Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Behavior
Click here for the English version

Behavior

Yeni nesne tanıma ve nesnenin konumunu bir bütçe farelerde test davranış

Published: November 20, 2018 doi: 10.3791/58593
Automatic Translation
1, 1, 1,2,3
1Department of Psychology, Ohio State University, 2Department of Neuroscience, Ohio State University, 3Center for Chronic Brain Injury, Ohio State University

Summary

Burada tasarım, maliyet ve gerekli ekipman inşası gibi fare nesnenin konumunu ve Roman nesne tanıma davranış test, ekonomik kurulması için kapsamlı yönergeler içeren bir protokolü sağlamak olarak yürütme davranış testleri, veri toplama ve analiz.

Abstract

Ethologically ilgili davranış test çeşitli fizyolojik veya patolojik değişikliklerin bilişsel etkisini incelemek için fare modelleri kullanan herhangi bir çalışma önemli bir bileşenidir. Nesne konumu görev (OLT) ve Roman nesne tanıma görev (Kuzey) fonksiyonu ve belirli beyin bölgeleri bellekte yer göreli durumunu ortaya çıkarmak için yaygın olarak kullanılan iki etkili davranış görevlerdir. Bu testlerin her ikisi de doğal tercihi yararlanmak fareler için bellek daha önce ortaya çıkarmak yenilik için nesneleri karşılaştı, OLT, öncelikle ağır hipokampal faaliyete dayanmaktadır kayma öğrenme değerlendirir. Kuzey, buna ek olarak, birden çok beyin bölgeleri üzerinde dayanır nesne kimliğinin kayma olmayan öğrenme değerlendirir. Her iki görevi bir açık alan test arena, fareler, uygun çevre ipuçları ve video kayıt cihazları için eşdeğer gerçek değer nesneleriyle ve yazılım gerektirir. Ticari olarak mevcut sistemleri, uygun olsa da, pahalıya mal olabilir. Bu el yazması arenalarda oluşturmak ve ekipmanları OLT ve Kuzey yerine getirilmesi ayarlama için basit, uygun maliyetli bir yöntem ayrıntıları. Ayrıca, el yazması OLT ve Kuzey içermektedir ve temsilcisi sonuçları gibi veri toplama ve analiz için tipik yöntemler sağlar verimli bir test protokolü açıklar. Bu testlerin başarılı tamamlanma çeşitli fare modeli sistemlerinin bellek işleve değerli bilgiler sağlamak ve bu işlevleri desteklemek temel sinir bölgeleri değerlendirmek.

Introduction

Etkili bilişsel testleri izole ve davranış kontrollü ortamda1inceleyerek belirli beynin sinirsel işlev değerlendirmek. İnsanlarda, belirli görevleri görev prefrontal işlevi için veya Test otomatik pil Cambridge nöropsikolojik (test öğrenme eşleştirilmiş ortakları sıralama Wisconsin kart gibi hedeflenen beyin bölgeleri performansını değerlendirmek için tasarlanmıştır CANTAB) hipokampal işlevi2,3. Bu testler belirli beyin bölgeleri insanlarda fonksiyonları bölgelere sinirsel aktivitesinden kaynaklanan davranışları değerlendirmek tarafından çalışma için tasarlanmıştır. İnsan sağlığı geliştirme en Biyomedikal araştırma sona hedeftir; Ancak, sağlık veya hastalık beyin işlevinin birçok çalışma etik insan katılımcılarıyla gerçekleştirilemez. İnsan katılımcılar kullanamazsınız çalışmalar için fareler gibi küçük kemirgen kez seçim modeli vardır. Fare modelleri kullanarak deneysel manipülasyonlar Gen ifadesinin değiştirilmesi, indüksiyon yaralanma veya hatta modülasyon devresi faaliyet optogenetic teknikleri ile de dahil olmak üzere üzerinde doğrudan kontrol sağlar. Farelerin, insan test için benzer davranış testleri belirli bölgelerde itimat davranışları ölçerek deneysel değişkenleri beyin fonksiyonları üzerindeki etkisini değerlendirmek amaçlamaktadır.

Hipokampüs insanlar ve kemirgenler4bellek oluşumu için önemli bir yapıdır. Daha ayrıntılı olarak, hipokampus bildirimsel hafıza ilişkisel gösterimler içeren ama beyin4motor merkezlerindeki dayanır değil yordam bellek kritik bir rol oynar. Zarif pertürbasyon için duyarlı olduğundan hipokampal bellek işlevi nörolojik birçok alanları arasında çalışmanın bir odak noktası olmuştur. Uzun süreli stres arasında değişen ve anti-aging nöbetler ve inme için negatif tedirginlikler hipokampal hasar5ile ilişkilidir. Buna ek olarak, sosyal etkileşim, fiziksel çevre zenginleştirme veya egzersiz, gibi olumlu müdahaleler hipokampal işlevi6,7,8geliştirmek. Uygun hipokampal bellek sınamasını ile kemirgen çalışmaları hücresel ve moleküler arabulucu belleğin yanı sıra etkileri farklı çevresel müdahaleler hipokampal işlevi bir anlayış ortaya çıkarabilir.

Kemirgen, hipokampus bağlı öğrenme ve bellek9,10,11eğitim için çeşitli testler geliştirilmiştir. Onlar geniş davranış değişikliği temin için duygusal valence bir uyarıcı gerektiren görevleri ve yeni uyaranlara11araştırmaya kemirgen tercih üzerinde çizmek görevleri alt. Bağlamsal korku Merkezi Klima, örneğin, bir çevre içeriği ve daha sonra testler bellek bağlamı için hoş olmayan bir uyarıcı (ayak şok) korku kaynaklı dondurucu davranış9,11ölçerek çiftleri. Morris su labirent ve kuru karşılığı, Barnes labirent, olumsuz dış takviye kayma öğrenme4,11tanıtmak için kullanın. Her durumda, kemirgenler soğuk suya batırılır ya da parlak ışıklı bir platform üzerinde sırasıyla maruz bir caydırıcı durumu kaçış aramak. Hayvanlar küçük yiyecek Ödülleri4,11almak için mekansal hafıza ile birleştiğinde doğal yiyecek davranışı kullanırken Radyal Kol labirent, buna ek olarak, pozitif takviye dayanır. Bu görevleri yaygın olarak kullanılır ve hipokampal bellek hakkında temel bilgi vermiştir. Ancak, bazı durumlarda istenmeyen olabilir negatif ve pozitif dış takviye veya korku-inducing uyaranlara şok gibi duygusal bir bileşeni bu davranış eklemek sınar. Örneğin, dorsal ve ventral hippocampi farklı işlevler, duygusal yönetmelik, sırasıyla12karşı kayma bellek ile ilişkilidir. Ventral hipokampal duygusal düzenleme işlevleri de etkileniyorsanız uyaranlara karşı duygusal bir itimat testler Engelli kayma bellek doğru yansıtmayabilir.

OLT hipokampus bağımlı kayma bellek13ölçüsü sağlar basit ve etkili bir testtir. Görev için ek harici takviye olmadan yenilik bir hayvanın iç tercih kullanır ve bu nedenle genellikle farklı duygusal tepkileri13ile ilişkili komplikasyonlar önleyebilirsiniz. OLT için mevcut iletişim kuralı fareler için sunulan cihazın boyutları uygun şekilde ölçeklenir Eğer Ayrıca Rat etkili değildir Protokol bir fare bir açık alan test arena için acclimating ve sonra uzamsal çevre yardımlar ile ilgili olarak 2 nesne araştırmak izin oluşur. Fare sonra salondan kaldırılır ve sırasında bir gecikme (arası deneme aralığı veya ITI), nesnelerden birini taşınır. ITI sonra fare arenaya yeniden ortaya çıkar ve serbestçe keşfetmek için izin. Genel olarak, fareler yenilik tercih ve onlar ilk onların maruz kalma nesnelerin konumunu hatırlarsanız, taşınan nesnenin soruşturma daha fazla zaman harcayacaksınız. Hipokampal lezyonlar hayvanlarla kayma bağlamsal öğrenme güçlüğü ve sonuç olarak Roman konumu14,15dakika içinde nesneler için tercihiniz olmadığını göstermektedir.

OLT sinirsel aktivite üzerinde birden çok beyin bölgelerden çizer bellek roman nesne tanıma görev (Kuzey) ek bir test ile ayrı ayrı veya birlikte kullanılabilir. Kuzey kadar otelde nesnelerden birini yeni bir konuma taşındığı yerine yeni bir nesne tarafından değiştirilir test aşamasında OLT için aynıdır. OLT modelinde olduğu gibi iyi bellek nesneleri ile fareler kendiliğinden roman nesne soruşturma tercih eder. Ağır hipokampal yüzeylerde dayanmaktadır, nesne konumu bellek aksine nesne tanıma bellek beyin bölgeleri çeşitli üzerinde güveniyor görünüyor ve hipokampus tutulumu huzursuz. Birçok diğerleri karşısında18,19bulana hipokampal lezyonlar veya inactivation roman nesne tercih10,13,16,17, etkilemez rapor çalışmaları. Ancak, genel bellek işlevin Rodents hala yaygın olarak kullanılan bir görevdir.

Burada sunulan Protokolü ikisi de bir açık alan test arena kullanın adımlar başlatmak ve OLT ve Kuzey, yürütme içinde delineates. Ticari olarak mevcut davranışsal test etme donanımları maliyet-engelleyici özellikle daha küçük labs için olabilir. Bu protokol tasarımı ve basit adımları arenalarda içi en az maliyetle ve özel araçlar olmadan oluşturmak için içerir. Ayrıca, bu iletişim kuralını arenas, bağlamsal ipuçları ve OLT ve Kuzey kurallarının uygulanması için hazırlıyor video kayıt sistemi de dahil olmak üzere ideal davranış test alanı ayrıntıları. Tüm malzeme ve yordamlar her çalışma için en iyi duruma getirme önemini vurgulayan yanı sıra kusurlu başarılı çalışmalar için temsilcisi sonuçları sunulmuştur.

Açıklama Seçeneği Miktar
Bölüm A: akrilik levha - opak beyaz (0.635 cm x 40 cm x 40.64 cm) Yönlendirilmiş kenarları 2
Bölüm B: akrilik levha - opak beyaz (0.635 cm x 40 cm x 41.91 cm) Yönlendirilmiş kenarları 2
Bölüm C: akrilik levha - opak beyaz (0.635 cm x 41.91 cm x 41.91 cm) Yönlendirilmiş kenarları 1
Akrilik çimento (1 pt) NA 1
16 gauge hipo aplikatör NA 1
Kombinasyon kare NA 1
HD Web Kamerası NA 1
Video yakalama yazılımı NA 1
USB 2.0 uzatma kablosu NA 1
Kablo kanalı NA 1

Tablo 1: Malzeme ve ekipman davranış test etmek için gereken ayrıntılı listesi.

Protocol

Aşağıdaki iletişim kuralı kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Ohio Devlet Üniversitesi (OSU) tarafından onaylandı.

1. yapı Arenas

  1. Tablo 1' de özetlenen malzeme sipariş: Akrilik, akrilik çimento ve 16 G beş adet aplikatör Hippo.
  2. Uygun güvenlik ekipmanları göz, cilt ve diğer koruma türlerini içerebilir üreticinin yönergelerine uygun giymek.
  3. Koruyucu kağıt kaplama Akrilik levhalar kaldırın.
  4. Kuru boyutları doğru (Şekil 1A) olduğunu doğrulamak için tüm malzemeler uygun.
  5. Bir araya getiren ve akrilik çimento şırınga yük.
  6. Bir dış duvar (Bölüm B) Bankası (Bölüm C) bir üst kenarıyla uzun kenarına hizalayın ve her bir bileşik ya da makinist kare kullanarak diğer dikey olduklarından emin olmak.
  7. Şırınga kullanarak, çimento bir küçük ve sürekli boncuk doğrudan alanına bağlı iki adet köşe için geçerli.
  8. Onlar başlangıçta (yaklaşık 5 dk) küme kadar tutun iki yerde (parçalar B ve C) parçaları.
    Not: Genellikle, onlar % 80'i 24 h içinde sertleştirilmiş olacaktır, ancak derleme 5 dk sonra devam edebilirsiniz.
  9. Adımları 1.5 – 1.7 diğer dış duvar (Bölüm B) ile aynı temel için yineleyin.
  10. İki iç duvarları (Bölüm A), teker teker, adımları 1.5 – 1.7 kullanarak Bankası iliştirin.
  11. Ayrıca, küçük bir uygulamak için şırınga kullanın ve çimento doğrudan sabit boncuk şimdi dış duvar (Bölüm B) ve iç tarafından oluşturulmaktadır köşe duvar (Bölüm A).
  12. Bu parçalar 5 min için bir yerde tutun.
  13. 24-48 h sonra davranış sınama ortamını kurma devam edin.

2. davranışsal test ortamı ve donatım ayarlama

  1. Çevre ipuçlarını birbirleriyle ve test alanı (Şekil 1B) alanda karşı karşıya karşısında (tartışma bölümünde anlatıldığı gibi) yerleştirin.
  2. Dört test arenalarda ya kat veya sağlam tablo ipuçları ve görsel fareler (Şekil 1B) girişine en üst düzeye çıkarmak için kamera uygun mesafelerde 2 2 şekilde düzenleyin.
  3. Görüş açısı arasında arenalarda ve ipuçları bu mesafeleri uygun olduğunu doğrulamak için ipuçları doğru duvarın üzerinden her arena kattan propped bir metre stick kullanarak doğrulayın.
  4. Kameranın yüksekliğini veya tablonun yüksekliğini ayarlayarak video tüm dört arenalarda belgelenmesi sağlar optimum optik yol uzunluğu belirler. (Şekil 1B).
  5. Fotoğraf makinesini bir USB uzatma kablosu bağlayın.
  6. Kablo raceways kullanarak, tavan arasında kablo çalıştırın ve video çalıştıran bir bilgisayara bir duvar aşağı yazılım yakalamak.
  7. Bilgisayar fare test alanında araştırmacı (Şekil 1 c) ayıracak bir perdenin arkasında gizlemek.
  8. Yaklaşık 2-5 cm uzunluk ve genişlik en az 3 farklı nesneler her 4 montajı ve dakikada 10 cm yüksekliği (Şekil 1 d) test etmek için kullanabilirsiniz.

Figure 1
Şekil 1: davranış test hazırlığı. (A)açık-alan-test ile ilgili Bölüm A iç duvar, Bölüm B dış duvar olarak ve üs olarak C parçasını arena derleme. Bitmiş arena Bankası tüm kenarına çalıştırmak iki dış duvarları (Bölüm B) ve (Bölüm C) tabanının bitişik kenarlarda dış duvarları arasında uygun iki iç duvarlar (a parçalar) var. Tüm duvarlar üstünde tepe-in temel dinleneceğim. (B) temsilcisi aranjman arenalarda 0,62 m yüksek tablo, 60 x 90 cm çevresel cues, ışıkları ve tüm dört arenalarda yakalanması bırakmak aynı zamanda yapılan bir test alanı için bir fotoğraf makinesi. (C) A perde denemeler sırasında fareler deneyci ve bilgisayar sisteminden gizler. Bu fotoğraf almak amacıyla genel gider ışıklar yanıyor ama test sırasında sadece zemin lambaları yanıyor. Ayrıca, çevre ipuçları biri bu fotoğrafını test alanı için kaldırıldı, ama test sırasında masanın arkasında tüm siyah işaret karşı karşıya dördüncü bir işaret arenas, önünde yoktur. (D) A temsilcisi nesnesi (ve ölçek için cetvel) bu OLT veya Kuzey fareler ile test etmek için uygundur. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

  1. Bu nesneleri doğrulayın.
    1. En az kullanılan deneysel farelerin seks, zorlanma ve yaş grubu temsilcisi 8 vahşi tipi farelerde elde edilir (örn., 6-9 hafta-yaşlı kadın ve erkek C57Bl/6 fareler).
    2. Bütün fareler 1dk test önce 3-5 gün boyunca her gün için baş.
    3. Fareler 4 gruba ayırın ve onlar zaten tek başına yerleştirilmiştir değil, onları temiz tutarak kafesleri birey taşıyın.
    4. En az 30 dk alışmana izin ve onları test odasına getir.
      Not: özellikle deneyci erkek20ise bu 30 dk için odasında deneyci varlığı fareler üzerinde stres görev sırasında azaltacaktır.
    5. Calıştıkları yapılır ve deneyci başlatmak hazır olduktan sonra video kaydetmeye başlayın.
    6. Yer (Yayın köşe olarak adlandırılır) arena bir köşesinde duvarları karşı karşıya her fare (Şekil 2A).
    7. Fareler serbestçe 10 min için arenalarda keşfetmek izin.
    8. Video kaydı durdurmak.
    9. Fareler 20 dk süresince onların temiz tutarak kafes dönmek.
    10. Temiz hayvan tesisi ile tüm alanlarda sonraki kullanmadan önce koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek gibi yöntemleri, temizlik önerilir.
    11. Öyle ki arena ve 6 x 6 cm2 her duvar o köşe (2B rakam) nesneleri karşı dengeli çift taraflı bant kullanarak, 2 farklı nesne 2 yayın olmayan köşe yakınındaki yapıştırmayın.
    12. Video kaydı başlatın.
    13. Yayın köşe duvarlarda bakan her fare yerleştirin.
    14. Fareler arena ve nesneleri özgürce 10 min için araştırmak izin verir.
    15. Video kaydı durdurmak.
    16. Yer fareler onların temiz tutarak kafeslerde 20 dk süresince geri.
    17. Temiz tüm alanlarda ve nesneler ile hayvan yetenek yöntemleri gibi koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek Temizleme önerilir.
    18. Eğitim denemeler tüm nesneleri (OLT ve Kuzey Eğer en az üç farklı nesneleri) her fare ile test edinceye kadar aynı konumda yapıştırılmış 2 yeni nesne ile yineleyin.
    19. Fareler nesnenin üzerine oturmak izin nesneleri hariç.
    20. Soruşturma zaman her fare ile her nesne adım 4 göre analiz.
    21. Bir negatif veya pozitif içsel değere sahip nesneleri hariç.

3. davranışsal Test iletken

  1. Bir hafta önce test: alışma davranış deneylerini bireylere
    1. Yetişkin 6-9 hafta-yaşlı kadın ve erkek C57Bl/6 fareler her gün için 1 dk test önce 3-5 gün boyunca baş.
  2. 1. gün: habituation oturumları
    1. Fareler 4 gruba ayırın ve onlar zaten tek başına yerleştirilmiştir değil, onları temiz tutarak kafesleri birey taşıyın.
    2. Onları test odasına getir ve onları en az 30 dk için test odasına alışmana izin.
      Özellikle deneyci erkek20ise Not: bu 30 dk için odasında deneyci varlığı görev sırasında fareler üzerinde stres azaltmak.
  3. Calıştıkları yapılır ve deneyci başlatmak hazır olduktan sonra video kaydetmeye başlayın.
  4. (Arena başına tek bir fare) arenada yer her fare yayın köşe (Şekil 2A) duvarları karşı karşıya.
  5. Fareler serbestçe 6 min için arenalarda keşfetmek izin.
  6. Video kaydı durdurmak.
  7. Dönüş fareler için onların temiz tutarak kafes arası deneme aralýðý (ITI).
  8. Temiz hayvan tesisi ile tüm alanlarda yöntemleri gibi koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek Temizleme önerilir.
  9. Toplam 3 habituation oturum için her fare için daha fazla kez 3.3-3,9 iki adımları yineleyin.
  10. Bütün fareler için ev onların kafes dönmek.
  11. Temiz hayvan tesisi ile tüm alanlarda yöntemleri kullanma ertesi gün önce koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek gibi temizlik önerilir.
  12. 2. gün: eğitim deneme, OLT, Kuzey
    Not: Kuzey isteğe bağlı bir testtir.
    1. 24 saat sonra fareler aynı grup test odasına getir ve onları için en az 30 dk önce habituation oturumları önceki gün yapılan gibi test odasına alışmana izin.
    2. Arena (2B rakam) yerleştirilen 2 nesne kullanarak bir eğitim deneme yapmak.
      1. Arenada karşı dengeli öyle ki çift taraflı bant kullanarak, nesneleri 6 x 6 cm2 2 yayın olmayan köşe uzak yapıştırmayın.
      2. Video kaydı başlatın.
      3. Yayın köşe duvarlar habituation oturumları sırasında yapılır gibi karşı karşıya her fare yerleştirin.
      4. Fareler arena ve nesneleri özgürce 10 min için araştırmak izin verir.
      5. Video kaydı durdurmak.
      6. Yer fareler onların temiz tutarak kafeslerde 20 dk bir ITI için geri.
      7. Temiz tüm alanlarda ve nesneler ile hayvan yetenek yöntemleri gibi koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek Temizleme önerilir.
    3. OLT gerçekleştirin.
      1. Yeni bir yayın olmayan köşe deneme eğitim kullanılan nesnelerden birini taşımak ve nesne 6 cm çift taraflı bant (Şekil 2C) ile bu köşe her duvarından yapıştırmayın.
        Not: Diğer nesne deneme eğitim sırasında neredeydi kalmalıdır.
      2. Video kaydı başlatın.
      3. Yayın köşe duvarlarda bakan her fare yerleştirin.
      4. Fareler nesneleri 10 min için araştırmak izin verir.
      5. Video kaydı durdurmak.
      6. Yer fareler onların temiz tutarak kafeslerde 20 dk bir ITI için geri.
      7. Temiz tüm alanlarda ve nesneler ile hayvan yetenek yöntemleri gibi koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek Temizleme önerilir.
    4. Kuzey gerçekleştirin.
      1. Bir roman nesnesiyle OLT sırasında taşınmaz nesneyi değiştirmek ve yeni nesne köşe çift taraflı bant (Şekil 2B) ile iki duvar üzerinden 6 cm yapıştırmayın.
      2. Video kaydı başlatın.
      3. Yayın köşe duvarlarda bakan her fare yerleştirin.
      4. Fareler nesneleri 10 min için araştırmak izin verir.
      5. Video kaydı durdurmak.
      6. Fareler onların ev kafeslerde yerleştirin.
      7. Temiz tüm alanlarda ve nesneleri hayvan tesisi ile sonraki kullanmadan önce koku yardımlar en aza indirmek için % 70 etanol ile silerek gibi yöntemleri temizlik önerilir.

Figure 2
Şekil 2: Arena yapılandırma denemeler için. (A)açık-alan nesneleri olmadan arena habituation oturum için test. Siyah oku bir yayın köşe gösterir. Bu köşede aynı göreli konumu her alanda olmalı ve her deneme ve test edilen her fare için tutarlı olun. (B) eğitim deneme için iki farklı nesne açık alan, 6 x 6 cm uzakta onların anılan sıraya göre duvarlar için güvenli. (C) için OLT, bir nesne için bir yeni yer, ayrıca 6 x 6 cm duvarlar ve yayın köşe uzakta taşınır. OLT üzerinden taşınan nesnenin artık tanıdık nesne olduğundan (D) için Kuzey, OLT içinde sabit nesnenin yeni bir nesne ile değiştirilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

4. davranışsal Test verilerini çözümleme

Not: Video analizi ideal olarak en az iki bağımsız, kör Denemecileri tarafından tamamlanmalıdır.

  1. Video dosyasını açın.
  2. Etkin soruşturma belirlemenize yardımcı olması için ekran üzerinde 2 cm her nesnenin çevresine kenarlık sağlar şeffaf bir daire uygulanır. Bu kılavuz ayarlamak için yerleştirilen bir arenada cetvel ile bir video dosyası görüntü kullanın.
  3. Fare davranışı işlevlerini izlemek ve kaydetmek kez fare aktif olarak bu nesneden nesne en fazla 2 cm uzaklıkta işaret burnunu oluşur nesne araştırmaktadır.
    1. Kayıt zaman damgası fare o nesnenin soruşturma durduğunda bir nesne ve zaman damgası araştırmaya başlar.
    2. Her iki nesnenin de arenada için deneme süresi için yineleyin.
    3. Fare her nesne nesne soruşturma her örnek için durma zamanı gelen başlangıç saati çıkarılarak ve tüm bu değerleri ekleme araştırıldı toplu süresini hesaplamak.
  4. Toplam soruşturma zaman ya da ayrımcılık dizin aşağıdaki formüllerle yüzdesini hesaplamak:
    1. Yüzde toplam soruşturma zaman hesaplamak =
      Equation 1
      Not: Roman konumu veya nesnenin daha fazla araştırma değeri % 50 üzerinde gösterir.
    2. Ayrımcılık Dizin hesaplamak =
      Equation 2
      Not: Daha fazla zaman Roman nesne soruşturma pozitif bir değer gösterir. Her iki nesnenin ile eşit zaman geçirdim sıfır bir ayrımcılık dizinini gösterir.
  5. Grafik olarak sonuçları ve tam istatistiksel analizler karşılaştırılan grupları için uygun bir t-test veya ANOVA kullanarak temsil eder.

Representative Results

Şekil 3 kullanarak bu protokolü6erkek ve dişi yetişkin C57Bl/6 fare ile elde edilen tipik pozitif ve negatif sonuçlar örnekleri sağlar. Her zaman OLT ve Kuzey veri yorumlanması bir grup toplam veri için geçerlidir (aşağıdaki konuya bakın). Tek bir fare için soruşturma zaman bellek veya bellek yetersizliği olarak yorumlanamaz. Ancak, bir grup farelerin performansını (i.e., birden fazla örnekleri) diğer gruplara ya da istatistiksel test kullanarak sabit şans düzeyleri ile karşılaştırıldığında. Onlar her ikisi de eşit olarak Roman ve farelere (Şekil 3A ve 3B) özünde olumlu ya da olumsuz herhangi bir değere sahip olmayan bir tipik eğitim deneme sırasında farelerin grupları önemli bir tercih ortalama ya nesneleri için gösterme. Toplama veriyi fareler bir grup için bir nesne önemli tercih başka bir yere eğitim sırasında gösterirse, o doğal tercih/nefret sonuçları sonraki çalışmalarda yıkmak çünkü bu nesneler kullanılmamalıdır. Ayrıca, tüm farelerin toplam soruşturma zaman asgari standart karşılaması gerekir (geleneksel olarak 20 saniye21set) ve bellek sonraki testler etkileyebilir soruşturma hiçbir temel fark olması için karşılaştırılmalıdır.

OLT sırasında nesnenin konumunu için bellek toplam soruşturma zaman taşınan nesnenin (Şekil 3A) ile önemli ölçüde fazla % 50 Ortalama harcama fareler yansıtır. Toplam soruşturma kez bireysel farelerin büyük ölçüde farklıysa, daha iyi (Şekil 3B) nesneler için bir ayrımcılık dizini olarak görülen sonuçlarıdır. Sonra taşındı fareler nesnesiyle birlikte daha fazla zaman harcadı Şekil 3B dizinde ortalama ayrımcılık önemli artış gösterir. Artış yüzde zaman veya ayrımcılık dizin tarafından ölçülen, soruşturma nesnesinin taşındıktan sonra artış fareler nerede nesne eğitim sırasında yer olduğunu hatırlıyorum göstermektedir.

Bu protokol son deneme nesne tanıma bellek değerlendiriyor. Temsil edici bir örnek fareler bir grup ile bir daha yüksek zamanın yüzde olarak ortalamasını soruşturma (Şekil 3 c) sırasıyla % 50 ve 0, sabit denetimi değerleriyle karşılaştırılan pozitif ayrımcılık Dizin yanı sıra (şekil 3D) gösterir. Bireysel fareler arasında toplam soruşturma zamanında önemli değişkenlik Eğer olarak OLT verilerle ayrımcılık Dizin büyük olasılıkla bu verileri görselleştirmek için daha iyi yöntemdir. Şekil 3E Kuzey ve bazı (konuya bakın) Bu testler ortaya çıkabilir istatistiksel komplikasyonların 2-grup karşılaştırma örneği gösterir. İçin A grubu B grubu için bir tane örnek t-testi soruşturma % 50 üzerinde önemli ölçüde gösterirken, aynı test edin. Bu bulgu A ve B birbirinden farklı olduğu anlamına gelmez. Grup farkları belirlemek için grupları B A'ya karşılaştırarak bir ayrı iki örnek parametrik olmayan Mann-Whitney testi yapılması gerekiyor. Bir iki örnek parametrik olmayan Mann-Whitney test bu temsili grup verilerin anlamlı bir fark gösterir (p = 0.66) roman nesne soruşturma zaman yüzdesi olarak iki grup arasında.

Hem OLT ve Kuzey nesneleri gerçek değerini son derece hassas ve nesne denklik ayrıntılı test sonuçları yıkmak içsel hiçbir önyargı olması gereklidir. Şekil 3F ve 3 G uygunsuz nesne seçimi örneği gösterir. 4 Örneklem büyüklüğü ile bir pilot testi, fare ile nesne nesne B (Şekil 3F) karşı eşleştirildiğinde A soruşturma zaman % 50'den daha az harcama doğru bir eğilim gösterdi. Bu nesneler daha sonra Kuzey nesne A ile roman nesne ve daha büyük bir örnek boyutu 16 kullanılmaya başlanmıştır, fareler önemli ölçüde daha az % 50'sinden nesne A ile soruşturma zaman (Şekil 3 g) harcamış. Bu isteksizlik roman nesneye kolayca tanınabilir burada deneyinde teknik bir kusur olarak ve doğal tercih/tiksinme nesnelerinden pilot test çok önemlidir bu yüzden örneğidir.

Figure 3
Şekil 3: vahşi türü yetişkin C57Bl/6 fareler ile davranış sınama verileri. (A)yüzde toplam soruşturma zaman OLT gösterir önemli artış soruşturmasında, sonra nesne taşındı karşı deneme eğitim sırasında taşınan nesnenin karşılaştırılması. p < 0,0001, eşleştirilmiş t-testi. Taşındıktan sonra (B) temsilcisi sonuçları taşınan nesnenin soruşturma sırasında eğitim ve ayrımcılık dizin olarak görüntülenen OLT denemeler için benzer şekilde nesne araştırmada önemli bir artış gösteriyor. p < 0,0001, eşleştirilmiş t-testi. (C) yüzde toplam soruşturma zaman Kuzey roman nesnesinin roman nesne soruşturma için önemli tercih gösterir. ** p = 0.0024, tek örnek t-testi vs. %50. (D) temsilcisi olarak bir ayrımcılık dizin benzer şekilde roman nesne soruşturma için tercih görüntülenen Kuzey soruşturmada yeni nesne için sonuçlar. ** p = 0.0024, tek örnek t-testi vs 0. (E) temsilcisi farelerin iki farklı grupları içeren bir Kuzey incelemenin sonuçlarını. B grubu, önemli ölçüde bir örnek t-testi ile % 50 den başlayarak farklıdır (** p 0.0024 =), ancak A grubu (p = 0.5837). Ayrı bir analizde, gruplar, karşılaştırmak için iki örnekli Mann-Whitney testi düzensiz Grup boyutları nedeniyle kullanılır ve soruşturma anlamlı bir fark bulunmuştur (p = 0.66, ns). Bir küçük örnek boyutu çalışmalarda doğrulama sırasında bir nesne (F) yüzde zamanla isteksizlik nesneye doğru bir eğilim gösterir. p = 0.2159, tek örnek t-testi. (G) roman nesne olsa bile daha büyük bir örnek boyutu ve (F) nesnesinden bir Kuzey roman bir nesne olarak kullanılan, nesneyi önemli bir nefret, bulunur. * p = 0.0270, tek örnek t-testi. Bu nesne seçimi teknik bir arıza bir örnektir. Veri demek gibi ± sem veri C-E bir önceki yayın6adapte panelleri mevcuttur. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Discussion

Bu iletişim kuralı, nesnenin konumunu ve Roman nesne tanıma farelerde test davranış yapmak için düşük maliyetli bir yöntem sağlar. Bu testler hipokampal işlev hem de prefrontal korteks, nesne tanıma10yer gibi diğer kortikal bölgelerde, fonksiyonun değerlendirilmesi etkinleştirin. OLT ve Kuzey Morris su labirent, bağlamsal korku Klima, Barnes labirent veya Radyal Kol labirent için gerekli olan bir çekim gücü ile güçlü duygusal Değerlik kaçınarak avantajı var. Ayrıca gıda yoksunluğu Radyal Kol labirent için gerekli ihtiyacını kaçının. Ayrıca, bu iletişim kuralını geniş veya karmaşık ekipman does değil istemek yürütme veya çözümleme için basit bir iki gün test işlemi açıklar. Bunlar öğrenme veya devralma önlemler için izin vermez bu görevlerin bir dezavantaj olduğunu. Bir fark yenilik soruşturmasında nesneler hakkında yoksul öğrenme sırasında eğitim, yoksul ne öğrenildi için bellek veya her ikisi nedeniyle olabilir. Harcanan toplam süre keşif sürücü doğal tüm farklılıkları dışarı iktidar için önemli bir ölçüdür nesneleri araştırıyor ama öğrenme bir ölçü değil. Önlemler öğrenme için deneysel bir soru önemli ise, su labirent, Barnes labirent veya Radyal Kol labirent büyük olasılıkla tercih olurdu.

Özel davranış arenalarda binanın yüzlerce dolar kaydedin ve labs çok çeşitli finansal ulaşılabilecek test nesnesini getirme potansiyeline sahiptir. Bu iletişim kuralı pek çok engel ortadan kaldırır ve in-house arena inşaat Akrilikler içinde herhangi özel bir eğitim ile bilim adamları için daha erişilebilir kılan imalat süreci hızlandırır. Siyah fareler için beyaz akrilik ve beyaz fareler için siyah akrilik gibi fare ile karşıtlık renkli Akrilik levhalar satın alma veri toplama ve analizi, özellikle ticari olarak mevcut kullanılarak kolaylaştıracaktır olduğunu unutmamak önemlidir analiz yazılımı. Kesim boyutu sayfaları "kenarları yönlendirilen" ile bir tablo için ihtiyaç ortadan kaldırır sipariş (Tablo 1) gördüm ve akrilik kullanımı matkap ve pilot delikleri Havşa gerek kaldırır. Bağlantı elemanları, delme ve kesme akrilik kez vidalama molası, çip ve kırılgan doğası nedeniyle çatlamak neden olur. Çimento bir çözücü olduğu için birleştirilmiş alan akar, eriterek ve herhangi bir akrilik yumuşatma karşılaşır. Geleneksel bir tutkal sanki gibi bu nedenle, bu her parça için ayrı ayrı uygulanmamalıdır. Tutkal, çimento değil negatif boşluk doldurmak veya yüzeylere tutturun. Bu çok daha iyi bir bağ oluşturarak bir pürüzsüz ve düz kenar sağlayacaktır "yönlendirilmiş kenarları" sipariş için birincil nedeni bu. Çimento kurur, bu iki Akrilik levhalar tek bir "solvent kaynak" denen bir süreç içine erimiş. Çok gibi metal kaynak, bitmiş ürün tek bir parça, ama kaynaklı alan her zaman en zayıf konum kalacaktır. Arenas kullanımda olduğunda, bu nedenle, doğrudan etkisi veya bu güçlükleri, aşırı stres önlemek için özen gösterilmelidir.

Bu iletişim kuralı da aynı anda 4 fareler (resim 1 ve Şekil 2) test etmek için 4 arenalarda ayarlamak gösterilmiştir. Arenas opak duvarlarının fareler bir başka test sırasında görmesini engellemek, ama hala bu koku neden olur diğer farelerin odaya sahip bir olasılık veya test zarar olabilir gürültü dikkat dağıtıcı. Fareler davranış test etmeden önce çok hayvan oda koşullarına maruz kalan gibi habituation denemeler olarak detaylı burada bu endişe etkisinin azaltılmasına yardımcı olur. Ancak, Eğer dikkat dağıtıcı gürültü diğer farelerin işleme ile birleştirmek diğer fareler veya deneyci güçlü bir husustur, bir fare ile bir arena kullanılabilir, hem de olsa OLT ve Kuzey ile birden çok fareler tamamlamak için gereken süreyi artırır. 4'ten fazla arenalarda teorik olarak de kullanılabilir ancak çoğu kamera bir yeterince geniş iyi çözünürlük ile o kadar çok arenalarda göstermek için görüş alan var mı.

Boyutları ve mesafeleri burada 16 x 16 x 16 m3 boyutlu (Şekil 1B ve 1 C) bir tipik test oda içinde fare davranış testleri için genel yönergeler sağlanmaktadır. Uygun çevre ipuçları kurmak, Arena ve video kayıt cihazları her ortam için optimize edilmiş olması gerekir. İpuçları, büyük şekiller veya dağınık şekilde kendilerini sırasında OLT yönlendirmek fareler sağlayan desenleri (genellikle siyah ve beyaz) oluşabilir. Birbirimizi karşısında farklı konumlarda ipuçları yerleştirmek yerine, yardımlar da test alanı duvarlara monte edilebilir. Bu iletişim kuralı araştırmacı ve bilgisayara davranış test sırasında gizlemek için bir perde ile test Oda bölme önerir. Tüm habituation, arası deneme aralıkları ve etkin denemeler sırasında araştırmacılar kendilerini test alanından ayrı perde yakın olmalıdır. Bu pratik değilse, bilgisayar fare içinde görüş-in kalabilir ama araştırmacı görev sırasında görünümün dışına taşımanız gerekir. Araştırmacı varsa, fareler itimat kayma bir işaret onu ya da onu için deneyebilirsiniz.

Tüm davranış test loş ama hatta aydınlatma yaklaşık 310 lux ve parfüm Denemecileri üzerinde gibi çok az yabancı ses veya güçlü çevre koku yardımlar ile sıcaklık ve nem kontrollü bir ortamda tamamlanmalıdır. Deneme ve test etme her gün arasında tüm alanlarda ve nesneleri koku yardımlar en aza indirmek için önerilen yöntemlerden sterilizasyon % 70 etanol veya kokusuz çamaşır suyu ile mendil silme gibi hayvan tesisi ile temizlenmelidir. Kimyasal dezenfektanlar kullanılması halinde, birçok kimyasal dezenfektanlar hayvanların ayakları için rahatsız edici olabilir çünkü son durulama % 70 etanol ile tavsiye edilir.  Birkaç gün önce test performans OLT ve Kuzey ve20,22sınamaları sırasında stresi azaltmak bireyler ile onları daha yakından tanımak gerekli olan fareler işleme davranış herhangi bir görev olduğu gibi. Fareler akut stres sınama alanı civarında yabancı kişiler nedeniyle yaşayabilirsiniz gibi Ayrıca tüm davranış test aynı individual(s) tarafından tamamlanmalıdır önerilir. Test parametreleri ve bu protokol için ayrıntılı koşullar 6-9 hafta-yaşlı yetişkin C57Bl/6 fareler için optimize edilmiş ve bu yaş grubundaki yaralanma nedeniyle bellek bozuklukları ortaya en yararlı olacaktır ya da bellek bozuklukları nedeniyle kendisini büyük fareler yaş. Genç farelerde hafıza iyileştirmeler için test etmek istiyorsanız, 1 gün olarak 1 saat kadar daha uzun bir ITI performans daha kolay 20 dk ITI sürümü üzerinde tavan etkileri önlemek daha uygun olurdu. Nitekim, ITIS 5 dk (için hemen geri) birkaç saat veya gün (için uzak anılar), deney ve suşların özel ihtiyaçlarını ve fareler yaşları bağlı olarak değişebilir. Önemlisi, uzunluğu ne olursa olsun tüm ITIS bir deneyde oturumları arasında tutarlı olmalıdır. Gibi farklı suşları ve fareler yaşları sergi davranış ve öğrenme, alan düzenleme, test her deneme ve aralığı için zamanlama farklılıkları ve kullanılan nesneleri göre fareler, yaşlarına ve belirli yaralanma zorlanma belirli değiştirilebilir / 9,21,23,25test modeli hastalık/müdahale ediliyor.

Hipokampal bağımlılığı mekansal hafıza fonksiyonları test ederken OLT köklü, Kuzey olabilir veya üzerinde hipokampus dayanmaz. Kuzey verilerden yorumlanması hesabına bu mağara almalısınız. İster hipokampüs, nesne tanıma bellekte ilgilenmektedir için belirleyici değişken üzerine henüz kabul edilmez, ama ITI uzunluğu ya da kayma cues18saliency olabilir olabilir. Özellikle, sunulan Protokolü önce fareler içinde Kuzey hipokampal süreçleri kullanarak doğru önyargı Kuzey kayma OLT kullanır. Böylece, sipariş geri alınabilir veya her görev bağımsız olarak, Denemecileri sorular ve ihtiyaçlarına bağlı olarak çalıştırılabilir unutmamak gerekir.

Nesne seçimi OLT ve Kuzey22,24önemli bir yönüdür. İdeal değil kolayca bir fare tarafından zorla göç ettirilmiş ve cam veya metal bir fare çiğneme ya da tırmalamak zarar veremez, gibi malzemeden yapılmış ağır nesnelerdir. Ahşap, köpük veya yumuşak plastik nesneler onlar kolayca deforme odor-özgür tutmak zor olarak ve uygun değildir. Ayrıca, çalışmalarda kullanılan nesneleri tüm boyut, doku, koku ve malzeme nispeten benzer olmalıdır. Şekil 1 d kullanılabilir uygun bir nesne örneği verir. Bu turuncu plastik heykelcik karı yeterince ağırlık vermek kumla dolu ve reaktifler veya diğer koku neden olan maddeleri temizlik kaçağı önlemek için kapalı. Üst şekli nedeniyle, fareler üstüne tırmanmak ya da bu nesne üzerinde oturmak mümkün değildir. OLT veya Kuzey için bu nesnenin en iyi benzer boyutu, ağırlığı, malzeme, renk ve karmaşıklık, benzer bir plastik heykelcik bir tavşan gibi başka bir nesne ile eşleştirilmiş olan. Nesne soruşturma, gerçekten yenilik için tercih yansıtır, en az 8 fareler aynı soy bir eşdeğer gerçek değer için tüm nesneleri doğrulanması gerekir emin olmak için cinsiyet ve yaş deneysel grubunun iletişim kuralının 2,9 bölümünde açıklanan. Ayrıca, nesnelerin daha fazla doğal özellikleri nesnelerin tercih etkileyen değil emin olmak için aynı çalışma fareler arasında roman veya taşınan nesne hangi amacı açısından randomize. Nesne yerleştirme da büyük ölçüde başarılı veya başarısız OLT ve Kuzey etkileyebilir. Nesneleri arenalarda denge ağırlıklı olmalı ve duvarlara yakın olmamalıdır. Bir nesne tarafından kalabalık bir köşe gizlemek fareler için cazip bir yerdir ve bu önlemler soruşturmanın yıkmak.

Veri toplama için önemli bir önkoşul "hangi bir fare bir nesne nesne sivri burun ilgilendiği zaman etkin soruşturma", tanımlama Hayır daha--dan 2 cm uzakta. Nesnenin üst üzerinde hareket ya da nesne arıyorsunuz bir fare etkin soruşturma geçerli değildir. Ayrıca, bu yana OLT ve Kuzey uzamsal konum veya nesnenin gerçek özellikleri hatırlayarak bir fare üzerinde bağlıdır, bu eğitim denemeler sırasında yeterli çalışma olmalı. Böylece, araştırmacı ve soruşturma, geleneksel olarak 20 saniye21ayarla şu temel düzeyde uymayan herhangi bir konular hariç en az soruşturma vakit tanımlamak gerekir.

Nesne soruşturma zaman miktar ile veya pahalı analiz yazılımı olmadan çeşitli şekillerde gerçekleştirilebilir. El ile yapılan Puanlama, burada açıklandığı şekilde kullanılırsa, en kapsamlı veri toplama ne zaman fare nesne araştırmaktadır zaman damgaları video kayıt tarafından elde edilebilir. Üç bireysel denemeler sırasında nesne soruşturma başlatılması ve durdurulması kez kayıt tarafsız zaman damgaları kalıcı günlüğünü oluşturur ve veri bir stop watch kullanma gibi alternatif yöntemler aksine doğru el ile hesaplama kolaylaştırır Additively her nesnenin bir fare inceler toplam süreyi kaydetmek.

Ticari yazılım paketleri de nesne soruşturma Puanlama için mevcuttur. Piyasada bulunan yazılım veri toplam mesafe de dahil olmak üzere burada, açıklanan veri Puanlama el ötesinde zenginliği seyahat, belirli alanlarda Arena ve hız hareket16,23harcanan süreyi sağlayabilir. Yazılım, bir kez düzgün kalibre edilmiş ve güvenilir nesne soruşturma, algılamak için doğruladı aynı zamanda el ile Puanlama daha çok daha hızlı veri yol açabilir. Bu daha hızlı veri verim uzun vadede net tasarruf manuel Puanlama için gerekli insan saat göre verim. Ancak, çoğu yazılım paketleri davranış analizi için birçok labs için engelleyici olabilir yüksek ön maliyeti var ve el ile Puanlama kez davranış Puanlama saatlik maliyeti en az yapma Öğrenci araştırmacılar tarafından gerçekleştirilebilir. Ticari yazılım kullanıcı belgili tanımlık bilgisayar yazılımı aynı anda, veri incelemesi ve zaman tasarrufu sınırlama erişebilirsiniz üzerinde kısıtlamalar ile de sık sık gelir. Bu yazılım paketleri için pek çok avantajı olsa da, onlar OLT ve Kuzey nesnelerden soruşturma zaman temel bilgileri bir araya için gerekli değildir. El ile bu verileri elde etmek için yeteneğini roman nesne görevleri daha fazla mali araştırmacılar daha geniş bir hale getirmektedir.

Bu protokol ek bir özelliği bu habituation ilk oturumunda esas faaliyet ve anksiyete düzeyleri veri getirebilecek bir açık alandaki bir deneme olduğunu. Aktivite düzeyine kat edilen toplam mesafeyi kullanarak sayısal veya ortalama hızı, izleme yazılımı varsa. Benzer şekilde, yazılım izleme ile anksiyete önlemler arena veya ortadaki kat edilen mesafeyi merkezini harcanan zaman elde edilebilir. Bu veriler de el ile bir kılavuz ile arena video klipten ve geçişleri miktarının elde edilebilir. Bu açık alan veriler brüt motor açıkları veya daha sonra nesne soruşturma ile etkileşebilir aşırı anksiyete ekarte yardımcı olur.

Bu protokol için kullanılan istatistiksel testler analiz geleneksel yöntemleri temsilcisi vardır. Farelerin 2 grupları karşılaştırırken, bir iki örnek, iki kuyruklu t-testi yüzde zaman gruplar arasında taşınan veya yeni nesne soruşturma farklılığı önemini test etmek için önerilir. Örneklerin boyutu eşit aralıkta olmayan, son derece yüksek değişkenlik var veya gruplar arasında dengesiz değişkenliği t-testi temel varsayımlarını birçoğu bu şartlarda ihlal bir non-parametrik test bunun yerine önerilir göstermek. Farelerin 3 veya daha fazla grupları karşılaştırırken, ANOVAs grubu yüzde zaman taşınmış veya yeni nesne soruşturma üzerinde önemli bir etkisi olup olmadığını sınamak için tavsiye edilir. Tukey'nın test veya ikili karşılaştırmalar Bonferroni düzeltilmiş, sonra uygulanabilir gibi gruplar her çifti arasındaki yüzde soruşturma zaman farkı sınamak için hata düzeltilmiş post-hoc test eder. OLT ile verileri çözümlemek için ek yollar eğitimden taşınan nesnenin OLT denemeler için soruşturma yüzde zamanında önemli bir değişiklik için test etmektir. Fare tek bir grup ile bu test bir eşleştirilmiş, iki kuyruklu t-taşınan nesnenin eğitimden OLT için her Mouse ile yüzde zamanında önemli değişiklikler için test test, biçiminde (bunlar göz önünde bulundurarak eşleştirilmiş analizleri ve bağımsız değil ölçüler, her fare iki veri noktası verir bu yana). Fareler, iki yönlü ANOVA kullanılacak, tekrarlanan bir tedbirler iki grup ile tekrarlanan ölçü ile deneme (eğitim OLT karşı) ve Grup atama ikinci faktör olmak olmak. Post-hoc testler tedavi grupları arasındaki farklar için birbirlerine denemeler içindeki grupları karşılaştırmak gerekir.

Alternatif olarak, bellek OLT veya Kuzey kanıtı tüm test ediliyor ise, bir tek örnek t-testi yüzde zaman bir nesne sabit değer %50 karşı soruşturma kullanılabilir. Yüzde zaman % 50 daha yüksek bellek nesnesi için öneriyor. Yüzde bir süre önemli ölçüde % 50'in altında isteksizlik (nedense) öneriyor ve nesne seçimleri yeniden değerlendirilmiş olmalıdır. Ancak, tek örnek t-testi iki veya daha fazla gruplar birbirinden farklı olup olmadığını ifşa edemem. Örneğin, farelerin, Eğer Grup A Roman nesne zamanla % 60'ı p için harcanan iki grup bir denemede 0.049 tek örnek t-testi karşılaştırma için % 50 ve B grubu = roman nesne zamanla % 59'p için harcanan sadece 0.051 = , Grup A % 50 den başlayarak önemli ölçüde farklı (ve B grubu değildir). Ancak, bu iki grubun birbirinden önemli ölçüde farklı sonuç olarak hatalıdır. Bir iki örnek t-testi karşılaştırma A ve B kolayca bu iki grubun istatistiksel olarak ayırt edilemez olduğunu ortaya çıkarabilir. İki veya daha fazla gruplar bellek performansını karşılaştırmak için sona hedeftir, bu grupların istatistiksel olarak birbirlerine, sadece dış bir standarda göre karşılaştırılır gerekir. Benzer bir kılavuz ile eğitim ve OLT arasında taşınan nesnenin harcanan süre karşılaştırması için geçerlidir. Bu durumda, bir grup içindeki değil de başka bir eğitim ve OLT arasında taşınan nesnenin ile yüzde zamanında önemli bir fark bulma bu gruplar istatistiksel olarak farklı olduğunu göstermez. Grupları post-hoc birbirlerine karşı değil tam karşısında deneme grubundaki her deneme içinde göre olmalıdır.

Soruşturma zaman bireysel herhangi bir fare ya da bellek karşı delil olarak kullanılamaz akılda tutmak önemlidir. Daha doğrusu, nesnenin konumunu veya bu görevleri bulunan kimliği için bellek yalnızca dayalı istatistiksel olarak başka bir grubun veri toplamak veya sabit şans düzeylerine (süre, ayrımcılık oranı için %0 50) karşılaştırıldığında toplam veri olarak söylenebilir. Örnek boyutu ağır bir belirli manipülasyon ve davranış, ikisi de sırayla kullanılan fareler üzerinde bağlıdır değişkenlik etkisi boyutunu bağlıdır. Yaş, cinsiyet ve manipülasyonlar tüm değişkenlik etkisi. Örnek verilerde sunulan Şekil 3A ve 3B, n = 14 konular kullanılmıştır, 0.68 etkisi boyutunu ve gücünü 0.65 α ile eşleştirilmiş bir t-test için verimli 0,05 =. Bu karşılaştırma için bir güç 0,8 istenirse, bir örnek boyutu 18 gerekli olacaktır.

Bu tartışma p-değerler çerçeveli ve önemi cutoffs ölçümleri ve analizleri en genellikle çünkü bunlar OLT ve Kuzey veriler için rapor ve bu nedenle tanıdık Denemecileri ve yorumcular için muhtemeldir. Bu güven p-değerlerini istatistiksel olarak geçersiz26ağır eleştirdi. Alternatif analiz yöntemleri var ve bazı dergilerin27onaylanan rağmen ancak, hiçbiri geniş davranış ve Biyomedikal alanları tarafından standart26benimsenmiştir.

Özet olarak, bu iletişim kuralını etkili en az maliyetle farelerde hafıza testleri. İletişim kuralına uygun değişiklikleri için öneriler herhangi bir küçük kemirgen model ile başarılı uygulama sağlamak için eklenmiştir. Bu protokolün uygulamaya belirli yaralanma veya terapötik müdahale modelleri okudu hücresel ve moleküler mekanizmaları tamamlar değerli fonksiyonel alaka ortaya çıkarabilir.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgments

Bu eser R00 NS089938 NIH üzerinden ve EDK için kronik beyin hasarı ve keşif Temalar Ohio State Üniversitesi'nde tohum fon tarafından finanse edildi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) TAP Plastics NA 1/4" x 15.75" x 15.75" with Routed Edges
Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) TAP Plastics NA 1/4" x 15.75" x 16.5" with Routed Edges
Sign White - 9% Translucent and Opaque Colored Cast Acrylic (Chemcast) TAP Plastics NA 1/4" x 16.5" x 16.5" with Routed Edges
TAP Acryllic Cement (1 pt.) TAP Plastics NA
16 G Hypo Applicator TAP Plastics NA
Debut Video Capture Software Pro Edition NCH Software NA
Stanely SAE/Metric Comb Square Grainger 6R171
Logitech Pro Stream Webcam C922x CDW 4429927
Belkin 16' USB 2.0 Active Extension Cable CDW 570691
Panduit Pan-Way LD Surface Raceway (8') CDW 300902
Spatial/Environmental Cues Variable NA
Objects for testing Variable NA
70% ethanol Variable NA
Double-sided tape Variable NA

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Krakauer, J. W., Ghazanfar, A. A., Gomez-Marin, A., Maclver, M. A., Poeppel, D. Neuroscience Needs Behavior: Correcting a Reductionist Bias. Neuron. 93 (3), 480-490 (2017).
  2. Lange, F., Seer, C., Kopp, B. Cognitive flexibility in neurological disorders: Cognitive components and event-related potentials. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 83, 496-507 (2017).
  3. Barnett, J. H., Blackwell, A. D., Sahakian, B. J., Robbins, T. W. The Paired Associates Learning (PAL) Test: 30 Years of CANTAB Translational Neuroscience from Laboratory to Bedside in Dementia Research. Current Topics in Behavioral Neuroscience. 28, 449-474 (2016).
  4. Eichenbaum, H., Otto, T., Cohen, N. J. The hippocampus-what does it do? Behavioral and Neural Biology. 57 (1), 2-36 (1992).
  5. Bartsch, T., Wulff, P. The hippocampus in aging and disease: From plasticity to vulnerability. Neuroscience. 19 (309), 1-16 (2015).
  6. Smith, B. M., Yao, X., Chen, K. S., Kirby, E. D. A Larger Social Network Enhances Novel Object Location Memory and Reduces Hippocampal Microgliosis in Aged Mice. Frontiers in Aging Neuroscience. 10 (142), 1-16 (2018).
  7. Chieffi, S., et al. Exercise Influence on Hippocampal Function: Possible Involvement of Orexin-A. Frontiers in Physiology. 14 (8), 85 (2017).
  8. Garth, A., Roeder, I., Kempermann, G. Mice in an enriched environment learn more flexibly because of adult hippocampal neurogenesis. Hippocampus. 26 (2), 261-271 (2016).
  9. Brown, R. E., Stanford, L., Schellinck, H. M. Developing standardized behavioral tests for knockout and mutant mice. Institute for Laboratory Animal Research Journal. 41 (3), 163-174 (2000).
  10. Barker, G. R., Warburton, E. C. When is the hippocampus involved in recognition memory? Journal of Neuroscience. 31 (29), 10721-10731 (2011).
  11. Savage, S., Ma, D. Animal behavior testing: memory. British Journal of Anaesthesia. 113 (1), 6-9 (2015).
  12. Fanselow, M. S., Dong, H. W. Are the dorsal and ventral hippocampus functionally distinct structures? Neuron. 65 (1), 7-19 (2010).
  13. Vogel-Ciernia, A., Wood, M. A. Examining object location and object recognition memory in mice. Current Protocols in Neuroscience. 69, 1-17 (2014).
  14. Ammassari-Teule, M., Passino, E. The dorsal hippocampus is selectively involved in the processing of spatial information even in mice with a genetic hippocampal dysfunction. Psychobiology. 25 (2), 118-125 (1997).
  15. Le Merrer, J., Rezai, X., Scherrer, G., Becker, J. A., Kieffer, B. L. Impaired hippocampus-dependent and facilitated striatum-dependent behaviors in mice lacking the delta opioid receptor. Neuropsychopharmacology. 38 (6), 1050-1059 (2013).
  16. Hattiangady, B., et al. Object location and object recognition memory impairments, motivation deficits and depression in a model of Gulf War illness. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, 78 (2014).
  17. Oliveira, A. M., Hawk, J. D., Abel, T., Havekes, R. Post-training reversible inactivation of the hippocampus enhances novel object recognition memory. Learning and Memory. 17 (3), 155-160 (2010).
  18. Cohen, S. J., Stackman, R. W. Jr Assessing rodent hippocampal involvement in the novel object recognition task. Behavioral Brain Research. 285, 105-117 (2014).
  19. Cohen, S. J., et al. The Rodent Hippocampus Is Essential for Nonspatial Object Memory. Current Biology. 23 (17), 1685-1690 (2013).
  20. Sorge, R. E., et al. Olfactory exposure to males, including men, causes stress and related analgesia in rodents. Nature Methods. 11 (6), 629-632 (2014).
  21. Ennaceur, A., Delacour, J. A new one-trial test for neurobiological studies of memory in rats. 1: Behavioral data. Behavioral Brain Research. 31 (1), 47-49 (1988).
  22. Leger, M., et al. Object recognition test in mice. Nature Protocols. 8 (12), 2531-2537 (2013).
  23. Wolf, A., Bauer, B., Abner, E. L., Ashkenazy-Frolinger, T., Hartz, A. M. A Comprehensive Behavioral Test Battery to Assess Learning and Memory in 129S6/Tg2576 Mice. Public Library of Science ONE. 11 (1), e0147733 (2016).
  24. Ennaceur, A. One-trial object recognition in rats and mice: methodological and theoretical issues. Behavioural Brain Research. 215, 244-254 (2010).
  25. Lueptow, L. M. Novel Object Recognition Test for the Investigation of Learning and Memory in Mice. Journal of Visualized Experiments. (126), e55718 (2017).
  26. Wasserstein, R. L., Lazar, N. A. The ASA's Statement on p-Values: Context, Process, and Purpose. The American Statistician. 70 (2), 129-133 (2016).
  27. Ranstam, J. Why the P-value culture is bad and confidence intervals a better alternative. Osteoarthritis and Cartilage. 20 (8), 805-808 (2012).

Tags

Davranış sayı: 141 bellek bilişsel test nesnenin konumunu roman nesne tanıma fare hipokampus
Yeni nesne tanıma ve nesnenin konumunu bir bütçe farelerde test davranış
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Denninger, J. K., Smith, B. M.,… More

Denninger, J. K., Smith, B. M., Kirby, E. D. Novel Object Recognition and Object Location Behavioral Testing in Mice on a Budget. J. Vis. Exp. (141), e58593, doi:10.3791/58593 (2018).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter