Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים

Published: January 23, 2019 doi: 10.3791/58191
Automatic Translation
1, 2, 2, 1,3
1Department of Neuroscience, Psychology and Behaviour, University of Leicester, 2Preclinical Imaging Facility, Core Biotechnology Services, University of Leicester, 3School of Psychology, University of Nottingham

Summary

Intraluminal סגר נימה של עורק המוח התיכון הוא הדגם הנפוצות ביותר בשימוש ב- vivo של שבץ ניסויים בחולדות. גישה כירורגית חלופיים כדי לאפשר תיקון עורק הראש נפוצות מתבצע כאן, מה שמאפשר את פגיעה reperfusion של עורק תרדמני, של פגיעה reperfusion מלא אל השטח עורק המוח התיכון.

Abstract

שבץ איסכמי הוא הגורם העיקרי לנכות לטווח ארוך למבוגרים ומוות ברחבי העולם. טיפולים שוטפים זמינים מוגבלים, עם רק רקמות plasminogen activator (tPA) כטיפול סמים שאושרו למטרה שבץ איסכמי. המחקר הנוכחי בשדה של שבץ איסכמי מתמקד יותר בהבנת הפתופיזיולוגיה של שבץ מוחי, לפתח ולחקור מטרות התרופות הרומן. מודלים אמינים קו נסיוני מכריעים על ההתקדמות של טיפולים פוטנציאליים. המודל סגר (MCAO) בעורק האמצעי הרלוונטית קלינית, לעתים קרובות ביותר המשמשים מודל כירורגי של שבץ איסכמי מכרסמים. עם זאת, התוצאות של מודל זה, כגון נפח הנגע, קשורים עם רמות גבוהות של השתנות, בעיקר בעכברים. המודל MCAO חלופי המתוארים כאן מאפשר את פגיעה reperfusion של עורק תרדמני (המרכז לאמנות עכשווית) זלוף מוגברת של השטח עורק המוח התיכון (MCA), באמצעות כרית רקמות עם איטום פיברינוגן לתקן את הכלי, ולא המשופר רווחת העכברים על ידי הימנעות מצדו החיצוני העורק הראשי (ECA). זה מפחית את ההסתמכות על מעגל ויליס, אשר ידוע להיות מאוד מבחינה אנטומית משתנה בעכברים. נציג נתונים מראים כי שימוש בגישה כירורגית חלופית זו מקטינה ההשתנות הנגע כרכים בין הגישה המסורתית MCAO הגישה החלופית המתוארים כאן.

Introduction

הגורם העיקרי שבץ מוחי הוא מוקד איסכמיה בשטחה של עורק המוח התיכון. רקמת plasminogen activator (tPA) הוא הטיפול תרופתי בלבד זמין עם יעילות מוכחת, למרות ניסויים קליניים סמים רבים ממוקד שבץ איסכמי1,2. עם זאת, בשל חששות בטיחות חלון טיפולי צר (< 4.5 h), רק ~ 15% מהחולים שבץ כל זכאי לקבל tPA הינם המחירים recanalization יכול להיות < 50%3,4.

הרלוונטית קלינית הדירים חייתיים של שבץ נחשבים חיוניים כדי ליידע את התפתחות חדשה וקו פוטנציאל טיפולי. עם זאת, בשל חששות לגבי עקביות ולהבדלים ב התוצאות במודלים בבעלי חיים, זה נשאר חשוב לחדד ויוו המודלים הקיימים כדי לשפר את התרגום ממחקרים פרה למרפאה. העדר תרגום פרה ניסויי היעילות של טיפולים פוטנציאליים לשימוש קליני הוא עניין מרכזי מחקר קו5. הסיבות לכישלון של תרגום צפויים להיות מרובים עשויה להיות קשורה, לדוגמה, עיצוב למשפט, טיפול עיכובים, הטרוגניות קלינית שבץ, ואת המגבלות של הדגמים בעלי חיים המשמש6. אתגר המפתח עבור קו מחקר נשאר ההתפתחות של טיפולים יעילה ובטוחה.

חסימה בעורק האמצעי (MCAO) על ידי intraluminal פילמנט ההכנסה הוא בשימוש תכוף ביותר ויוו מכרסמים הדגם של שבץ ניסיוני. דגם זה מאפשר השחזור של זרימת הדם לאחר אינדוקציה איסכמיה, מחקה את האירועים המתרחשים ב אנושי קו7. עם זאת, בפרט בעכברים, כרכים הנגע הטרוגנית עם סטיות תקן מגוונת להתרחש אף-על-פי המוגדר פרוטוקולים כירורגי הם יישומי8,9,10. . זה אופייני לראות התפלגות דו-אופנית striatal קטנים, גדולים הנגע striato-קורטיקלית אמצעי אחסון11 לזירוז איסכמיה, הלהט בדרך כלל מוחדר דרך חתך של המרכז לאמנות עכשווית או ECA ואז להישאר מחוברים באופן קבוע12. מצדו הקבע של המרכז לאמנות עכשווית מונע את הקמתה מחדש של זרימת הדם לתוך העורק (ICA), לאחר מכן, הטריטוריה MCA. פעולה זו גורמת פגיעה reperfusion להיות מסתמך על אספקת משני בתוך מעגל ויליס (פרה). המבנה פרה יש השתנות אנטומי בין חיות בודדות, בפרט C57BL/6 עכברים-זן המשמש בדרך כלל אין ויוו שבץ מחקר13. שיטה חלופית, ההכנסה פילמנט דרך ECA, לאפשר המשך זלוף דרך של המרכז לאמנות עכשווית, אך הפשרות בשיטה זו אספקת עורקי אל השטח ECA, אשר הוכח, בחולדות, השפעה מזיקה על החיה רווחה14.

ההסתמכות על הפרה עבור אספקת משני, פגיעה reperfusion במודל MCAO הוקמה מאי, בין השאר, חשבון ההשתנות נפח הנגע בעקבות סגר. אנו מתארים מאתר כירורגי הליך חלופי שבו ECA מצדו הוא נמנע, תיקון החתך המרכז לאמנות עכשווית, וכך מאפשר פגיעה reperfusion דרך המרכז לאמנות עכשווית, עצמאית של הפרה. התיקון של החתך המרכז לאמנות עכשווית בעבר הוכח בחולדות את התוצאה פגיעה reperfusion מוצלח דרך ה15-המרכז לאמנות עכשווית. החלת גישה זו בהצלחה על עכברים11 ואנו להתייצב כאן פרוטוקול אשר התוצאות השתנות מופחתת בנפח הנגע, המדד התוצאה העיקרית בשימוש במחקרים קו נסיוני.

ב פרוטוקול זה, נדגים כיצד מתחייב MCAO דרך המרכז לאמנות עכשווית כלי פילמנט ההכנסה ואחריו תיקון כלי המרכז לאמנות עכשווית, שכרוך רקמות pad איטום יישום כדי להתיר פגיעה reperfusion.

Protocol

פרוטוקול זה, המידע המדווח נערכו על פי חוק חיות בבריטניה (וצפייה), 1986 (פרוייקט רשיון 60/4315) ובעקבות אישור אתית מוסדית. כל הניסויים מדווחים על פי המחקר בעל חיים: דיווח ב- Vivo ניסויים (יגיעו) הנחיות16.

