Yapısal ve görsel dökümanları Rodents optik koherens tomografi ve optokinetic yanıt tarafından değerlendirilmesi için detaylı bir protokol sunulmuştur. Sonuçları Oftalmolojik gibi nörolojik araştırma için değerli bilgiler sağlar.
Optik koherens tomografi (OCT) yüksek çözünürlüklü Retina görüntüleme sağlayan hızlı, non-invaziv, dalgaboyu bir tekniktir. Ateş, neuroprotection ve nöro-onarım görsel sistemin bu kez correlate Retina değişiklikleri ile ilgili işlemlerin incelenmesi için ideal bir araçtır. Fonksiyonel bir okuma görsel olarak uyarılmış telafi edici göz ve baş hareketleri deneysel modelleri görsel işlevi içeren yaygın olarak kullanılır. Her iki teknikleri birleştiren bir nicel içinde vivo araştırma yapısı ve patolojik koşullarını veya roman therapeutics potansiyelini değerlendirmek için kullanılan işlev sağlar. Sunulan tekniklerin büyük yarar sağlayan dinamik süreçler, değişkenliği azaltmak incelenmesi boyuna çözümlemesi yapma ihtimali ve hayvanların deneyler için gerekli sayıda aşağı keser. Protokol amaçları Alım ve yüksek kaliteli retina taramalarını fareler ve sıçanlar inhalational anestezi sunmak için bir seçenek ile düşük maliyetli bir özelleştirilmiş tutucu kullanarak analiz için bir kılavuz sağlamak için nitelendirdi. Ayrıca, önerilen Kılavuzu bir öğretim kılavuzu kendi özel ihtiyaçlarına ve çıkarları için adapte edilebilir Rodents optokinetic yanıt (OKR) analizi ile araştırmacılar yöneliktir.
Görsel yolu, sınav merkezi sinir sisteminin bir parçası olarak sadece Oftalmolojik1,2,3,4,5 ele etkili bir başlangıç noktası olması için kanıtlanmıştır , ama ayrıca nörolojik6,7,8,9,10,11,12,13,14 ,15,16 soru. Son yıllarda, OCT ve OKR çok çeşitli retinopathies ve çeşitli kemirgen modelleri17,18,19 Retina belirtileri değerlendirmek için yararlı analitik, non-invaziv araçları olarak tespit edilmiştir , 20 , 21 , 22 , 23 , 24 , 25. hızlı ve yüksek çözünürlük vivo içinde görsel olarak retina Morfoloji ve fare ve sıçanlar, yapısında histolojik kesitler iyi doğrultusunda sonuçlarını gösteren hayvanlar retinae26OCT sağlar. OKR kantitatif görsel işlevini değerlendirmek için hızlı ve sağlam bir yöntem kabul ettiğiniz anlamına gelir.
Birçok OCT aygıt tanılama Retina patolojileri, yani Kılavuzu farklı dalga boylarında, lipofuscin mevduat görüntülenmesini veya Retina değişiklikleri ile aynı anda confocal tarama Lazer ophthalmoscopy (cSLO) görüntüleme izin pigment epitel27. Ayrıca, transjenik hayvanlar hücrelerde etiketli floresans in vivo görüntüleme mümkün28,29,30,31,32‘ dir. Ancak, OCT teknoloji kemirgen modellerinde hala, ağırlıklı olarak küçük göz boyutu nedeniyle meydan okuyor. Çeşitli ticari olarak kullanılabilir aygıtlar uyarlamalar gerektirir ve sık sık sahibi farklı bir boyutunu farklı tür hayvanların Image için gereklidir. Ayrıca, hayvanlar ölçüm için anestezi gerektirir.
OKR cihazlar kemirgenler görsel işlevinde değerlendirmek için kullanılabilir. Hayvanlar bir gerçek ya da sanal silindir hareketli bir görüntüleme merkezi bir platform üzerinde yansımalı baş ve boyun hareketleri ile hayvanlar izleyen ızgara, yerleştirilir. Bu optokinetic yanıt azaltılmış veya azaltma veya görsel fonksiyon kaybı söz konusu olduğunda ortadan kaldırılmıştır.
Bu iletişim kuralının amacı bir soluk çeken anestezi sağlayan özel bir sahibi ile piyasada bulunan OCT aygıtı kullanarak Retina kalınlığı ölçümü için el sunmaktır. Protokol, yazılım üreticisi tarafından sağlanan kullanarak ses taramaları analiz verilmektedir. Görsel sınama, OKR değerlendirmek için ticari olarak kullanılabilir bir sistem kullanımı hakkında yönergeler sağlamak için amaçtır.
Bu iletişim kuralı bir yönerge kalınlığı ölçümleri ve görsel fonksiyon incelenmesi Rodents için sağlar. Görsel dökümanları giderek translasyonel araştırma18,26,38,39,40 içinde kullanılan ve klinik için kolayca transfer edilebilir. Boyuna analizleri büyük ölçüde değişkenlik ve sayısını azaltarak dinamik patolojik süreçlerin soruşturma izin mümkündür, Ekim hayvan deneyleri histolojik araştırmalar ile karşılaştırıldığında önemli avantaj olduğunu hayvan çalışma gerekli. Ayrıca, OCT ile içinde vivo görüntülemede kesme veya katman kalınlığı histolojik araştırmalarda etkileyebilir eserler boyama fiksasyon, tabi değildir.
Ancak, lazer ışını retina ile ilgili olarak tüm uçaklarda ortogonal oryantasyon kalite ve tekrarlanabilirlik kalınlığı değerleri sağlamak için kritik bir adımdır. Bu araştırmacı bazı eğitim gerektirir ve OCT taramaları edinme önce zorunludur. Ticari cihazlar insan uygulamalar için inşa edilir gibi Ayrıca, kemirgen OCT görüntülerin kalitesi insan hasta B taranmasını karşılaştırıldığında hala aşağı kalır yanı yok. Yazarın deneyimi farklı iç Retina ayırt etmek zor olabilir katmanları (retina sinir lifi tabakası, ganglion hücre katmanı ve iç pleksiform tabaka) el ile Düzeltme sırasında. Bu yüzden bu katmanlar bir bileşik okuma (IRL) analiz öneririz.
Deneysel Kur uçucu anestezi, örneğin, hangi, deneyim, daha güvenli ve daha kolay ketamin-xylazine41,42 enjekte edilebilir anestezi Örneğin, kontrol ve riskini azaltır soluk çeken isoflurane için bir seçenek sağlar kemirgenler uzun satın alma durumunda erken Uyanış (örn., düşsel fluorescently etiketli hücre gerçekleştirirken) kere. Bir ön çalışmada, birim taramalar iletişim kuralları en yüksek geçerlilik ve güvenilirliği ile tespit edilmiştir. Ne zaman cilt taramaları optik disk içeren orta kesiminde hariç tüm değerlendirmeler için 0.85 üzerindeki ICC (Intra-sınıf korelasyon katsayısı) değerleri ile değerlendirildi arası Oylayıcısı ve test testi tekrarlayın güvenilirlik mükemmel.
Optokinetic yanıt ölçümü yanıt olarak sürekli hareketli bir alan oluşur istemsiz optokinetic refleks dayanır. Diğer türler, aksine Rodents sadece gözleri, ama kolayca kamera ile tespit edilebilir tüm baş hareketi içerir.
“İzleme” arasında ayırt edici veya normal hayvanların davranış hareketleri gerektirir araştırmacı bazı eğitim ve deney grubu için kör önemlidir. Buna ek olarak, hayvanların deneysel ayarı ve uzun süredir ölçüm protokolleri sırasında karşılamak için bir adaptasyon faz ihtiyacım var, “izleme” OKR eşik ulaşmasını nedeniyle değil de, azalan temin için art arda animasyon hayvanlar var dikkat. Önemli zorlanma değişkenliği ile ilgili laboratuvar fareler ve sıçanlar43,44görsel fonksiyonu da vardır. Kemirgen görme keskinliği önce test edilir ve gen Pde6brd1 için homozigoz oldukları gibi SJL fareler gibi bazı suşları bile OKR ölçümleri için uygun olmayabilir bu nedenle değerlendirilmelidir (Retina dejenerasyonu 1).
Özetle, Retina Morfoloji ve görsel fonksiyon incelenmesi hayvan modellerinde non-invaziv, Boylamsal araştırmalar EAE bağlamında meydana gelen yapısal ve işlevsel hasar için izin verir ve görsel içeren diğer modellerinde yararlı olabilir Sistem, ancak bunlarla sınırlı olmamak retinopathies ya da optik sinir yaralanma modelleri de dahil olmak üzere.
The authors have nothing to disclose.
Bu eser hibe Dr Robert Pfleger-Vakfı ve Ilselore Luckow-Vakfı, yanı sıra Biogen ve PA Novartis tarafından desteklenmiştir Şekil 1B çoğaltılamaz “tüm vücut pozisyonel manipülatörler anaesthetized fareler ve sıçanlar oküler görüntüleme için:-it-yourself bir rehber. Dietrich, M., Cruz-Herranz, A., yurttaş, H., Aktaş, O., Brandt, A. U., Hartung, HP., yeşil, A., Albrecht, P. BMJ açık göz hastalıkları. 1 (1), e000008, 2017” izniyle BMJ Publishing Group Ltd
Heidelberg Spectralis HRA+OCT system | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | ophthalmic imaging platform system |
Heidelberg Eye Explorer | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | Version 1.9.10.0 |
blue 25D non-contact lens | Heidelberg Engineering, Germany | N/A | lens for rodent mesurement |
OptoMotry | CerebralMechanics Inc., Canada | N/A | system for visual function analysis |
OptoMorty HD software | CerebralMechanics Inc., Canada | N/A | Version 2.1.0 |
Inhalation Anesthetic Isoflurane | Piramal Critical Care, Bethlehem, PA, USA | 803250 | inhalation anesthetic |
Phenylephrin 2.5%-Tropicamide 0.5% | University Hospital Düsseldorf, Germany | N/A | pupillary dilation |
Visc-Ophtal | Dr. Robert Winzer Pharma GmbH, Berlin, Germany | 58407 | ophthalmologic eye gel |
GraphPad Prism | GraphPad Software Inc, San Diego, CA, USA | N/A | statistical analysis software, Version 5.00 |
IBM SPSS Statistics | IBM Corporation, Armonk, New York, USA | N/A | statistical analysis software, Version 20 |