Summary
Мы описываем неинвазивные в vivo imaging протокол, рационального и экономически эффективным, используя L-012, хемилюминесцентный люминол аналоговый, визуализировать и количественно реактивнооксигенных видов (ров) сгенерирована модель мыши эксцизионная раны.
Abstract
Поколение реактивнооксигенных видов (ров) является отличительной чертой воспалительных процессов, но в избытке, оксидативный стресс широко вовлечено в различных патологий, таких как рак, атеросклерозом и диабетом. Ранее мы показали, что дисфункция ядерного фактора (эритроидные производные 2)-как 2 (Nrf2) / Кельха как эритроидные клетки производные протеин 1 (1Keap) сигнальный путь ведет к крайней ROS дисбаланс во время кожный заживление ран при сахарном диабете. Поскольку уровень рос являются важным показателем прогрессии заживления ран, конкретной и точной количественной оценки методов являются ценными. Были описаны несколько в vitro анализов для измерения рос в клетках и тканях; Однако они только обеспечивают единый накопительный измерения на сэмпл. Совсем недавно разработка показателей на основе белков и визуализации условия позволили уникальных пространственно-временных анализов. L-012 (C13H8ClN4НАО2) является производной люминол, может использоваться как в естественных условиях , так и в пробирке хемилюминесцентный обнаружения ROS, порожденных оксидазы NAPDH. L-012 излучает сильный сигнал, чем другие флуоресцентных зондов и было показано, быть конфиденциальной и надежной для обнаружения рос. Применимость промежуток времени L-012-способствовали изображений обеспечивает ценную информацию о воспалительных процессах, уменьшая потребность в жертву и общего сокращения числа исследования животных. Здесь мы описываем протокол, используя L-012-содействие в vivo imaging для количественного определения окислительный стресс в модели эксцизионная заживления ран с помощью диабетических мышей с локально неблагополучных Nrf2/Keap1.
Introduction
Метаболитов кислорода, порожденных через воспалительных процессов вклад различных сигнальных каскадов, а также деструктивные изменения клеточных компонентов1. Использование чувствительных и конкретные методы для измерения ROS имеет решающее значение для изучения воспалительных процессов и характеризующих последствия оксидативного стресса. В естественных условиях изображений является ценным из-за его способность обеспечивать динамические пространственные и временные данные в живых тканях. L-012 является синтетическим хемилюминесцентный зонд, который является весьма чувствительной для супероксид анионов и производит более высокие интенсивности света, чем другие флуоресцентных зондов в клетках, тканях и цельной крови1,2,3, 4. он успешно работал в vivo образов в мышиных моделях изучить несколько воспалительных заболеваний, в том числе артриты и колите5,6. Он еще использоваться в установленных кожный модель ранозаживляющее. Измерение Рось создан столь же важное значение для оценки прогрессирование заживление ран при различных условиях. Чувствительность и неинвазивный характер этого метода делает его перспективным технику для изучения заживления ран через мышиных моделях.
Nrf2 является основной движущей силой реакции антиоксидантной и transcriptional фактор со спецификой для элемента реагирования антиоксидант (являются), общие для регионов промоутер нескольких антиоксидантные ферменты8. В отсутствие оксидативного стресса Nrf2 поглощенных в цитоплазме, Keap1, который впоследствии вызывает его ubiquitination и деградации. Дисбаланс путь Nrf2/Keap1 был вовлечен в неуместным редокс гомеостаза и замедленного заживления ран в параметре Увеличение окислительного стресса9. Ранее мы показали, что подавление Keap1 стимулирует повышение активности Nrf2 и способствует спасения патологического кожный заживления ран в диабетической раны9.
Здесь мы описываем протокол, который использует L-012-помощь биолюминесценции imaging для измерения уровней рос в эксцизионная кожные раны исцеления модель, которая имеет решающее значение для подчеркнув связь между рос и заживление ран. Эта техника демонстрирует реального времени изменения окислительного бремени внутри раны и немедленного периферии. Кроме того этот метод позволяет для быстрой оценки мероприятий и механизмов, что влияет на окислительно-восстановительной обработки. Здесь мы используем модель Keap1 сногсшибательно для восстановления гомеостаза редокс оценить применимость нашей стратегии. Потому что наша техника является неинвазивным и раны спокойно, то же самое животное может использоваться для дальнейшего подтверждающего анализа на основе гистология или ячейки лизатов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитета из Нью-Йорка школы медицины университета. Все мыши размещаются за барьером и всего персонала носить надлежащие средства личной защиты.
1. день 0: Подготовка мышиных модели эксцизионная заживление ран
- Анестезировать диабетических мышей (Leprdb/дБ), в возрасте 8-12 недель, с ингаляционных 2% изофлюрановая. Убедитесь, правильно что наркоз каждая мышь с помощью ног колодки щепотку теста. Стерильные глазные смазки применяются для каждого глаза, чтобы предотвратить раздражение от сухости. Исследователи должны следовать их институциональных ветеринарного персонала руководящие принципы, когда обезболивающим животных с помощью изофлюрановая.
- Взвешивание мышей и запишите вес тела каждой мыши. Подтвердите состояние диабетической животных путем записи уровня глюкозы в крови каждого животного, используя глюкометр.
- Дезинфекция процедурного рабочей области и наркозное оборудование. Удалять спинной волосы мышей с помощью машинки, последующим применением лосьон для удаления волос обтереть вне избыток волос. Использование алкоголя салфетки для чистки открытые участки кожи, дважды и дайте высохнуть.
- Создайте две раны полный толщина 10 мм, проходящий через carnosus подкожной, используя стерильные 10 мм биопсии пробойники согласно устоявшейся эксцизионная ранозаживляющее техника7,8. Используйте стерильные перчатки для всех выживания хирургии. Автоклав всех хирургических инструментов в мешках до хирургии и открытым только в операционном поле.
- Шина раны с помощью листа 0,5 мм толщиной силикона с 10 мм круглые вырезами и закрепите стентов в место с помощью прервана 4-0 шелковыми швами.
- После операции, удаление животных из наркоза и место на грелку для облегчения надлежащего восстановления. Следует отметить если во время процедуры, снижается температура тела животного животного могут быть перемещены в грелку ранее свести к минимуму потери тепла тела под наркозом. Мониторинг животных до тех пор, пока они просыпаются и мобильных.
- После того, как полностью восстановился, возвращение животных в отдельных клетках, содержащих продуктов питания и воды (убедитесь, что еду на пол клетки для послеоперационного обогащения). Обеспечивают измельченной бумаги полотенца как дополнительное раскроя материал для 2 недели. Не дом животных, которые подверглись операции с другими животными, для предотвращения отрицательных взаимодействий и изменения к ране исцеления статус.
- Для послеоперационного обезболивания придать мышей подкожно с бупренорфина на 0,1 мг/кг массы тела два раза в день, начиная сразу после процедуры, за 3 дня.
2. день 1: Подготовка Keap1 интерферирующей РНК
Примечание: Подготовьте все процедуры внутри биобезопасности кабинета.
- Подготовьте siRNA разрежения, объединяя 37,5 мкл сокращение сыворотке среды с 12,5 мкл 20 мкм Keap1 интерферирующей РНК (siKeap1) (250 пмоль) в трубу microcentrifuge 1,5 мл на льду.
- Подготовьте липосом разрежения, объединяя 25 мкл сокращение сыворотке среды с 25 мкл липосом смеси в пробки microcentrifuge 1,5 мл.
- 50 мкл siRNA разбавления до 50 мкл прикапывают разрежения липосомы (тома 1:1) и осторожно перемешать.
- Инкубируйте 20 минут при комнатной температуре.
- Добавьте 50 мкл метилцеллюлоза гель 2% в воде и аккуратно перемешать, закупорить вверх и вниз.
- Лечить каждого животного с либо нонсенс СиNS (управления) или СиKeap1 (экспериментальная). Нанести гель на вершину раны. Оберните туловища животного с прозрачной пленки соусом держать гель на месте, сохраняя конечностей, бесплатно для поддержания мобильности.
3. день 3: Подготовка L-012 раствора
Примечание: Подготовьте все реагенты в биобезопасности кабинета.
- В пробки microcentrifuge 1,5 мл Подготовьте L-012 в 1 X PBS на концентрации 0.5 мг/100 мл.
- Вручную вихрь пробки microcentrifuge. L-012 полностью не растворяются в PBS, однако оно должно быть равномерно приостановлено в жидкости. Следует отметить не пытайтесь распустить L-012 в воде, чтобы избежать тревожные физиологического электролитного баланса, после инъекции.
- Передача решения в 1 мл шприц с помощью иглы 27 G.
Примечание: Не забудьте защитить решения L-012 от света.
4. день 3: В Vivo изображений диабетических ран
- Анестезировать мышей с ингаляционных 2% изофлюрановая. Исследователи должны следовать их институциональных ветеринарного персонала руководящие принципы, когда обезболивающим животных с помощью изофлюрановая. Убедитесь, правильно что наркоз каждая мышь с помощью ног колодки щепотку теста. Стерильные глазные смазки применяются для каждого глаза, чтобы предотвратить раздражение от сухости.
- Аккуратно снимите повязку прозрачная пленка от мышей не нарушая раны.
- Место мыши в тепловизионной камере в их соответствующих приказов. Для поддержания надлежащего уровня2 O в камере, установите тепловизионные системы приток и2 уровней камеры O индукции до 1,0 Л/мин.
- Изображения мышей биолюминесценции и фотографии в базовых перед инъекцией L-012 соединения.
- Протрите живота с алкоголем салфетки и дайте высохнуть. Выполните внутрибрюшинной инъекции L-012 раствора на 5 мг / 200 г веса тела с помощью иглы 27-го калибра. Например мышь, весом 20 g должен получить 0,5 мг L-012.
- Сразу же после инъекции L-012, место мышей обратно в их соответствующих местах в тепловизионной камере. Изображения мышей в течение 60 минут, за 1 минуту на 4 минутными интервалами. Определите 10-мм раны как региона, представляющих интерес для определения уровня рос.
- После операции, удаление животных из наркоза и место на грелку для облегчения надлежащего восстановления. Мониторинг животных до тех пор, пока они просыпаются и мобильных.
- После того, как полностью восстановился, возвращение животных в отдельных клетках, сохранение той же послеоперационные обогащения среды, ранее описанных в 1.6. Не дом животных, которые подверглись операции с другими животными, для предотвращения отрицательных взаимодействий и изменения к ране исцеления статус.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Через три дня после создания двусторонних раны согласно установленным эксцизионная рану модели (рис. 1а), диабетических мышей расположены в тепловизионной камере. Первоначальный фотографию и измерения биолюминесценции взяты перед инъекцией L-012 для учета фонового сигнала (рис. 1B). После внутрибрюшинного введения раствором L-012, мыши перемещено в камере и биолюминесценции визуализируется в области раны, где обнаруживается Рось (рис. 1 c). После выбора правильной визуализации и анализа параметров, как указано на рисунке 2, перейти с изображениями. Биолюминесценции записывается на 1 минуту на 5-минутными интервалами в течение 60 минут (рис. 3). Это свидетельствует о биолюминесценции насыщенности региона интерес с течением времени. В нашей модели на животных оптимальное время визуализации достичь полного насыщения L-012 был определен 50 мин, после чего ценилась не заметное различие в биолюминесценции. Это время будет отличаться в зависимости от животного модели используются и должны самостоятельно определяется и оптимизирована для различных моделей рану в зависимости от размера, тип животных, лечение и т.д.
Область интересов (ROI) с целью количественного определения биолюминесценции, ограничиваясь области диабетической раны рисуется на накладываемого изображения (рис. 4). Эти ROIs аналогичным образом определены для всех РАН, включая до L-012 впрыска (рис. 4A) и после инъекции L-012 чушь малых интерферирующих РНК лечение (рис. 4B) и Keap1 малых интерферирующих РНК лечение мышей (рис. 4 c). Биолюминесценции была рассчитана путем деления общего количества интенсивности света по площади. В таблице 1 приведены расчеты графике в рисунке 4 d. Вздор малых интерферирующих РНК лечение диабетической раны были 45,775 11,649 биолюминесценции/см2, в то время как подавление Keap1 привели к 19,405 5,939 биолюминесценции/см2 (средняя SD). Студент t теста показали значительно снизилась биолюминесценции (p = 0,042) в Keap1 малых интерферирующих РНК лечить раны по сравнению с вздор малых интерферирующих РНК лечить раны, соотнося с нижней окислительного бремя с более высокой Nrf2 активностью (Рисунок 4 D). для подтверждения, что относительные уровни ROS визуализированное L-012 на СиNS и СиKeap1 соотносятся с другими установленными средствами измерения воспаления, мы проанализировали 10 день раны разделах ткани. H & E пятна показал снижение клеточного инфильтрата в СиKeap1-лечить раны в отличие от СиNS-обработанных те, указывающее уменьшить воспалительные морфологии (Рисунок 5A). Иммунореактивности F4/80, маркер макрофагов белка (красной флуоресценцией) на разделах ткани раны показали снижение макрофагов в siKeap1 лечить раны по сравнению с СиNS-лечить раны (Рисунок 5B). Это далее показывает, что уровни ROS, визуализированное L-012 точной и соотносятся с другими установленными модели измерения ROS. Критически применяя эту технику сделал не требуют принесения в жертву животных для разделов ткани, как это требуется для H & E и пятнать иммунофлюоресценции.
Рисунок 1: экспериментальная установка для томографии. Раненых диабетических мышей (A) с использованием модели установленного эксцизионная рану. (B) A базовые оверлея фотографии с впрыска pre-L-012 биолюминесценции. (C) после внутрибрюшинного введения с L-012, визуализируется рос. Люминесценция шкала B и C. пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: Параметры изображения и анализа в в vitro imaging системы программы. (A) выберите «Imaging мастера» на панели управления приобретения (красная стрелка). (B) «Биолюминесценции изображений» является изображений выбран режим. (C) «открыть фильтр» выбран как метод измерения. (D) изображений тема выбрана «мышь» и выбран параметр «время серии исследования». Общее количество сегментов и время задержки между сегментами ввода. (E) выберите «приобрести последовательности» продолжить с изображениями. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: продольного исследования в естественных условиях рос томографии. Диабетических мышей отражаются за 1 минуту после внутрибрюшинного введения с L-012 на 5 минут интервалы в течение 60 мин красные круги: ROI. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: количественная оценка биолюминесценции. Фотографии с оверлеем биолюминесценции диабетических ран (A) до L-012 инъекции, (B) с раны лечить с грехи после инъекции L-012 и (C) с раны, лечение с siKeap1 после инъекции L-012. (D) количественная оценка среднего биолюминесценции разделены площадь поверхности ROIs за грехи и СиKeap1 лечение ран. Желтые круги: ROI. Данные представлены в виде mean±standard отклонение; p < 0,05, n = 4. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: ROS корреляции с пятен иммуногистохимических. (A) H & E пятна диабетической раны разделов ткани на 10 дней показал снижение клеточного инфильтрата как доказательства снижения воспалительных морфологии в siKeap1 раны по сравнению с СиNS -лечить раны. (B) F4/80 иммунофлюоресценции (красный) показали снижение количества макрофагов в siKeap1 лечение ране секций на 10 дней по сравнению с их СиNS -лечение коллегами. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
| ROI | Si | Общее количество | AVG графов | STDEV графов | Площадь [см²] | Площадь графов | Среднее количество/район |
| ROI 1 | NS | 9.38E + 03 | 1.14E + 02 | 3.85E + 01 | 2.48E-01 | 3.78E + 04 | 4.58E + 04 |
| ROI 2 | NS | 4.68E + 03 | 5.37E + 01 | 3.13E + 01 | 2.63E-01 | 1.78E + 04 | |
| ROI 3 | NS | 1.72E + 04 | 2.18E + 02 | 1.54E + 02 | 2.39E-01 | 7.20E + 04 | |
| ROI 4 | NS | 1.24E + 04 | 1.68E + 02 | 8.41E + 01 | 2.24E-01 | 5.55E + 04 | |
| ROI 5 | Keap1 | 3.21E + 03 | 3.41E + 01 | 2.76E + 01 | 2.84E-01 | 1.13E + 04 | 1.94E + 04 |
| ROI 6 | Keap1 | 2.56E + 03 | 2.88E + 01 | 1.06E + 01 | 2.69E-01 | 9.52E + 03 | |
| ROI 7 | Keap1 | 4.92E + 03 | 6.48E + 01 | 5.03E + 01 | 2.30E-01 | 2.14E + 04 | |
| ROI 8 | Keap1 | 8.34E + 03 | 1.07E + 02 | 5.25E + 01 | 2.36E-01 | 3.54E + 04 |
Таблица 1: количественная оценка биолюминесценции для определенных ROIs. Биолюминесценции измеряется для каждого ROI и стандартизированы по отношению к площади поверхности. Расчеты для среднее, стандартное отклонение и стандартная ошибка вычисляются соответственно. ROI-1, 2, 3 и 4 представляют ROI от ран биологического повторяется грехов лечение диабетической раны и ROI 5, 6, 7 и 8 представляют собой ROI от биологических повторяется СиKeap1 лечение диабетической раны.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Общие методы для измерения ROS была ограничена сложных протоколов, требующих извлечения тканей или аналогичным образом инвазивные методы. В последние годы на основе новаторских механизмов обработки изображений, тем самым позволяя пространственно-временных оценок9,10,11поступили измерение оксидативного стресса. L-012 имеет несколько преимуществ как хемилюминесцентный зонда относительно luminol, lucigenin и MCLA1,4. Соединение не токсичен, легко впитывается, и имеет гораздо сильнее биолюминесценции по сравнению с luminol или аналогичных зонды12. Критически L-012 можно безопасно вводить несколько раз в континууме для продольного анализа без каких-либо негативных последствий или вреда для животных моделей6. Эта стратегия требует ограниченное специальное обучение, и необходимое оборудование легко доступны в большинстве исследовательских лабораториях, что делает его широко доступной протокол.
Для оптимального использования мы предлагаем, что реагенты должным образом до даты и защищенный от света, чтобы избежать деградации. Гуманизация раны через стентирование позволяет мышиных раны заживают путем миграции и эпителизация, в отличие от значительного сокращения. Швы следует поместить две трети пути через стента периметра для защиты края раны на месте. Упаковка мышей с прозрачной пленки одевать после применения геля гарантирует, что актуальные лечения остаются в силе. Для предотвращения самоубийств раны в мышей, которые могут сбить с толку результатов, горький вкус спрей может применяться к периферии и шовные сучки препятствовать кусаться. L-012 имеет ограниченную растворимость в PBS, но будет форма подвеска, повторяющихся дозирование раствора. Эти устранение мер обеспечить согласованность различных ран, устраняя изменчивость между пользователей при сохранении комфорта животных. Поскольку этот метод опирается на внутрибрюшинной инъекции раствора в животной модели, есть несколько мешающих факторов, присущих животным, которые не могут контролироваться. Например нельзя продиктовал местного кровотока и последующего поглощения и локализации L-012 в областях, представляющих интерес. Однако эта переменная может быть уменьшен за счет использования животного как собственного внутреннего контроля таким образом, что один рану можно лечить с помощью СиNS и другой с siKeap1.
Мы сообщаем о полезности стратегии для изучения в естественных условиях рос в кожный ранозаживляющее модель. В нашем настоящем исследовании, лечение ран с Keap1 siRNA привело к снижению окислительного бремя, которое подтверждает наше понимание значимости Nrf2 /Keap1 путь для антиоксидантной обработки. Хотя этот метод позволяет для количественного анализа, существует ряд важных ограничений. В то время как L-012 очень чувствительна, он не является специфичным для ROS и было показано, также реагируют химически активному азоту видов6. Дальнейший анализ с целенаправленной зондов и методов на основе иммуноферментного анализа дополняют этот подход путем повышения специфичности и внутриклеточных локализации ROS коррелирует13. Предлагаемый механизм на основе L-012 биолюминесценции включает окисления L-012, молекулярный кислород через активность пероксидазы в сочетании с H2O212. Это ограничивает использование этого метода для изучения антиоксидант фермента, которые взаимодействуют с пероксидазой. Более подробный анализ предназначен для специально количественно ROS помимо супероксид анион или химически активному азоту видов метаболиты не возможен с текущей стратегии.
Учитывая высокую чувствительность L-012 для обнаружения ROS широко, он легко адаптируется для различных кожных заживление ран и другие модели ткани. Мы продемонстрировали целесообразность этой методики для оценки последствий окислительно-восстановительные целенаправленной терапии диабетической раны, таких как RTA 408 и lipoproteoplex доставка Keap1 siRNA14,15. Учитывая значительные сильных сторон настоящего Протокола, существует огромный потенциал в применении аналогичные стратегии для изучения рос в глубокие отсеки через подходы ex vivo , целенаправленный Анатомирование и organoids.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
У нас нет раскрытия информации для доклада.
Acknowledgments
Мы благодарны доклинических Imaging Core в NYU школа медицины, особая благодарность Aristizabal Орландо и Юсеф Заим Wadghiri. Ядро — это общий ресурс, частично поддерживается Лаура и Исаак Перлмуттер рака центр поддержки гранта NIH/NCI 5P30CA016087 и NIBIB биомедицинских технологий ресурсов центр гранта NIH P41 EB017183. Эта работа была поддержана американская ассоциация диабета «Путь остановить диабет» округ [номер гранта 1-16-ACE-08] и NYU применяется исследовательский фонд поддержки для P.R.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BKS.Cg-Dock7m+/+ Leprdb/J mice | Jackson Laboratories | 000642 | |
| 13 cm x 18 cm Silicone sheet (0.6 mm) | Sigma Aldrich | 665581 | |
| 3M Tegaderm Transparent Film Dressings | 3M | 88-1626W | |
| Lipofectamine 2000 Transfection Reagent | Life Technologies | 11668027 | |
| Keap1 Stealth siRNA | Thermofisher Scientific | 1299001 | |
| Silencer negative control | Thermofisher Scientific | AM4635 | |
| Opti-MEM Reduced Serum | ThermoFisher Scientific | 11058021 | |
| DPBS | ThermoFisher Scientific | 14040133 | |
| Methyl-cellulose | Sigma Aldrich | 9004-67-5 | |
| L-012 | Wako Chemicals | 120-04891 | |
| IVIS Lumina III XR In Vivo Imaging System | PerkinElmer |
References
- Nishinaka, Y., et al. A new sensitive chemiluminescence probe, L-012, for measuring the production of superoxide anion by cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 193 (2), 554-559 (1993).
- Daiber, A., et al. Measurement of NAD(P)H oxidase-derived superoxide with the luminol analogue L-012. Free Radical Biology and Medicine. 36 (1), 101-111 (2004).
- Imada, I., et al. Analysis of reactive oxygen species generated by neutrophils using a chemiluminescence probe L-012. Analytical Biochemistry. 271 (1), 53-58 (1999).
- Sohn, H. Y., Gloe, T., Keller, M., Schoenafinger, K., Pohl, U. Sensitive superoxide detection in vascular cells by the new chemiluminescence dye L-012. Journal of Vascular Research. 36 (6), 456-464 (1999).
- Fuchs, K., et al. In vivo Hypoxia PET Imaging Quantifies the Severity of Arthritic Joint Inflammation in Line with Overexpression of Hypoxia-Inducible Factor and Enhanced Reactive Oxygen Species Generation. The Journal of Nuclear Medicine. 58 (5), 853-860 (2017).
- Asghar, M. N., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in murine colitis. Inflammatory Bowel Diseases. 20 (8), 1435-1447 (2014).
- Galiano, R. D., Michaels, J. t, Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing. Wound Repair and Regeneration. 12 (4), 485-492 (2004).
- Soares, M. A., et al. Restoration of Nrf2 Signaling Normalizes the Regenerative Niche. Diabetes. 65 (3), 633-646 (2016).
- Wang, X., et al. Imaging ROS signaling in cells and animals. Journal of Molecular Medicine. 91 (8), 917-927 (2013).
- Kielland, A., et al. In vivo imaging of reactive oxygen and nitrogen species in inflammation using the luminescent probe L-012. Free Radical Biology and Medicine. 47 (6), 760-766 (2009).
- Balke, J., et al. Visualizing Oxidative Cellular Stress Induced by Nanoparticles in the Subcytotoxic Range Using Fluorescence Lifetime Imaging. Small. , (2018).
- Zielonka, J., Lambeth, J. D., Kalyanaraman, B. On the use of L-012, a luminol-based chemiluminescent probe, for detecting superoxide and identifying inhibitors of NADPH oxidase: a reevaluation. Free Radical Biology and Medicine. 65, 1310-1314 (2013).
- Dikalov, S. I., Harrison, D. G. Methods for detection of mitochondrial and cellular reactive oxygen species. Antioxidants & Redox Signalling. 20 (2), 372-382 (2014).
- Rabbani, P. S., et al. Targeted Nrf2 activation therapy with RTA 408 enhances regenerative capacity of diabetic wounds. Diabetes Research and Clinical Practice. 139, 11-23 (2018).
- Rabbani, P. S., et al. Novel lipoproteoplex delivers Keap1 siRNA based gene therapy to accelerate diabetic wound healing. Biomaterials. 132, 1-15 (2017).