1. הכנה

  1. היכרות למבוגרים-זכר C57BL/6 עכברים לטיפול לאחר הניתוח (למשל, לסביבה, מצעים, שחזור מזונות) לפחות 48 שעות לפני הניתוח.
    הערה: פוסט-MCAO חיות לעתים קרובות יש קושי עם אכילה ושתייה בעקבות הניתוח.
    1. כדי למנוע אובדן משקל יתר לאחר ניתוח, ואקלום החיות בכל דיאטה פוסט-MCAO, לדוגמה, הצבת התייבשות ג'ל ג'ל מזון, כדורי ספוג/רטוב תזונה נורמלית ישירות על רצפת הכלוב.
    2. להחליף את המצעים הכלוב כדי שלאחר הניתוח מצעים שונים, כגון נייר לבן שבב.
  2. לעקר כל כלי ניתוח לפני שמתחילים את הגדרת כירורגי או את הליכים.
    1. עושים זאת על ידי autoclaving את הכלים (עם מינימום של 121 מעלות צלזיוס, 15 psi, למשך 15 דקות) או באמצעות שימוש אתילן אוקסיד (בעקבות הוראות היצרן הנכון, עבור h 8-10).
    2. לחטא את כל המשטחים לפני הגדרת את ההליך. מכסים כל המשטחים עם וילונות כירורגי סטרילי או בלוק נייר כסף עבור פריטים הדורשים טיפול במהלך הניתוח. שימוש בטכניקה אספטית משך ההליך.
      הערה: בלוק נייר כסף יכול לשמש כדי לכסות על מכשירים או ציוד צריך שיתקיים במהלך הניתוח. שימוש בכפפות סטריליות וטכניקות, ניתן להחיל את רדיד האלומיניום, לאחר מכן, ניתן להניח את הפריט לתוך שדה סטרילי. בעקבות זאת, יידרש שינוי כפפה סטרילית.

2. ניתוח חסימה בעורק האמצעי

  1. השתמש למבוגרים עכברים C57BL/6 זכר שוקל 24 – 31 g בזמן הניתוח. לגרום הרדמה באמצעות 5% איזופלוריין ב 2 ל'/דקה של O2, בחדר הרדמה פלסטיק אדום.
  2. בעקבות של אינדוקציה, להפחית את איזופלוריין כדי לשמור על עומק נאותה הרדמה לניתוח (למשל, 1.5 – 2%-70% N2O2/30% O2) מועברים על ידי מסכת פנים בשילוב מערכת נבלות כדי להוריד את המנתח חשיפה איזופלוריין.
    הערה: תחמוצת החנקן (2O N2) יכול לשמש בשילוב עם חמצן (O2) כדי להפחית את הכמות הנדרשת של איזופלוריין לעומק הרדמה נאותה.
  3. ניהול מערכתי נגד כאבים אולטרסאונד [carprofen, 10 מ"ג/ק"ג תת עורית (sc.)] הרדמה מקומית כדי החתך באתר (נמשך, sc. 2 מ"ג/ק"ג, 1:10 מדולל ב- saline 0.9%) פרי-שמעשית.
  4. לנהל נוזלים על-ידי בקרום הבטן (ip.) זריקות של µL 200 של פתרון 0.9% NaCl prewarmed סטרילי אולטרסאונד.
  5. לגלח את הפרווה של הזכות באזור הרקות, באזור הצוואר הגחון בעזרת קוצץ שיער קטן כדי לחשוף את העור. לחטא באזור העור כירורגי, באמצעות פתרון chlorhexidine 5% במשך 3 דקות החל עינית חומר סיכה על שתי העיניים, כדי למנוע ייבוש במהלך הניתוח.
    הערה: אם נדרש עבור קריאות oximetry הדופק צג רווית חמצן בדם, קצב הלב וקצב הנשימה, השתמש קרם להסרת שיער כדי לנקות את הרגל האחוריות של השיער. החלת הקרם בעזרת צמר גפן נקי ניצנים, לאחר הסרת שיער, לשטוף את האזור עם הפתרון chlorhexidine שתדללו. לבצע שלב זה באזור שטרם-נותחו כדי למזער את הסיכון של פרווה משוחררת שמזהם את השדה כירורגי סטרילי. חוקרים, ייתכן שתעדיף להשתמש תכשירים אחרים באתר כירורגית לפי מקומיים.
  6. להעביר את העכבר האזור הכירורגי ולמקם אותו במצב שכיבה על מזרון חום homeothermic מכוסה על ידי תלוי סטרילי. לשמור על הרדמה באמצעות קונוס האף. הוספת בדיקה רקטלית לפקח על טמפרטורת הגוף של העכבר ולשמור על זה ב 37.0 ± 0.6 מעלות צלזיוס.
    1. לפני כל חתכי ניתוח, בדוק את רפלקס הנסיגה כפת האחוריות, ממצמץ רפלקס כדי לאשר את עומק ההרדמה.
  7. לצרף בדיקה דופלר flowmetry (LDF) לייזר כדי להקליט את זרימת הדם אל השטח MCA.
    1. שימוש של סטריאוסקופ לנתיחה, לעשות חתך של < 1 ס מ אל נקודת האמצע בין עין ימין לבין האוזן על העור טמפורלית החשופים בעזרת איזמל מס 15. בלשון בוטה לנתח הרקמה הבסיסית המכסים את הגולגולת, בעדינות גירוד זה מן העצם, ייבוש השטח עם ספוגיות כותנה סטרילי.
      הערה: חייבים להקפיד שלא יגרמו נזק לשריר temporalis.
    2. . תחזיק 0.7 מ מ, גמיש בדיקה סיב יחיד מחובר לצג LDF, לחתוך סופו באמצעות אזמל חדה כדי להשיג יתרון שטוח, לגרום לזה לעבור בעל המכשיר בצורת סופגנייה, מקום כמות קטנה של ג'ל תואמות אופטי בקצה של הסיבים.
    3. המקום כמות קטנה של דבק סופר דבק עמיד למים סביב הקצה התחתון של בעל המכשיר; ירשה זאת חלקית יבש ולהיות מוזנח.
    4. יבש את הגולגולת מעל העצם הטמפורלית והניחו כמות קטנה של רקמת אקטואלי דבק במעגל עד העצם, מספיק רק בשביל בעל רגש.
    5. מקום בעל המכשיר, עם סיבים אופטיים המכשיר כבר במקום, על אזור זה (6 מ מ לרוחב ו דיסטלי של bregma 2 מ"מ).
    6. מאפשרים זמן הדבק לייבוש; לאחר יבש, המצורפת, להתחיל בהקלטת LDF הנתונים.
  8. בעדינות להתהפך החיה למיקום פרקדן, טיפול תומך המכשיר דופלר לייזר ולמנוע את הניתוק שלו. קלטת בעדינות את forepaws שני למטה עם קלטת רפואי נקבובי, הזזה זוג כותנה ניצנים (או משהו דומה, כגון מלקחיים סגור) מתחת לצוואר להרים את האזור וליצור מתח. מכסים את העכבר עם תלוי סטרילי כדי לשמור על הכיסוי אספטי.
  9. מתחילים את חיתוך וחשיפה של המרכז לאמנות עכשווית.
    1. עושים חתך קו האמצע 1.5 ס מ על הצוואר הגחון חשוף באמצעות להב סכין מס 15.
    2. בעדינות תוך שימוש בטכניקות עדינות עמום, משכי בלוטות הרוק בצדדים, לחשוף את קנה הנשימה.
    3. באמצעות עמום, לנתח את המרכז לאמנות עכשווית חופשי הרקמה הסובבת העצב vagal.
      הערה: להימנע מלגעת העצב vagal ישירות, כמו נזק העצב vagal עלול לפגום ניידות, האכלה, ונשימה.
  10. עוברים שני קטעים קטנים (2 ס מ) של שאינם נמסים 6-0 בתפר להלן המרכז לאמנות עכשווית, הגבי כלי ו הגחוני / על העצב vagal. לצייר עניבת משי אחד קרוב יותר למנתח הפלסטי ולקשור אותו בחוזקה סביב המרכז לאמנות עכשווית (proximal תיקו). ברפיון לקשור את העניבה משי השנייה (דיסטלי תיקו) לכיוון ההסתעפות של יק א/ECA.
  11. כדי להתחיל לבודד מקטע המרכז לאמנות עכשווית, החל סרטון microvascular מעל את העניבה דיסטלי אבל לא הפרעה ההסתעפות. באמצעות מספריים Vannas מיקרו, עושים חור קטן לתוך המרכז לאמנות עכשווית.
    הערה: ECA חייב להשאר פטנטים בכל עת. החתך המרכז לאמנות עכשווית חייב להיות לא יותר מ- 40% של הרוחב של כלי השיט, בעמדה הגחון נגיש בקלות; זה לשחק תפקיד חשוב כלי תיקון שלב הפוסט-MCAO.
  12. הכנס monofilament מצופה סיליקון 7-0 המרכז לאמנות עכשווית, שהתקדמו לעבר הקליפ microvascular.
    הערה: גודל פילמנט חייב להקים על בסיס משקל העכבר לפני הניתוח; עיין הנחיות היצרן.
    1. להדק את העניבה הדיסטלי, מספיק כדי להדק את הסיב למקום ללא פגיעה בו. הסר את הקליפ microvascular באמצעות קליפ מחזיקי.
      הערה: אין אובדן דם צריך לראות בשלב זה. אם יש זרם אחורי של דם, העניבה מחזיק את הסיב אינו חזק מספיק.
  13. לקדם את הסיב לתוך יק א.
    1. ודא הלהט נותר בתוך יק א לא יעבור לתוך העורק pterygopalatine (PPA). עושים זאת על ידי הרמת ומושך את המרכז לאמנות עכשווית, שימוש באחת קשרים משי, לצד החיצוני של גוף החיה, מעט, לנווט את הסיב לכופף אחרי פתיחת הפונים באופן פנימי PPA.
      הערה: פעם מתקדם על מוצאם סניף MCA, ירידה בזרם הדם יחסית לשטח שסופקו יהיה גלוי על הערכים LDF; זה מאשר את מיקום נימה...
  14. לאבטח את הסיב במקום עם עניבה משי הדיסטלי, קושר את זה הדוק יותר. להשאירו במקום משך זמן סגר תקופת זמן.
    הערה: תלוי פרוטוקולים בודדים, ניתן להעביר החיה לכלוב שחזור, בעקבות פצע תפירת, לשחזר, או להישאר תחת הרדמה למשך כל תקופת סגר. במקרה האחרון, להבטיח שהפצע נמנעת ממנו להתייבש באמצעות מלח 0.9% NaCl prewarmed סטרילית.

