Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Bioengineering
Click here for the English version

Bioengineering

Изоляция и Decellularization целом свинину поджелудочной железы

Published: October 10, 2018 doi: 10.3791/58302
Automatic Translation
*1, *2, 1, 1
1Department of Surgery, Institute of Clinical Sciences, Sahlgrenska Academy, University of Gothenburg, 2The Transplant Institute, Sahlgrenska University Hospital
* These authors contributed equally

Summary

Тканевая инженерия всей поджелудочной железы является проблемой из-за своей эндокринной и экзокринной функции. Мы покажем метод для рассечения нетронутыми свинину поджелудочной железы и процесса успешных decellularization, перфузии моющих средств X-100 Тритон, Дезоксихолат натрия и дезоксирибонуклеаза.

Abstract

Тканевая инженерия всей поджелудочной железы может улучшить текущего лечения сахарного диабета. Конечная цель является инженер поджелудочной железы ткани из аллогенной или культивированная источника с клеток человека. Демонстрация методов эффективного рассечение, decellularization и recellularization свинину поджелудочной железы может принести пользу области. Сродни человека поджелудочная железа, свинину поджелудочная железа имеют специальное анатомическое соглашение с тремя лопастями (селезеночной, двенадцатиперстной кишки и подключения) округлые, двенадцатиперстной и тонкой кишки. Двенадцатиперстной кишки мочку поджелудочной железы подключается в двенадцатиперстную кишку, несколько мелких кровеносных сосудов. Тканевая инженерия поджелудочной железы является сложным из-за своей эндокринной и экзокринной характер. В этой статье мы покажем подробный протокол вскрыть всю свинину поджелудочной железы и decellularize его с моющими средствами при сохранении своей структуры и некоторые компоненты внеклеточного матрикса. Для достижения полной перфузии, аорты выбирается в качестве входного и воротной вены как выход. Лигируют других кровеносных сосудов (печеночная артерия, селезеночной вены, Селезеночной артерии, верхней брыжеечной артерии и Вены дерево) и желчных протоков. Для предотвращения формирования тромбов, свинья является гепаринизированным и, сразу после вскрытия, орган промывается холодной гепарина. Для подавления действия экзокринной ферментов, поджелудочной decellularization установлен на 4 ° C. Decellularization осуществляется перфузии Тритон X-100, Дезоксихолат натрия и дезоксирибонуклеаза, с прерывистой и окончательный обширные промывкой. С успешным decellularization поджелудочной железы появляется белый, и гистологической оценки с гематоксилином и эозином показывает отсутствие ядер с структуры сохранились внеклеточного матрикса. Таким образом предложенный метод может использоваться для успешного рассекать и decellularize весь свинину поджелудочной железы.

Introduction

Сахарный диабет характеризуется наличием повышенного уровня глюкозы в крови. Он признан проблемой общественного здравоохранения в большинстве стран1. Высокий уровень глюкозы в крови влияет на кровеносные сосуды и нервную систему, вызывая повреждение глаза, сердце, почки, и ишемии конечности. Традиционные методы лечения включают в себя инъекции экзогенного инсулина, наркотиков и изменения образа жизни. Отложив в сторону для лечения этого заболевания, в некоторых случаях, доступные методы лечения не в состоянии поддерживать инсулина на терапевтических уровнях, что приводит к гипергликемии. Хотя трансплантация островков или всей поджелудочной железы устраняет болезни, не делается это обычно из-за нехватки подходящих доноров органов и риски и трудности от2иммуносупрессии и инкапсуляции.

Текущий улучшений в области инженерных и регенеративной медицины ткани обладают потенциалом для обеспечения решения для этих проблем. С техникой decellularization клеточного материала от человека или животных доноров могут быть удалены во время важных внеклеточного матрикса (ECM) белки, факторы роста, и в леса сохранились сигнальных молекул. Такие леса потенциально могут быть трансплантированы без необходимости иммуносупрессия, чтобы восстановить функции органа после recellularization с получателя и не иммуногенность стволовые клетки3,4. Ткани инженерных органов из аллогенной или культивированная источников может использоваться в клинической трансплантологии, как белки основных внеклеточной матрицы сохраняются среди видов и не может быть отклонена после пересадки5.

Decellularization это хорошо изучить метод оптимального применения физической силы, химических моющих средств и ферментов в физиологической установки для удаления клеток и ядерный материал из ткани или органа. Recellularization — это процедура заполнения ячейки обратно в ацеллюлярной орган. Это интеллектуально жесткой процедурой, требующей большое количество клеток, оптимального заполнения ячейки стратегии и системы биореактор для культуры органа на физиологически приемлемых условий, как температура, давление и газов6.

Поджелудочной железы можно рассматривать сложные ткани для тканевой инженерии из-за своей эндокринной и экзокринной возможностей. Экзокринной ткани выделяет несколько пищеварительные ферменты, в то время как эндокринная часть выделяет гормоны, включая инсулин. Decellularization нетронутыми поджелудочная железа от мыши7,8, человека9и10 свиней уже сообщалось с помощью ферменты (трипсин, дезоксирибонуклеаза [DNase]) и неионных (Тритон X-100) и ионной моющих средств ( Дезоксихолат натрия [SDC] и лаурилсульфат натрия [ПБ]). Однако после опубликованные протоколы, мы боролись с успешным диссекции и полный перфузии и decellularization при сохранении структуры ECM. Мы предположили, что применяемых моющих средств во время decellularization вызывают лизис клеток, высвободив тем самым пищеварительные ферменты в орган. Выпущенные ферментов нанести необратимый ущерб на эшафот ECM и сделать его неэффективным для decellularization и recellularization. Дизайн метод, который эффективно decellularizes поджелудочной железы при подавляя действие пищеварительных ферментов может решить эту проблему. Мы выбрали стратегию Пелозо et al., о decellularization поджелудочной железы при холодной температуре, хотя они не сообщают о том, почему холодной температуры используется9. В то же время мы разработали стратегию диссекции с изменениями от Taylor et al. , выбрав аорты как перфузии впуска через ствол Целиакия (КТ) и превосходной верхней брыжеечной артерии (SMA)11.

В недавно опубликованной статье12мы демонстрируем метод для эффективной изоляции и decellularization свинину поджелудочной железы при сохранении некоторых компонентов ECM. В этом документе мы показать подробное описание как вскрыть весь свинину поджелудочной железы содержащие селезеночной, двенадцатиперстной кишки и подключение лопастями и настоящее время поэтапного протокол для успешного decellularization.

Protocol

Рассечение свинину поджелудочной железы и decellularization процедуры, представленные здесь следовать этические принципы Университета Гетеборга.

1. Подготовка Decellularization настройки

  1. С помощью Трубы силиконовые 3 x 5 мм, подключиться насос peristalic серии стиральный порошок входе контейнера и затем поджелудочной железы в органе камеры через дегазатор (см. Рисунок 1). Подключите мужской luer к свободный конец трубки в орган палаты.
  2. С помощью другой силиконовой трубки 3 x 5 мм, подключите орган палаты к моющим средством выхода контейнера через Перистальтический насос для сбора перфузии моющего средства.
  3. Подключите к свободные концы труб в стиральный порошок входе контейнера и моющие средства розетки cointainer немеченого пипетки 2 мл.
  4. Сохранить все настройки при 4 ° C.

Figure 1
Рисунок 1: подготовка перфузии set-up. С помощью трубки силиконовые 3 x 5 мм, как показано в настройке, соединиться в серии стиральный порошок входе контейнер Перистальтический насос, вакууматор и орган палаты. Черные стрелки показывают направление потока из контейнера стиральный порошок входе орган палату. Для моющего средства розетки используйте другой трубки силиконовые 3 x 5 мм и подключить орган палаты через Перистальтический насос к контейнеру моющие средства розетки. Красные стрелки показывают направление потока от орган палаты для контейнера моющие средства розетки. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

2. Приготовление растворов Decellularization

  1. Решение 1 (фосфат амортизированное saline [PBS]): добавить 8 г хлорида натрия (137 мм), 0,2 г, хлорида калия (2,7 мм), 1,44 г фосфата натрия (10 мм) и 0,24 г фосфата калия (1,8 мм) 1 Л сверхчистой воды и перемешать до растворения. Отрегулируйте пэ-аш до 7,4 соляной кислотой (HCl). В общей сложности 3,2 Л этого решения не требуется.
  2. Решение 2 (PBS + гепарина): до 1 Л раствора 1, добавить 3,4 мл гепарина (17 международных единиц [ме] / мл). Подготовить этот свежие решения и держать его на льду, до тех пор, пока она становится холодно. В общей сложности 1,2 Л этого решения не требуется.
  3. Решение 3 (ультрачистая вода + азид натрия + динатриевой Этилендиаминтетрауксусная кислота [ЭДТА]): до 1 Л сверхчистой воды, добавить 1,86 г ЭДТА (5 мм) и 200 мг азид натрия (0,02%). Размешайте до растворения соли. Прохладный решение 4 ° C перед использованием. В общей сложности 22 Л этого решения не требуется.
  4. Решение 4 (PBS + азид натрия + ЭДТА): до 1 Л раствора 1, добавить 200 мг азид натрия (0,02%) и 1,86 г (5 мм) ЭДТА. Размешайте до растворения соли. Прохладный решение 4 ° C перед использованием. В общей сложности 1 Л этого решения не требуется.
  5. Решение 5 (ультрачистая вода + азид натрия): до 1 Л сверхчистой воды, добавить 200 мг азид натрия (0,02%). Размешайте до растворения соли. Прохладный решение 4 ° C перед использованием. В общей сложности 260 Л этого решения не требуется.
    Примечание: ЭДТА образует осадок с SDC и был исключен из решения 5, поскольку он будет использоваться для немедленной промывки до и после лечения SDC.
  6. Решение 6 (SDC + X-100 Тритон): 940 мл сверхчистой воды, добавьте 40 г (4%) SDC, 60мл (6%) X-100 Тритон, 200 мг азид натрия (0,02%) и 69,6 мг фторида (0,4 мм) phenylmethylsulfonyl (PMSF). Размешайте до растворения. Прохладный решение 4 ° C перед использованием. Добавление PMSF перед использованием. В общей сложности 9,6 Л этого решения не требуется.
  7. Решение 7 (DNase): Добавить 10.000 Кунитц единиц DNase-I в 250 мл (40 Кунитц единиц/мл) Дульбекко PBS, содержащие CaCl2 и MgCl2. Подготовьте свежие и немедленно использовать. Теплый раствор до 37 ° C перед использованием.
  8. Решение 8 (PBS + натрия азид): до 1 Л раствора 1, добавить 200 мг азид натрия (0,02%). Размешайте до растворения соли. Прохладный решение 4 ° C перед использованием. В общей сложности 1 Л этого решения не требуется.

3. рассечение свинину поджелудочной железы

Примечание: В этом исследовании, свинину поджелудочная железа были расчленены от умерщвлены, Женский свиней гепаринизированным (400 МЕ/кг) весом 45 кг из фермы.

