Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Chemistry
Click here for the English version

Chemistry

Luminophore formasjon i ulike konformasjonen av bovin Serum Albumin ved Binding av Gold(III)

Published: August 31, 2018 doi: 10.3791/58141
Automatic Translation
1, 1
1Department of Physics and Optical Science, Center for Biomedical Engineering & Science, University of North Carolina

Summary

Protokollene for studerer binding av gull kasjoner (Au(III)) til ulike konformasjonen av bovin serum albumin (BSA) så vel som karakteriserer den conformational avhengige unike BSA-Au fluorescensen presenteres.

Abstract

Formålet med presentert protokollene er å studere prosessen med Au(III) binding til BSA, gir konformasjon forårsaket røde fluorescens (λem = 640 nm) av BSA-Au(III) komplekser. Metoden som justerer pH for å vise at fremveksten av den røde fluorescensen er korrelert med pH-indusert likevekt overganger av BSA konformasjonen. Rød fluorescerende BSA-Au(III) komplekser kan bare utformes med en tilpasning av pH på eller over 9,7, som tilsvarer "Et-skjema" konformasjon av BSA. Protokollen å justere BSA Au molar forhold og overvåke tid-løpet av prosessen med Au(III) binding er beskrevet. Minste antall Au(III) per BSA, å produsere den røde fluorescensen, er mindre enn sju. Vi beskriver protokollen i trinn for å illustrere tilstedeværelsen av flere Au(III) bindende områder i BSA. Først, ved å legge kobber (Cu(II)) eller nikkel (Ni(II)) kasjoner etterfulgt av Au(III), denne metoden viser en binding området for Au(III) som ikke er den røde fluorophore. Andre, ved å endre BSA av thiol capping agenter, en annen nonfluorophore-forming Au(III) binding området er avslørt. Tredje illustrert endre BSA konformasjon av cleaving og capping av disulfide obligasjoner, mulig Au(III) binding område(r). Protokollen beskrevet, for å kontrollere BSA konformasjonen og Au(III)-tilknytning kan brukes generelt for å studere samspillet av andre proteiner og metall kasjoner.

Introduction

En BSA-Au sammensatt viser en ultrafiolett (UV)-nervøs røde fluorescens, med bemerkelsesverdig stokes SKIFT, har blitt opprinnelig syntetisert av Xie et al. 1. den unike og stabil røde fluorescensen finner forskjellige programmer i felt som sensing2,3,4, tenkelig5,6,7eller nanomedicine8 ,,9,,10,,11,,12,,13. Denne forbindelsen har vært studert av mange forskere innen nano-vitenskap i årene14,15,16. BSA-Au sammensatte har blitt tolket som Au25 nanoclusters. Målet med presentert metoden er å undersøke denne forbindelsen i detalj og forstå opprinnelsen til den røde fluorescensen. Ved å følge presentert tilnærming, kan tilstedeværelse av flere Au bindende områder, og opprinnelsen til fluorescens, alternativ til ett område nucleation av Au25 nanoclusters, illustreres. Samme tilnærming kan brukes til å studere hvordan andre proteiner17,18,19 kompleksbundet med Au(III) kan endre deres iboende fluorescerende egenskaper.

Syntese av rød-fluorescerende BSA-Au sammensatte krever en smal kontroll av molar prosenter av BSA til Au (BSA:Au) å maksimere intensiteten av fluorescensen og plasseringen av toppene i eksitasjon-utslipp kart (EEM)20. Det kan vises at det finnes flere bindende områder for Au(III) å binde, inkludert Asparagine fragment (eller Asp fragment, fire første aminosyre rester på N-terminus av BSA)21,22. 34th aminosyren av BSA (Cys-34) vises også å koordinere Au(III) og å være involvert i de røde fluorescence([Cys34-capped-BSA]-Au(III))20mekanisme. Cleaving alle Cys-Cys disulfide obligasjoner og capping alle thiols, rød fluorescens er ikke produsert ([all-thiol-capped-BSA]-Au(III)). Dette angir nødvendigheten av Cys-Cys disulfide obligasjoner som Au(III) binding til å produsere den røde fluorescensen.

Protein kjemi teknikker har ikke vært mye brukt til å studere BSA-Au(III) komplekser i nano-forskningsmiljøet. Men ville det være verdifullt å bruke disse teknikkene til å forstå enkelte aspekter av disse kompleksene, så vel som å få detaljert forståelse av de Au(III) binding i BSA. Denne artikkelen er ment å vise noen av disse teknikkene.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. syntese av BSA-Au(III) kompleks

  1. Oppløse 25 mg BSA i 1 mL av høy ytelse flytende kromatografi (HPLC) klasse vann i 5 mL reaksjon ampuller.
    Merk: Løsningen skal vises tydelig.
  2. Oppløse gull (III) klorid trihydrate (chloroauric acid) til en konsentrasjon av 5 mM i HPLC klasse vann.
    Merk: Løsningen skal vises gule. Chloroauric sur løsning forberedt på denne konsentrasjonen vil resultere i en BSA Au forholdet 1:13.
    1. Alternativt forberede en løsning av chloroauric syre med en konsentrasjon av hvor som helst mellom 0.38 mM (BSA:Au = 1:1) 20 mm (BSA:Au = 1:50) i HPLC Vurder vann.
      Merk: Ulike forhold av BSA Gold vil medføre drastisk ulike røde fluorescens mønstre av eksitasjon-utslipp kartet.
  3. Plasser reaksjon ampullen av BSA i et 37 ° C vannbad og kraftig rør på 750 rpm med en magnetisk rørestang.
  4. Straks omrøring begynner, kan du legge til 1 mL av chloroauric syre i løsningen. Fargen på løsningen skulle transformere fra klar til gult.
  5. Rør blandingen i 2 minutter på 37 ° C og 750 rpm med en magnetisk rørestang.
  6. I reaksjon ampullen, tilsett 100 μL av 1 M NaOH løsningen å bringe pH til 12.
    Merk: Straks NaOH legges, løsningen bør mørkne litt til en gul-brun og deretter vende tilbake til gul.
  7. Fortsett å røre på 750 rpm for 2t og på 37 ° C. Løsningen bør langsomt endre fra gul til mørk gul/brun farge. Denne fargen endre angir dannelsen av den røde fluorescing BSA-Au(III) kompleks.
  8. Lar prøve å sitte ved romtemperatur for 2 dager, og løsningen vil fortsette å mørkne til en oransje brun og fluorescens intensiteten vil øke.
    1. Du kan eventuelt la prøven Fortsett å røre på 37 ° C for 12 mer h som fargen på løsningen utvikler seg til et gult brun.

2. syntese av BSA-Cu(II)-Au(III)

  1. Oppløse 25 mg BSA i 1 mL av HPLC klasse vann. Løsningen skal vises tydelig.
  2. Oppløse kobber (II) klorid dihydrate i HPLC klasse vann til en konsentrasjon av 5 mM. Løsningen skal vises lys blå.
  3. Legge til 1 mL av vandig BSA løsningen til 5 mL reaksjon ampuller og plass i et vannbad på 37 ° C. Rør blandingen på 750 rpm.
  4. Straks legge til 0,5 mL av kobber (II) klorid dihydrate løsningen reaksjon ampullen og bland i 2 minutter. Løsningen blir lys blå.
  5. Tilsett 75 μL av 1 M NaOH å bringe pH til 12 og tillate for å blande 2 h. Løsningen blir lilla.
  6. Oppløse chloroauric syre i HPLC klasse vann til en konsentrasjon av 5 mM.
  7. Legge til 0,5 mL av vandig chloroauric syre reaksjon ampullen og justere pH tilbake til 12 med 1 M NaOH.
  8. Rør reaksjonsblandingen 2 h.
    Merk: Løsningen bør utvikles til en brun farge.

3. syntese av BSA-Ni(II)-Au(III)

  1. Oppløse 25 mg BSA i 1 mL av HPLC klasse vann. Løsningen skal vises tydelig.
  2. Oppløse nikkel (II) klorid hexahydrate i HPLC klasse vann til en konsentrasjon av 5 mM. Løsningen skal vises lys grønn.
  3. Legge til 1 mL av BSA-vannoppløsning 5 mL reaksjon ampuller og plass i et vannbad 37 oC. rør blandingen på 750 rpm.
  4. Straks legge 0,5 mL av nikkel (II) klorid hexahydrate løsningen til reaksjon medisinglass og blanding i 2 minutter.
    Merk: Løsningen vil være lys grønn.
  5. Tilsett 75 μL av 1 M NaOH å bringe pH til 12 og tillate for å blande 2 h.
    Merk: Løsningen blir mørk gul.
  6. Oppløse chloroauric syre i HPLC klasse vann til en konsentrasjon av 5 mM.
  7. Legge til 0,5 mL vandig chloroauric syre reaksjon ampullen og justere pH tilbake til 12.
  8. Rør reaksjonsblandingen 2 h.
    Merk: Løsningen bør utvikles til en brun farge.

4. syntese av [Cys34-capped-BSA]-Au(III)

  1. Oppløse 2 mg av N-ethylmaleimide (NEM) i 1 mL av fosfat bufret saltvann (PBS, pH 7.4).
  2. Oppløse 2 mg av BSA i 1 mL av PBS-NEM løsning.
  3. Overføre løsningen til 5 mL reaksjon ampuller og rør på 20 ° C på 500 rpm 1t.
  4. Dialyze løsningen med 12 kDa dialyse rør i 500 mL PBS, røring 50 RPM med en magnetisk rørestang natten fjerne Ureagert NEM.
  5. Oppløse chloroauric syre i PBS til en konsentrasjon av 0.4 mM.
    Merk: Løsningen vil være en svak gul.
  6. Overføre reaksjon ampullen til et vannbad på 37 ° C. Rør på 750 rpm.
  7. Umiddelbart legge 1 mL av chloroauric sur løsning til reaksjon ampullen og la blande i 2 minutter.
  8. Legge til 75 μL 1 M NaOH reaksjon ampullen å bringe pH til 12 og tillate for å blande 2 h.

5. syntese av [all-thiol-capped-BSA]-Au(III)

  1. Forberede en løsning av 2 M urea og 50 mM ammonium bikarbonat (NH4HCO3, pH 8.0) i HPLC klasse vann.
  2. Oppløse 3.3 mg av BSA i 1 mL av det over løsning og overføring til 5 mL reaksjon ampuller.
  3. Gjøre en lagerløsning 0,25 m tris(2-carboxyethyl) phosphine (TCEP) ved å løse opp 62.5 mg TCEP i 1 mL av HPLC vann.
  4. Legge til lager løsning av TCEP reaksjonen ampullen til siste konsentrasjonen av TCEP er 8 mM.
  5. Inkuber løsningen i et vannbad 1t på 50 ° C. Rør på 500 rpm med en magnetisk rørestang.
  6. Tillate løsningen helt avkjøles til romtemperatur.
  7. Forbered en lagerløsning 100 mm NEM ved oppløsning 12.5 mg NEM i 1 mL av HPLC klasse vann.
  8. Legge til lager løsning av NEM reaksjon ampullen til siste konsentrasjonen av NEM er 16 mM.
  9. Tillate løsningen å kombinere 2 h på 20 ° C. Rør på 500 rpm.
  10. Dialyze løsningen ved å benytte en 12 kDa dialyse rør, røring løsningen på 50 rpm med en magnetisk rørestang overnatter i 500 mL 50 mM NH4HCO3 fjerne overflødig TCEP, NEM og urea.
  11. Flytte reaksjon ampullen til et vannbad på 37 ° C og rør på 750 rpm.
  12. Oppløse chloroauric syre i HPLC klasse vann til en konsentrasjon av 0,66 mM.
  13. Umiddelbart legge 1 mL av chloroauric sur løsning til reaksjon ampullen og la blande i 2 minutter.
  14. Tilsett 1 M NaOH til pH av løsningen er 12 og la oppløsningen å fortsette å blande 2 h.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Fra fluorescens av BSA-Au(III) komplekset, det har blitt observert at konvertering av den iboende blå fluorescensen av BSA (λem = 400 nm) til rød fluorescens (λem = 640 nm) omtrent pH 9,7 gjennom en likevekt Overgang (figur 1). EEM av BSA-Au(III) på ulike BSA til Au molar prosenter er vist i figur 2, og disse dataene viser hvordan endre molar forholdstallene gir samme utslipp bølgelengde på ulike eksitasjon bølgelengder. Cu(II), Ni(II) og Au(III) binde konkurransedyktig til et kjent område (Asp fragment) i BSA (Figur 3). Cys34-capped BSA viser en endring i EEM topp mønstre på Au(III) binding, og disse resultatene viser hvordan endring av bestemt bindende endrer fluorescens mønstre. All-thiol-capped BSA viser ingen røde fluorescens og avslører Cys-Cys disulfide obligasjoner som mulig bindende områder å produsere den røde fluorophore (Figur 4).

Figure 1
Figur 1. Fluorescens BSA-Au(III) og den conformational indusert endring fra blå red. (A) den absorbansen og fluorescens (λex = 365 nm) av BSA-Au(III). (B) rød fluorescens vesener å komme på rundt pH 9,7, hvor konformasjon av BSA endres. (C) blå fluorescens henfall som røde fluorescens framgår. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2. Forholdet-beregning eksitasjon-utslipp kart (EEM) målinger av BSA-Au(III). EEM av BSA-Au(III) komplekse syntetisert bruke standardprotokollen mens du justerer forholdet mellom BSA til gull. (A) BSA på pH 12, (B) BSA:Au = 1:1, (C) BSA:Au = 1:7, (D) BSA:Au = 1:13, (E) BSA:Au = 1:26, (F) BSA:Au = 1:30 (G) BSA:Au = 1:40, (H) BSA:Au = 1:52. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3. EEM av BSA-Cu(II)/Ni(II)-Au(III) komplekser. Eksitasjon-utslipp kart (eksitasjon: 290-500 nm, utslipp: 300-850 nm) BSA kompleksbundet med Cu(II)/Ni(II) ved pH 12 (A og B), BSA kompleksbundet med Cu(II)/Ni(II) og deretter med Au(III) ved pH 12 (C og D) og absorpsjon Spectra sammenligne BSA, BSA-Au, BSA-Cu(II)/Ni(II) og BSA-Cu(II)/Ni(II)-Au(III) (E og F). Kurven 4 sammenlignes med superposisjon av kurver 2 og 3. Dette tallet er endret fra Dixon, J. M. & Egusa, S. J. er kjemiske Soc. 140 2265-2271, (2018). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4. EEM av Cys34 avkortet og alle thiols avkortet. EEM (eksitasjon: 300-500 nm, utslipp: 300-700 nm) av (A) Cys34-capped BSA reagert med Au ved pH 12. Alle Cys-Cys disulfide obligasjoner i BSA var kløyvde (B), og deretter alle-thiol-avkortet-BSA ble reagert med Au ved pH 12. Dette tallet er endret fra Dixon, J. M. & Egusa, S. J. er kjemiske Soc. 140 2265-2271, (2018). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

BSA-Au(III) forbindelser forberedt ved pH 12 viser rød fluorescens på et utslipp bølgelengde av λem= 640 nm når opphisset med ultrafiolett (UV) lys λex= 365 nm (figur 1A). Fremveksten av røde fluorescens er en langsom prosess og vil ta noen dager ved romtemperatur å øke til en maksimal intensitet. Kjører reaksjonen på 37 ° C vil gi optimale resultater, selv om høyere temperatur kan brukes til å produsere den røde fluorescensen raskere. Uhelbredelig nedbrytning av proteinet kan oppstå ved temperaturer over 45 ° C23. Justeringen av pH slik at BSA forvandles alderen (pH > 10) konformasjon21 ("A-skjemaet") er avgjørende for rød fluorescens; pH justeres fint fra nøytrale til grunnleggende å bestemme terskelen til forekomsten av den røde fluorescensen (figur 1B, C). For maksimal røde fluorescerende intensitet, bør pH justeres over 11. Til rød fluorescens, kan pH justeres utover 11, men svært grunnleggende (pH > 13) forhold kan denature BSA og forårsake røde fluorescens forsvinner.

Varierende stoichiometric forholdet BSA og Au kan illustrere binding av Au BSA. Fluorescens spektra av de BSA-Au(III) stoffene varierer stoichiometric prosenter av BSA til Au (figur 2). Som BSA gold forhold justeres til 1:26, maksimalt røde fluorescens intensitet er observert på λex= 500 nm. På den annen side, som BSA:gold forholdet justeres til 1:7, røde fluorescens er observert hovedsakelig i λex= 365 nm. Ingen røde fluorescens kan oppdages i forholdet BSA til Au mindre enn 1:7 eller over 1:52. Minimum antall gull kasjoner kreves for å produsere røde fluorescens er mindre enn 7 og mer enn 1, og maksimumsantallet for tap den røde fluorescensen er større enn 52 (figur 2B, C). I tillegg oppstår reduksjon av alle nevnte prøver under overflødig natrium borohydride, Klargjørende at alle prøver fortsatt inneholde kationisk Au(III). Videre kan tillegg av overflødig mengder gull utover 20 mM forårsake løsningen å bli for surt og denature protein. Hvis protein rødsprit skyldes høy Surhet, redusere konsentrasjonen av BSA og Au relativt å megle problemet.

Konkurransedyktige binding av Au og andre metall kasjoner til BSA kan illustrere bindende områdene i BSA. Det er kjent at Cu(II) og Ni(II) begge binde til Asp fragment på N-terminus BSA24,25,26,27. Gjennom tillegg av Cu(II), en sterk dokumentordner til Asp-fragment, etterfulgt av tillegg av Au(III), er absorbansen spektra av BSA-Cu(II)-Au(III) og absorbansen spektra av BSA-Au(III) og BSA-Cu(II) de samme - som indikerer at gull og kobber ikke Konkurrer om det samme binding området på Asp-fragmentet (Figur 3 c). Ni(II) binder svakt til Asp-fragment og derfor Au(III) konkurrerer med Ni(II) gull legges; Det har blitt observert at absorbansen spektra av BSA-Ni(II) og BSA-Au(III) ikke samsvarer med den som BSA-Ni(II)-Au(III) (figur 3F). Gjennom over protokollen, kan man vise hvordan Au(III) binder til kjente binding området av BSA. Denne teknikken krever også justering av pH over 11 og teknikken endres ved å legge til to ganger konsentrasjonen BSA, men på halv volum, dermed dette bør utføres på lav BSA til Au prosenter å opprettholde protein konformasjon.

Endre cystein rester i BSA kan videre belyse Au bindende områder. Gold er kjent for å ha høy affinitet for thiol28 og BSA besitter en overflate tilgjengelig thiol på (Cys34)21. Gjennom blokkering av denne thiol, kan sekundær binding nettsteder bli belyst. Blokkering av denne cystein utføres før tillegg av Au(III) til prøven og viser en endret fluorescens mønster av BSA-Au(III), som indikerer en mulig overføring sti involvert i mekanismen av den røde fluorescensen (figur 4A). Det er viktig å legge til en thiol blokkering agent, i dette tilfellet NEM, på en nøytral pH. Cleaving alle disulfide obligasjoner og den påfølgende capping av deres gratis thiol grupper avslører ingen røde fluorescens (figur 4B). Disse resultatene indikerer at en disulfide obligasjon er nødvendig for å produsere en rød fluorescerende kompleks.

Vi har vist i ulike protokoller, ved hjelp av spektroskopiske og protein kjemi teknikker, en metode for å analysere BSA-Au(III) komplekser. Protein kjemi teknikker som presenteres her har ikke vært mye brukt i protein-basert nano-materialer forskning14. Disse teknikkene kan generelt gjelder og være verdifullt å forstå metall tilknytningsprosessen og mulig bindende områder i andre, om ikke alle, proteiner som trypsin, pepsin, lysozyme og transferrin17,29. Proteiner er dynamisk, men veldig presis "nano-materialer". Detaljert forståelse av metall binding området kunne bane vei mot nye protein-basert materialer med kontrollert optiske egenskaper med myriade bruksmuligheter.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

S.E. anerkjenner støtte fra Duke spesiell initiativ kapitalfond, Wells Fargo fondet, PhRMA Foundation, samt oppstart midler fra University of North Carolina, Charlotte.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bovine Serum Albumin (BSA), 96% Sigma-Aldrich A5611
gold (III) chloride trihydrate, 99.9% Sigma-Aldrich 520918
Copper (II) chloride dihydrate, 99.999% Sigma-Aldrich 459097
Nickel (II) chloride hexahydrate, 99.9% Sigma-Aldrich 654507
N-Ethylmaleimide (NEM), >99.0% Sigma-Aldrich 4259
Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP), >98.0% Sigma-Aldrich C4706
Sodium hydroxide, >98.0% Sigma-Aldrich S8045
Urea, 99.5% Chem-Implex Int'l 30142
Phospate buffered saline (PBS) Corning MT21040CV
Ammonium bicarbonate, 99.5% Sigma-Aldrich 9830

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Xie, J., Zheng, Y., Ying, J. Y. Protein-Directed Synthesis of Highly Fluorescent Gold Nanoparticles. Journal of the American Chemical Society. 131, 888-889 (2009).
  2. Saha, K., Agasti, S. S., Kim, C., Li, X., Rotello, V. M. Gold Nanoparticles in Chemical and Biological Sensing. Chemical Reviews. 112, 2739-2779 (2012).
  3. Zhang, Y., et al. New Gold Nanostructures for Sensor Applications: A Review. Materials. 7, 5169-5201 (2014).
  4. Chen, L. -Y., Wang, C. -W., Yuan, Z., Chang, H. -T. Fluorescent Gold Nanoclusters: Recent Advances in Sensing and Imaging. Analytical Chemistry. 87 (1), 216-229 (2015).
  5. Cai, W., Gao, T., Hong, H., Sun, J. Applications of Gold Nanoparticles in Cancer Nanotechnology. Nanotechnology, Science and Applications. 1, 17-32 (2008).
  6. Nune, S. K., et al. Nanoparticles for Biomedical Imaging. Expert Opinion on Drug Delivery. 6, 1175-1194 (2009).
  7. Dorsey, J. F., et al. Gold Nanoparticles in Radiation Research: Potential Applications for Imaging and Radiosensitization. Translational Cancer Research. 2, 280-291 (2013).
  8. Daniel, M. -C., Astruc, D. Gold Nanoparticles: Assembly, Supramolecular Chemistry, Quantum-Size-Related Properties, and Applications toward Biology, Catalysis, and Nanotechnology. Chemical Reviews. 104 (1), 293-346 (2004).
  9. Ferrari, M. Cancer Nanotechnology: Opportunities and Challenges. Nature Reviews Cancer. 5, 161-171 (2005).
  10. Huang, X., Jain, P. K., El-Sayed, I. H., El-Sayed, M. A. Gold Nanoparticles: Interesting Optical Properties and Recent Applications in Cancer Diagnostics and Therapy. Nanomedicine. 2, 681 (2007).
  11. Arvizo, R., Bhattacharya, R., Mukherjee, P. Gold Nanoparticles: Opportunities and Challenges in Nanomedicine. Expert Opinion on Drug Delivery. 7, 753-763 (2010).
  12. Doane, T. L., Burda, C. The Unique Role of Nanoparticles in Nanomedicine: Imaging, Drug Delivery and Therapy. Chemical Society Reviews. 41, 2885 (2012).
  13. Egusa, S., Ebrahem, Q., Mahfouz, R. Z., Saunthararajah, Y. Ligand Exchange on Gold Nanoparticles for Drug Delivery and Enhanced Therapeutic Index Evaluated in Acute Myeloid Leukemia Models. Experimental Biology and Medicine. 239, 853 (2014).
  14. Qu, X., et al. Fluorescent Gold Nanoclusters: Synthesis and Recent Biological Application. Journal of Nanomaterials. (784097), (2015).
  15. Chakraborty, I., Pradeep, T. Atomically Precise Clusters of Noble Metals: Emerging Link between Atoms and Nanoparticles. Chemical Reviews. 117, 8208-8271 (2017).
  16. Raut, S., et al. Evidence of energy transfer from tryptophan to BSA/HSA protected gold nanoclusters. Methods and Applications in Fluorescence. 2, (2014).
  17. Le Guével, X., Daum, N., Schneider, M. Synthesis and Characterization of Human Transferrin-Stabilized Gold Nanoclusters. Nanotechnology. 22 (27), (2011).
  18. Kawasaki, H., Yoshimura, K., Hamaguchi, K., Arakawa, R. Trypsin-Stabilized Fluorescent Gold Nanocluster for Sensitive and Selective Hg2+ Detection. Analytical Sciences. 27 (6), 591 (2011).
  19. Lu, D., et al. Lysozyme-Stabilized Gold Nanoclusters as a Novel Fluorescence Probe for Cyanide Recognition. Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy. 121, 77-80 (2014).
  20. Dixon, J. M., Egusa, S. Conformational Change-Induced Fluorescence of Bovine Serum Albumin-Gold Complexes. Journal of the American Chemical Society. 140, 2265-2271 (2018).
  21. Peters, T. Jr All About Albumin. , (1996).
  22. Masuoka, J., Saltman, P. Zinc(II) and Copper(II) Binding to Serum Albumin. A Comparative Study of Dog, Bovine, and Human Albumin. Journal of Biological Chemistry. 269, 25557-25561 (1994).
  23. Takeda, K., Wada, A., Yamamoto, K., Moriyama, Y., Aoki, K. Conformational Change of Bovine Serum Albumin by Heat Treatment. Journal of Protein Chemistry. 8 (5), 653-659 (1989).
  24. Klotz, I. M., Curme, H. G. The Thermodynamics of Metallo-protein Combinations. Copper with Bovine Serum Albumin. Journal of the American Chemical Society. 70, 939-943 (1948).
  25. Fiess, H. A., Klotz, I. M. The Thermodynamics of Metallo-Protein Combinations. Comparison of Copper Complexes with Natural Proteins. J. Am. Chem. Soc. 74, 887-891 (1952).
  26. Rao, M. S. N. A Study of the Interaction of Nickel(II) with Bovine Serum Albumin. Journal of the American Chemical Society. 84, 1788-1790 (1962).
  27. Peters, T. Jr, Blumenstock, F. A. Copper-Binding Properties of Bovine Serum Albumin and Its Amino-terminal Peptide Fragment. Journal of Biological Chemistry. 242, 1574-1578 (1967).
  28. Xue, Y., Li, X., Li, H., Zhang, W. Quantifying Thiol-Gold Interactions towards the Efficient Strength Control. Nature Communications. 5, 4348 (2014).
  29. Xu, Y., et al. The Role of Protein Characteristics in the Formation and Fluorescence of Au Nanoclusters. Nanoscale. 6 (3), 1515-1524 (2014).

Tags

Kjemi problemet 138 syntese storfe serum albumin BSA gull Au fluorescens pH konformasjon
Luminophore formasjon i ulike konformasjonen av bovin Serum Albumin ved Binding av Gold(III)
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Dixon, J. M., Egusa, S. Luminophore… More

Dixon, J. M., Egusa, S. Luminophore Formation in Various Conformations of Bovine Serum Albumin by Binding of Gold(III). J. Vis. Exp. (138), e58141, doi:10.3791/58141 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter