Fabrication d’un Hydrogel de dérivés de matrice extracellulaire rein Cortex

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour fabriquer un rein cortex extracellulaire dérivé de matrice hydrogel pour conserver la composition biochimiques et structurales du rein natif de la matrice extracellulaire (MEC). Le processus de fabrication et ses applications sont décrites. Enfin, un point de vue sur l’utilisation de cet hydrogel pour soutenir la bioingénierie et la régénération cellulaire et tissulaire rénale spécifique est discutée.

Résumé

Matrice extracellulaire (ECM) fournit des indices biochimiques et biophysiques importants pour maintenir l’homéostasie tissulaire. Hydrogels synthétiques actuels offrent soutien mécanique robuste pour in vitro culture cellulaire, mais n’ont pas la composition protéique et ligand nécessaire pour provoquer un comportement physiologique des cellules. Ce manuscrit décrit une méthode de fabrication pour un rein cortex dérivés ECM hydrogel avec bonne robustesse mécanique et la composition biochimique favorable. L’hydrogel est fabriquée par mécaniquement l’homogénéisation et cortex DECELLULARISE rein humain ECM de solubilisation. La matrice conserve les rapports de protéine native rein cortex ECM tout en permettant aussi de gélification à des rigidités mécaniques physiologiques. L’hydrogel sert de substrat sur lequel rein cortex dérivées des cellules peuvent être maintenus dans des conditions physiologiques. En outre, la composition de l’hydrogel peut être manipulée pour modéliser un environnement malade qui permet l’étude future des maladies rénales.

Introduction

Matrice extracellulaire (ECM) fournit des indices biochimiques et biophysiques importants pour maintenir l’homéostasie tissulaire. La composition moléculaire complexe régit les propriétés structurales et fonctionnelles du tissu. Protéines structurales confèrent des cellules la conscience spatiale et permettent pour l’adhérence et la migration¹. Ligands liés interagissent avec les récepteurs de surface cellulaire pour contrôler le comportement de cellule². Rein ECM contient une multitude de molécules dont la composition et structure varie selon la localisation anatomique, stade de développement et maladie état

Protocole

Reins humains ont été isolées du Nord-Ouest LifeCenter, suivant les directives éthiques fixés par l’Association des organisations de marchés orgue. Ce protocole suit animaux soins et cellule culture lignes directrices établies par l’Université de Washington.

1. préparation du tissu rénal humain

1. Préparation de la solution de DÉCELLULARISATION
   1. Stériliser un bécher de 5000 mL et d’un bar de remuer de 70 x 10 mm.
   2. Mélanger 1/1000 (poids : volume) dodécylsulfate de sodium (SDS) dans l’eau désionisée autoclavé dans le bécher. Laisser la solution sur une plaque de remuer à environ 200 tr/min pendant 24 h ou jusqu'à ce q....

Résultats

L’hydrogel kECM fournit une matrice pour culture de cellules de rein avec une composition chimique similaire comme le microenvironnement rein natif. Pour fabriquer l’hydrogel, tissu de cortex rénal est mécaniquement isolé d’un organe rein entier et coupé en dés (Figure 1). DÉCELLULARISATION avec un détergent chimique (Figure 2 a.1-A.3) suivie de rinçages à l’eau pour enlever les particules de détergent (

Discussion

Matrices fournissent des signaux mécaniques et chimiques importantes qui régissent le comportement de la cellule. Hydrogels synthétiques sont capables de soutenir la structuration 3-dimensional complexe mais ne parviennent pas à fournir les divers signaux extracellulaires dans des micro-environnements matrice physiologique. Hydrogels dérivés ECM natif sont des matériaux idéaux pour les études aussi bien in vivo et in vitro . Des études antérieures ont utilisé DECELLULARISE ECM hydrogels pour enrober des.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Préparation du tissu rénal
5000 mL Bécher	Sigma-Aldrich	Z740589
Dodécylsulfate de sodium (SDS)	Sigma-Aldrich	436143
Stérile H2O			Autoclave DI H2O
Barre d’agitation (70 x 10 mm)	Fisher Science	14-512-128
500 mL Filtre à vide	VWR	97066-202
Plaque	d’agitation Sigma-Aldrich	CLS6795420D
1000 mL Bécher	Sigma-Aldrich	CLS10031L
		F4642	Toute pince similaire peut être utilisée
Poignée à ciseaux Hélice Sigma-Aldrich		Z168866
Ciseaux de dissection	Sigma-Aldrich	Z265977
Manche de scalpel, n° 4	VWR	25859-000	Tout manche de scalpel similaire peut être utilisé
Lame de scalpel, n° 20	VWR	25860-020	Toute lame de scalpel similaire peut être utilisée
Barre d’agitation (38,1 x 9,5 mm)	Fisher Science	14-513-52
Sous-coussin absorbant	VWR	82020-845
Boîte de Pétri (150 x 25 mm)	Corning	430597
Sac autoclavable pour matières biologiques	VWR	14220-026
Passoire à cellules stériles (40 μm)	Fisher Science	22-363-547
Eau de culture cellulaire	HyClone	SH30529.03
30 mL Tube autoportant	VWR	89012-778
strong> Fabrication d’une machine d’homogénéisation de tissus <>
	Polytron	PCU-20110
Lyophilisateur	Labconco	7670520
20 mL Flacons à scintillation en verre et bouchon	Sigma-Aldrich	V7130
(15,9 x 8 mm)	Fisher Science	14-513-62
Pepsine de la muqueuse gastrique porcine	Sigma-Aldrich	P7012
0,01 N HCl	Sigma-Aldrich	320331	Diluer à 0,01 N HCl avec de l’eau de culture cellulaire
Rénale ECM Gélification
1 N NaOH (stérile)	Sigma-Aldrich	415413	Diluer à 1 N dans de l’eau de culture cellulaire
Milieu 199	Sigma-Aldrich	M4530
15 mL Tube conique	ThermoFisher	339651
Milieu de culture cellulaire	ThermoFisher	11330.032	Dulbecco’s Modified Eagle Medium : Mélange de nutriments F-12 (DMEM/F12)
Sérum fœtal de bovin (FBS)	Gibco	10082147
Antibiotique-antimycosique 100X	Life Technologies	15240-062
Insuline, transferrine, sélénium, solution de pyruvate de sodium ( ITS-A) 100X	Life Technologies	51300-044
Seringue de 1 mL	Sigma-Aldrich	Z192325
Microspatule	Sigma-Aldrich	Z193208

Pince Sigma-Aldrich< gel ECMBarre d’agitation