Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

Luminofor är placerad delen Formation i olika konformationer av bovint Serum Albumin genom bindning av Gold(III)

Published: August 31, 2018 doi: 10.3791/58141
Automatic Translation
1, 1
1Department of Physics and Optical Science, Center for Biomedical Engineering & Science, University of North Carolina

Summary

Protokollen för att studera bindningen av guld katjoner (Au(III)) till olika konformationer av bovint serumalbumin (BSA) som liksom för att karaktärisera den konfirmerande beroende unika BSA-Au fluorescensen presenteras.

Abstract

Syftet med protokoll som presenteras är att studera processen för Au(III) bindning till BSA, ger konformation förändring-inducerad röd fluorescens (λem = 640 nm) av BSA-Au(III) komplex. Metoden justerar pH för att visa att uppkomsten av den röda fluorescensen är korrelerad med de pH-inducerad jämvikt övergångarna av de BSA konformationer. Röd fluorescerande BSA-Au(III) komplex kan endast bildas med en justering av pH vid eller över 9.7, vilket motsvarar ”A-formulär” konformation av BSA. I protokollet att justera BSA att Au molar förhållandet och övervaka tid-processen för Au(III) bindande beskrivs. Det minsta antalet Au(III) per BSA, att producera den röd fluorescensen, är mindre än sju. Vi beskriver steg för att illustrera förekomsten av flera Au(III) bindningsställen i BSA protokoll. Första, genom att lägga till koppar (Cu(II)) eller nickel (Ni(II)) kationer följt av Au(III), denna metod avslöjar ett bindningsställe för Au(III) som inte är röda fluorophore. För det andra, genom att ändra BSA thiol tak agenter, en annan nonfluorophore-bildar Au(III) bindningsställe avslöjas. För det tredje, ändra BSA konformation genom klyva och tak av disulfide obligationer, möjliga Au(III) bindande industriområden är illustrerade. Protokollet beskrivs, för att kontrollera BSA konformationer och Au(III) bindande, kan tillämpas allmänt för att studera samspelet mellan andra proteiner och metall katjoner.

Introduction

En BSA-Au förening uppvisar en ultraviolett (UV)-retbara röd fluorescens, med anmärkningsvärd stokes Skift, ursprungligen har syntetiserats av Xie et al. 1. den unika och stabil röd fluorescensen kan hitta olika applikationer inom bland annat avkänning2,3,4, imaging5,6,7eller nanomedicin8 ,9,10,11,12,13. Denna förening har studerats ingående av många forskare inom nanovetenskap i senaste åren14,15,16. BSA-Au föreningen har tolkats som Au25 nanoclusters. Målet med denna metod är att undersöka denna förening i detalj och att förstå ursprunget till den röd fluorescensen. Genom att följa metoden presenteras, kan förekomsten av flera Au bindande platser, och ursprunget till fluorescens, alternativ till den enda plats kärnbildning av Au25 nanoclusters, illustreras. Samma tillvägagångssätt kan användas för att studera hur andra proteiner17,18,19 komplex med Au(III) kan ändra sina inneboende fluorescerande egenskaper.

Syntesen av röd fluorescerande BSA-Au föreningen kräver en smala kontroll av molar förhållandena av BSA att Au (BSA:Au) att maximera intensiteten av fluorescensen och placeringen av topparna i excitation-utsläpp karta (EEM)20. Det kan visas att det finns flera bindningsställen för Au(III) att binda, inklusive asparagin fragment (eller Asp fragment, de fyra första aminosyra resterna vid N-terminalen av BSA)21,22. De 34th aminosyran i BSA (Cys-34) visas också att samordna Au(III) och deltar i mekanismen av den röda fluorescence([Cys34-capped-BSA]-Au(III))20. Klyva alla Cys-Cys disulfide obligationer och tak alla tioler, röd fluorescens är inte producerade ([all-thiol-capped-BSA]-Au(III)). Detta indikerar behovet av Cys-Cys disulfide obligationer som webbplatsen Au(III) bindande för att producera den röd fluorescensen.

Protein kemi tekniker har inte använts att studera de BSA-Au(III) komplex i nano-science gemenskapen. Dock skulle det vara värdefullt att anställa dessa tekniker för att förstå vissa aspekter av dessa komplex, samt för att få detaljerad förståelse för de Au(III) bindningsställen i BSA. Denna artikel är avsedd att visa några av dessa tekniker.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Sammanfattning av BSA-Au(III) komplex

  1. Lös upp 25 mg av BSA i 1 mL högpresterande vätskekromatografi (HPLC) grade vatten i en 5 mL injektionsflaska av reaktion.
    Obs: Lösningen ska visas tydligt.
  2. Lös upp guld (III) klorid trihydrate (chloroauric syra) till en koncentration av 5 mM i vatten av HPLC-kvalitet.
    Obs: Lösningen bör visas gula. Chloroauric syra lösning som beretts vid denna koncentration kommer att resultera i en BSA Au-förhållandet 1:13.
    1. Alternativt kan bereda en lösning av chloroauric syra med en koncentration av någonstans mellan 0.38 mM (BSA:Au = 1:1) till 20 mM (BSA:Au = 1:50) i HPLC grad vatten.
      Obs: Olika nyckeltal av BSA att guld kommer att resultera i drastiskt annorlunda röd fluorescens mönster av excitation-utsläpp kartan.
  3. Placera injektionsflaskan reaktion av BSA i 37 ° C vattenbad och rör kraftigt på 750 varv med en magnetisk omrörare.
  4. Omedelbart efter omrörningen börjar, tillsätt 1 mL av chloroauric syra till lösningen. Färgen på lösningen bör förvandla från klart till gul.
  5. Rör blandningen i 2 min vid 37 ° C och 750 rpm med en magnetomrörare.
  6. I reaktion flaskan, tillsätt 100 μL 1 M NaOH till lösning att ta pH till 12.
    Obs: Omedelbart efter NaOH läggs, bör lösningen mörkna något till en gul-brun och sedan vända tillbaka till gul.
  7. Fortsätt att röra vid 750 rpm för 2 h och vid 37 ° C. Lösningen bör sakta ändra från gul till en mörk gul/brun färg. Denna färgförändring indikerar bildandet av det röda fluorescerande BSA-Au(III) komplex.
  8. Låt den stå i rumstemperatur i 2 dagar, och lösningen kommer att fortsätta att mörkna till en amber brown och fluorescensintensiteten kommer att öka.
    1. Alternativt låta provet Fortsätt att röra vid 37 ° C i 12 mer h som färgen på lösningen utvecklas till ett orangefärgat brun.

2. Sammanfattning av BSA-Cu(II)-Au(III)

  1. Lös upp 25 mg av BSA i 1 mL vatten av HPLC-kvalitet. Lösningen ska visas tydligt.
  2. Lös upp koppar (II) klorid dihydrat i vatten av HPLC-kvalitet till en koncentration av 5 mM. Lösningen bör visas ljus blå.
  3. Tillsätt 1 mL BSA vattenlösningen till en injektionsflaska med 5 mL i reaktion och placera i vattenbad vid 37 ° C. Rör blandningen på 750 rpm.
  4. Omedelbart tillsätta 0,5 mL kopparlösning (II) klorid dihydrat till injektionsflaskan reaktion och blanda i 2 min. Lösningen förblir ljus blå.
  5. Tillsätt 75 μl av 1 M NaOH till pH 12 och låt blandas i 2 h. Lösningen blir lila.
  6. Lös chloroauric syra i vatten av HPLC-kvalitet till en koncentration av 5 mM.
  7. Tillsätt 0,5 mL av vattenhaltigt chloroauric syra till injektionsflaskan reaktion och justera pH tillbaka till 12 använda 1 M NaOH.
  8. Rör reaktionsblandningen för 2 h.
    Obs: Lösningen bör utvecklas till en brun färg.

3. Sammanfattning av BSA-Ni(II)-Au(III)

  1. Lös upp 25 mg av BSA i 1 mL vatten av HPLC-kvalitet. Lösningen ska visas tydligt.
  2. Lös upp nickel (II) klorid hexahydrat i vatten av HPLC-kvalitet till en koncentration av 5 mM. Lösningen bör visas ljus grön.
  3. Tillsätt 1 mL BSA vattenlösningen till en injektionsflaska med 5 mL i reaktion och placera i vattenbad på 37 oC. rör blandningen på 750 rpm.
  4. Tillsätt 0,5 mL av nickel (II) klorid hexahydrat lösningen omedelbart i reaktion injektionsflaskan och blanda i 2 min.
    Obs: Lösningen förblir ljus grön.
  5. Tillsätt 75 μl av 1 M NaOH till pH 12 och låt blandas i 2 h.
    Obs: Lösningen blir mörkt gul.
  6. Lös chloroauric syra i vatten av HPLC-kvalitet till en koncentration av 5 mM.
  7. Tillsätt 0,5 mL av vattenhaltigt chloroauric syra till injektionsflaskan reaktion och justera pH tillbaka till 12.
  8. Rör reaktionsblandningen för 2 h.
    Obs: Lösningen bör utvecklas till en brun färg.

4. Sammanfattning av [Cys34-capped-BSA]-Au(III)

  1. Lös 2 mg N-ethylmaleimide (NEM) i 1 mL av fosfatbuffrad saltlösning (PBS, pH 7,4).
  2. Lös 2 mg BSA i 1 mL PBS-NEM lösning.
  3. Överför lösningen till en injektionsflaska med 5 mL i reaktion och rör vid 20 ° C på 500 rpm för 1 h.
  4. Dialyze lösningen med 12 kDa dialys slangar i 500 mL PBS, omrörning vid 50 rpm med en magnetisk omrörare över natten att ta bort oreagerad NEM.
  5. Lös chloroauric syra i PBS till en koncentration av 0,4 mM.
    Obs: Lösningen kommer att vara en svag gul.
  6. Överföring reaktion injektionsflaskan till ett vattenbad vid 37 ° C. Rör vid 750 rpm.
  7. Omedelbart tillsätta 1 mL chloroauric syra lösning till injektionsflaskan reaktion och tillåta för att blanda i 2 min.
  8. Tillsätt 75 μl av 1 M NaOH till injektionsflaskan reaktion till pH 12 och låt blandas i 2 h.

5. Sammanfattning av [all-thiol-capped-BSA]-Au(III)

  1. Bered en lösning av 2 M urea och 50 mM ammoniumbikarbonat (NH4HCO3, pH 8,0) i vatten av HPLC-kvalitet.
  2. Lös upp BSA 3,3 mg i 1 mL av ovanstående lösning och överföring till en injektionsflaska med 5 mL i reaktion.
  3. Göra en stamlösning av 0,25 M tris(2-carboxyethyl) fosfin (TCEP) genom upplösning 62,5 mg TCEP i 1 mL HPLC vatten.
  4. Tillsätt stamlösning av TCEP till reaktion injektionsflaskan tills den slutliga koncentrationen av TCEP är 8 mM.
  5. Inkubera lösningen i ett vattenbad för 1 h vid 50 ° C. Rör på 500 varv med en magnetisk omrörare.
  6. Låt lösningen svalna helt i rumstemperatur.
  7. Förbereda en stamlösning av 100 mM NEM genom upplösning NEM 12,5 mg i 1 mL vatten av HPLC-kvalitet.
  8. Tillsätt stamlösning av NEM till reaktion injektionsflaskan tills NEM slutliga koncentration är 16 mM.
  9. Låt lösningen att kombinera för 2 h vid 20 ° C. Rör på 500 rpm.
  10. Dialyze om lösningen med en 12 kDa dialys slangar, omrörning lösningen vid 50 rpm med en magnetisk omrörare övernattning i 500 mL 50 mM NH4HCO3 ta bort överflödig TCEP, NEM och urea.
  11. Flytta injektionsflaskan reaktion till ett vattenbad vid 37 ° C och rör vid 750 rpm.
  12. Lös chloroauric syra i HPLC grade vatten till en koncentration på 0,66 mM.
  13. Omedelbart tillsätta 1 mL chloroauric syra lösning till injektionsflaskan reaktion och tillåta för att blanda i 2 min.
  14. Tillsätt 1 M NaOH tills pH-värdet i lösningen är 12 och låt lösningen fortsätter att blanda för 2 h.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Från fluorescensen av BSA-Au(III) komplex, har det observerats att omvandlingen av den inneboende blå fluorescensen av BSA (λem = 400 nm) till röd fluorescens (λem = 640 nm) inträffar vid ungefär pH 9,7 genom en equilibrium övergång (figur 1). EEM av BSA-Au(III) på olika BSA till Au molar nyckeltal visas i figur 2, och dessa data visar hur förändra molar förhållandet ger samma utsläpp våglängd vid olika excitation våglängder. Cu(II), Ni(II) och Au(III) binda kompetitivt till en känd plats (Asp fragment) i BSA (figur 3). Cys34-capped BSA visar en förändring i EEM peak mönster vid Au(III) bindning, och dessa resultat visar hur ändring av specifika bindningsställen förändrar fluorescens mönster. All-thiol-capped BSA visar ingen röd fluorescens och avslöjar Cys-Cys disulfide obligationer som möjligt bindningsställen att producera röda fluorophore (figur 4).

Figure 1
Figur 1. Fluorescens av BSA-Au(III) och den konfirmerande inducerad förändringen från blå till red. (A) den absorbans och fluorescens (λex = 365 nm) av BSA-Au(III). (B) röd fluorescens varelser att dyka upp på runt pH 9.7, där konformation av BSA ändras. (C) blå fluorescens sönderfaller som röd fluorescens framträder. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2. Baserat på-metric excitation-karta (EEM) Emissionsmätningar av BSA-Au(III). EEM av BSA-Au(III) komplexa syntetiseras med hjälp av standardprotokollet medan du justerar förhållandet mellan BSA gold. (A) BSA vid pH 12, (B) BSA:Au = 1:1, (C) BSA:Au = 1:7, (D) BSA:Au = 1:13, (E) BSA:Au = 1:26, (F) BSA:Au = 1:30, (G) BSA:Au = 1:40, (H) BSA:Au = 1:52. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3. EEM av BSA-Cu(II)/Ni(II)-Au(III) komplex. Magnetisering-utsläpp kartor (excitation: 290-500 nm, emission: 300-850 nm) av BSA komplexförening med Cu(II)/Ni(II) vid pH 12 (A och B), BSA komplexförening med Cu(II)/Ni(II) och sedan med Au(III) vid pH 12 (C och D) och absorption Spectra jämföra BSA, BSA-Au, BSA-Cu(II)/Ni(II) och BSA-Cu(II)/Ni(II)-Au(III) (E och F). Kurva 4 jämförs med överlagring av kurvor 2 och 3. Denna siffra har ändrats från Dixon, J. M. & Egusa, S. J. ändr. Chem. Soc. 140 2265-2271, (2018). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 4
Figur 4. EEM av Cys34 tak och alla tioler utjämnade. EEM (excitation: 300-500 nm, emission: 300-700 nm) av (A) Cys34-capped BSA reagerade med Au vid pH 12. (B), alla Cys-Cys disulfide obligationer i BSA var klyvs och sedan all-thiol-capped-BSA var reagerade med Au vid pH 12. Denna siffra har ändrats från Dixon, J. M. & Egusa, S. J. ändr. Chem. Soc. 140 2265-2271, (2018). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De BSA-Au(III) föreningarna beredd vid pH 12 uppvisar röd fluorescens på emissionsvåglängden λem= 640 nm när glada med ultraviolett (UV) ljus λex= 365 nm (figur 1A). Uppkomsten av röd fluorescens är en långsam process och tar ett par dagar i rumstemperatur att öka till en maximal intensitet. Kör reaktionen vid 37 ° C kommer att ge de optimala resultat, även om högre temperatur kan användas för att producera den röd fluorescensen snabbare. Irreversibel nedbrytning av protein kan uppstå vid temperaturer över 45 ° C23. Justering av pH så att BSA förvandlas till dess äldre (pH > 10) konformation21 (”A-formulär”) är kritiska för röd fluorescens; pH justeras fint från neutral till grundläggande att fastställa tröskeln till förekomsten av den röd fluorescensen (figur 1B, C). För maximala röd fluorescerande intensitet justeras pH ovanför 11. För röd fluorescens justeras pH bortom 11, trots extremt basic (pH > 13) villkor kan denaturera BSA och orsaka röd fluorescens att försvinna.

Varierande det stökiometriska förhållandet av BSA och Au kan illustrera bindningen av Au till BSA. Fluorescens spektra av BSA-Au(III) föreningar varierar beroende på de stökiometriska förhållanden för BSA att Au (figur 2). Som BSA gold förhållande justeras till 1:26, maximalt i röda fluorescensintensiteten observeras på λex= 500 nm. Däremot, som förhållandet BSA:gold justeras till 1:7, röd fluorescens observeras primärt på λex= 365 nm. Ingen röd fluorescens kan upptäckas i ett förhållande av BSA att Au mindre än 1:7 eller högre 1:52. Det minsta antalet guld katjoner krävs för att producera röda fluorescens är mindre än 7 och mer än 1, och det maximala antalet för förlusten i röd fluorescens är större än 52 (figur 2B, C). Dessutom sker minskningen av alla ovan nämnda prover under överskott natriumborhydrid, klarlägga att alla prover som fortfarande innehåller katjoniska Au(III). Tillägg av överskjutande belopp av guld än 20 mM kan dessutom orsaka lösningen blir för surt och denaturera proteinet. Om protein denaturering uppstår p.g.a. hög surhetsgrad, minska koncentrationen av BSA och Au relativt att medla problemet.

Konkurrenskraftiga bindningen av Au och andra metallkatjoner till BSA kan illustrera bindningsställen i BSA. Det är känt att både Cu(II) och Ni(II) binder till Asp fragment vid N-terminalen av BSA24,25,26,27. Genom tillägg av Cu(II), ett starkt bindemedel till Asp-fragmentet, följt av tillägg av Au(III), absorbans spektra av BSA-Cu(II)-Au(III) och absorbansen spektra av BSA-Au(III) och BSA-Cu(II) desamma - som visar att guld och koppar inte tävla om samma bindningsstället på Asp-fragmentet (figur 3 c). Ni(II) binder svagt till Asp-fragmentet och därför Au(III) konkurrerar med Ni(II) som guld är adderat; Det har observerats att absorbansen spektra av BSA-Ni(II) och BSA-Au(III) inte korrelerar med BSA-Ni(II)-Au(III) (figur 3F). Genom ovanstående protokollet, kan en Visa hur Au(III) binder till kända bindningsstället för BSA. Denna teknik kräver också justeringen av pH över 11 och tekniken ändras genom att lägga till två gånger koncentrationen till BSA men på halv volym, således detta ska utföras vid låg BSA till Au nyckeltal att upprätthålla protein konformation.

Modifiera cystein rester i BSA kan vidare belysa de Au bindningsställen. Guld är känd för att ha en hög affinitet för thiol28 och BSA äger en surface åtkomliga tiol (Cys34)21. Genom att blockera detta tiol, kan sekundära bindningsställen belysas. Blockering av denna cystein utförs före tillägg av Au(III) till provet och visar en förändrad fluorescens mönster av BSA-Au(III), vilket indikerar en möjlig överföring väg deltar i mekanismen av den röd fluorescensen (figur 4A). Det är absolut nödvändigt att lägga till thiol blockerande agenten, i detta fall NEM, vid neutralt pH. Klyva alla disulfide obligationer och den efterföljande tak av deras gratis thiol grupper avslöjar ingen röd fluorescens (figur 4B). Dessa resultat indikerar att det krävs en disulfide bond att producera ett rött fluorescerande komplex.

Vi har visat i olika protokoll, genom användning av spektroskopiska och protein kemi tekniker, en metod för att analysera de BSA-Au(III) komplex. Protein kemi tekniker presenteras häri har inte använts i protein-baserade nano-material forskning14. Dessa tekniker kan vara allmänt tillämpliga och vara värdefullt att förstå metall bindningsprocessen och de möjliga bindningsställen i andra, om inte alla, proteiner såsom trypsin, pepsin, lysozym och transferrin17,29. Proteiner är dynamisk, men ändå mycket exakt ”nano-material”. Detaljerad förståelse av metall bindningsstället kunde bana väg för nya protein-baserade material med kontrollerad optiska egenskaper med myriad av potentiella tillämpningar.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna har något att avslöja.

Acknowledgments

S.E. erkänner stöd från hertig kapitalförsäkring särskilda initiativ fonden, Wells Fargo fonden, PhRMA Foundation, samt start medel från University of North Carolina, Charlotte.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bovine Serum Albumin (BSA), 96% Sigma-Aldrich A5611
gold (III) chloride trihydrate, 99.9% Sigma-Aldrich 520918
Copper (II) chloride dihydrate, 99.999% Sigma-Aldrich 459097
Nickel (II) chloride hexahydrate, 99.9% Sigma-Aldrich 654507
N-Ethylmaleimide (NEM), >99.0% Sigma-Aldrich 4259
Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP), >98.0% Sigma-Aldrich C4706
Sodium hydroxide, >98.0% Sigma-Aldrich S8045
Urea, 99.5% Chem-Implex Int'l 30142
Phospate buffered saline (PBS) Corning MT21040CV
Ammonium bicarbonate, 99.5% Sigma-Aldrich 9830

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Xie, J., Zheng, Y., Ying, J. Y. Protein-Directed Synthesis of Highly Fluorescent Gold Nanoparticles. Journal of the American Chemical Society. 131, 888-889 (2009).
  2. Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. Gold Nanoparticles in Chemical and Biological Sensing. Chemical Reviews. 112, 2739-2779 (2012).
  3. Zhang, Y., et al. New Gold Nanostructures for Sensor Applications: A Review. Materials. 7, 5169-5201 (2014).
  4. Chen, L. -Y., Wang, C. -W., Yuan, Z., Chang, H. -T. Fluorescent Gold Nanoclusters: Recent Advances in Sensing and Imaging. Analytical Chemistry. 87 (1), 216-229 (2015).
  5. Cai, W., Gao, T., Hong, H., Sun, J. Applications of Gold Nanoparticles in Cancer Nanotechnology. Nanotechnology, Science and Applications. 1, 17-32 (2008).
  6. Nune, S. K., et al. Nanoparticles for Biomedical Imaging. Expert Opinion on Drug Delivery. 6, 1175-1194 (2009).
  7. Dorsey, J. F., et al. Gold Nanoparticles in Radiation Research: Potential Applications for Imaging and Radiosensitization. Translational Cancer Research. 2, 280-291 (2013).
  8. Daniel, M. -C., Astruc, D. Gold Nanoparticles: Assembly, Supramolecular Chemistry, Quantum-Size-Related Properties, and Applications toward Biology, Catalysis, and Nanotechnology. Chemical Reviews. 104 (1), 293-346 (2004).
  9. Ferrari, M. Cancer Nanotechnology: Opportunities and Challenges. Nature Reviews Cancer. 5, 161-171 (2005).
  10. Huang, X., Jain, P. K., El-Sayed, I. H., El-Sayed, M. A. Gold Nanoparticles: Interesting Optical Properties and Recent Applications in Cancer Diagnostics and Therapy. Nanomedicine. 2, 681 (2007).
  11. Arvizo, R., Bhattacharya, R., Mukherjee, P. Gold Nanoparticles: Opportunities and Challenges in Nanomedicine. Expert Opinion on Drug Delivery. 7, 753-763 (2010).
  12. Doane, T. L., Burda, C. The Unique Role of Nanoparticles in Nanomedicine: Imaging, Drug Delivery and Therapy. Chemical Society Reviews. 41, 2885 (2012).
  13. Egusa, S., Ebrahem, Q., Mahfouz, R. Z., Saunthararajah, Y. Ligand Exchange on Gold Nanoparticles for Drug Delivery and Enhanced Therapeutic Index Evaluated in Acute Myeloid Leukemia Models. Experimental Biology and Medicine. 239, 853 (2014).
  14. Qu, X., et al. Fluorescent Gold Nanoclusters: Synthesis and Recent Biological Application. Journal of Nanomaterials. (784097), (2015).
  15. Chakraborty, I., Pradeep, T. Atomically Precise Clusters of Noble Metals: Emerging Link between Atoms and Nanoparticles. Chemical Reviews. 117, 8208-8271 (2017).
  16. Raut, S., et al. Evidence of energy transfer from tryptophan to BSA/HSA protected gold nanoclusters. Methods and Applications in Fluorescence. 2, (2014).
  17. Le Guével, X., Daum, N., Schneider, M. Synthesis and Characterization of Human Transferrin-Stabilized Gold Nanoclusters. Nanotechnology. 22 (27), (2011).
  18. Kawasaki, H., Yoshimura, K., Hamaguchi, K., Arakawa, R. Trypsin-Stabilized Fluorescent Gold Nanocluster for Sensitive and Selective Hg2+ Detection. Analytical Sciences. 27 (6), 591 (2011).
  19. Lu, D., et al. Lysozyme-Stabilized Gold Nanoclusters as a Novel Fluorescence Probe for Cyanide Recognition. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 121, 77-80 (2014).
  20. Dixon, J. M., Egusa, S. Conformational Change-Induced Fluorescence of Bovine Serum Albumin-Gold Complexes. Journal of the American Chemical Society. 140, 2265-2271 (2018).
  21. Peters, T. Jr All About Albumin. , (1996).
  22. Masuoka, J., Saltman, P. Zinc(II) and Copper(II) Binding to Serum Albumin. A Comparative Study of Dog, Bovine, and Human Albumin. Journal of Biological Chemistry. 269, 25557-25561 (1994).
  23. Takeda, K., Wada, A., Yamamoto, K., Moriyama, Y., Aoki, K. Conformational Change of Bovine Serum Albumin by Heat Treatment. Journal of Protein Chemistry. 8 (5), 653-659 (1989).
  24. Klotz, I. M., Curme, H. G. The Thermodynamics of Metallo-protein Combinations. Copper with Bovine Serum Albumin. Journal of the American Chemical Society. 70, 939-943 (1948).
  25. Fiess, H. A., Klotz, I. M. The Thermodynamics of Metallo-Protein Combinations. Comparison of Copper Complexes with Natural Proteins. J. Am. Chem. Soc. 74, 887-891 (1952).
  26. Rao, M. S. N. A Study of the Interaction of Nickel(II) with Bovine Serum Albumin. Journal of the American Chemical Society. 84, 1788-1790 (1962).
  27. Peters, T. Jr, Blumenstock, F. A. Copper-Binding Properties of Bovine Serum Albumin and Its Amino-terminal Peptide Fragment. Journal of Biological Chemistry. 242, 1574-1578 (1967).
  28. Xue, Y., Li, X., Li, H., Zhang, W. Quantifying Thiol-Gold Interactions towards the Efficient Strength Control. Nature Communications. 5, 4348 (2014).
  29. Xu, Y., et al. The Role of Protein Characteristics in the Formation and Fluorescence of Au Nanoclusters. Nanoscale. 6 (3), 1515-1524 (2014).

Tags

Kemi fråga 138 syntes bovint serumalbumin BSA guld Au fluorescens pH konformation
Luminofor är placerad delen Formation i olika konformationer av bovint Serum Albumin genom bindning av Gold(III)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dixon, J. M., Egusa, S. Luminophore… More

Dixon, J. M., Egusa, S. Luminophore Formation in Various Conformations of Bovine Serum Albumin by Binding of Gold(III). J. Vis. Exp. (138), e58141, doi:10.3791/58141 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter