Summary
여기, 선물이 지방 조직 유래 stromal 혈관 분수와 인간의 골 관절염 환자에서 연골 같은 조직의 재생성 하 여 무릎 기능을 개선 하는 응용 프로그램을 생성 하는 프로토콜.
Abstract
관절염 (OA) 가장 일반적인 쇠 약 질환 중 하나입니다. 최근, 중간 엽 줄기 세포 (MSCs)의 다른 형태를 사용 하 여 무릎의 기능을 개선 하기 위해 수많은 시도 되었습니다. 한국, 골 집중, 코드 혈액에서 파생 된 줄기 세포 연골 재생을 위한 한국 식품 의약품 안전 청 (식약청)에 의해 승인 되었습니다. 또한, 한 지방 조직 유래 stromal 혈관 분수 (SVF) 인간 환자에서 관절 주사에 대 한 식약청에 의해 허용 되었습니다. 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 중간 엽 줄기 세포 외 기질 (ECM)를 포함합니다. ECM 배설 히 알루 론 산 (HA) 및 혈소판이 풍부한 혈장 (PRP) 염화 칼슘에 의해 활성화 MSCs 재생성 연골 및 무릎 기능을 개선에 도움이 될 수 있는 다양 한 cytokines. 이 문서에서는, 우리는 OA 인간 환자에서 연골 같은 조직의 재생성 하 여 무릎 기능을 개선 하는 프로토콜을 제시. 프로토콜의 결과 뒤에 몇 가지 추가적인 간행물 2011 년에 처음 보고 되었다. 프로토콜 콜라 섞인 헌 lipoaspirates를 지방 흡입을 포함 한다. 이 lipoaspirates 콜라 혼합물 다음 잘라내어 동안 주사 바늘을 방해할 수 있습니다 큰 섬유 조직을 제거 하는 무 균. 나중에, 혼합물 지방 조직에서 파생 된 SVF를 incubated. 포함 하는 지방 조직에서 파생 된 MSCs와 ECM의 나머지 결과 지방이 많은 직물에서 파생 된 SVF HA와 함께 환자의 무릎에 주입 하 고 염화 칼슘 PRP를 활성화. 무릎 통증, 붓기, 그리고 유리 모양의 연골 같은 조직의 MRI 증거 함께 모션의 범위에 따른 우리의 프로토콜으로 치료 했다 환자의 세 가지 경우는 있습니다.
Introduction
중간 엽 줄기 세포 (MSCs) 연골1,2,,34,,56을 다시 생성 하는 기능으로 알려져 있습니다. 그들은 쉽게 다양 한 소스에서 얻어질 수 있다: 골 수, 제대혈, 및 많은 다른 사람의 사이에서 지방 조직. 이러한 소스 중 지방 조직 임상 설정7,8에 연골을 다시 생성 하려면 어떤 문화 확장 없이 MSCs의 충분 한 수를 구할 수 있는 유일한 소스 이다. 자가 골 수 기질 혈관 분수 (SVF) 얻어질 수 있다 쉽게 뿐만 아니라. 그러나, 줄기 세포 문화 비 확장 된 골 수에 포함 된 수는 매우 낮은7,8. 코드 혈액은 MSCs의 충분 한 번호를 포함할 수 있습니다. 그러나, 탯 줄 혈액 헌 SVF의 쉽게 사용할 수 있는 소스 되지 않습니다.
SVF를 처리 지방 조직의 수많은 방법 임상 응용 프로그램에 대 한 사용할 수 있습니다. 이러한 가운데, 콜라를 사용 하 여 지방 조직에서 MSCs를 얻기의 방법 개발 및 Zuk 외 에 의해 확인 5 , 6, 잘 허용 됩니다. 콜라를 사용 하는이 방법은 정형 외과에 임상 응용 프로그램에 대 한 수정 되었습니다. 임상 설정으로 적용 하기 위해서는 시스템 편의 유지 하면서는 불 임을 유지 하기 위해 폐쇄 시스템 이어야 합니다. 이 문서에서 제공 하는 하나의 특정 수정은 lipoaspirates의 균질 화를 포함 한다. 작은 크기의 lipoaspirates는 분해의 결과에 고르지 못한 지방이 많은 직물의 큰 것 들 보다는 상대적으로 빨리 소화 된다. 또한, 이러한 큰 크기 lipoaspirates 관절 주사9,10를 수행 하는 동안 주사기와 바늘을 방해할 수 있는 섬유 조직을 생성할 수 있습니다. 이러한 문제를 방지 하기 위하여는 lipoaspirates 자르고 콜라와 부 화 하기 전에 lipoaspirates를 닦지 무 균 수 있습니다. 결과 지방이 많은 직물에서 파생 된 SVF 더 균일 한 세포 외 기질 (ECM) 무 균된11하지 않은 lipoaspirates에 비해 포함할 수 있습니다. Broken-down ECM에 있는 SVF 포함 된 비 계12으로 작동 수 있습니다.
2009 년, 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 한국 식품 의약품 안전 청 (식약청) 의사13에서 최소한의 처리와 의료 시설 내에서 처리 될 때에 의해 허용 되었습니다. 나중에, 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF은 잠재적으로 재생성 연골 같은 조직의10,,1415 에 의해 관절염 (OA) 환자의 무릎 기능을 개선 하기 위해 잠재적인 대리인으로 이용 되어 , 16 , 17 , 18 .
2011 년 박 보였다 처음으로 지방 조직 유래 줄기 세포 (ASCs) 지방이 많은 직물에서 파생 된 SVF에 포함 된 잠재적으로 인간의 OA 환자 혈소판이 풍부한 주사 때에 연골 같은 조직의 재생성 무릎 기능을 향상 시킬 수 있습니다. 플라즈마 (PRP) 14. 또한, 박 외. 2013 관련 91 환자에서 안전 데이터를 보고 있다. 말은 효능이 안전 데이터에 보고 이었다 6715. 그 후, 박 외. 추가 연구는 초승달 모양의 눈물과 chondromalacia patellae10,16,17 가진 환자에서 연골 같은 조직 재생 때문에 잠재적으로 향상 된 무릎 기능 보였다 ,18. 기사 보고에 따라, 그것은이 문서에서 제공 하는 프로토콜에 의해 처리 하는 지방 조직의 100 g에 포함 된 줄기 세포의 수에 따라 환자의 특성8, 1000000 40,000,000에서 범위 수 있습니다 알려져 있다 19 , 20 , 21 , 22 , 23.
여기, 우리는 하와 염화 칼슘을 활성화 하는 PRP 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF를 사용 하 여 인간 무릎 OA의 임상 프로토콜을 제시. 이 임상 프로토콜, 불 임, 유지 하기 위해 폐쇄, 수동 시스템을 포함의 첫 번째 버전 201114에 보고 되었다. 동일한 프로토콜 최적화 되었다, 불 임, 유지 하 고 2013 201610,15에서 보고 했다. 여기, 최적화 된 프로토콜 제공 됩니다. 프로토콜의 개요 개요는 그림 1에 표시 됩니다.
그림 1: 프로토콜의 도식 개요. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Protocol
승인 및 동의 사건 보고서를 다음 보고서를 명 지 대학 기관 검토 위원회 위원회 (MJUIRB)에 의해 기권 했다. 또한,이 임상 프로토콜 식약청의 헬싱키의 선언 및 규제 지침을 준수 했다. 절차에 대 한 통지 해준 동의 환자 로부터 얻은 했다.
1입니다. 지방 흡입
참고: 무 균 기법으로 수행 합니다.
- 다음 포함 조건 사용: 3 단계의 (1) MRI 증거 OA; (2) 남성 또는 여성; (3) 18 세 이상; (4) 충분 한 (100-110 g) 지방이 많은 직물 지방 흡입;에 대 한 (5) 외 과적 수술;과 진행 방식 (6) 보수 관리;의 실패 그리고 (7) 지속적인 비활성화 통증입니다.
- 다음 제외 기준을 사용 하 여: (1) 활성 염증 또는 결합 조직 질병 통증 상태 (즉,루 푸 스, 류 마티스 관절염, fibromyalgia); 영향을 생각 (2) 활성 내 분 비 장애 통증 상태 (즉, 저하 증, 당뇨병);에 영향을 줄 수 있는 (3) 활성 신경 장애 통증 상태 (즉, 주변 신경 병, 다 발성 경화 증);에 영향을 줄 수 있는 (4) 활성 폐 질환 필요한 약물 사용; (5) 호르몬 관절 주사 지난 3 개월의 역사.
- 생물 학적 클래스 A 후드와 함께 수술 실에 환자를 가져오고 그 (또는 그녀) 부정사 위치에 배치.
- 5 %betadine (povidone-요오드)와 환자의 복 부 영역을 청소 하 고 복 부 지방 흡입에 대 한 청소 영역을 노출 무 균 기술을 사용 하 여 환자를 드러 워 진.
- Infero-옆으로 배꼽에서 약 5 cm 절 개 투-수-만든 (25 게이지, 1½ 인치) 바늘 5 mL 주사기에 피 네 프 린 없이 2 %lidocaine 2 개 mL를 사용 하 여 두 사이트 (왼쪽에는 배꼽의 오른쪽에 다른 하나) anesthetize 표 피 수준에서 각 사이트 주입 하 여
- 투-수-사용 하 여 만든 tumescent 솔루션 (2 %lidocaine, 0.5 %bupivacaine, 1:1000 피 네 프 린의 0.5 mL의 20 mL의 정상적인 염 분, 40 mL 500 mL)의 5 mL 10 mL 주사기에서 바늘 (25 게이지, 1½ 인치) 절 개의 사이트 anesthetize
- 피하 레벨의 깊이를 피부를 곤란 하 게 하 여 옆으로 배꼽 아래 0.5 cm 대략 5 cm의 2 절 개를 확인 합니다.
- 11 호 블레이드를 사용 하 여 제기 피부 피하 수준까지 침투를 하지만 복 벽을 통해 관통 구멍.
- 20 cm 16 게이지 cannula를 사용 하 여 anesthetize tumescent 솔루션의 700 ~ 800 mL 투 수 liposuctioned는 전체 더 낮은 복 부 지역 피하 수준.
- 후에 연결 하는 3.0 m m 정을 연결 하 여 지방 흡입 기구를 준비 tumescent 솔루션 전체 더 낮은 복 부의 침투를 마무리 60 mL (30 mL) 수동 지방 흡입 또는 특별히 고안 된 3.0 m m 정에 연결에 대 한 주사기를 원심 분리기 키트, 불 임, 유지 하기 위해 폐쇄 시스템 주사기에 진공 기계 진공 기반 지방 흡입에 대 한 연결.
- 지방 흡입 지방 조직의 tumescent 솔루션을 제외 하 고 100-110 g를 수행 합니다. 지방 흡입을 수행할 때 지방 조직 분리 하 고 제거 해야 tumescent 솔루션과 함께 가져옵니다.
- Tumescent 솔루션, 별도로 먼저 중력, 60 mL 주사기를 원심 분리기 키트에 지방 조직 전송 및 장소 (즉, 주사기의 부분은 하단에) 아래로 주사기. 5-6 분을 대기, 지방 조직 및 tumescent 액체 구분 됩니다. 주사기 플런저의 상단 부분에 눌러 주사기의 바닥에서 액체를 제거 합니다.
- 100-110 g 무릎 당 지방 조직 (lipoaspirates)의 총 축적 되었습니다 때까지 1.9-1.11 위의 단계를 수행 합니다.
2. 살 균 닫힌 시스템 ASC/ECM 혼합물의 준비
- 분리 후 중력 및 각 60 mL 원심 분리기 키트, 살 균 닫힌된 시스템 당 lipoaspirates의 50-55 g 축적 tumescent 솔루션 배치 원심 분리기 컨테이너 양동이와 1600 x g 5 분, 응축에서 스핀 2 원심 분리기 키트는 lipoaspirates 고 지방 조직에서 액체를 분리입니다. 이 추가의 과정 응축, lipoaspirates는 특정 경우에 지방 기름 생성 될 수 있습니다.
- 동요, 안전 모자와 원심 분리기 키트의 하단에 플러그를 제거 주의 되 고.
- 눌러서 천천히 아래로 원심 분리기 키트의 플런저 상단 하단 액체를 제거 합니다.
- 별도 60 mL 주사기에 정상적인 염 분의 50 mL와 콜라 (콜라 결합 조직24 에 대 한 특정의 5 밀리 그램) 및 지방 조직25에 대 한 특정 콜라의 5 mg의 10 mg을 디졸브.
- 원심 분리기 키트를 사용 하 여 60 mL 주사기를 연결 하 여 압축 된 lipoaspirate의 약 25-30 mL 녹은 콜라 (콜라 결합 조직에 대 한 특정의 5 밀리 그램) 및 지방 조직에 대 한 특정 콜라의 5 mg의 1:1 (v: v)의 비율로 혼합 특수 커넥터입니다.
- 60 mL 주사기와 원심 분리기 키트 막대 또는 미는 사람을 사용 하 여 콘텐츠를 추진 하 여 압축 된 lipoaspirate와는 콜라로 믹스 철저 하 게.
- 60 mL 주사기를 다시는 lipoaspirate와는 콜라의 혼합물을 전송 합니다.
- 블레이드를 포함 하는 조직 균질 화기와 혼합물을 포함 하는 각 60 mL 주사기를 연결 합니다.
- 빈 60 mL 주사기는 균질 화기의 다른 쪽 끝을 연결 합니다.
- 4-6 시간에는 균질 화기를 통해 다른 60 mL 주사기 혼합물 밀어 절단 하 고는 lipoaspirate의 닦지.
- 무 균된 lipoaspirate과 콜라 혼합 60 mL 원심 분리기 키트 전문된 커넥터를 통해 다시 전송
- 원심 분리기 키트 미리 37 ° c.에가 열 된 인큐베이터에 배치 하는 컨테이너에 배치
- 45 rpm에 회전 하는 동안 40 분 동안 37 ° C에서 무 균 혼합 두 개의 원심 분리기 키트를 품 어.
- 외피의 40 분 후 살 균 방식에서 인큐베이터에서 컨테이너를 제거 합니다. 그런 다음, 원심 분리기 키트를 제거 하 고 원심 분리기 기계에 넣어.
- 지방 조직 유래 SVF 분리 5 분 800 x g 에서 혼합물 원심
- 원심 분리기, 후 (이 콜라를 포함 하 고 지방 조직 소화) 상쾌한에서에서 제거 각 원심 분리기 키트 플런저 위에 주사기 모자를 제거 하 고 주사기 잠금을 통해 여 플런저에 30 mL 주사기를 배치 하 여 연결입니다.
- 천천히 30 mL 주사기로 채우기 위해 상쾌한에 대 한 30 mL 주사기의 배럴 부분을 누르십시오.
- 지방 조직 유래 SVF의 마지막 3-4 mL를 떠나 원심 분리기 키트의 아래쪽의 마지막 3-4 mL까지 30 mL 주사기 배럴 아래로 누릅니다. 상쾌한 삭제 됩니다.
- 플런저의 위에서 30 mL 주사기를 제거 하 고 lactated 벨의 솔루션 (D5LR)에 5% 포도 당 주사기를 채우십시오.
- 채우기 원심 분리기 키트, D5LR와 함께 지방 조직에서 파생 된 SVF의 3-4 mL를 포함 하 여 플런저 상단 D5LR 가득 30 mL 주사기를 연결 하 여 최대 55 mL.
- 30 mL 주사기를 제거 하 고 플런저, 모자 원심 분리기 키트 4 분의 300 x g 에서 다시.
- 4 빨 래의 총 단계 2.17-2.21를 반복 합니다. 사용된 콜라 xenogenic입니다. 따라서, 대부분 콜라 4 빨 래에 의해 제거 됩니다. 그러나, FDA 승인에 대 한 프로토콜의 미세 조정 해야 할 수 있습니다 완전히 최종 볼륨에 콜라 잔류물을 제거 콜라 잔류물의 현재 금액이 없는 어떤 임상 환자에 대 한 충분히 무시할 수 있지만 부작용입니다.
- 4번째 원심 분리 후 주입에 대 한 최종 SVF를 얻으려면 제거 안전 모자와 원심 분리기 키트의 하단 오프닝에 플러그 없이 떨고 하거나 원심 분리기 키트.
- 특별히 디자인 된 커넥터를 사용 하 여 열고 원심 분리기 키트 하단에 20 mL 주사기를 연결 합니다.
- 원심 분리기 키트의 하단에 정착 하는 셀을 흔들어 앞뒤로 여러 번 주사기의 플런저를 당겨.
- 다른 세포 및 조직 ASCs와 ECM을 포함 된 SVF의 원하는 총 볼륨 제거 (보통 각 원심 분리기 킷 무릎 관절 주사에서에서 약 3-4 mL).
3. PRP 준비 살 균 기술
- ASCs 및 ECM을 준비 하는 동안 항 응 혈 약 시트르산 포도 당 솔루션의 2.5 mL와 헌 혈액의 30 mL를 그립니다.
- 60 mL 원심 분리기 키트에 그려진된 혈액을 전송 합니다.
- 730 x g 5 분에 그려진된 혈액을 원심 하 고 새로운 60 mL 원심 분리기 키트에는 상쾌한을 제거 합니다. 4 분, PRP의 3-4 mL의 결과 1300 x g 에서 상쾌한 원심
- 10: 2의 비율로 3% (w/v) 염화 칼슘을 추가 주사, 앞 (PRP: 염화 칼슘, v: v) 그것을 활성화 하기 위해 PRP를.
- 염화 칼슘 활성화 하는 PRP를 0.5% (w/v)를 발판으로 하를 추가 합니다. ECM, PRP, 함께 함께 이러한 ASCs 칼슘 염화 물에 의해 활성화 하 고 하 서 ASC/ECM 혼합물에 대 한.
4. ASC/ECM 혼합물에 기초를 둔 치료
- 5 %betadine 환자의 무릎을 청소 하 고 살 균 방식으로 드러 워 진.
- 만져 tibial와 대 퇴 뼈 사이 공동 공간에 대 한 무릎의 앞쪽.
- 공동 캡슐 외부 그냥 피부에서 피상적으로 희석된 lidocaine (정상적인 염 분의 4 mL에 희석 1 %lidocaine 1 mL)으로 사출 사이트 anesthetize.
- 희석된 ropivacaine (1 mL 0.75 %ropivacaine 정상적인 염 분 3 mL로 희석)와 공동 캡슐의 내부 anesthetize
- HA의 믹스 2 mL 주사기 주사기 커넥터를 통해 20 mL 주사기에 포함 된 SVF의 6-8 ml
- 주사기 주사기 커넥터를 사용 하 여 헌 이미 준비 된 PRP와 5 mL 주사기에 준비 되 고 3-4 mL를 염화 칼슘 0.4 mL를 추가 합니다.
- 3.5-4.5 mL 5 mL 주사기에 PRP/칼슘 염화 물의 8-10 mL 주사기 주사기 커넥터를 통해 20 mL 주사기에 HA/SVF 혼합물의 결합.
- 즉시 혼합물 (약 12-15 mL)를 천천히 주사 또는 초음파 지도 없이 38 m m 18 게이지 바늘을 사용 하 여 무릎의 앞쪽 tibio-대 퇴 관절에.
- 주입 후 접는 거 즈 4 x 4 면 4 번 고 접힌된 4 x 4 거 즈 위에 테이프를 배치 하 여 압력 사출 사이트 붕대.
- 60 분 셀 첨부 파일에 대 한 허용 여전히 남아 환자를 지시 합니다.
- 지시 하는 활동을 제한 하는 환자는 병원에서 퇴원 후 1 주 최소.
- 3 주 이상 칼슘 염화 물에 의해 활성화 하는 PRP의 3 개의 추가 주사 클리닉에 반환 합니다.
5. 치료 후 후속
- 시각 아날로그 척도 (VAS) 측면 통증 개선 및 물리 치료 매개 변수에서 기능 향상에 대 한 2, 4, 16 18 (22)의 주에 환자를 평가 합니다. 앞에서 설명한26,27기능 평가 지 수 (금), VAS, 및 모션 (ROM)의 범위를 결정 합니다.
- 치료 후 MRI 3 개월 치료 후 환자를 따라 합니다.
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Representative Results
3 환자 (87 세 여성을 무대 3 OA, 한 68 세 남성 하나 3 OA, 무대와 함께 한 60 세 여성 무대 3 OA) 가능성에 대 한 어떤 중요 한 과거 의료 기록을 영구 무릎 통증으로 병원에 제시 하 고 원하는 없이 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 치료. 모든 3 명의 환자 정형 외과 의사에 의해 검사를 그들의 무릎을 했다 총 무릎 보충 (TKR)을 제공 했다 하 고는 수술을 꺼 려 했다. 절차, 이전 모든 세 환자 장기 개선 없이 스테로이드와 HA의 여러 주사를 받았습니다 했다.
87 세 한국 여성 환자, 심한 통증의 불평, 시험의 때에 (8;의 VAS 점수 그림 2A) 나머지에 있는 동안. 그녀는 고통을 증가 설명 ([금: 37; 그림 2A) 때 층 계 왔다 갔다 걷고. 실제 시험에 가벼운 관절 붓기 감소 ROM과 굴곡 (그림 2B)와 부드러움으로 지적 했다. 그러나, 아무 인 대 해이 함 높이 평가 되었다. 맥 머리의와 Apley의 테스트 부정 했다입니다. 치료 전에 MRI 시연 변형 및 단식 감소 크기 중간 초승달 모양. (그림 2C, 2E, 2 세대, 그리고 2I).
두 번째 환자, 68-올해-옛 한국 남성, 심한 왼쪽된 무릎 통증의 불평 (VAS 점수: 7; 그림 3A) 나머지에 있는 동안. 통증 (금: 33; 그림 3A) 층 계 왔다 갔다 걷고 증가으로 설명 했다. 실제 시험에 약한 공동 붓기와 가벼운 기형이 이었다. ROM (그림 3B) 감소 했다. 또한, 아무 인 대 해이 함 높이 평가 되었다. 맥 머리의와 Apley의 테스트 부정 했다입니다. 치료 전에 MRI 감소 크기 함께 숱이 연골 그리고 중간 초승달 모양 (그림 3C, 3E, 3 세대, 그리고 3I) 이전 meniscectomy에 보조를 변형. 환자는 3 OA 무대는 진단 했다.
세 번째 환자, 60 세 한국 여성도 보고 심한 통증 (VAS 점수: 8; 그림 4A) 에 나머지. 통증 (금: 36; 그림 4A) 증가 하는 때 기술 되었다. 환자는 또한 온화한 무릎 붓기를 했다 ROM (그림 4B) 감소. 아니 인 대 해이 함 평가 되었다. 맥 머리의와 Apley의 테스트 부정 했다입니다. 치료 전에 MRI 보여주었다 크기 중간 초승달 모양 변형와 단식, 감소 하 고 연골 (그림 4C, 4E, 4g및 4I) 숱이 있었습니다.
치료 계획. 모든 3 명의 대표적인 환자 절차 이전 1 주일 이상 스테로이드, 아스피린, 비 스테로이드 성 항 염증 약물 (Nsaid는), 그리고 아시아 초본 약물을 복용에서 제한 되었다. 복용 후 MRI 이미징 연구, lipoaspirates 취득 되었고 위의 참조로 처리. 이후에, 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF ASCs, 포함 된 ECM, 하, 그리고 칼슘 염화 물 활성화 헌 PRP 했다 주입 무릎에 0에. 아무 합병증 liposuctions 및 관절 주사 했다. 그 후, 환자는 병원에 1 주일, 다음 2 주, 그리고 다음 3 주 하 고 염화 칼슘 활성화 헌 PRP의 추가 주사에 대 한 반환.
결과. ASC/ECM 혼합 주사의 두 번째 주 후 87 세 여성 환자의 통증과 ROM에 개선 (그림 2A 와 2B). 16 주, 환자의 통증과 ROM 크게 향상 (그림 2A 와 2B) 70% 이상. 16 주 후 치료 후 MRI (그림 2D, 2 층, 2 시간및 2J) 무릎의 중간 측에 유리 모양의 연골 같은 조직의 증가 두께 보였다. 비교로 평균 효능 율이 임상 프로토콜을 사용 하 여, 91 환자를 참여 하 고 201315에서 보고 데이터에 67% 이었다.
그림 2: 통증 측정의 결과 (A) 및 범위 (B); MRI 화살 (C-F)와 무릎의 화관 (G-J) 순차 T2 조회 환자 사례 1에서에서 모션. * 통계적으로 중요 한 발견 (p < 0.05)를 나타냅니다. 치료 전 MRI 검사 (C: 순차적 이미지, 5/20; E: 6/20; G: 10/20; 그리고 난: 11/20) 연골 병 변 (화살표)를 보여줍니다. 16 주에 치료 후 MRI 검사 (D: 6/20; F: 7/20; H: 10/20; 그리고 J: 11/20) 연골 같은 조직 재생 (화살촉)는 ASC/ECM 혼합물에 기초를 둔 치료에 의해 복구 되었습니다 나타냅니다. 이 그림 외. 수 박 이전 보고서에서 수정 되었습니다. 10. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
68 세 남성 환자의 통증과 ROM ASC/ECM 혼합 주사 (그림 3A 와 3B)의 두 번째 주 후 개선. 18일 주, 그의 고통 및 ROM 크게 더 향상 80% (그림 3A 와 3B). 18 후에 찍은 MRI를 반복회 주 (그림 3D, 3 층, 3 H, 및 3J) 무릎의 앞쪽 중간 쪽에 유리 모양의 연골 같은 조직의 높이에 증가 보여주었다.
그림 3 : 통증 측정의 결과 (A) 및 범위 (B); MRI 화살 (C-F)와 무릎의 화관 (G-J) 순차 T2 조회 환자 사례 2에서에서 모션. * 통계적으로 중요 한 발견 (p < 0.05)를 나타냅니다. 치료 전 MRI 검사 (C: 순차적 이미지, 6/20; E: 7/20; G: 13-20; 그리고 난: 14/20) 연골 병 변 (화살표)를 보여줍니다. 16 주에 치료 후 MRI 검사 (D: 6/20; F: 7/20; H: 13-20; 그리고 J: 14/20) 연골 같은 조직 재생 (화살촉)는 ASC/ECM 혼합물에 기초를 둔 치료에 의해 복구 되었습니다 나타냅니다. 이 그림 외. 수 박 이전 보고서에서 수정 되었습니다. 10. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
60 세 여성 환자의 통증과 ROM는 ASC/ECM 혼합 주사 (그림 4A , 4B)의 두 번째 주 후 약 50% 향상. 22노스다코타 주, 고 통과 ROM 크게 향상 이상의 80% (그림 4A 및 4B). 22노스다코타 주 후 반복된 MRI (그림 4D, 4 층, 4 H와 4J) 무릎의 중간 측에 유리 모양의 연골 같은 조직의 높이에 증가 보여주었다.
그림 4 : 통증 측정의 결과 (A) 및 범위 (B); MRI 화살 (C-F)와 무릎의 화관 (G-J) 순차 T2 조회 환자 사례 3에서에서 모션. * 통계적으로 중요 한 발견 (p < 0.05)를 나타냅니다. 치료 전 MRI 검사 (C: 순차적 이미지, 4/20; E: 5/20; G: 10/20; 그리고 난: 11/20) 연골 병 변 (화살표)를 보여줍니다. 16 주에 치료 후 MRI 검사 (D: 4/20; F: 5/20; H: 10/20; 그리고 J: 11/20) 연골 같은 조직 재생 (화살촉)는 ASC/ECM 혼합물에 기초를 둔 치료에 의해 복구 되었습니다 나타냅니다. 이 그림 외. 수 박 이전 보고서에서 수정 되었습니다. 10. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
2001 년에, Zuk 외. 콜라6콜라겐 매트릭스를 파괴 함으로써 지방 조직에서 분리 된 줄기 세포. 나중에, 그룹이 보여주었다 지방 조직에서 분리 된 줄기 세포 연골 및 mesoderm 원점에서의 다른 조직으로 변환 수 증명 하는이 줄기 세포에에서 엽 했다.
마찬가지로,이 문서에 제공 된 절차 인간 환자에 게 비슷한 메서드를 적용 하는 수정 된 프로토콜입니다. 프로토콜의 주요 수정 및 절차 수행의 용이성을 유지 하면서 공기 접촉을 최소화 하기 위하여는 lipoaspirates 처리에 닫힌된 시스템 주사기의 설립 이다. 이러한 닫힌된 시스템 주사기를 사용 하 여, 지방이 많은 직물 지방 흡입을 통해 얻은. 다음, 닫힌된 시스템 주사기 내 콜라는 lipoaspirates 혼합 했다. 나중에, 콜라는 닫힌된 시스템 주사기 내 콜라 농도 diluting 하 여 혼합물에서 제거 되었습니다. 최종 결과 과정의 쉽게 얻은 메 마른 지방 조직에서 파생 된 SVF입니다.
비슷한 메서드를 사용 하 여 박에서에서 보였다 2011 년 처음으로 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 잠재적으로 같은 연골 조직을 재생성 하 여 OA 환자 치료를 사용할 수 있습니다. 나중에, 박세리 외. 또한 그 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 초승달 모양의 눈물과 patellae의 chondromalacia 섬유 연골 같은 조직 및 유리 모양의 연골 같은 조직을 각각 재생 하 여 치료를 사용할 수 있습니다. 2013 년에 박세리 외. 관련 된 91 환자 치료 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 안전 연구 보고. 연구 보고의 평균 효능 67%, 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 적용의 가능성에도 포장 일반적 환자 인구와 연골 손상.
박 외에 의해 보고 되는 가장 흔한 부작용 중 하나입니다. 2013 년에 안전 연구는 설명 될 수 있는 죽음으로 1) 줄기 세포, PRP에 포함 된 2) Rbc에 의해 염증, 치료 후 무릎 관절 붓기 또는 3) 잔여 콜라 SVF 지방 조직 유래의 마지막 볼륨에 남아 있다. MSCs는 지방 조직11,12의 ECM 내 존재, 줄기 세포를 임대 매트릭스 뜨 콜라와 lipoaspirates 소화 이므로 필수 과정12. 그러나, 줄기 세포를 분리 하는 매트릭스를 부셔 후 남은 잔여 콜라 제거 되어야 한다 완전히 최종 볼륨에서 잔여 콜라28에 의해 생산 될 수 있는 잠재적인 염증을 방지 하기 위해. 비록 콜라 염증을 일으킬 수, 지방 조직에서 파생 된 SVF의 마지막 볼륨에 콜라의 사소한 금액 실행할 수 있는 하지 공동 붓기. 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF 콜라의 사소한 금액의 이러한 마지막 볼륨은 같은 연골 조직을 재생성 하 여 무릎의 OA 대우를 지난 몇 년 동안 안전 하 게 사용 되었습니다.
최근 지방 조직에서 파생 된 SVF를 얻기의 두 비 효소 방법 소개29,30되었습니다. 이러한 방법 중 기계적 힘 또는 초음파 (진동) 힘, 콜라 대신 사용합니다. 2018 년, D'Ambrosi 외. 마이크로 골절, 순화 헌 adipose 조직 붕괴 매트릭스29에 기계적인 힘을 사용 하 여 얻은으로 발목의 탈 러 스의 4 개의 osteochondral 병 변 치료의 결과 보고. 아니 콜라 뜨 매트릭스 사용 되었다. 4 환자는 그들의 탈 러 스29는 마이크로 골절 지방 조직 (즉, 기계적으로 찌 그러 진 지방 조직)와 함께 치료 했다. 이러한 모든 4 명의 환자에서 수술 후 6 개월 임상 개선을 보여주었다. 아무도 어떤 합병증 했다. 그러나,이 연구29, 연골의 잠재적인 재생 보고가 했다. 진동 에너지 관련 올해에 간행 된 또 다른 연구는 특정 주파수에서 진동 에너지30줄기 세포 분리 하는 충분 한 이었다는 것을 보여주었다.
위와 같이 다른 그룹 다양 한 퇴행 성 관절 질환을 치료 하는 자가 지방 조직을 사용 하기 위한 다른 프로토콜을 있다. 프로토콜 정 지방 흡입, 지방 조직의 사용 금액, 유형 및 양의 콜라 (있을 경우), 주사의 방법에 대 한 사용의 크기에서 변화할 수 있다. 때문에 MSCs ECM의 지방 조직 내에 존재, 콜라, 또는 기계적인 힘을 사용 하 여 정화 방법의 효과 중요 한 역할을 재생할 수 있습니다. 특히, 콜라의 효능 지방 조직, 지방 조직, 콜라, 시간과 콜라, 가진 외피의 온도 남은 제거 하는 과정의 금액의 크기와 같은 요소에 따라 달라질 수 있습니다. 콜라, 세포 손상28을 발생할 수 있습니다.
그것은 그 콜라 지방 조직에서 파생 된 SVF를 포함 하는 줄기 세포를 생산 하는이 절차의 중요 한 요소는 SVF 지방 조직 유래의 마지막 볼륨에 부정적인 영향을 있을 수 있습니다 주목 해야한다. 이 절차에서는 콜라는와 혼합 압축된 lipoaspirates, 무 균, 인 큐베이 팅, 그리고 씻어. 이 과정을 통해 줄기 세포는 줄기 세포28의 생존에 해로운 영향을 미칠 수 있는 콜라에 노출 됩니다. 너무 많은 농도 또는 콜라의 장기간된 노출 최종 볼륨28줄기 세포 생존 능력을 낮출 수 있습니다. 또한, 너무 많은 콜라 마지막 볼륨에 남아 발생할 수 있습니다 염증 공동의 콜라 공동 주입 된28의 연골 매트릭스 뜨 수 있습니다 이후.
콜라의 잠재적인 부정적인 영향 뿐만 아니라 지방 흡입은 다른 잠재적인 합병증을 수행할 수 있습니다. 지방 조직 유래 SVF를 얻기 위하여 지방 흡입은 먼저 수행 되어야 합니다. Liposuctions, 다른 의료 절차로 수행 피부 윤곽, seromas, 감염, 근 막, 지방 색 전 증 및 폐 색 전 증 necrotizing 복 벽의 구멍 뚫 기에 부정 같은 몇 가지 잠재적인 합병증을 수행 합니다. 이러한 합병증 중 피부 컨투어 불규칙 표면 liposuctions31,32피하 및 작은 뉼을 사용 하 여 쉽게 예방할 수 있는 매우 일반적인 부작용입니다. Seromas suctioned 영역에서 묽 액체의 소장품 인 적극적인 지방 흡입33의 결과 수 있습니다. 다른 잠재적인 합병증 감염, necrotizing 근 막, 복 벽, 지방 색 전 증, 또는 폐 색 전 증의 구멍 뚫 기는 모두 가능 합니다. 그러나, 이러한 합병증 엄격한 무 균 기술을 사용 하 여 및 환자 준수34를 개선 하 여 예방할 수도 있습니다.
또한, 처음 가벼운 공동 유출, 염증의 명확한 표시와 함께 제시 하는 연구에 포함 된 모든 세 환자. 후에 지방 조직에서 파생 된 SVF, 향상 된 붓기 공동 이러한 모든 환자와 치료. 이러한 이유로, 그것은 또한 임상 증상의 개선 가능한 연골 재생 때문 그러나 대신, 활 액 막35 에 줄기 세포 PRP의 modulatory 및 항 염증 효과 가정 하는 합리적 , 36. 증상 개선 가능한 연골 같은 조직의 재생 함께 활 액 막에 줄기 세포 PRP의 modulatory 및 항 염증 효과에 기여 하는 수 또는. 더 연구는 증상 개선의 진정한 메커니즘의 윤곽을 그리 다 하는 데 필요한, 헌의 형태로 세포 치료의이 경 피 적인 내부 관절 주사 활성화 헌 PRP와 함께 지방 조직에서 파생 된 SVF 균질 칼슘 염화 물 및/또는 하 치료 무릎 OA의 현재 전략 대안 치료를 제공할 수 있습니다.
헌 PRP의 추가 관해서는 우려, 그것은 널리 다양 한 성장 인자를 포함 하는 PRP와 차별화 요인 성장 하 고37,,3839차별화 MSCs를 주입 허용 이다. 또한 PRP는 효과40중화 콜라를가지고 나타났습니다. 히 알루 론 산의 추가 대하여 (하), 하 표시 되었습니다 연골 조직으로, 그것의 높은 친 화력으로 인해 비 계 자료로 서 잠재적인 역할 및 줄기 세포 연골 매트릭스41관통을 잠재적인 역할.
지방 조직 유래 SVF를 얻기의 더 새로운 프로세스를 사용할 수 있는, lipoaspirates를 처리 하는 방법의 최적화 과정을 표준화 하는 데 필요한입니다. 그러나,이 고 자가 지방 조직에서 파생 된 SVF를 처리 하는 과정에서 잠재적인 변이의 수의 어려운 작업을 수 있습니다. 예를 들어 각 개별 환자, 노화 나 비만 정도에 피하 지방이 많은 직물의 질감에서 차이 콜라 활동, 자가 지방에 다른 수 ASCs 결과 다른 응답을 할 수 있습니다. 조직에서 파생 된 SVF42. 또한, 지방 조직의 각 그램에 있는 줄기 세포 수가 다를 수 있습니다 한 환자에서 수많은 간행물7,,1920, 에 보고 된 줄기 세포의 큰 변화에 의해 같이 다른 21 , 22 , 23.
이 문서에 제공 된이 프로토콜은 잠재적으로 지방 조직 유래 헌의 경 피 적인 주사와 연골 같은 조직의 재생성 하 여 인간의 무릎 OA를 치료의 현재 전략을 개선 하는 새로운, 혁신적인 절차 SVF입니다. 콜라의 올바른 사용은이 프로토콜에서 중요 하 고 중요 한 단계입니다. 사용 하 여 시스템 주사기 Zuk 외에 의해 개발 된 프로토콜의 주요 수정은 절차 수행의 편의 유지 하는 무 균을 계속 폐쇄. 5 또한, 인간의 응용 프로그램, 마지막 지방 조직에서 파생 된 SVF에 포함 된 콜라의 잔여 금액 이어야 합니다 하지 어떤 관절 염증을 방지 하기 위해 중요 한. 이 프로토콜의 제한이 있다: 마지막 볼륨에 콜라 잔류물 (비록이 무시할 수 있습니다), 단독 주입 PRP 하, 아니 biopsies 증거 때문에 PRP, 작은 임상 증상의 개선 제외 그룹 제어 환자 (파일럿 연구), 아니 무시 하 고 지방 조직에서 파생 된 SVF의 컴포넌트와 각 3 환자에 줄기 세포 수의 지정이 없는의 수입니다. 지방 조직 유래 SVF 초승달 모양 눈물, chondromalacia patellae, 척추 디스크 질환 등 질환에 대 한 적용, 한 지연 치유 (치료 비) 뼈 골절, 비 치유 피부 궤 양, 유 방 재건, 그리고 다른 신체 장애 임상 결과 향상 시킵니다. 이 지방 조직에서 파생 된 SVF의 잠재적인 임상 응용 프로그램, 비록 철저 하 고 활발 한 임상 연구는 실제 임상 설정에서 지방 조직에서 파생 된 SVF 통합 필요 하다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
작가 인정 Mipro 진료소 및 Jaepil/데이비드 리 그림 디자인의 직원에서 지원 합니다. 이 작품에서 바이오 및 의료 기술 개발 프로그램 MSIT (NRF-2017M3A9E4078014 번호)에 의해 투자 하는 NRF의 연구 보조금에 의해 지원 되었다 그리고는 국립 연구 재단의 한국 (NRF) 과학 교육부와 정보 통신 (숫자 NRF 2017R1A2B4002315 NRF-2016R1C1B2010308).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Material | |||
| 5% Betadine (povidone-iodine) | Firson Co., Ltd. | 657400260 | |
| 2% Lidocaine | Daehan Pharmaceutical Co. | 670603480 | |
| Tumescent solution | Myungmoon Pharm. Co. Ltd. | N01BB01 | The solution was composed of 500 mL normal saline, 40 mL 2% lidocaine, 20 mL 0.5% marcaine, and 0.5 mL epinephrine 1:1000. |
| Liberase TL and TM research grade | Roche Applied Science | 5401020001 | |
| D5LR | Dahan Pharm. Co., Ltd. | 645101072 | Dextrose 5% in lactated Ringer's solution |
| Anticoagulant citrate dextrose solution | Fenwal, Inc. | NDC:0942-0641 | The solution was composed of 0.8% citric acid, 0.22% sodium citrate, and 0.223% dextrose. |
| 3% (w/v) Calcium chloride | Choongwae Pharmaceutical Co. | 644902101 | |
| 0.5% (w/v) HA (Hyaluronic acid ) | Dongkwang pharm. Co., Ltd. | 645902030 | |
| 0.25% Ropivacaine | Huons Co., Ltd. | 670600150 | |
| Equipment | |||
| 3.0 mm Cannula | WOOJU Medical Instruments Co. | ML30200 | |
| 60-mL Luer-Lock syringe | BD (Becton Dickinson) | 309653 | |
| Centrifuge Barrel Kit | CPL Co., Ltd. | 30-0827044 | |
| Tissue homogenizer that contains blades | CPL Co., Ltd. | 30-0827045 | |
| Rotating incubator mixer | Medikan Co., Ltd | MS02060092 | |
| Centrifuge | Hanil Scientific Inc. | CE1133 | |
| Magnetic Resonance Imaging | Philips Medical Systems Inc. | 18068 | |
| Ultrasound Imaging System | Samsung Medison co., Ltd | CT-LK-V10-ICM-09.05.2007 |
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