Summary
Anastomotic lek of defect na de operatie is een belangrijke oorzaak van postoperatieve morbiditeit en mortaliteit. Onze chirurgie voor het maken van een Colon wapendrager is een betrouwbare en reproduceerbare methode voor het bestuderen van de genezing mechanismen van anastomoses.
Abstract
Intestinale anastomoses worden meestal uitgevoerd in zowel opkomende als electieve operaties. Toch, anastomotic lekken een zeer gevreesde complicaties van Colon chirurgie en kunnen optreden bij maximaal 26% van de chirurgische anastomoses, met sterfte wordt tot 39% voor patiënten met dergelijke een lek. Momenteel, blijft er een schaarste aan gegevens detaillering van de cellulaire mechanismen van anastomotic genezing. Uitwerking van preventieve strategieën en behandelmodaliteiten voor anastomotic lek kan aanzienlijk worden Potentiation door een beter begrip van passende anastomotic genezing.
Een lymfkliertest model is ideaal als vorige studies hebben aangetoond dat de lymfkliertest wapendrager het meest klinisch vergelijkbaar met het menselijke geval ten opzichte van andere diermodellen is. Wij bieden een gemakkelijk reproduceerbaar lymfkliertest model van Colon anastomosis in muizen die voor verdere illustratie van anastomotic genezing toestaat.
Introduction
Een zeer gevreesde complicatie van chirurgische wapendrager van de darm is anastomotic afbraak- of lek. Anastomotic lek, die veroorzaakt morsen van de intraluminale inhoud in de buikholte, is levensbedreigend en kan snel leiden tot intra-abdominale sepsis; schok tarieven variëren van 0,3% naar 5,5% na kleine darm anastomoses, en stijgen tot tussen 0,5% en 26% voor Colon anastomoses1,2. Sterftecijfers na lekken kunnen oplopen tot 39% door het snelle begin van sepsis en snelle progressie ter dood na intraabdominal besmetting3. Preventieve strategieën en behandelmodaliteiten zijn momenteel gebaseerd op pathofysiologie die niet volledig begrepen.
Momenteel is anastomotic genezing vaak vergeleken met de grotere schaal bestudeerde cutane wondgenezing, die blijkt te zijn een relatief arme facsimile. Healing treedt op in een reeks van overlappende fasen, te beginnen met de eerste vertraging fase. Tijdens de dagen 0-4 na oprichting van de intestinale anastomose, wordt de lag-fase gedefinieerd door een acute ontstekingsreactie die de wond van cellulaire puin wist. Vervolgens dagen 3-4, fibroblastic proliferatie en productie van collageen is typerend voor de fibrophasia fase. Ten slotte, na dag 10, een langdurige periode van het remodelleren van collageen staat bekend als de rijping fase. Het is belangrijk om er rekening mee dat anastomotic sterkte vrij laag is en hangt af van de extrinsieke steun van chirurgisch geplaatste nietjes of hechtdraad tot collageen gedeponeerd4 is. Begrip van de rol en timing elke laag van de wand van de darm speelt in anastomotic wondgenezing en de betrokkenheid bij inflammatoire-gemedieerde celtypes zoals macrofagen, evenals informatief surrogaat markeringen om te voorspellen anastomotic mislukking of succes kon sterk verminderen morbiditeit, mortaliteit en na dikke darm operaties5uitgaven voor gezondheidszorg.
De lymfkliertest model is aangetoond in eerdere studies het nuttig in het nabootsen van menselijke wapendrager6. Terwijl er populaire, bewezen en goed bestudeerde voorbeelden van het lymfkliertest Colon anastomotic model, met name de methode beschreven door Komen et al. zijn 7, deze modellen gunst ileocecal of oplopende colocolonic anastomotic technieken8. Eerdere studies van menselijke patiënten hebben aangetoond dat significant verschil in lek tarieven tussen ileocecal, colocolonic en colorectal anastomoses, gewezen op de noodzaak voor verdere experimentele modellen op verschillende anatomische locatie. Extra, volksmond gebruikte methoden zijn gericht op het ontwikkelen van een model waardoor opzettelijk een anastomotic lek in plaats van verheldering van de cellulaire mechanismen nodig voor normale anastomotic wond genezing9. Rat modellen zijn in het verleden geprobeerd maar hebben tarieven van anastomotic dehiscentie en/of tekenen van lek (dat wil zeggen, de vorming van abces) beduidend lager dan mensen en muizen6,7. Bovendien zijn meer genetisch gemodificeerde experimentele lijnen beschikbaar in muizen dan ratten. Dit maakt het model rat minder bruikbaar voor een anastomotic model. Varkens en honden-modellen hebben bovendien minder klinisch onderzoek dan de lymfkliertest model6,7.
Stellen wij voor een veilige, technisch eenvoudig en gemakkelijk en snel reproduceerbare procedure voor de oprichting van Colon anastomoses in een lymfkliertest model dat verder onderzoek naar het mechanisme van onderrapportage van anastomotic wond helende10 dient te vergemakkelijken .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Het volgende protocol is goedgekeurd door de Universiteit van Oklahoma Health Sciences Center institutionele dierenverzorgers en gebruiken Comité (IACUC) en voldoet aan alle institutionele ethische richtsnoeren met betrekking tot het gebruik van dieren voor onderzoek. Bovendien werden alle experimenten verricht overeenkomstig de institutionele, staats- en federale regelgeving met betrekking tot experimentele dierlijke onderzoek.
Opmerking: Voor dit protocol gebruikten we vrouwelijke en mannelijke congenisch in-gefokte C57BL6/J muizen op de leeftijd van 12 tot en met 72 weken. Alle muizen gebruikt voor deze procedure werden gehouden bij onze niet-barrière-faciliteit voor ten minste een week voorafgaand aan de operatie aan te passen aan de lokale bioom. Dieren mochten te voeden op tijd van operatie en gebruikten we mondeling mechanische darm voorbereiding noch rectale blozen vóór ingreep.
1) totstandbrenging van Anastomoses
- Autoclaaf de chirurgische instrumenten, de zoute irrigatie oplossing warm en grondig schoon alle operatieve oppervlakken met 70% ethanol.
- Om te induceren anesthesie, plaatst u de muisaanwijzer in een inductie-vak dat is verbonden met een vaporizer. Leveren 2-3% Isofluraan op 1-2 L/min, totdat het muizen zijn verdoofd.
- Plaats het dier op een opwarming van de aarde apparaat, zoals een verwarming pad, om te voorkomen hypothermie.
- Subcutaan injecteren een tijd dosis van 0,1 mg/kg buprenorfine (3 µg voor een muis van 30 g) voor postoperatieve analgesie en een eenmalige dosis van 10 mg/kg voor enrofloxacin voor preoperatieve antibiotische profylaxe.
Opmerking: Hoewel pre- en postoperatieve antibiotica niet vereist voor deze bewerking zijn, institutionele richtsnoeren en het dier zorg en gebruik van de Commissie op onze instelling aanbevolen het gebruik ervan op onze faciliteit. - Plaats de verdoving neus kegel rond de snuit van de muis. Gedurende de operatie, zorgvuldig volgen de luchtwegen van het dier en de verdoving stroomsnelheid naar wens aanpassen. Het handhaven van een respiratoire tempo 30-40 ademhalingen per minuut.
- Gebruik een haartrimmer gevolgd door een ontharende agent te verwijderen van het haar van het huidoppervlak van de gehele van de buik. Verwijder grondig de ontharende agent met gaas bevochtigd met water of 70% ethanol. Grondig droog het dier.
- Voorafgaand aan de buik prepping, tape van de muis ledematen aan de verwarming pad of operatieve oppervlak aan het einde van elk been om te verhinderen dat de muis verschuiven tijdens de operatie. Ontsmetten van de buik met chloorhexidine. Omvatten het hele geschoren gebied, alsmede de haren op de randen van de geschoren gebied. Plaats een steriele draperen over de muis (figuur 1A).
- Snijd een kleine ovale of rechthoekige venster in het draperen de klaargestoomd buik bloot te stellen vóór het draperen.
Opmerking: Het venster moet blootstellen de hele buik van de muis maar betrekking hebben op de ledematen, de staart, de kop en de thorax. We snijden een 4 x 3 cm2 venster voor onze activiteiten (figuur 1B). - Maak een kleine gleuf langs het gordijn middellijn, vanaf de onderrand naar de eivormige of rechthoekig venster, toegang te verlenen tot het rectum tijdens de procedure (Figuur 1 c).
- Snijd een kleine ovale of rechthoekige venster in het draperen de klaargestoomd buik bloot te stellen vóór het draperen.
- Maak een huid incisie. Start langs de middellijn van de onderbuik en incise van de huid met een schaar verticaal aan de xiphoid. Incise alleen de huid en Vermijd het snijden van de spieren van de buikwand (figuur 2A).
- Begrijpen van de middellijn van de buikwand met een tang en til uit de buurt van de buik inhoud. Zorg niet te verwonden intraabdominal structuren, de lengte van de middellijn abdominale fascia verticaal incise met een scherpe schaar. Uitbreiden van de lengte van de huid incisie (figuur 2B).
- Wanneer de darmen worden blootgesteld, zoek de blindedarm en de kleine darm en draaien van de linkerpagina ingewanden mediaal om de aflopende en de sigmoid colon bloot te stellen. De botte sondepunt met smeerolie gelei jas en vooraf zorgvuldig de sonde in de endeldarm, om te helpen bij de identificatie van de aflopende/sigmoid colon (Figuur 3).
Opmerking: In tegenstelling tot mensen, de blindedarm van de muis over het algemeen komt voor in de linker bovenste kwadrant van het abdomen. Wees voorzichtig niet te perforate de darm wand met de sonde in deze stap. Als de wand van de darm wordt geperforeerd, beëindiging van de procedure en euthanaseren van de muis.- Vermijd het grijpen van de blindedarm met een getande of scherpe Tang. In plaats daarvan gebruik van de atraumatische pincet, katoen omver te werpen applicator of zachte vinger manipulatie te draaien van de ingewanden.
- Gebruik opgewarmd steriele zoutoplossing om ervoor te zorgen dat de blootgestelde darm vochtig gedurende de hele procedure wordt gehouden.
- De dikke darm aan de linkerkant schouderstreek zal worden en aan het retroperitoneum via het mesenterium. Na identificatie, trekken de botte sonde gedeeltelijk ter vergemakkelijking van de colotomy.
- Uitvoeren van dwarse colotomy van de sigmoid colon.
- Pak de sigmoid colon superieur aan de inlaat van de bekken zachtjes met een atraumatische Tang (figuur 4A).
- Met behulp van scherpe micro-schaar, maak een snede over de sigmoid colon loodrecht op de richting van de dikke darm en uitbreiding in 80-90% van de breedte van de dikke darm. Dit zal helpen voorkomen dat intrekking van één uiteinde van de dikke darm uit het chirurgische gebied en het vergemakkelijken van de reparatie (figuur 4B).
- Als een mesenterische bloedvat gewond in de loop van de viscerale rotatie of colotomy geraakt is, zachtjes houdt druk voor maximaal 2 min met gaas of een katoen-tipped applicator. Als het bloeden aanhoudt na dit tijdstip, plaats een cijfer-van-8 8-0 monofilament hechtdraad rond het punt van bloeden.
Opmerking: Als de darm tekenen van necrose of letsel na dit toont, beëindigen van de procedure en de muis met behulp van een humane wijze goedgekeurd door uw Commissie institutionele dierlijke gebruik euthanaseren.
- Repareer het sigmoid colotomy.
- Plaats een Castroviejo naald stuurprogramma met 5-6 eenvoudige onderbroken 8-0 nonabsorbable polypropyleen steken om te herstellen van de colostomie. Plaats hechtingen 1 mm naast elkaar met 0,5 mm bites.
- Zorg om te voorkomen dat de rollen van de randen van de darm in de reparatie door het nemen van iets meer sereus vlies dan mucosa met elke steek. Laat de staarten 5 mm lang. Zorg niet per ongeluk de omliggende darm vangst in de hechtdraad (figuur 4C).
Opmerking: Het is handig om te beginnen wordt op het in de buurt van de mesenterische rand van de colotomy, het opslaan van het anti-mesenteric-meest gedeelte van de colotomy voor het laatst. - Zoals het herstel vordert, vooraf de trans-anale blunt-tipped dissectie sonde te omvatten van de reparatie, voordat de definitieve hechtingen worden geplaatst. Dit zal helpen voorkomen dat te smal is een reparatie en tarieven van anastomotic strictuur verlagen.
- Zorg om te voorkomen dat de rollen van de randen van de darm in de reparatie door het nemen van iets meer sereus vlies dan mucosa met elke steek. Laat de staarten 5 mm lang. Zorg niet per ongeluk de omliggende darm vangst in de hechtdraad (figuur 4C).
- Plaats een Castroviejo naald stuurprogramma met 5-6 eenvoudige onderbroken 8-0 nonabsorbable polypropyleen steken om te herstellen van de colostomie. Plaats hechtingen 1 mm naast elkaar met 0,5 mm bites.
- Met behulp van een 10 mL spuit gevuld met verwarmde saline, bevloeiing van de buik meermaals. Indien het oppervlak onder de muis doorweekt wordt, drogen van de muis of verplaats de muis naar een droog oppervlak om te voorkomen hypothermie.
- Gebruik een steriel gaas geplaatst over de snede om te genieten van overtollige irrigatie.
- Op de laatste irrigatie, vul de buik met een steriele zoutoplossing. Zorgvuldig verder een condoom met 18 G-angiocatheter in het rectum en opblazen met 0,5-1 cm3 van lucht. Dit zal eventuele lekken in de anastomose aantonen dan kan worden gerepareerd met een ander onderbroken polypropyleen Sutuur (geologie) met behulp van de steriele sonde te omvatten van de wapendrager.
- Het leeglopen van de dikke darm met behulp van de angiocatheter voordat zij zijn afgehaald.
- Zorg ervoor dat er geen actieve bloeden. Als er, zachte druk rechtstreeks op het punt van bloeden voor 1-2 min. plaats hemostatische hechtdraad, zoals hierboven beschreven als bloeden blijft uitoefenen.
- Voorzichtig terug de medialized ingewanden in de normale anatomische stand (figuur 5A).
- Sluit de abdominale incisie (figuur 5B).
- Plaats een lopende hechtdraad langs de gespierde laag van de buikwand vanaf de bovenkant van de incisie en afwerking op de inferieure aspect van de incisie met 4-0 absorbeerbare gevlochten hechtingen. Installeer een gelijkspel en knippen van de hechtdraad verlaten 5 mm staarten.
Opmerking: Darm in de buikwand sluiting niet per ongeluk te nemen. - Herhaal met 4-0 monofilament hechtdraad te sluiten van de huid (figuur 5C).
- Plaats een lopende hechtdraad langs de gespierde laag van de buikwand vanaf de bovenkant van de incisie en afwerking op de inferieure aspect van de incisie met 4-0 absorbeerbare gevlochten hechtingen. Installeer een gelijkspel en knippen van de hechtdraad verlaten 5 mm staarten.
- Zorg ervoor dat het gehele dier is warm en droog, ter voorkoming van postoperatieve onderkoeling.
- Zorgvuldig toezicht houden op het dier als het herstelt van anesthesie. Beheren van 0,1 mg/kg buprenorfine elke 72 h voor 2-3 dagen na de ingreep voor pijnbestrijding. Tijdens de herstelperiode, moeten muizen zorgvuldig worden onderzocht dagelijks op tekenen van abces of peritoneale sepsis. Observatie van de post-operatieve pijn en ongemak moet omvatten: beperking van verkeer met inbegrip van hunching houding, gebrek aan eten of drinken, niet goed verzorgen, buitensporige ontsteking rond de wond, gebrek aan normale genezing op de plaats van de incisie, soort of niet normaal nesten. Een dier aan te tonen een van deze problemen moet onmiddellijk worden euthanized door CO2 verstikking voor een minimum van 10 min, gevolgd door bilaterale Thoracotomie.
- Meng 0,1 mg/mL enrofloxacin met drinkwater van de muis voor 7 dagen na de operatie ter voorkoming van intra-abdominale infectie of sepsis als gevolg van de fecale verontreiniging die zijn gekoppeld aan de bewerking.
2) oogsten Anastomotic weefsel
- Euthanaseren net voor middendoor anastomotic weefsel, de muis met behulp van een humane wijze goedgekeurd door de Commissie institutionele dierlijke gebruik.
Opmerking: Op basis van institutioneel beleid, euthanaseren we onze dieren door ze te plaatsen in een zaal van de kooldioxide met 100% kooldioxide gas infusie op 2 L/min gedurende 5 minuten vóór het uitvoeren van bilaterale Thoracotomie. - Het steriliseren van de buik met chloorhexidine gevolgd door 70% ethanol.
- Opnieuw incise de oorspronkelijke incisie middellijn met een scherpe schaar. Beginnen bij de lagere pool van de vorige incisie en breiden deze gesneden superiorly de xiphoid (figuur 6A).
- Met behulp van schaar, sneed in de gespierde laag, en na het invoeren van de peritoneale ruimte, breiden de snede aan de bovenkant en de onderkant van de incisie. Zorg om te voorkomen dat de darm verwonden bij het invoeren van de buik of verstoren van de anastomose, omdat er mogelijk darm vastgehouden aan de incisie of anastomotic site.
- Zorgvuldig een linker mediale viscerale rotatie bloot van de gerepareerde sigmoid colon (figuur 6B) uitgevoerd. Waarschijnlijk zal er Verklevingen van de darm naar de darm rond de reparatie. Zachtjes en bot ontleden deze verklevingen uit de buurt van de plaats van reparatie. Neem grote zorg niet te verstoren de anastomose.
- Geef de reparatie-site door het lokaliseren van de staarten van de polypropyleen hechtdraad gebruikt voor de reparatie. Met behulp van schaar en 1 cm proximaal aan de reparatie beginnen, transect dwars door de dalende dikke darm. Herhaal deze stap 1 cm distale op site van anastomose.
- Verwijder de sigmoïdale segment door scherp ontrafeling van de dikke darm van de bijgevoegde mesenterium langs de achterste rand van de dikke darm met een fijne schaar (Figuur 7).
- Identificeren de mesenterische rand van het model van de dubbele punt en het gebruik van fijne schaar te snijden langs de lengte van de mesenterische grens in een longitudinale mode. Hiermee maakt u een vierkant of rechthoekig deel van de dikke darm van de cilindrische specimen dat eerder verwijderd (Figuur 8).
- Gebruik een markering-pen af te bakenen de anti-mesenterische grens van de dikke darm voorafgaand aan verwijdering van het segment van de dikke darm. Na het verwijderen, maken een longitudinale knippen langs de lengte van de dikke darm tegenover de markering. Repareren, insluiten en snijd monster weefsel desgewenst voor histologie en/of immunokleuring.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
7 dagen na de operatie, moet de anastomose goed genezen worden. De wapendrager geoogst kan worden op de tijdstippen vóór en na zeven dagen beter de stadia van anastomotic genezing illustreren. In Figuur 9, de histologische analyse blijkt een fibrotische (collageen gevisualiseerd door trichrome kleuring) reactie gemedieerd door gladde spieren alpha-actine positieve myofibroblasts. We hebben echter gevonden dat resultaten uit histologische analyses tussen muizen, specifiek de mate van re epithelialization en concentratie van de myofibroblasts op de anastomotic site variëren. Wij rapporteren sterfte na deze procedure moet minder dan 10%, met meer dan 90% van de muizen met goed genezen anastomoses op 7 dagen overleven.
Figuur 1: Draperend en chirurgische voorbereiding. (A) A steriele draperen over de muis wordt geplaatst nadat de buik heeft al klaargestoomd. (B) een klein ovaal of rechthoek wordt gesneden in de gordijn aan het blootstellen van de buik. (C) A kleine gleuf moet geschieden langs de middellijn van het gordijn in de buurt van het venster ovale of rechthoekige toegang te verlenen tot het rectum tijdens de procedure. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 2 : Insnijdingen. (A) A huid incisie wordt gemaakt terwijl de zorg niet te verwonden het buikvlies. ()B) het buikvlies is verhoogde weg van de buik inhoud en ingesneden bloot van de intra-abdominale inhoud.
Figuur 3 : Plaatsing van de sonde. Een botte sonde is voorzichtig in het rectum geplaatst. Na het lokaliseren van de blindedarm, worden de inhoud van de buik geroteerd mediaal visualiseren de rectale sonde eerder geplaatst.
Figuur 4 : Colotomy en repareren. (A) de sigmoid met een atraumatische Tang is begrepen. (B) met scherpe micro-schaar, maken een cut over de sigmoid colon loodrecht op de richting van de dikke darm en uitbreiding in 80-90% van de breedte van de dikke darm. (C) met een stuurprogramma van de naald Castro-Viejo, plaats 5-6 eenvoudige onderbroken 8-0 polypropyleen steken om te herstellen van de colotomy. Hechtingen moet ongeveer 1 mm naast elkaar met 0,5 mm bites. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 5 : Gewikkeld sluiting. (A) de viscerale organen worden teruggestuurd naar hun normale anatomische stand. (B) de abdominale insnijding wordt afgesloten met 4-0 gevlochten hechtdraad. (C) de huid wordt afgesloten met 4-0 monofilament hechtdraad. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.
Figuur 6 : Incisie na chirurgie. (A) opnieuw de oorspronkelijke incisie van de middellijn onthullen de intra-abdominale inhoud te openen. Verleng de incisie superiorly en lateraal voor betere blootstelling aan het sigmoid worden. (B) de ingewanden mediaal onthullen de sigmoid wapendrager draaien.
Figuur 7 : Oogsten de anastomose. Verwijder het segment van de darm proximale en distale aan de anastomose 1 cm aan elke kant.
Figuur 8 : Oriëntatie voor weefselsecties. U snijdt langs de lengte van de mesenterische grens in een longitudinale mode. Dit laat een rechthoekig model. Dit toont exemplaar van sigmoid wapendrager.
Figuur 9 : Histologie en immunohistochemische analyse van een volledig genezen Colon anastomose. Histologische analyse blijkt fibrotische (collageen gevisualiseerd door trichrome kleuring) reactie gemedieerd door gladde spieren alpha-actine positieve myofibroblasts.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Er zijn verschillende belangrijke stappen voor het welslagen van en minimaliseren van de morbiditeit/sterfte die zijn gekoppeld aan deze procedure. Eerst zorgvuldige behandeling van intestinale weefsel te waarborgen en verzorgen tractie om verwonding te verhinderen wanneer de ingewanden om bloot van de dikke darm te draaien. Onnodige spanning op de darm of mesenterium kan schade de darm of therapieën en oorzaak necrose van de darm uit de buurt van de site van anastomose. Daarnaast, moeten scherpe pincet of pincet met tanden niet worden gebruikt om de darm.
Schade aan de darm gescheiden zijn van de site van geplande anastomose, tijdens viscerale rotatie of door perforatie met de botte sonde, moet leiden tot euthanasie van het dier. In onze ervaring, kan darm necrose of letsel leiden tot de intra-abdominale sepsis of dood, en een sterk toegenomen inflammatoire respons dat herstel van een genezen anastomotic specimen onbetaalbaar bemoeilijkt.
Transect van de dikke darm-element moet omvatten zo veel van de dalende dikke darm mogelijk, maar zorg moet worden genomen om niet de darm sereus vlies in contact met het mesenterium transect. In onze ervaring, transect waarin het sereus vlies- en vooral het mesenterium-kan leiden tot de intrekking van het proximale deel van de dikke darm dat bemoeilijkt anastomose en kan leiden tot verdere schade proberen te herstellen van de ingeklapte segment.
Anastomosis kan worden gerepareerd met 5-6 onderbroken hechtingen. Meer kan nodig zijn voor grote muizen. Hechtingen moeten 1 mm uit elkaar. Plaats hechtingen aan weerszijden van de mesenterische grens en vervolgens op de zijden van het transect te ontmoeten in het midden aan de anti-mesenterische grens afwisselend vergemakkelijkt een anastomose makkelijker en sneller. Vóór de definitieve hechtdraad, verspreid over de anastomose met de botte sonde zorgt voor een patent anastomose en voorkomt "back-beschotten" de anastomose, dat zou effectief het afbinden van de dikke darm.
Hemostase vóór abdominale afsluiting zorgen. Ondanks de postoperatieve antibiotica dekking, hemoperitoneum in de herstelperiode na intraabdominal besmetting kan leiden tot een onaanvaardbaar hoog percentage van intra-abdominale infecties en zelfklevende ziekte.
Wanneer u eerst deze procedure uitvoert, verschillende muizen in de postoperatieve periode mogelijk verloren. Onze eerste sterftecijfer benaderd 30%. We hebben dit voornamelijk te wijten aan anastomotic strictuur leidt tot obstructie en darm necrose, verdeling van de anastomotic reparatie of darm wand necrose weg van site van wapendrager waarschijnlijk veroorzaakt door ischemie na mesenterische letsel gevonden. Al deze kan leiden tot sepsis, intra-abdominale infecties en dood. Als eenmaal ervaren in deze procedure, moet operationele chirurg ervaring een sterftecijfer van minder dan 10%. Bewijs van subklinische anastomotic site lek, geïllustreerd door purulence en dichte verklevingen op de site van de anastomose, waren aanwezig in een nog eens 10%. Terwijl deze procedure kan worden gedaan zonder de hulp van vergroting, is het grootste nadeel als een reproduceerbare experimentele model de relatieve technische uitdaging wanneer vergeleken bij ileocecal of oplopende dubbelpunt anastomoses. We vonden chirurgische loupes buitengewoon nuttig zijn bij het uitvoeren van de anastomose terwijl het minimaliseren van trauma aan de wand van de darm. Een chirurgische Microscoop kan ook worden gebruikt, maar wij vonden dat niet nodig.
Vele technieken zijn gebruikt om te beschrijven van diermodellen voor Colon wapendrager; met name met behulp van de rat en het konijn modellen. We hebben gevonden dat er een schaarste aan reproduceerbare procedures dalende dikke darm anastomosis in muismodellen; Wij vermoeden dat dit is te wijten aan de kleinere omvang van muizen verhoging van de technische moeilijkheid van anastomotic procedures. Muizen hebben echter meer selectie en bredere beschikbaarheid van transgene lijnen en antilichamen, die op dit punt waren niet beschikbaar om te worden gebruikt in een dikke darm wapendrager model. We ontwikkelden het huidige model te verenigen de muismodel met een model van dubbele punt anastomose.
Onze ervaring met deze procedure omvat zowel vrouwelijke als mannelijke muizen van verschillende maten en leeftijden. Wij hebben op dit punt, niet anastomotic wond genezing resultaten tussen leeftijden, maten of geslachten van muizen, maar kan zeker verschillen, waardoor dit model zou die vergelijking vergeleken.
Wij zijn van mening dat dit model kan worden gemakkelijk en consistent gereproduceerd en gebruikt om te studeren anastomotic wondgenezing. Hoewel wordt aangeraden eerste specimen oogsten op zeven dagen eerder en later kunnen tijd punten nuttig zijn in ter illustratie van een tijdlijn van anastomotic genezing; aan te tonen, bijvoorbeeld, vroege migratie van ontstekingscellen en bemiddelaars op de anastomotic site en de afzetting van collageen door fibroblasten in de volgende weken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
De auteurs verklaren dat zij geen concurrerende financiële belangen hebben.
Acknowledgments
Geen
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL6/J mice | Jackson Labs | #00664 | |
| Fisherbrand Absorbent Underpads, 20" x 24" | Fisher Scientific | 14-206-62 | |
| Polylined Sterile Field, 18" x 24" | Busse Hospital Disposables | 696 | Cut a rectangular hole |
| Isothesia isoflurane | Henry Schein | 50033 | |
| Fisherbrand Sterile cotton gauze pad, 4" x 4" | Fisher Scientific | 22-415-469 | |
| Puralube petrolatum ophthalmic ointment, 1/8 oz. tube | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Nair depilatory cream | Church & Dwight Co. | 22339-05 | |
| Buprenex buprenorphine 0.3 mg/ml | Reckitt Benckiser Pharma Inc | NDC 12496-0757-5 | |
| 1 cc insulin syringe, 27 G | Becton Dickinson | 329412 | |
| Chloraprep Shampoo | Medline | APL82287 | |
| Webcol alcohol prep swabs | Covidien | 6818 | |
| BioGel PI surgical gloves | Mölnlycke Health Care | ALA42675Z | |
| Micro Forceps with teeth | Roboz | RS-5150 | |
| Fine scissors- sharp | Fine Science Tools | 14060-09 | |
| Straight serrated forceps | Fine Science Tools | 11050-10 | |
| Castro-Viejo needle driver | Fine Science Tools | 12565-14 | |
| 0.9% Sodium Chloride Irrigation | Baxter | BHL2F7121 | Warm to 37 °C prior to use |
| 10 ml syringe | Becton Dickinson | 309604 | |
| 4-0 Vicryl absorbable braided suture, 18", PS-2 needle | Henry Schein | 6546037 | |
| Blue monofilament suture 24” BV-1 needle | Henry Schein | 8305H | Usually comes double-armed. Cut the suture at the midway point to generate two usable sutures. |
| Cole-Parmer Microscissors, Standard Grade, Straight, 4". | Cole- Parmer | EW-10818-06 | |
| Medline Sterile lubricating jelly | Medline | MDS032273H |
References
- Murrell, Z. A., Stamos, M. J.
- Shaban, F., Carney, K., McGarry, K., Holtham, S. Perforated Diverticulitis: To Anastomose or Not to Anastomose? A Systematic Review and Meta-Analysis. International journal of surgery (London, England). , (2018).
- Chambers, W. M., Mortensen, N. J. Postoperative leakage and abscess formation after colorectal surgery. Best practice, research. Clinical gastroenterology. 18, 865-880 (2004).
- Ashkanani, F., Krukowski, Z. H. Surgery - Oxford International Edition. Intestinal Anastomosis. 20, 104-107 (2002).
- Raptis, D., Pramateftakis, M. G., Kanellos, I. Our 20-year experience with experimental colonic anastomotic healing. Journal of medicine and life. 11, 5-14 (2018).
- Pommergaard, H. C., Rosenberg, J., Schumacher-Petersen, C., Achiam, M. P. Choosing the best animal species to mimic clinical colon anastomotic leakage in humans: a qualitative systematic review. European surgical research. Europaische chirurgische Forschung. Recherches chirurgicales europeennes. 47, 173-181 (2011).
- Komen, N., et al. Colorectal anastomotic leakage: a new experimental model. The Journal of surgical research. 155, 7-12 (2009).
- Perry, T., Borowiec, A., Dicken, B., Fedorak, R., Madsen, K. Murine ileocolic bowel resection with primary anastomosis. Journal of visualized experiments : JoVE. , e52106 (2014).
- Pommergaard, H. C., Achiam, M. P., Rosenberg, J. Colon anastomotic leakage: improving the mouse model. Surgery today. 44, 933-939 (2014).
- Bosmans, J. W. A. M., Jongen, A. C. H. M., Bouvy, N. D., Derikx, J. P. M. Colorectal anastomotic healing: why the biological processes that lead to anastomotic leakage should be revealed prior to conducting intervention studies. BMC Gastroenterology. 15, 180 (2015).