3. פוסט-סגר

  1. בסוף תקופת MCAO, מיד תמשוך את הסיב עד הראש פילמנט לבן הוא נראה בבירור.
  2. לשחרר המרכז לאמנות עכשווית דיסטלי קישרו מספיק כדי להסיר את הסיב הראש רוב הדרך החוצה כלי הקיבול.
    הערה: הסיב ניתן לחלוטין להסיר בשלב זה אם המנתח הוא בטוח עם מהירות כדי לקשור את העניבה דיסטלי כדי למנוע איבוד דם.
  3. מקום אחד סרטון microvascular במצב אופקי לכיוון ההסתעפות המרכז לאמנות עכשווית לצד העניבה דיסטלי. לשחרר את הקשר דיסטלי ולהסיר את הסיב באופן מלא. הוסף סרטון microvascular אחר מתחת העניבה המרכז לאמנות עכשווית צינתור לקראת המנתח.
    הערה: ודא הספינה מספיק רחוק לתוך ליחצ של המלחציים כדי למנוע כל החלקה. המיקום של הקליפים היא חיונית כדי להבטיח את הפריט מדללים גישה קלה במהלך השלבים מאוחר יותר. הקליפים יכול לשמש כדי לעזור להרים את כלי הקיבול כדי לאפשר של סיווג והמיקום טוב יותר של התיקון רקמות, הצבת את הקליפים אופקית לאורך השרירים המקיפים.
  4. בזהירות להסיר את שני קשרים משי באמצעות מלקחיים דומונט #5 או מספריים Vannas מיקרו, לייבש את האזור באמצעות צמר גפן סטרילי.
    הערה: חייבים להקפיד לא לחתוך דרך/לתוך הכלי.
  5. ב עקר פטרי, להוסיף פיברינוגן תרומבין איטום ופתרונות 1 ו- 2 (ראה את הטבלה של חומרים), המבטיח משני החומרים להישאר נפרדים, מוכן עבור ערבוב מאוחר יותר.
    הערה: רק קטן מאוד כרכים של הסוכנים הם נדרשים (< 0.25 מ ל כל אחד). מפרידים את הפתרונות של מניעת תגובה מוקדמת בין המרכיבים שני. ודא שהכובע מוחלף באופן זהה זה הוסר למניעת זיהום צולב שני מזרקים, אשר ייגרמו הסוכן להגיב להגדיר בתוך המזרק. לפני השימוש, לאחסן את הפתרונות ב-20 ° C. כאשר הדבר נדרש עבור הניתוח הראשון, להפשיר את חומר האיטום לטמפרטורת החדר. לא להקפיא מחדש את חומר האיטום; הוא חייב להישאר בטמפרטורת החדר, ניתן לאחסן בדרך זו. המזרק יכולה לשמש על פני ריבוי ניתוחים הפיכתה חסכונית; עם זאת, אנו ממליצים לא להשתמש באותו הבקבוקון למשך יותר משבוע כדי למנוע זיהום.
  6. השתמש עמום לאורך השריר עם דומונט 5 אין מלקחיים ומספריים Vannas מיקרו להשגת פרוסה דק הגחון של שריר שריר הצוואר לשימוש עבור משטח הרקמה, הפרוסה עבה יותר מ 1 מ"מ של לאורך סיבי השריר העליון.
    הערה: לא לחתוך דרך השריר, מעבר כמו זה יפגום באופן משמעותי את תפקידה. הרקמה חייב להיות גדול מספיק כדי לכסות את החתך המרכז לאמנות עכשווית בנוחות.
  7. בעזרת מלקחיים דומונט #5, לקחת משטח רקמת וערבבו הרקמה על פני שני פיברינוגן תרומבין פתרונות איטום, ויוצרים ערוץ בין ריאגנטים שני. קרישה תתרחש במהירות; ברגע קרישת הדם מתחיל, הסר את משטח הרקמה כדי החתך המרכז לאמנות עכשווית. במקום משטח רקמת במול למטה עם בינונית בלחץ חזק, מלקחיים פתוחים.
    1. במהירות להסיר את הסרטון microvascular דיסטלי בזמן עדיין מחזיק בעדינות את משטח רקמת במקומה.
      הערה: פעולה זו מאפשרת זרם חלק אחורי של דם נוספת להפעיל את ריאגנטים איטום פיברינוגן ו תרומבין. רק מספיק לחץ נדרש להחזיק את הפנקס במקום, אבל לא כדי לחסום את כלי הקיבול.
    2. לאט לאט להקל את הלחץ מהמקלדת רקמות, ומאפשר לדם לזרום תחת אזור החתך. וכעת, לאט ובעדינות לשחרר את הלחץ מן הקליפ microvascular הפרוקסימלית ואת להסיר לחלוטין.
    3. הערה: כדי להבטיח שהכלי הופך פטנטים באופן מלא, את המיקום של משטח רקמת והסרה של הקליפים microvascular חייבת להתבצע במהירות כדי למנוע משטח רקמת איטום הפנימי של המרכז לאמנות עכשווית. עם זאת, אם יש כמות קטנה של דם דליפה, מקם מחדש קצת לחץ קל על גבי משטח הרקמה כדי לאפשר את המשך זמן היווצרות קרישי ואיטום להתרחש. אם לדליפת דם ניכר או משטח רקמת אינו מופיע להיות איטום, לשמור על לחץ כדי למנוע איבוד דם, להחליף שני קליפים microvascular של המרכז לאמנות עכשווית לבודד את החתך ולמנוע איבוד דם נוסף.
  8. במקרה משטח הרקמה לא לאטום לכלי השיט, ניסיון נוסף יכול להתבצע, בעקבות צעדים 3.3 – 3.7.3.
  9. פעם אחת כלי הקיבול נחתם תפר את הפצע בעזרת תפרים נמסים 6-0. אם LDF ההקלטה נמשך לאורך כל הניתוח, להסיר את LDF בגולגולת, פצע התפר באמצעות תפרתי בתפר 6-0.

4. לאחר הניתוח טיפול

  1. מקם את החיה לתוך כלוב ההתאוששות prewarmed (ממוקם על מחוממת מדף/מזרון ב 35 ° C, או בתוך חדר מחומם).
    הערה: חוקרים ייתכן שתעדיף להשתמש אחרים טמפרטורות ומשכי לפי מקומיים.
  2. לספק כל החיות עם 200 µL של prewarmed 0.9% NaCl מלוחים sc. מיד לאחר המבצע, ב 4 שעות שלאחר המבצע, ועוד 2 x מדי יום במשך 72 h.
    הערה: הנהלת prewarmed 0.9% NaCl היא חיה הוביל. אם יותר נדרש, ניתן לערוך יותר נוזלים כדי להבטיח החלמה טובה.
  3. בכלובי ההתאוששות, מעניקה גישה בלתי מוגבלת של חיות כדורי דיאטה ספוגים, כדורי דיאטה יבש, התייבשות ג'ל, ואוכל ג'ל, לצד ad libitum גישה למים.
  4. לחזור על הזריקה carprofen sc. ב- 24 שעות פעולה-מאוחרת (ראה שלב 2.3).
    הערה: כל בעלי החיים קיבלו את אותו המינון של carprofen; השפעה neuroprotective צפוי להיות זניח.
  5. במרווחים קבועים במשך 48 שעות, לבצע לאחר הניתוח העכבר. גרימיס הבקיע17 כדי להעריך את רמות הכאב כדי לסייע ההחלטה לנהל עוד יותר נגד כאבים.
  6. שוקלים את החיות מיד לפני הניתוח, ואז ביום בעקבות ההליך. לבצע תצפיות יומי וגליונות רווחה מלאה כדי לנטר את האוכל ואת צריכת המים ואת הסימנים הקליניים.
  7. מתחייבים תצפיות פונקציונלי ב 24 שעות ותפעול לאחר 48 שעות. להעריך את העכברים בקנה מידה מוקד קשב. הערך שלהם בגוף סימטריה, מקיף חובה, הילוך, 45° רשת טיפוס, מקיפים התנהגות האיבר קבלה א-סימטרי, שפם מגע תגובה18,19,20.

5. דימות תהודה מגנטית ועיבוד תמונה

  1. למדוד את נפח הנגע (LV) באמצעות דימות תהודה מגנטית (MRI) מבניים.
    הערה: שיטות אלטרנטיביות, כגון צביעת היסטולוגית triphenyltetrazolium כלוריד (TTC), בעבר השתמשו, תשבחות מבני נתונים MRI. עם זאת, שיטה זו יכול לשמש רק על נקודת הקצה של מחקר, לא longitudinally. באמצעות סריקת MRI האורך יקטין את מספר החיות הנדרשים למחקר.
    1. לאחר 48 שעות, בעקבות של אינדוקציה של MCAO, עזים ומתנגד את העכבר עם איזופלוריין (איזופלוריין 5% ב- 1 ליטר/דקה של O2 עבור אינדוקציה), 1.5 – 2% איזופלוריין לצורך תחזוקה.
    2. להעביר את העכבר אל העריסה MRI, להניחה על חיישן נשימה לניטור קצב הנשימות שלה, שתל את החללית טמפרטורה רקטלית לניטור הטמפרטורה שלו במהלך הסריקה. המקום הגג ערוץ 2-מוח-עכבר מקבלים סליל על המוח לסימן, במקום העריסה ב קורה T אופקי נשא את הסורק.
      הערה: כאן, סליל נפח עם 72 מ מ קוטר פנימי שימש במשך שידור RF.
    3. רוכשים משוקלל T2 סריקות באמצעות רצף מהיר. הד-ספין. לקבוע את הזמן חזרה (TR) 3,000 ms ו הד הזמן (TE) גב' 40 שימוש 18 מ מ x 18 מ מ כמו שדה הראייה (FOV), ולקבל מטריצה 256 x 256 רכישה עם פרוסות של 18 מ"מ x 0.8 מ"מ וממוצעים אות 3 כ 10 דקות.
    4. לרכוש תמונות טנזור דיפוזיה (DTI) באמצעות רצף מהיר. הד-ספין. הגדר הת ל 1,730 ms, TE כדי 35 ms, של FOV עד 20 מ מ x 20 מ מ, ולקבל מטריצה 128 x 128 רכישה עם פרוסות של 16 מ מ x 1 מ מ, שני אותות ממוצעים, 14 דיפוזיה כיוונים קידוד המרבי של b-הערך של מ"מ/s 1,0242.
    5. למדוד את LV על משוקלל T2 תמונות באמצעות תצוגת תמונה של ומדידת חבילת תוכנה. למדוד את השטח lesioned, איסוף את הערכים ביחד כדי לחשב את נפח הנגע הכולל תוך כדי לקחת בחשבון את עובי הפרוסה MRI (מוגדר במהלך ה-mri).
    6. לקחת בחשבון כל נפיחות ואת האחוז באזור הנגע כרכים בעוד מדידת את ההמיספרות מלא contralateral, חולשת. נכונות עבור כל מוח נפיחות עקב בצקת באמצעות שיטה עקיפה כדי למדוד את נפח הנגע כפי שתואר לעיל21,22. רק כוללים פרוסות המכילות רקמת קליפת ולא האונה הקדמית או רקמת המוח הקטן לפי אטלס המוח עכבר רגיל כדי להימנע overcorrection.
  2. למדוד את הפרמטרים דיפוזיה של הנגע והשג את האזורים הילה והליבה של ריבית.
    1. צור את מקדם דיפוזיה נראית לעין (ADC) ומפות חיזקו החלקי (FA) מן התמונות טנזור דיפוזיה באמצעות תוכנה מתאימה של ניתוח MRI.
    2. יישר את התמונות DTI עם משוקלל T2 תמונות באמצעות תוכנת ניתוח התמונה המתאימה המסוגלים לבצע רישום ליניארי של תמונות. לאחר ההרשמה, מהמסיכה המסכות הנגע משוקלל דיפוזיה (איסכמי הליבה) המסכות הנגע משוקלל T2 (הליבה איסכמי, הילה) כדי להעריך את האזור הילה. המסכות תוצאות (core והילה) חלות על המפות ADC ו- FA לכמת את הפרמטרים דיפוזיה בתוך הליבה, הילה.
    3. לתרגם את ליבת חולשת ומסכות הילה על האמצע המוח על מנת לקבל ערכי ADC ו פא contralateral להשוואה.

Representative Results

בסך הכל 24 בוגרים זכר C57BL/6 עכברים, במשקל בין 24-31 g בזמן הניתוח, שימשו במחקר. חיה אחת מתה לאחר חסימה בעורק האמצעי (MCAO), אחד היה נשלל עקב סיבוכים כירורגיים. הנתונים המובאים כאן לקוחים מתוך עבודה שפורסמו על-ידי המחברים. אלה שימשו כדי להדגים את השפעת כלי תיקון על תוצאות MCAO11. כל הנתונים מבוטא חמישי הממוצע ± סטיית התקן. הנתונים היו העריכו סטטיסטית לנורמליות באמצעות מבחן נורמליות אומניבוס D'Agostino-פירסון. נתונים פרמטרית הושוו באמצעות הסטודנט t-test (עבור שני אמצעים), חד-כיווני אנובה עם הבדיקה Sidak (פירושו מרובים). נתונים-פרמטרית הושוו באמצעות מבחן מאן-ויטני U. ההשתנות של הנתונים פרמטרית הוערכה באמצעות F-לבדוק, ואת השתנות הנתונים שאינם פרמטרי הוערכה באמצעות הבדיקה של Levene.

בדרך כלל, בפרוצדורות MCAO, חוט הלהט occluding מוכנס לתוך המרכז לאמנות עכשווית, ECA זה מאתרים כדי למנוע את הלהט הזה עובר לתוך של ECA ולא של יק א. של ההתרחקות ECA מצדו, על התוספת של שיכוך כאבים הראה את מגמה של ירידה במשקל מופחת ב 48 שעות פוסט-MCAO, בהשוואה לנתונים ממחקרים קודמים, שנערך על ידי המנתח זהה באותו זמן MCAO באמצעות ECA מצדו אין כאבים, ואילו בעירוי הופיע מעושה, ראה איור 1.

עכברים עברה של 60 דקות MCAO-induced איסכמיה ואחריו פגיעה reperfusion עם המרכז לאמנות עכשווית כלי תיקון או את מצדו טיפוסי של הגישה המרכז לאמנות עכשווית. תיאור סכמטי של מחוברים, unligated לתיקון המרכז לאמנות עכשווית מוצגת באיור2.

Flowmetry דופלר בלייזר נעשה שימוש כדי לאשר את הדם זרימה זלוף בשטח של MCA ב MCAO, לפני ואחרי תיקון כלי המרכז לאמנות עכשווית. איור 3 מדגים את 5 דקות לאחר הסרת נימה, זרימת הדם האזורית מוחי (rCBF) גדל באופן משמעותי על אזור במוח MCA. זלוף נשמר עד תיקון כלי, עם עלייה זלוף אל השטח MCA שמוצג בעקבות התיקון כלי המרכז לאמנות עכשווית, רומז כי התיקון המרכז לאמנות עכשווית מותרות של זלוף דם מוגברת אל השטח איסכמי לעומת הסתמכות על המעגל של וויליס לבד.

MRI משוקלל T2 שימשו לקביעת בעירוי הכולל, ושימשו DTI סריקות כדי לקבוע את הליבה LV, 48 שעות לאחר MCAO. איור 4A מראה הבדל משמעותי בעירוי הסיכום או הליבה בין קבוצות הליך מחוברים ותיקון. עם זאת, ההשתנות נתונים עבור שני סה כ המרכזיים LV, כפי העריך באמצעות הבדיקה של Lavene עבור של לא פרמטרי או את F-בדיקה עבור נתונים פרמטרית, צומצם באופן משמעותי בתוך הקבוצה תיקון המרכז לאמנות עכשווית. סה כ בעירוי שנשברה למטה לתוך LV קורטיקליים ו subcortical, כפי שמוצג באיור 4B. החלק בקליפת המוח היה משתנה באופן משמעותי פחות בקבוצה תיקון המרכז לאמנות עכשווית, ואילו החלק תת קורטיקלית של הנגע לא הושפע בין שתי הקבוצות פרוצדורלי.

ניתוח כוח ציינו כי פחות בעלי חיים לכל טיפול קבוצת יהיה נדרש להדגים ירידה של 30% בעירוי בעקבות MCAO באמצעות המרכז לאמנות עכשווית תיקון לעומת ההליך טיפוסי המרכז לאמנות עכשווית-ובין אם לא, ראה טבלה 1. ההנחה של צריכת החשמל 1-β = 0.8, ברמת מובהקות α = 0.05, חיזוי של 30% הפחתה בעירוי בין מבחן שליטה היפותטי קבוצות שימשו לניתוח כוח. יתר על כן, הנחנו על סטיה שווה בין הקבוצות. טבלה 1 מציגה את מספר החיות הדרושה לבדיקות ומשמש קבוצות שליטה כאשר משתמשים גם טיפוסי מאתרים-המרכז לאמנות עכשווית או בשיטה לתיקון מעודכן של המרכז לאמנות עכשווית, כפי שמתואר כאן. שימו לב: קבוצת הניסוי מתייחס קבוצה שטופלו היפותטי של בעלי חיים, קבוצת הביקורת מתייחס לקבוצת הבקרה היפותטי; שתי הקבוצות ירצו לעבור MCAO.

Figure 1
איור 1: בשילוב טיפול נגד כאבים, העדרו של ECA מצדו על תוצאות בעקבות MCAO. (א) משקל הגוף, מוצג כאחוז של טרום-MCAO משקל, ירידה d 2 הראשון בעקבות את MCAO לשתי הקבוצות. קבוצת ECA-unligated (שיכוך כאבים-שטופלו אין מצדו ECA ב MCAO) הראו מגמה של ירידה במשקל מופחת ביום השני בעקבות את MCAO. (B) לוח זה מראה את נפח הנגע (3מ"מ) נמדדת כלוריד triphenyltetrazolium רגיל (TTC) צביעת 48 שעות לאחר MCAO. הנתונים המוצגים הם הממוצע ± סטיית התקן. ECA מאתרים: n = 17, ECA unligated: n = 10. איור זה שונה מ- Trotman-לוקאס. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2: מפרטים טכניים מציג את השיטה הרגילה של המרכז לאמנות עכשווית, את המרכז לאמנות עכשווית חלופית לתקן את השיטה בעקבות MCAO. (א) הסכמות מתארת מחוברים באופן קבוע המרכז לאמנות עכשווית בעזרת תפרים שאינם נמסים חלה על צדי החתך המרכז לאמנות עכשווית, וכתוצאה מכך מצדו הקבע של המרכז לאמנות עכשווית נכון. (B) הסכמות מתארת בשיטת התיקון חלופית של המרכז לאמנות עכשווית. משטח רקמת קטן מצופה פיברינוגן, איטום תרומבין המשמש כדי לכסות את החתך המרכז לאמנות עכשווית, איטום זה כדי לאפשר את זלוף המלא של הזכות, המרכז לאמנות עכשווית. איור זה שונה מ- Trotman-לוקאס. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 3
איור 3: דם מוחי אזוריים מפרמטרי הזרם (rCBF) בעקבות MCAO. RCBF לשנות 5 דקות לאחר הסרת נימה MCAO עבור שני ובין אם-לא המרכז לאמנות עכשווית ותיקן המרכז לאמנות עכשווית הקבוצות (post-MCAO), ביחס rCBF שנמדד במהלך MCAO. לוח זה מציג את הנתונים rCBF מיד לפני התיקון כלי המרכז לאמנות עכשווית (לפני התיקון) ו- 5 דקות לאחר התיקון המרכז לאמנות עכשווית (לאחר תיקון). עליות משמעותיות rCBF מוצגים 5 דקות לאחר הסרת נימה (post-MCAO) בשתי הקבוצות. עלייה נוספת rCBF מוצג בעקבות התיקון המרכז לאמנות עכשווית (לאחר תיקון) בקבוצה תיקון המרכז לאמנות עכשווית. אין הבדל rCBF מוצג בין 5 דקות פוסט-MCAO ותיקון מראש. הנתונים המוצגים הינם מרוכז מן הזמן מנות הנתונים דיווח נקודות הזמן מפתח, כאן כמו הממוצע ± סטיית התקן. המרכז לאמנות עכשווית מאתרים: n = 10, המרכז לאמנות עכשווית תוקן: n = 10; P < 0.01, * * *P < 0.001, ns: בלתי-משמעותיים. איור זה שונה מ- Trotman-לוקאס. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 4
איור 4: ניתוח של אמצעי האחסון הנגע מתקבל על ידי טכניקות MRI. (א) לוח זה מראה את עוצמת הקול הנגע (LV; מ מ3) ב- 48 שעות לאחר MCAO בעירוי הכולל שנלקחו MRI משוקלל T2 תמונות (LV סה כ), בעירוי הליבה שנלקחו DTI סריקות וניתוח (LV הליבה). להחליפן בתמונות יציג את נפח הנגע הכולל מתמונת פרוסה סריקה T2 עם DTI הליבה הנגע נפח המסכה מוחל. ההשתנות בתוך הקבוצות צומצם באופן משמעותי עבור שניהם LV הכולל (P = 0.015, המרכז לאמנות עכשווית תיקון: n = 10, המרכז לאמנות עכשווית מאתרים: n = 10, F-מבחן) והליבה LV (P = 0.043, המרכז לאמנות עכשווית תיקון: n = 9, המרכז לאמנות עכשווית מאתרים: n = 6, הבדיקה של Lavene), העריך באמצעות F-מבחן עבור נתונים פרמטרית או הבדיקה של Levene עבור נתונים שאינם פרמטרי. (B) לוח זה מראה את LV ב 48 שעות בעקבות MCAO, שנלקחו MRI משוקלל T2 תמונות ו מחולק אזורים קורטיקליים ו subcortical הנגע. התיקון המרכז לאמנות עכשווית הקטינה באופן משמעותי את השתנות הנתונים (P = 0.03, F-מבחן) בחלק קורטיקלית של הנגע, אך אין השפעה על הנתונים הראו השתנות בחלק subcortical של הנגע. המרכז לאמנות עכשווית תיקון: n = 10, המרכז לאמנות עכשווית מאתרים: n = 10. הנתונים המוצגים הם הממוצע ± סטיית התקן. # P < 0.05 (F-מבחן), xP < 0.05 (מבחן של Lavene). איור זה שונה מ- Trotman-לוקאס. et al. 11. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

הגישה נפח הנגע
(LV; מ מ3; זאת אומרת ± ש)		 כוח רמת המובהקות ההבדל Anticiapted גודל הקבוצה נדרש
המרכז לאמנות עכשווית ובין אם לא (הגישה המסורתית) 94.08 ± 53.79 0.8 0.05 30% n = 58
המרכז לאמנות עכשווית תוקן (גישה חדשה) 51.73 ± 22.78 0.8 0.05 30% n = 35

טבלה 1: נציג כוח ניתוח השוואת מסורתי מצדו המרכז לאמנות עכשווית עם החלופה, המרכז לאמנות עכשווית לתקן את השיטה המוסברת. טבלה זו מציגה הניתוח של כוח שנערך כדי לחשב את גודל הקבוצה הצפוי הנדרש כדי לזהות הבדל משמעותי בעירוי בין קבוצת ביקורת, הגישה (החדשה) מסורתי או חלופיים קבוצת בדיקה (חזה). הטבלה מציגה קבוצת גדלים ככל הנדרש אם ההנחה היא כוח של 0.8, רמת מובהקות של 0.05 מוחל, אם קבוצת הניסוי החזוי מראה הבדל 30% בעירוי לעומת קבוצת הביקורת. הטבלה מציגה את תוצאות שתי הגישות MCAO (של המרכז לאמנות עכשווית-ובין אם לא ותיקן את המרכז לאמנות עכשווית-) כדי לקבוע אם יש הבדל במספר חיות לזכות הבדל 30% LV. עבור שתי שיטות, ההנחה של סטיה שווה בין הבדיקה לבין קבוצת הביקורת. איור זה שונה מ- Trotman-לוקאס. et al. 11.

Discussion

פילמנט אינדוקציה של MCAO ארעי בחולדות הוא הנפוצות ביותר בשימוש דגם ניסיוני שבץ, שכן היא מאפשרת פגיעה reperfusion לאזור הנגוע, מחקה ההתרחשות של אירועים בעקבות שבץ איסכמי קליניים7. דווח כאן היא גישה כירורגית חלופי השיטה המסורתית של הלהט-induced MCAO ארעי בעכברים. הגישה החלופית, מעורבים וטיפול נגד כאבים, הימנעות מצדו ECA, תיקון החתך המרכז לאמנות עכשווית, תוצאות השתנות LV מופחתת כאשר העריך באמצעות שיטות מכתימים היסטולוגית11ו- MRI.

הגישות המסורתיות לזירוז MCAO בעיקר להסתמך על חיתוך, או לפחות מצדו, של ECA, אשר הוכח, בחולדות, להשפיע על התנהגות שתיה, עלייה במשקל הגוף בעקבות MCAO14. פרוטוקול יוגדרו כאן, בעכברים, עם ההתרחקות ECA מצדו והוספת שיכוך כאבים, הציע לירידה במשקל הגוף בעקבות את MCAO עם השפעה באמצעי האחסון הנגע. השימוש של שיכוך כאבים למנוע, או לפחות לא דיווחו, ברוב המכריע של מחקרים קו נסיוני, עקב תופעות אפשריות מבלבלים על תוצאות הניסוי. עם זאת, הימנעות שיכוך כאבים לחלוטין לא תמיד מוצדק, יש צורך לאזן בין צרכי רווחת החיות עם ההישג של מטרות מדעיות.

הבדלי גודל בעלי חיים, זן ו אנטומיה כשאבדן, בנוסף פילמנט גודל וסוג וריאציות מוצעים כל כדי להשפיע על קו תוצאות23,24. הגישה החלופית המתוארים כאן מונע ההסתמכות על הפרה במהלך פגיעה reperfusion, ובכך להקטין, לפחות בחלקו, ההשתנות ראיתי בין חיות נפח הנגע. אנטומיה פרה זה משתנה מאוד בעכברים, בפרט ב C57BL /6 זן, אשר משמש לעתים קרובות בלימודי קו נסיוני. 90% של עכברים C57BL/6 יש של פרה לא הושלמה עקב מגוון האחורי המקיימים תקשורת עורק (PcomA) patency, אשר עלולה להיות השפעה באמצעי האחסון של נזק איסכמי בשל זלוף לא מספיקות של מבנים מחוץ לשטח MCA13, 25. תיקון של המרכז לאמנות עכשווית בעכברים, כפי שמוצג להלן, יוצרת הקמתה מחדש של דם לזרום דרך המרכז לאמנות עכשווית לאזור איסכמי, שתואר קודם לכן כמו חולדות15. נציג הנתונים מראים כי תיקון המרכז לאמנות עכשווית מגביר פגיעה reperfusion, למרות זרימת הדם ב המרכז לאמנות עכשווית לא נמדדה ישירות. עם זאת, זה אפשרי עבור המנתח להמחיש את reperfuse המרכז לאמנות עכשווית עם דם לאחר תיקון כלי, כמו היא מחזירה למצב הפועמת ומלא כל הזמן תא המטען, לקרע, למיקום התיקון. אישור חזותי זה, יחד עם לייזר קריאות flowmetry דופלר של האזור איסכמי, יכול לשמש כדי לאשר את התיקון מוצלח של כלי השיט. הזמן בין היישום משטח רקמת הסרת הסרטון הקיבול של המרכז לאמנות עכשווית יכול להשפיע על patency וכתוצאה מכך של המרכז לאמנות עכשווית, כמו צמצום הזמן בין היישום pad רקמות, הסרת הסרטון ימנע משטח רקמת הקפדה על o pposite צד המרכז לאמנות עכשווית. למרות טכנית מאתגר, ההליך MCAO חלופי שמוסבר כאן אינו דורש שום כישורים נוספים מאשר אלו הנדרשים לביצוע של אינדוקציה כירורגי של MCAO בעכברים.

באופן מסורתי המשויך השתנות גבוהה במדדי תוצאה, קו נסיוני מחקרים ייתכן נטייה להיות חלשה. דרישות אתיות והרווחה בשילוב עם חששות כלכליים ופרקטיים עשוי לתרום מחקרים להיות חלשה. על-ידי הפחתת מידת ההשתנות התוצאה, לכן, הפקת תוצאות הנגע עקבית יותר על פני קבוצת הניסוי, ניתן לבצע חישוב כוח יעיל יותר עם המטרה של מחקרים להיות מופעל כראוי.

לסיכום, אלטרנטיבית המרכז לאמנות עכשווית תיקון נוהל זה, בעכברים, התוצאה פחות השתנות נפח הנגע בעקבות שבץ ניסיוני ואת מאפשר קטן ניסיוני לקבוצות להידרש לבדיקת אפקט הטיפול בעת הצורך כוח חישובי משמשים.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו הייתה במימון המרכז הארצי עבור החלפת, עידון הפחתה של בעלי חיים במחקר (NC3Rs; NC/M000117/1 כדי CG). המחברים תודה המטה של החטיבה של השירותים ביו, מאוניברסיטת לסטר, לטיפול שלהם של חיות ניסוי, מריה Viskaduraki לייעוץ סטטיסטי שלה. התוצאות נציג מותאמים באישור המחלה מודלים & מנגנונים11.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.7 mm flexible single fibre optic probe Moor Instruments, UK P10d Use with master probe code: VP10M200ST
7-0 silicone coated monofilament Doccol, USA 701956PKRe Item dependent on animal size and weight - use manufacteurer guidelines. Product code here was used for representative results shown in article.
9.4T Preclinical MRI system Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA MY11520101 Equipped with gradient and RF coils suitable for mouse brain imaging
Animal monitoring and gating equipment SA Instruments, Stony Brook, New York, USA 22124005 MRI compatible temperature and respiration monitoring
Bupivacaine National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK 512345 Marcaine
C57BL/6 Mice Charles River, Oxford, UK B6JSIMA49D
Carprofen Norbrook Laboratories 143658 Carprieve 5% w/v Small animal solution for injection
Chlorhexidine 4% hand cleanser solution VWR International Ltd, Lutterworth, UK MOLN10008780 HibiScrub Antimicrobial hand cleanser, Molnlycke Health Care
Cotton buds National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK 213512 Any plastic body, cotton bud tip are suitable once made sterile by autoclaving.
Dissecting stereoscope Carl Zeiss OPMI99 Resident piece of equipment.
Any binocular dissecting stereoscope capable of x1-x5 magnification will be suitable.
dissolvable 6-0 sutures National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK 9544 Absorbable Sutures Ethicon Coated Vicryl 6/0 (Ethicon code: W9981)
Donut probe holder Moor Instruments, UK PHDO Probe holder for mouse, required to be used with single fibre optic probe when used with laser doppler flowmtry machine.
dumont #5 forceps World Precision Instruments, Hertfordshire, UK 500342
Fibrinogen and thrombin sealant Baxter, Berkshire, UK 1502243 TISSEEL Ready to use solutions for Sealant 2 mL
Gel food Datesand group, Manchester, UK 72065022 Diet Gel Recovery
Image display and measuring software package 3D Slicer https://www.slicer.org/ Version 4.0
Image display and measuring software package NIH, Maryland, USA https://imagej.nih.gov/ij/index.html NIH/ImageJ
LDF monitor Moor Instruments, UK moorVMS-LDF
micro vannas scissors InterFocus Ltd, Linton, UK 15000-08 Other microvannas spring scissors can be used as an alternative, although fine tips are required.
Microvascular clip World Precision Instruments, Hertfordshire, UK 15911 10 G Vessel Clip
microvascular clip holders World Precision Instruments, Hertfordshire, UK 14189
MRI acquisition and analysis software Agilent Technologies, Santa Clara, California, USA VnmrJ Version 4.2 Revision A
no. 15 scalpel Scientific Laboratory Supplies, Nottingham, UK INS4678 Sterile No15 Scalpel - manufactuer number P305. Other suppliers are available.
Non-disolvable 6-0 suture National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK W529 Ethicon Mersilk Sutures
Ocular lubricant National Veterinary Services, Stoke-on-trent, UK 847288 Lacrilube (5100G13)
Optical matching gel Moor Instruments, UK PMG
Pulse Oximetry Reader Starr Life Sciences Corp., Oakmont, PA, USA MouseOx MouseOx - rat & mouse pulse oximeter & physiological monitor
Use with mouse thigh sensor.
Rehydration gel Datesand group, Manchester, UK 70015022 HydroGel
Small hair clippers vetproductsuk.com HS61 Contura Cordless trimmer/clippers
Sterile 0.9 % NaCl Solution VWR International Ltd,
Lutterworth, UK		 LOCA3528286 SODIUM CHLORIDE 0.9% W/V INTRAVENOUS INFUSION BP 500 ML IN ECOFLAC½ PLUS
sterile Petri dish VWR International Ltd, Lutterworth, UK 5168021 50 mm sterile Petri dish. Any brand is suitable. Minimum 50 mm diameter is required.
Topical tissue adhesive World Precision Instruments, Hertfordshire, UK 503763 GLUture topical Tissue Adhesive
Waterproof superglue Loctite Loctite Superglue Precision Max Available at most hardware shops.
White paper chip Datesand group, Manchester, UK CS1BPB Pure-O'Cel

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. O'Collins, V. E., et al. 1,026 Experimental treatments in acute stroke. Annals of Neurology. 59 (3), 467-477 (2006).
  2. Sutherland, B. A., et al. Neuroprotection for Ischaemic Stroke: Translation from the Bench to the Bedside. International Journal of Stroke. 7 (5), 407-418 (2012).
  3. Reeves, M. J., et al. Acute Stroke Care in the US: Results from 4 Pilot Prototypes of the Paul Coverdell National Acute Stroke Registry. Stroke. 36 (6), 1232-1240 (2005).
  4. Wardlaw, J. M., Murray, V., Berge, E., del Zoppo, G. J. Thrombolysis for acute ischaemic stroke. Cochrane Database of Systematic Reviews. (7), CD000213 (2014).
  5. Pangalos, M. N., Schechter, L. E., Hurko, O. Drug development for CNS disorders: strategies for balancing risk and reducing attrition. Nature Reviews Drug Discovery. 6 (7), 521-532 (2007).
  6. Hossmann, K. A. Pathophysiological basis of translational stroke research. Folia Neuropathologica. 47 (3), 213-227 (2009).
  7. Ringelstein, E. B., et al. Type and extent of hemispheric brain infarctions and clinical outcome in early and delayed middle cerebral artery recanalization. Neurology. 42 (2), 289-289 (1992).
  8. Carmichael, S. T. Rodent models of focal stroke: Size, mechanism, and purpose. NeuroRX. 2 (3), 396-409 (2005).
  9. Dirnagl, U. Bench to Bedside: The Quest for Quality in Experimental Stroke Research. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 26 (12), 1465-1478 (2006).
  10. Ingberg, E., Dock, H., Theodorsson, E., Theodorsson, A., Ström, J. O. Method parameters' impact on mortality and variability in mouse stroke experiments: a meta-analysis. Scientific Reports. 6, 21086 (2016).
  11. Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Fern, R., Gibson, C. L. An alternative surgical approach reduces variability following filament induction of experimental stroke in mice. Disease Models & Mechanisms. 10 (7), 931-938 (2017).
  12. Macrae, I. M. Preclinical stroke research - advantages and disadvantages of the most common rodent models of focal ischaemia. British Journal of Pharmacology. 164 (4), 1062-1078 (2011).
  13. McColl, B. W., Carswell, H. V., McCulloch, J., Horsburgh, K. Extension of cerebral hypoperfusion and ischaemic pathology beyond MCA territory after intraluminal filament occlusion in C57Bl/6J mice. Brain Research. 997 (1), 15-23 (2004).
  14. Trueman, R. C., et al. A Critical Re-Examination of the Intraluminal Filament MCAO Model: Impact of External Carotid Artery Transection. Translational Stroke Research. 2 (4), 651-661 (2011).
  15. Dittmar, M. S., et al. The role of ECA transection in the development of masticatory lesions in the MCAO filament model. Experimental Neurology. 195 (2), 372-378 (2005).
  16. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving Bioscience Research Reporting: The ARRIVE Guidelines for Reporting Animal Research. Plos Biology. 8 (6), e1000412 (2010).
  17. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nature Methods. 7 (6), 447-479 (2010).
  18. Orsini, F., et al. Targeting Mannose-Binding Lectin Confers Long-Lasting Protection With a Surprisingly Wide Therapeutic Window in Cerebral Ischemia. Circulation. 126 (12), 1484-1494 (2012).
  19. Simoni, M. G. D., et al. Neuroprotection by Complement (C1) Inhibitor in Mouse Transient Brain Ischemia. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 23 (2), 232-239 (2003).
  20. Clark, W., Gunion-Rinker, L., Lessov, N., Hazel, K. Citicoline Treatment for Experimental Intracerebral Hemorrhage in Mice. Stroke. 29 (10), 2136-2140 (1998).
  21. Lin, T. N., He, Y. Y., Wu, G., Khan, M., Hsu, C. Y. Effect of Brain Edema on Infarct Volume in a Focal Cerebral-Ischemia Model in Rats. Stroke. 24 (1), 117-121 (1993).
  22. Loihl, A. K., Asensio, V., Campbell, I. L., Murphy, S. Expression of nitric oxide synthase (NOS)-2 following permanent focal ischemia and the role of nitric oxide in infarct generation in male, female and NOS-2 gene-deficient mice. Brain Research. 830 (1), 155-164 (1999).
  23. Connolly, E. S., Winfree, C. J., Stern, D. M., Solomon, R. A., Pinsky, D. J. Procedural and strain-related variables significantly affect outcome in a murine model of focal cerebral ischemia. Neurosurgery. 38 (3), 523-531 (1996).
  24. Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse Strain Differences in Susceptibility to Cerebral Ischemia are Related to Cerebral Vascular Anatomy. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 13 (4), 683-692 (1993).
  25. Kitagawa, K., et al. Cerebral Ischemia after Bilateral Carotid Artery Occlusion and Intraluminal Suture Occlusion in Mice: Evaluation of the Patency of the Posterior Communicating Artery. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 18 (5), 570-579 (1998).

Tags

רפואה גיליון 143 מדעי המוח שבץ MCAO ארעי המוח איסכמיה עורק המוח התיכון
חסימה בעורק האמצעי המאפשר פגיעה Reperfusion באמצעות תיקון עורק הראש נפוצות בעכברים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E.,… More

Trotman-Lucas, M., Kelly, M. E., Janus, J., Gibson, C. L. Middle Cerebral Artery Occlusion Allowing Reperfusion via Common Carotid Artery Repair in Mice. J. Vis. Exp. (143), e58191, doi:10.3791/58191 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter