 하 여 만든 고 정리 teratomas vivo에서 형성 누드 마우스 모델에 주입. 누드 마우스를 사용 하 여 셀의 간 종 주입 초기 면역성 거부를 방지합니다. 면역 결핍 쥐를 사용 하 여 potentiates tumorigenic 잠재력, 동안 동일한 프로토콜 immunocompetent 쥐 murine Psc를 활용 하 여 적용할 수 있습니다. 우리는 더 활성화 직렬 생물 발광 영상 전달된 세포 vivo에서의 더블-퓨전 취재 원 유전자와이 문서에 사용 된 Psc 불리고. 리포터 유전자 영상 사용 검 시 및 크기 또는 종양24의 성장을 추적 하는 조직학에 의존 하지 않고도 PSC 또는 vivo에서 PSC 유도체의 직렬 추적을 사용할 수 있습니다. 이전 연구는 라스 신호 강도와 종양 크기25,26사이의 상관 관계를 확인 했습니다. 더블-퓨전 취재 원 유전자와 Psc 라벨 종양 부담 부 량, 검 시 등의 다른 방법에 찬성 하 여 무시 될 수 있는 단계는 선택적입니다.
방사선 프로토콜에 대 한 수정에 대 한 임상 종양 치료에 대 한 다른 복용량을 적용할 수 있습니다. 이 문서의 목적을 위해 우리는 18 Gy 6 Gy 이상 3 연속적인 일을 주어진의 3 개의 복용량에서 관리와 함께 대표적인 동물을 치료 하 선출 했습니다. 하나의 설정에서 모든 18 Gy를 관리 하지의 장점은 방사선의 낮은 복용량 간격 떨어져 제한 인접 한 조직 손상과 사망률 EBRT를 보조. 환자 임상 설정에서 종종 EBRT를 받고이 같은 이유로27에 대 한 많은 다른 치료를 통해 간격 낮은 복용량을 받을. 프로토콜의 다른 단계는 설명 된 대로 따라야 한다.
방사선을 통해 종양 절제 수술 접근 하기 어려운 지역에 배달 종종 줄기 세포 유래 teratomas에 대 한 유망 치료 전략 이다. 이 연구는 EBRT PSC 파생 teratomas의 치료를 위한 효과적인 도구를 구성 하는 증거를 제공 한다. 이 간단한 방법을 주제, 방사선 광속의 시리즈 인접 조직20를 피하는 동안 복용량을 원하는 목표를 비추는 처방 수 후의 고해상도 CT 이미지의 인수를 요구 한다. 이 연구에서 두 접선 광선 피하 PSC 파생 기형종 contralateral 제어 기형종으로 주변 조직을 살려주는 동안 치료 하 사용 되었다. EBRT 종양 치료는 모두 효율적이 고 강력한, 고 임상 가능 하 고, 작은 분자, 항 체, 그리고 종양의 형성을 방지 하기 위해 사전 분리에 의존 하는 방법을 달리.
이 접근 방식에 상당한 이점이 있다. 첫째, 외부 빔 방사선은 세균 세포 종양19를 포함 한 많은 종양 종류의 치료에 사용 된 종양 치료의 임상 허용된 적임. 다른 치료 전략 달리 EBRT 이전 또는 셀 배달15동안 줄기 세포의 기능적 속성을 수정 하지 않습니다. 또한, EBRT 모드와 방해 하지 않는다 또는 셀 수 전달 하 고, 따라서, 그들의 잠재적인 효 험에 미치는 영향을 최소화 했다. 타겟된 조사는 또한 화학요법에 비해 다른 장기에 오프 대상 손상을 감소 시킨다. 마지막으로, 전처리 전략에 EBRT는 종양 형성 시에 의존 수 있는 "안전 장치" 옵션을 제공 합니다. 그럼에도 불구 하 고, 치료 줄기 세포 관련 기형종에 EBRT의 미래 도입에 한계가 있다. 첫째, 과정 반복된 영상 및 치료, 임상 관점에서 성가신 될 수 있는 필요 합니다. 또한, 줄기 세포 배달의 위치에 따라이 방법을 증명할 수 있습니다 위험이 높은 radiosensitive 조직 빔 경로 있는 경우. 마지막으로, 줄기 세포 주입 및 여러 장기에 양식 teratomas 사이트 넘어 체계적으로 보급, 그것은 중요 한 환자 사망률 없이이 전략을 적용 하기 어려운 될 수 있습니다.
결론적으로, 우리 마우스 모델에서 PSC 파생 teratomas를 만드는 모델을 제공 하 고 마이크로-CT 방사선 종양 짐의 타겟된 감소를 가능 하 게 하는 신뢰할 수 있는 방법 설명. 이러한 메서드를 다른 기형종 치료 전략과 EBRT의 치료 효능을 비교 하거나 종양의 근절에 EBRT의 가치를 평가 하 사용할 수 있습니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
저자는 국립 연구소의 건강 R01 HL134830 (PKN), K08 HL135343 (KS), 및 5F32HL134221를 감사 하 고 싶습니다 (JWR); 하 워드 휴즈 의학 연구소 (ASL); 그리고 그들의 지원에 대 한 스탠포드 심장 혈관 연구소 (ASL).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Induced Pluripotent Stem Cell Control Line | Stanford University | Nguyen Lab | Cell culture of iPSC |
| Corning matrigel basement membrane matrix 354234 | Fisher Scientific | CB-40234 | Cell culture of iPSC |
| Essential 8 culture medium | ATCC-The global bioresource center | 30-2203 | Cell culture of iPSC |
| Tryple E | Gibco | 12605-036 | Cell culture of iPSC |
| Y27632 inhibitor 2 HCL (ROCK Inhibitor) | Fisher Scientific | S104950MG | Cell culture of iPSC |
| Lentivirus | Cyagen | P170721-1001cjn | Transduction of iPSC with double fusion reporter gene |
| Polyrbrene Infection/Transfection Reagent | Millipore Sigma | TR-1003-G | Transduction of iPSC with double fusion reporter gene |
| Fluc-eGFP reporter gene driven by ubiquitin promoter | Stanford University | Sam Gambhir lab | Transduction of iPSC with double fusion reporter gene |
| D-luciferin | Perkin Elmer | 122799 | Transduction of iPSC with double fusion reporter gene and BLI |
| Flow cytometer (BD FACSARIA III) | BD Biosciences | FACSAria | Transduction of iPSC with double fusion reporter gene |
| microplate spectrofluorometer (Glomax Navigator System) | Promega Bio Systems, Sunnyvale, CA | GM2000 | Transduction of iPSC with double fusion reporter gene |
| Xenogen IVIS 200 | Perkin Elmer | 124262 | BLI |
| Isoflurane | Sigma-Aldrich | CDS019936 | irradiation |
| X-Rad SmART image-guided irradiator | Precision X-ray Inc., North Branford, CT | X-Rad SmART | irradiation |
| RT_Image software package | Stanford University (http://rtimage.sourceforge.net/) | RT_Image v0.2β | Irradiation |
References
- Sallam, K., Wu, J. C. Embryonic stem cell biology: insights from molecular imaging. Methods in Molecular Biology. 660, 185-199 (2010).
- Lee, A. S., Tang, C., Rao, M. S., Weissman, I. L., Wu, J. C. Tumorigenicity as a clinical hurdle for pluripotent stem cell therapies. Nature Medicine. 19 (8), 998-1004 (2013).
- Amariglio, N., et al. Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient. PLOS Medicine. 6 (2), e1000029 (2009).
- Kuriyan, A. E., et al. Vision Loss after Intravitreal Injection of Autologous "Stem Cells" for AMD. The New England Journal of Medicine. 376 (11), 1047-1053 (2017).
- Berkowitz, A. L., et al. Glioproliferative Lesion of the Spinal Cord as a Complication of "Stem-Cell Tourism". The New England Journal of Medicine. 375, 196-198 (2016).
- Zhang, W. Y., de Almeida, P. E., Wu, J. C. Teratoma formation: A tool for monitoring pluripotency in stem cell research. StemBook. , The Stem Cell Research Community. (2012).
- Scott, C. T., Magnus, D. Wrongful termination: lessons from the Geron clinical trial. STEM CELLS Translational Medicine. 3 (12), 1398-1401 (2014).
- Strauss, S. Geron trial resumes, but standards for stem cell trials remain elusive. Nature Biotechnology. 28 (10), 989-990 (2010).
- Coghlan, A. Unexpected mutations put stem cell trial on hold. New Scientist. 227 (3033), 9 (2015).
- Tang, C., et al. An antibody against SSEA-5 glycan on human pluripotent stem cells enables removal of teratoma-forming cells. Nature Biotechnology. 29 (9), 829-834 (2011).
- Lee, A. S., et al. Effects of cell number on teratoma formation by human embryonic stem cells. Cell Cycle. 8 (16), 2608-2612 (2009).
- Tano, K., et al. A novel in vitro method for detecting undifferentiated human pluripotent stem cells as impurities in cell therapy products using a highly efficient culture system. PLoS One. 9 (10), e110496 (2014).
- Kuroda, T., et al. Highly sensitive in vitro methods for detection of residual undifferentiated cells in retinal pigment epithelial cells derived from human iPS cells. PLoS One. 7 (5), e37342 (2012).
- Cao, F., et al. In vivo visualization of embryonic stem cell survival, proliferation, and migration after cardiac delivery. Circulation. 113 (7), 1005-1014 (2006).
- Cao, F., et al. Molecular imaging of embryonic stem cell misbehavior and suicide gene ablation. Cloning Stem Cells. 9 (1), 107-117 (2007).
- Kotini, A. G., de Stanchina, E., Themeli, M., Sadelain, M., Papapetrou, E. P. Escape Mutations, Ganciclovir Resistance, and Teratoma Formation in Human iPSCs Expressing an HSVtk Suicide Gene. Molecular Therapy - Nucleic Acids. 5, e284 (2016).
- Smith, A. J., et al. Apoptotic susceptibility to DNA damage of pluripotent stem cells facilitates pharmacologic purging of teratoma risk. STEM CELLS Translational Medicine. 1 (10), 709-718 (2012).
- Choo, A. B., et al. Selection against undifferentiated human embryonic stem cells by a cytotoxic antibody recognizing podocalyxin-like protein-1. Stem Cells. 26 (6), 1454-1463 (2008).
- Yorke, E., Gelblum, D., Ford, E. Patient safety in external beam radiation therapy. American Journal of Roentgenology. 196 (4), 768-772 (2011).
- Zhou, H., et al. Development of a micro-computed tomography-based image-guided conformal radiotherapy system for small animals. International Journal of Radiation Oncology • Biology • Physics. 78 (1), 297-305 (2010).
- Slatkin, D. N., Spanne, P., Dilmanian, F. A., Gebbers, J. O., Laissue, J. A. Subacute neuropathological effects of microplanar beams of x-rays from a synchrotron wiggler. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 92 (19), 8783-8787 (1995).
- Lee, A. S., et al. Brief Report: External Beam Radiation Therapy for the Treatment of Human Pluripotent Stem Cell-Derived Teratomas. Stem Cells. 35 (8), 1994-2000 (2017).
- Berkowitz, A. L., et al. Glioproliferative Lesion of the Spinal Cord as a Complication of "Stem-Cell Tourism". The New England Journal of Medicine. 375 (2), 196-198 (2016).
- Swijnenburg, R. J., et al. In vivo imaging of embryonic stem cells reveals patterns of survival and immune rejection following transplantation. Stem Cells and Development. 17 (6), 1023-1029 (2008).
- Cao, F., et al. Noninvasive de novo imaging of human embryonic stem cell-derived teratoma formation. Cancer Research. 69 (7), 2709-2713 (2009).
- Priddle, H., et al. Bioluminescence imaging of human embryonic stem cells transplanted in vivo in murine and chick models. Cloning and Stem Cells. 11 (2), 259-267 (2009).
- Dale, R. G.
