ويرد بروتوكول مفصلة لتقييم قراءات الهيكلية والبصرية في القوارض بالتصوير المقطعي التماسك الضوئية واﻻستجابة أوبتوكينيتيك. وتوفر النتائج أفكاراً قيمة لبحوث طب العيون وكذلك الجهاز العصبي.
التصوير المقطعي التماسك الضوئية (OCT) تقنية سريعة وغير الغازية، التداخل السوناريه السماح بتصوير الشبكية عالية الدقة. أنها أداة مثالية لتحقيق عمليات نيوروديجينيريشن ونيوروبروتيكشن والعصبية-إصلاح التي تنطوي على نظام البصرية، كهذه غالباً ما كورليت جيدا مع التغيرات الشبكية. كما قراءات وظيفية وبصريا مقولة العين التعويضية وحركات الرأس تستخدم عادة في النماذج التجريبية التي تنطوي على الدالة البصرية. الجمع بين كلا تقنيات تسمح تحقيقات المجراة في كمية هيكل ووظيفة، والتي يمكن استخدامها للتحقيق في الحالات المرضية أو لتقييم إمكانات المداواة رواية. هناك فائدة كبيرة من التقنيات التي عرضت إمكانية إجراء التحليلات الطولية السماح بالتحقيق في العمليات الديناميكية، والحد من تقلب وخفض عدد الحيوانات اللازمة للتجارب. وصف البروتوكول يهدف إلى توفير دليل لاقتناء وتحليل لفحص الشبكية عالية الجودة لدى الفئران والجرذان استخدام حامل مخصصة منخفضة تكلفة مع خيار لتقديم التخدير استنشاق. بالإضافة إلى ذلك، يهدف الدليل المقترح كدليل إرشادي للباحثين باستخدام تحليل الاستجابة (عكر) أوبتوكينيتيك في القوارض، التي يمكن تكييفها وفقا لاحتياجاتها ومصالحها.
دراسة المسار المرئي، كجزء من الجهاز العصبي المركزي، وقد ثبت أن تكون نقطة انطلاق فعالة في معالجة ليس فقط لعينين1،2،3،4،5 ، ولكن أيضا عصبية6،،من78،9،10،11،،من1213،14 ،،من1516 أسئلة. في السنوات الأخيرة، أكتوبر، وقد حددت عكر كأدوات تحليلية، وغير الغازية مفيدة لتقييم مجموعة كبيرة ومتنوعة من ريتينوباثيس ومظاهر الشبكية في مختلف نماذج القوارض17،،من1819 , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25-أكتوبر يسمح للقرار سريعة وعالية في فيفو التصور مورفولوجيا الشبكية وهيكل في الفئران والجرذان، مع نتائج جيدة وفقا لأقسام نسيجية ريتين الحيوانات26. عكر يشكل طريقة سريعة وقوية لتقييم دالة visual كمياً.
تسمح العديد من أكتوبر الأجهزة المتزامنة [كنفوكل] المسح الضوئي الليزر تنظير العين (كسلو) التصوير بأطوال موجية مختلفة، مما يوفر معلومات تشخيصية حول الأمراض الشبكية، أي، والتصور لرواسب lipofuscin أو تغيرات الشبكية الصباغ ظهارة27. وعلاوة على ذلك، في فيفو التصوير من الأسفار التي تسمى الخلايا في الحيوانات المحورة وراثيا هو ممكن28،،من2930،،من3132. ومع ذلك، تطبيق التكنولوجيا أكتوبر في نماذج القوارض تحدي لا يزال، أساسا بسبب حجم العين صغيرة. العديد من الأجهزة المتوفرة تجارياً يتطلب إجراء تعديلات وغالباً ما يلزم حجم مختلف لحامل لصورة الحيوانات من مختلف الأنواع. بالإضافة إلى ذلك، تتطلب الحيوانات التخدير للقياس.
يمكن استخدام أجهزة عكر لتقييم الدالة البصرية في القوارض. الحيوانات توضع على منصة في وسط من اسطوانة الفعلية أو الظاهرية عرض نقل القبر، التي تعقب الحيوانات مع انعكاسية الرأس والرقبة الحركات. هذا الرد أوبتوكينيتيك هو تخفيض أو إلغاء في حالة انخفاض أو فقدان الوظيفة البصرية.
والهدف من هذا البروتوكول تقديم دليل لقياس سماكة الشبكية تستخدم جهاز أكتوبر متاحة تجارياً مع حامل مخصص توفير مواد التنشق التخدير. ويوضح البروتوكول كيفية تحليل وحدة التخزين باستخدام البرمجيات توفرها الشركة المصنعة لمسح. لاختبار البصرية، ويهدف إلى توفير إرشادات حول كيفية استخدام نظام متاح تجارياً لتقييم عكر.
يوفر هذا البروتوكول تعليمة لقياسات سمك ودراسة دالة visual في القوارض. تستخدم بشكل متزايد في البحوث متعدية18،26،،من3839،40 قراءات مرئية وقابلة للتحويل بسهولة إلى التجارب السريرية. ميزة كبيرة في أكتوبر بالمقارنة مع التحقيقات النسيجي في التجارب على الحيوانات أن التحليلات الطولية إمكانية السماح بالتحقيق في العمليات المرضية دينامية، إلى حد كبير الحد من التفاوت وعدد الحيوانات اللازمة للدراسة. وعلاوة على ذلك، تصوير في المجراة مع أكتوبر لا يخضع التثبيت، قطع أو تلطيخ القطع الأثرية، التي قد تؤثر على سمك طبقة في التحقيقات النسيجي.
غير اتجاه متعامد شعاع الليزر في كل الطائرات فيما يتصل بشبكية العين خطوة حاسمة لضمان الجودة وإمكانية تكرار نتائج القيم سمك. أنه يتطلب بعض التدريب للمحقق وإلزامية قبل الحصول على فحص OCT. بالإضافة إلى ذلك، كما يتم بناء الأجهزة التجارية للتطبيقات البشرية، نوعية القوارض أكتوبر الصور، لا تزال مقارنة ب-فحص المرضى البشرية. في الخبرة أصحاب، قد يكون من الصعب التمييز بين الشبكية الداخلية مختلف الطبقات (طبقة الألياف العصبية الشبكية، والعقدة خلية طبقة وطبقة داخلية بليكسيفورم) أثناء التصحيح اليدوي. ولذلك نوصي بتحليل هذه الطبقات كما قراءات مجمع (أيرلندا).
الإعداد التجريبية يوفر خياراً للتقلب التخدير، مثلاً، الاستنشاق إيسوفلوراني، الذي هو، في تجربتنا، أكثر أماناً وأسهل للتحكم من التخدير عن طريق الحقن، مثل الكيتامين إكسيلازيني41،42 ويقلل من خطر الصحوة سابقا لأوانه للقوارض في حالة اقتناء أطول الأوقات (مثلاً عند القيام بتصوير خلايا المسمى فلوريسسينتلي). في دراسة أولية، حددت البروتوكولات فحص وحدة التخزين مع صلاحية أعلى والموثوقية. كان بين التصنيفات واختبار معولية ممتازة عندما قيمت فحص وحدة التخزين باستثناء الجزء المركزي الذي يحتوي على القرص البصري مع المحكمة الجنائية الدولية (معامل الارتباط الطبقة البينية) القيم أعلاه 0.85 لجميع التقييمات.
ويستند قياس الاستجابة أوبتوكينيتيك العاكسة أوبتوكينيتيك غير الطوعي، الذي يحدث استجابة لحقل تتحرك بشكل مستمر. في القوارض، على عكس الأنواع الأخرى، ويشمل الحركة العينين، بل الرأس كله، والتي يمكن كشفها بسهولة باستخدام الكاميرا.
المميزة بين “التعقب” أو العادي الحركات السلوكية من الحيوانات يتطلب بعض التدريب للمحقق، ومن المهم أن يكون أعمى للمجموعة التجريبية. وبالإضافة إلى ذلك، تحتاج الحيوانات إلى مرحلة التكيف لاستيعاب الإعداد التجريبية وخلال بروتوكولات القياس منذ فترة طويلة، الحيوانات يجب أن تكون متحركة مرارا وتكرارا أن أؤكد أن “لا تتبع” بسبب بلوغ العتبة عكر ولا إلى تناقص من الاهتمام. وهناك أيضا تقلب ضغطاً كبيرا فيما يتعلق بوظيفة البصرية من مختبر الفئران والجرذان43،44. ولذلك يتعين تقييم البصر القوارض قبل أنها يتم اختبارها وبعض السلالات، مثل الفئران سخل، قد لا يكون مناسباً لقياسات أوكر، كما أنهم متماثل اليل Pde6brd1 (تنكس الشبكية 1).
وباختصار، يسمح للتحقيقات غير الغازية، والطولي للأضرار الهيكلية والوظيفية التي تحدث في سياق ع دراسة مورفولوجيا الشبكية ودالة visual في نماذج حيوانية وقد تكون مفيدة في النماذج الأخرى التي تشمل البصرية النظام، بما في ذلك ولكن لا تقتصر على النماذج من ريتينوباثيس أو إصابة العصب البصري.
The authors have nothing to disclose.
أيد هذا العمل منح الدكتور روبرت بفلجر-مؤسسة لوكو إيلسيلوري-مؤسسة، فضلا عن Biogen وشركة نوفارتيس للسلطة الفلسطينية. واستنسخ الشكل 1B من “الجسم كله المتلاعبين الموضعية لتصوير بصري فظاعتها الفئران والجرذان: دليل أفعل ذلك بنفسك. ديتريش، م.، كروز-هيرانز، ألف، يو، حاء، اكتاش، سين، براندت، U. أ، Hartung، HP، الأخضر، ألف، البرخت، المجلة ص طب العيون المفتوحة. 1 (1)، e000008، 2017 “بإذن من المجلة نشر المجموعة المحدودة
Heidelberg Spectralis HRA+OCT system | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | ophthalmic imaging platform system |
Heidelberg Eye Explorer | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | Version 1.9.10.0 |
blue 25D non-contact lens | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | lens for rodent mesurement |
OptoMotry | CerebralMechanics Inc., Canada | N/A | system for visual function analysis |
OptoMorty HD software | CerebralMechanics Inc., Canada | N/A | Version 2.1.0 |
Inhalation Anesthetic Isoflurane | Piramal Critical Care, Bethlehem, PA, USA | 803250 | inhalation anesthetic |
Phenylephrin 2.5%-Tropicamide 0.5% | University Hospital Düsseldorf, Germany | N/A | pupillary dilation |
Visc-Ophtal | Dr. Robert Winzer Pharma GmbH, Berlin, Germany | 58407 | ophthalmologic eye gel |
GraphPad Prism | GraphPad Software Inc, San Diego, CA, USA | N/A | statistical analysis software, Version 5.00 |
IBM SPSS Statistics | IBM Corporation, Armonk, New York, USA | N/A | statistical analysis software, Version 20 |