  1. Место свиней на таблице рассечение в лежачем положении.
  2. Сделайте срединной линии разреза от xiphoidal процесса к лобковой кости (приблизительно 40 см) с помощью скальпеля, подвергая все органы брюшной полости.
  3. Найдите селезеночной, двенадцатиперстной кишки и подключение лопастями.
  4. Найдите уровень большого дуоденального сосочка и перевязать двенадцатиперстную кишку устно с этого сайта, с помощью двух отдельных швов.
  5. Перевязать уступает пищевода с двух отдельных швов и режут между лигатуры ножницами вывезти живота.
  6. Отдельной соединительной ткани из толстой кишки, чтобы достичь тонкой кишки.
  7. Отдельной соединительной ткани толстой кишки, что придает селезеночной мочку поджелудочной железы.
  8. Удалите двоеточие из тонкой кишки после безлигатурные артерии.
  9. Найти уступает брыжеечных вен и нижней верхней брыжеечной артерии дерево и перевязать с одним швом, где они появляются каудально поджелудочной железы.
  10. Перевязать Селезеночной артерии и Вены вместе с одним швом, близко к селезенке, в рубчик и дистально резать с ножницами, чтобы удалить селезенку.
  11. Следуйте двенадцатиперстная кишка, пока двенадцатиперстной кишки и подключение лопастями очищаются и перевязать двенадцатиперстную кишку в конце с двух отдельных швов.
  12. Вскрыть воротной вены, перевязать с одним швом для предотвращения любой утечки крови из печени и сократить проксимально лигатур. Воротной вены служит выход во время decellularization.
  13. Вскрыть и перевязать желчных протоков и печёночной артерии с двумя швами. Вырежьте дистально, чтобы швы.
  14. Найдите аорты при почечных вен и проанализируем его в черепной направлении от мышечной и соединительной ткани, пока он не достигнет области поджелудочной железы.
  15. Переверните поджелудочной железы мягко и вскрыть аорты, сохраняя нетронутыми, SMA и КТ и режут аорты превосходит CT и уступает SMA с ножницами.
  16. Вырезать оставшиеся окружающих тканей с ножницами и вывезти поджелудочной железы.
  17. С помощью 50-мл шприц, подключен к 4-мм arteriotomy канюлю, флеш орган через аорту с решением 2, до тех пор, пока он perfuses весь орган, или до тех пор, пока весь орган становится холодно.

4. Подготовка свинину поджелудочной железы Decellularization

  1. Держите поджелудочной железы, при температуре 4 ° C или на льду на протяжении всего процесса.
  2. Вырезать швы двенадцатиперстную кишку с помощью ножниц, очистить его продовольствия путем промывки 50-150 мл сверхчистой воды с помощью пипетки 25 мл и перевязать его снова с швами.
  3. Перевязать один конец аорты и всех отраслей помимо SMA и КТ с швы для предотвращения утечки.
  4. Вставьте из другого конца аорты 4-мм arteriotomy канюлю и перевязать с швами.
  5. Perfuse поджелудочной железы с 3 решение за 1 час при 20 мл/мин с использованием decellularization установки.
    Примечание: Заполнять трубы насоса с решением 3 таким образом, чтобы не ввести поджелудочной железы. Ищите любые утечки со всех сторон органа и перевязать все открытые сосудистых ветвей с шовные материалы, за исключением воротной вены.
  6. Заморозить поджелудочной железы при-20 ° C в 4 решения до начала decellularization.

5. decellularization свинину поджелудочной железы

  1. Оттепель поджелудочной железы при 4 ° C.
  2. Запустите Перистальтический насос в decellularization установке с решения 3 в 20 мл/мин до тех пор, пока нет пузырьков воздуха наблюдается в стиральный порошок трубку.
  3. Место поджелудочной железы в decellularization контейнере и подключить в стиральный порошок трубку в аорту поджелудочной железы. Стирать орган перфузии с раствором 3 ночь в 20 мл/мин при 4 ° C.
  4. Слить раствор оставили в камере орган.
  5. Замените решение 5 решения 3 и perfuse поджелудочной железы для 30 мин при 20 мл/мин при 4 ° C. Слейте раствор в зале орган.
  6. Добавить решение 6 и perfuse поджелудочной железы для 8 h 20 мл/мин при 4 ° C. Слейте раствор в зале орган.
  7. Стирать орган перфузии с 5 решения для 96 h 20 мл/мин при 4 ° C. Слейте раствор в зале орган.
  8. Подготовьте поджелудочной железы лечение DNase, рециркуляционные 500 мл Дульбекко PBS, содержащие CaCl2 и2 MgCl 30 мин при температуре 37 ° C. Слейте раствор в зале орган.
  9. Добавьте 250 мл раствора 7 и perfuse поджелудочной железы для 4 ч при 20 мл/мин при 37 ° C. Слейте раствор в зале орган.
  10. Стирать орган перфузии с 5 решения для 120 h 20 мл/мин при 4 ° C.
  11. Храните органа в решении 8 на 4 ° C для коротких периодов или при-20 ° C для длительных периодов.

6. Проверка Decellularization

  1. С помощью ножниц вырежьте биопсий 3 - 10 мм от всех долей поджелудочной железы и исправить их в формальдегида для 48 ч при комнатной температуре.
  2. Промыть куски в ультрачистая вода для 15 мин, обрабатывать их в ткани процессора, следующие стандартные протоколы и вставлять их в парафин.
  3. Вырезать 5 мкм разделы, используя микротом и линяют, Мейер гематоксилином и 0,2% алкогольных эозином (он) следующие стандартные протоколы.
  4. Просмотрите слайды под микроскопом света для проверки потери ядер.
    Примечание: Кусок от свежие ткани, обрабатываются таким же образом может использоваться как элемент управления для проверки на наличие ядер.

Representative Results

Представитель свинину поджелудочной железы рассечение картинки, которые могут помочь в поиске и рассекает нижней верхней брыжеечной артерии и Вены дерева, воротной вены, печеночная артерия, желчных протоков и аорты, ветвление CT и SMA, отображаются в Рисунок 2а, 2bи 2 C (Желтые стрелки), соответственно. На рисунке 3A показывает брутто морфология нормальные поджелудочной железы, которая появляется светло-розовый и содержит селезеночной, связи и дуоденального лопастями. После decellularization розовый цвет теряется и decellularized поджелудочной железы выглядит бледно белый цвет. Валового морфология картина селезеночной, связи и дуоденального лопастями decellularized поджелудочной железы показано на рисунке 3B. Рисунок 3 c показывает наличие многих синий ядер в нормальной поджелудочной железы путем пятнать с он. В decellularized поджелудочной железы, он пятнать показал потеря ядер, а не синий ядра видны (рис. 3D).

Figure 2
Рисунок 2: фотографии свинину поджелудочной железы диссекции. (A) расположение нижней верхней брыжеечной артерии и Вены дерева (желтая стрелка). (B) перевязки воротной вены, печеночной артерии и желчных протоков (желтая стрелка). (C) аорты ветвления Целиакия ствола и превосходной верхней брыжеечной артерии (желтая стрелка). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3: Общая морфология и он окрашивание поджелудочная железа нормальных и decellularized. (A) валового морфология нормальные поджелудочной железы. (B) валового морфология decellularized поджелудочной железы. Окрашивание (C), он показывает наличие синий ядер в нормальной поджелудочной железы. Окрашивание (D), он показывает отсутствие синий ядер в decellularized поджелудочной железы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Discussion

Предлагаемый протокол, с помощью перфузионного SDC и Тритон X-100 на 4 ° C, будут успешно decellularize целом свинину поджелудочной железы. В этой технике стоит задача рассечение нетронутыми поджелудочной железы, содержащий все тремя лопастями без повреждения паренхимы и снабжения судов, а также лигирование других сосудистых ветвей образца для того, чтобы perfuse орган без утечки. Свинину поджелудочной железы имеет различные анатомии, по сравнению с человека поджелудочной железы. Он состоит из трех долей и остается в тесном контакте с тонкой кишки, частично вокруг него. Мы анализировали двенадцатиперстную кишку вместе с поджелудочной железы, как подключить несколько мелких кровеносных сосудов из поджелудочной железы ЖКТ. Во время оптимизации исследований тупым резки этих кровеносных сосудов показал утечки и неполной перфузии решений.

Так как аорты подключается к поджелудочной железы через Целиакия и превосходной верхней брыжеечной артерии, мы выбрали аорты как входе для простоты перфузии, только используя один канюли и, следовательно, один вход. По нашему опыту лигирование аорты выше CT и ниже SMA сократит время вскрытия и уменьшает риск повреждения любого из двух судов. В дополнение к гепаринизированным свинья мы также заметили, что перфузии холодной гепарина через аорту сразу после вскрытия помогает в достижении перфузии решений на протяжении всего органа. Мы предположить, если это происходит, предотвращая образование тромбов в кровеносных сосудах. Начальной перфузии поджелудочной железы с ультрачистая вода после рассечения лизируют красных кровяных клеток и удалите остатки крови в органе, тем самым предотвращая образование сгустков крови. Этот период может также использоваться для поиска любого unligated веточек вен и артерий, как поток крови может быть легко заметили выше фона.

Мы решили сохранить весь decellularization процедуры при холодной температуре (4 ° C), поскольку это будет препятствовать действие экзокринной ферментов, что освобождение от экзокринной клеток поджелудочной железы. Экзокринной ферментов, когда не тормозится, может вызвать вредное воздействие на клетки и ECM, как они могут переварить мембраны клетки и белки12. Как эффективно замораживания и оттаивания может лопнуть клетки, мы включили замораживания/оттаивания шаг, первоначально даже до перфузии моющих средств4,13. Первоначальный мыть после оттаивания будет удалить остатки клеток очередей. Моющим средством лечения, которые мы использовали представляет собой смесь SDC и X-100 Тритон на необычно высокие концентрации и скорости высокой перфузии. Мы выбрали этот подход для достижения быстрее decellularization, удалив экзокринной клетки, которые повреждают ECM. Мы предположить, что жесткий и быстрый протокол выгодно для decellularization поджелудочной железы, как меньше времени будет доступна для панкреатических ферментов взаимодействовать с ECM, таким образом, сохраняя хорошее компоненты ECM. Чтобы сохранить компоненты ECM, мы также добавили сериновые протеазы ингибитора (PMSF) к моющим средством решения, как это будет препятствовать активации ферментов, выпустили из клетки экзокринной14. Азид натрия добавляются все decellularization решения, как он действует как бактериостатическое агент, тем самым препятствуя вероятность бактериального загрязнения15.

Поджелудочной железы decellularized после этого протокола, показали сохранение ECM структур и ECM белков коллагена и эластина. Однако значительная потеря гликозаминогликанов была замечена в decellularized поджелудочной железы. Поджелудочной железы decellularized таким образом, также показали обещание для крепления человеческого плода стволовых клеток поджелудочной железы и выражение эндокринной и экзокринной маркеров в recellularized за 14 дней12штук. Однако чтобы генерировать нетронутыми и функциональных поджелудочной железы, дальнейшие исследования требуется в оценке правильные ячейки источники, типы клеток, клеток посева стратегии и биореактор культуры.

Disclosures

Ш.С.Х проводит акции в Verigraft, компания, которая владеет лицензией на технологию сосудистой тканевой инженерии. Другие авторы имеют ничего не разглашать.

Acknowledgments

Это исследование было профинансировано грант от шведского правительства Альф LUA для Ш.С.Х

Materials

Name Company Catalog Number Comments
4mm DLP arteriotomy cannula Medtronic 31104
2ml Unlabelled pipette vWR 612-3720
Degasser Biotech AB 0001-6484
DNase-I Worthington LS0020007
Dulbecco's PBS with CaCl2 and MgCl2 Sigma Aldrich D8662
EDTA disodium salt dihydrate AlfaAesar A15161.OB
Heparin Leo 387107
Luer Male with 1/8" ID Barb Oina LM-2PP-QC For 3X5mm silicon tube
Peristaltic pump Oina SP-1X4
PMSF Roche 10837091001 Unstable in aqueous solution. Should be added fresh before perfusion.
Potassium chloride Sigma Aldrich P5405
Potassium hydrogen phosphate Sigma Aldrich P9791
SDC Sigma Aldrich 30970
Silicon tube 3X5mm VWR 2280706
Sodium Azide Sigma Aldrich 71290
Sodium chloride Sigma Aldrich 13423
Sodium hydrogen phosphate Merck 71640-M
Suture Vömel 14817
Syrringe 50mL Becton Dickinson 300137
Triton-X-100 AlfaAesar A16046.OF

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Federation, I. D. IDF Diabetes Atlas. , Available from: http://www.diabetesatlas.org (2016).
  2. Yang, H. K., Yoon, K. H. Current status of encapsulated islet transplantation. Journal of Diabetes and its Complications. 29 (5), 737-743 (2015).
  3. Badylak, S. F., Taylor, D., Uygun, K. Whole-organ tissue engineering: Decellularization and recellularization of three-dimensional matrix scaffolds. Annual Review of Biomedical Engineering. 13, 27-53 (2011).
  4. Crapo, P. M., Gilbert, T. W., Badylak, S. F. An overview of tissue and whole organ decellularization processes. Biomaterials. 32 (12), 3233-3243 (2011).
  5. Hynes, R. O. The evolution of metazoan extracellular matrix. Journal of Cell Biology. 196 (6), 671-679 (2012).
  6. Scarritt, M. E., Pashos, N. C., Bunnell, B. A. A review of cellularization strategies for tissue engineering of whole organs. Frontiers in Bioengineering and Biotechnol. 3, 43 (2015).
  7. Goh, S. K., et al. Perfusion-decellularized pancreas as a natural 3D scaffold for pancreatic tissue and whole organ engineering. Biomaterials. 34 (28), 6760-6772 (2013).
  8. Wu, D., et al. 3D Culture of MIN-6 Cells on Decellularized Pancreatic Scaffold. In Vitro and In Vivo Study. Biomed Research International. 2015, 432645 (2015).
  9. Peloso, A., et al. The Human Pancreas as a Source of Protolerogenic Extracellular Matrix Scaffold for a New-generation Bioartificial Endocrine Pancreas. Annals of Surgery. 264 (1), 169-179 (2016).
  10. Mirmalek-Sani, S. H., et al. Porcine pancreas extracellular matrix as a platform for endocrine pancreas bioengineering. Biomaterials. 34 (22), 5488-5495 (2013).
  11. Taylor, M. J., Baicu, S., Greene, E., Vazquez, A., Brassil, J. Islet isolation from juvenile porcine pancreas after 24-h hypothermic machine perfusion preservation. Cell Transplantation. 19 (5), 613-628 (2010).
  12. Elebring, E., Kuna, V. K., Kvarnstrom, N., Sumitran-Holgersson, S. Cold-perfusion decellularization of whole-organ porcine pancreas supports human fetal pancreatic cell attachment and expression of endocrine and exocrine markers. Journal of Tissue Engineering. 8, 2041731417738145 (2017).
  13. Gilpin, A., Yang, Y. Decellularization Strategies for Regenerative Medicine: From Processing Techniques to Applications. Biomed Research International. 2017, 9831534 (2017).
  14. James, G. T. Inactivation of the protease inhibitor phenylmethylsulfonyl fluoride in buffers. Analytical Biochemistry. 86 (2), 574-579 (1978).
  15. Lichstein, H. C., Soule, M. H. Studies of the Effect of Sodium Azide on Microbic Growth and Respiration: I. The Action of Sodium Azide on Microbic Growth. Journal of Bacteriology. 47 (3), 221-230 (1944).

Tags

Биоинженерия выпуск 140 поджелудочной железы поджелудочной железы свиней рассечение тканевая инженерия decellularization восстановительной медицины внеклеточная матрица
Изоляция и Decellularization целом свинину поджелудочной железы
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kuna, V. K., Kvarnström, N.,… More

Kuna, V. K., Kvarnström, N., Elebring, E., Holgersson, S. S. Isolation and Decellularization of a Whole Porcine Pancreas. J. Vis. Exp. (140), e58302, doi:10.3791/58302 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter