Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

Micronization מכני של Lipoaspirates לטיפול רגנרטיבית

Published: March 15, 2019 doi: 10.3791/58765
Automatic Translation
1, 1, 1, *1, *1
1Department of Plastic and Cosmetic Surgery, Nanfang Hospital, Southern Medical University
* These authors contributed equally

Summary

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשיג סטרומה השבר בכלי הדם של רקמת שומן באמצעות סדרה של תהליכים מכניים, הכוללים תחליב centrifugations מרובים.

Abstract

השבר בכלי הדם סטרומה (SVF) הפך להיות כלי משובי עבור מחלות שונות; עם זאת, החקיקה מסדיר בקפדנות היישום הקליני של התא מוצרים באמצעות collagenase. כאן, אנו מציגים פרוטוקול כדי ליצור תערובת להזרקה של תאים SVF מטריצה חוץ-תאית מקורי מתוך רקמת שומן על ידי תהליך מכאנית בלבד. Lipoaspirates הם הכניסו לתוך צנטריפוגה, ויצא ב x 1,200 g למשך 3 דקות. השכבה האמצעית שנאספו, הפרדתו בשתי שכבות (צפיפות גבוהה שומן בחלק התחתון) ושומן בצפיפות נמוכה בחלק העליון. השכבה העליונה היא ישירות emulsified על ידי העברת intersyringe, בקצב של 20 מ"ל/s עבור x 6 8 x. השומן emulsified הוא centrifuged ב x 2,000 g למשך 3 דקות, ואת החומר דביק מתחת לשכבת הנפט ונשתמש כהגדרתו של מטריצה חוץ-תאית (ECM) / SVF-ג'ל. השמן על השכבה העליונה נאסף. כ- 5 מ ל שמן להוסיף 15 מ"ל של שומן בצפיפות גבוהה, emulsified על ידי העברת intersyringe, בקצב של 20 מ"ל/s עבור x 6 8 x. השומן emulsified הוא centrifuged ב x 2,000 g למשך 3 דקות, והוא החומר הדביק גם ECM/SVF-ג'ל. לאחר ההשתלה של ECM/SVF-הג'ל לתוך עכברים עירום, השתל שנקטפו, מוערך על ידי בדיקה היסטולוגית. התוצאה מראה כי המוצר הזה יש פוטנציאל להתחדש לתוך רקמת שומן רגילה. ההליך זה הליך פשוט, יעיל דיסוציאציה מכני לתמצת את התאים SVF נעוץ ECM תומכת הטבעי שלהם למטרות משובי.

Introduction

תא גזע טיפולים מספקים שינוי פרדיגמה רקמות תיקון והתחדשות כך הם עשויים להציע של משטר טיפולי חלופיים עבור מחלות שונות1. תאי גזע (למשל, גזע pluripotent המושרה, תאי גזע עובריים) הפוטנציאל הטיפולי נהדר אבל הם מוגבל בשל תא ושיקולים אתיים. שומן-derived mesenchymal סטרומה/תאי גזע (השיקופיים) הם קל להשיג lipoaspirates, שאינם כפופים למגבלות זהות; לכן, זה הפך מסוג תאים אידיאלי עבור רפואה רגנרטיבית מעשי2. בנוסף, הם הינם nonimmunogenic וכוללים שפע המשאבים השומן autologous3.

כיום, השיקופיים מתקבלים בעיקר על ידי בתיווך collagenase עיכול של רקמת שומן. השבר בכלי הדם סטרומה (SVF) של רקמת שומן מכיל השיקופיים, תאים ובתאים אנדותל, pericytes של תאים חיסוניים. למרות קבלת צפיפות גבוהה של SVF/השיקופיים enzymatically הראו שיש השפעות מועילות, החקיקה במספר מדינות מסדיר בקפדנות את היישום הקליני של מוצרים מבוססי תאים באמצעות collagenase4. לעכל את רקמת שומן עם collagenase למשך 30 דקות כדי 1 h כדי להשיג SVF התאים, מגביר את הסיכון של שני חומרים אקסוגניים הכנה, המתפללים. התרבות חסיד הטיהור של השיקופיים, אשר לוקח ימים עד שבועות, דורשים ציוד מעבדה ספציפי. יתר על כן, רוב המחקרים, SVF תאים, השיקופיים משמשים ההשעיה. בלי ההגנה של מטריצה חוץ-תאית (ECM) או נושא אחר, תאים פנויים פגיעים, לגרום השמירה תא המסכן לאחר ההזרקה, לסכן את התוצאה הטיפולית5. מכל הסיבות הללו להגביל יישום נוסף של טיפול בתאי גזע.

להשיג השיקופיים של רקמת שומן ללא עיכול בתיווך collagenase, מספר הליכים עיבוד מכניים, כולל צנטריפוגה, מכני קוצץ, גיזום, pureeing, הא, היה מפותח6,7 , 8 , 9. שיטות אלה נחשבים לדחוס רקמת ו השיקופיים ע י מכנית שיבוש adipocytes בוגרת ושלפוחיות שלהם המכילים שמן. יתר על כן, ההכנות הללו, המכיל ריכוז גבוה של השיקופיים, הראה פוטנציאל טיפולי רב כמו רפואה רגנרטיבית של בעל חיים מודלים8,9,10.

בשנת 2013, Tonnard. et al. הציג את nanofat הרכבה טכניקה, אשר כרוך בהפקת emulsified lipoaspirates על ידי intersyringe עיבוד11. הטיית הכוח שנוצר על-ידי intersyringe הסטה יכול לשבור באופן סלקטיבי adipocytes בוגרת. בהתבסס על הממצאים שלהם, פיתחנו שיטת עיבוד מכניים גרידא מסירה את רוב השומנים נוזל, lipoaspirates משאיר רק SVF תאים, ECM fractionated, אשר הוא ECM/SVF-ג'ל12. במסמך זה, אנו מתארים את הפרטים של תהליך מכני של האדם, נגזר רקמת שומן כדי לייצר את ה-ECM/SVF-הג'ל.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

מחקר זה אושרה על ידי ועדת הבדיקה האתית Nanfang חולים, גואנגג'ואו, סין. רקמת שומן נאסף מתורמים מאוד בריאים שנתן בכתב הסכמה מדעת להשתתף במחקר. כל ניסויים בבעלי חיים היו אושרה על ידי Nanfang החולים טיפול בעלי חיים מוסדיים שימוש הוועדה וביצע בהתאם לקווים המנחים של בריאות לאומי המועצה למחקר רפואי (סין).

1. הכנה ECM/SVF-ג'ל

  1. שמן הקציר.
    1. לבצע שאיבת שומן על אדם עם בצינורית מרובה 3 מ מ, אשר מכילה מספר חורים חד צדדי של 1 מ מ קוטר, ב-0.75 atm של לחץ היניקה.
    2. אוספים 200 מ של lipoaspirates בשקית סטרילית.
  2. להכין שמן קולמן.
    1. להעביר את lipoaspirates לתוך צינורות 50 מ ל ארבע ולאפשר את השומן שנקטפו לעמוד עדיין למשך 10 דקות.
    2. לאסוף את השומן על השכבה העליונה לתוך שני צינורות 50 מ ל באמצעות פיפטה רחב-עצה להעביר, למחוק את החלק הנוזלי על השכבה התחתונה.
    3. באמצעות צינורות 50 מ ל, centrifugate על שכבת השומן ב 1,200 x g בטמפרטורת החדר (RT) למשך 3 דקות.
    4. מגדירים השכבה העליונה (כ 80 מ ל) שמן קולמן.
    5. להעביר 2/3 העליון של השומן קולמן צינור בפטרת באמצעות פיפטה רחב-עצה ולהגדיר את החלק הזה כשומן בצפיפות נמוכה.
    6. להעביר 1/3 התחתון של השומן קולמן עוד צינור בפטרת באמצעות פיפטה רחב-עצה ולהגדיר את החלק הזה כשומן בצפיפות גבוהה.
  3. לייצר ECM/SVF-ג'ל משומן בצפיפות נמוכה.
    1. באמצעות שני מזרקים 20 מ"ל מחובר על ידי מחבר נעל-סכינים סטריליים נקבה לנקבה (עם קוטר פנימי של 2.4 מ מ) intershift 20 מ של שמן בצפיפות נמוכה.
    2. לשמור על מהירות הסטה יציב (20 מ ל/s) וחזור עבור x 6 8 x.
    3. Centrifugate התערובת על 2,000 x g ב- RT למשך 3 דקות.
    4. לאסוף את החלק שמן על גבי צינור 10 מ"ל, באמצעות פיפטה רחב-טיפ של RT לשימוש נוסף.
    5. לאסוף את החומר הדביק בתוך השכבה האמצעית, המהווה SVF/ECM-ג'ל (איור 1א'), באמצעות פיפטה של wide-עצה, ולמחוק את הנוזל על השכבה התחתונה.
  4. לייצר ECM/SVF-ג'ל משומן בצפיפות גבוהה.
    1. הוסף 5 מ ל שמן (שנאספו משלב 1.3.4) 15 מ"ל של שומן בצפיפות גבוהה.
    2. Intershift השומן מעורבים בין מזרקים 6 x 8 x עד flocculate נוצרת בתוך האמולסיה.
    3. Centrifugate התערובת על 2,000 x g ב- RT למשך 3 דקות.
    4. למחוק את החלק שמן על גבי.
    5. לאסוף את החומר הדביק בתוך השכבה האמצעית (ECM/SVF-ג'ל) באמצעות פיפטה רחב-עצה ולמחוק את הנוזל על השכבה התחתונה.
    6. מערבבים ECM/SVF-הג'ל מן השלבים 1.3.5 ו 1.4.5.

2. דגם ה-ECM/SVF-ג'ל שתל עכבר ערום

  1. עזים ומתנגד העכברים עירום (8 שבועות הישן, נקבה) עם איזופלוריין (1% - 3%) שאיפת הרדמה בחדר הניתוח בעלי חיים.
  2. להעביר את ה-ECM/SVF-הג'ל מזרק 1 מ"ל.
  3. לחבר את המזרק 1 מ"ל בצינורית חדירה בוטה.
  4. הכנס את הצינורית subcutaneously בכל אגף של העכבר.
  5. להזריק mL 0.3 של ECM/SVF-הג'ל.

3. רקמות קציר 3, 15 ו- 90 ימים לאחר ההזרקה ECM/SVF-ג'ל

  1. עזים ומתנגד העכברים עם איזופלוריין (1% - 3%) שאיפת הרדמה.
  2. להקריב את העכברים בשיטת נקע בצוואר הרחם.
  3. לעשות חתך בקו האמצע של העור הגבי של העכבר עם מספריים כירורגיים.
  4. לנתח ולקצור את השתלים שמן משני הצדדים של העכבר. להטביע את השתלים שמן paraformaldehyde 4% ב RT בן לילה.
  5. מייבשים את הרקמה להגדיל את ריכוזי אתנול: 70% אתנול, שני שינויים, 1 h כל; 80% אתנול, שינוי אחד, 1 h; 95% אתנול, שינוי אחד, 1 h; 100% אתנול, שלושה שינויים, 1.5 h כל; קסילן, שלושה שינויים, 1.5 שעות כל אחד.
  6. לחדור את הרקמה עם פרפין (58-60 ° C), שני שינויים, 2 h.
  7. להטביע את הרקמה לגושי פרפין. לחתוך קטעים-עובי של 4 מיקרומטר ולשים אותם על שקופיות.

4. hematoxylin ואאוזין מכתים

  1. Deparaffinize השקופיות בלוק פראפין בהשריה של קסילן אני II, III (10 דקות כל אחד).
  2. נתרענן הסעיפים רקמות על ידי הכנסתם הפחתת ריכוז (100%, 100%, 95%, 80%, 70%) של אתנול אמבטיות למשך 3 דקות.
  3. יש לשטוף את המקטעים רקמות במים מזוקקים (5 דקות).
  4. כתם בסעיפים רקמות hematoxylin במשך 5 דקות.
  5. לשטוף את הסעיפים הרקמה הקשה במים במשך 20 דקות Decolorize זורמים ב 1% אלכוהול חומצה (1% HCl ב-70% אלכוהול) עבור 5 ס' שטיפה במים ברז זורמים עד הסעיפים כחולות שוב.
  6. להוסיף 2-3 טיפות של Eosin Y לצבוע ישירות על השקופיות באמצעות פיפטה, והנח את צבען להגדיר עבור 10 דקות.
  7. לשטוף את השקופיות במי ברז למשך 1-5 דקות.
  8. מייבשים את השקופיות להגדיל את ריכוז (70%, 80%, 95%, 100%, 100%) אתנול למשך 3 דקות.
  9. נקה השקופיות קסילן I ו- II למשך 5 דקות.
  10. הר בשקופיות הרכבה מדיה.

5. immunofluorescent מכתים

  1. Deparaffinize בסעיפים רקמות קסילן אני II, III (5 דקות כל אחד).
  2. נתרענן הסעיפים רקמות על ידי הכנסתם ריכוזים שונים (100%, 100%, 95%, 95%, 70%) של אמבטיות אלכוהול למשך 3 דקות.
  3. דגירה הסעיפים בפתרון2 O 3% H2ב- RT. מתנול עבור 10 דקות.
  4. לשטוף את השקופיות 2 x עם מים מזוקקים, 5 דקות כל אחד.
  5. שחרר את השקופיות סל שקופיות. מוסיפים 300 מ ל 10 מ מ ציטראט מאגר (pH 6.0), דגירה השקופיות ב 95-100 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות.
  6. מגניב השקופיות RT כעשרים דקות.
  7. לשטוף את השקופיות 2 x עם באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS), 5 דקות כל אחד.
  8. להוסיף 100 µL של 10% הסרום שור העובר על השקופיות, דגירה בתוך תא humidified ב RT לשעה.
  9. דגירה הסעיפים עם נוגדן ראשוני פתרון (שפן אנטי עכבר Perilipin, 1:400) ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה.
  10. לשטוף את השקופיות עם PBS 3 x, 5 דקות.
  11. דגירה הסעיפים עם פתרון נוגדנים משניים (אג חזיר אנטי-גינאה עז-488) עבור 2 h-RT.
  12. לשטוף את השקופיות עם PBS 3 x, 5 דקות.
  13. . נגבי את המים סביב הסעיף בנייר טישו נקי.
  14. ירידה 4 ′, 6-diamidino-2-phenylindole (דאפי) ו- isolectin מצומדת אלקסה עבור חיל הים 488 אל המעגל כדי לכסות את החלק בשקופית.
  15. הר על coverslips ולתת להן להתייבש בחושך.
  16. לצפות בשקופיות עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

לאחר העיבוד השומן קולמן ECM/SVF-ג'ל, הנפח של שמן שהושלכו תופס 80% של הכרך האחרון, רק 20% מכלל רקמת שומן נשמר מתחת לשכבת הנפט נחשב SVF/ECM-ג'ל (איור 1א'). ECM/SVF-ג'ל בעל מרקם נוזלי דמוי חלקה מאפשר לו לעבור דרך מחט בסדר 27 G; אולם, קולמן שומן מורכב מבנה אדיפוז נפרד עם סיבים גדולים, יכול רק לעבור על בצינורית 18 גרם (איור 1B).

ביום השלישי לאחר ההשתלה, הופיעו מספר גדול של קטן בגודל preadipocytes עם מספר השומנים תאיים טיפות, רקמת חיבור מקיף היטב vascularized הסתנן תאים דלקתיים. החל ביום 15, המספר של תאים דלקתיים החלו מופחת בהדרגה, adipocytes החלה להבשיל. ביום 90, רוב רקמת החיבור vascularized. ב- השתלים הוחלף ע י בוגרת adipocytes (איור 2, החלונית העליונה).

ECM/SVF-ג'ל שתלי הכיל כמה adipocytes perilipin-חיובית, 3 ימים לאחר ההשתלה. קטן בגודל preadipocytes עם טיפות השומנים תאיים מרובים החלו להופיע ביום 15. כל שדה של ECM/SVF-הג'ל להשתיל מקטעים ביום 90 הראתה חיובי perilipin adipocytes הרבות שהוקם כלי הדם (איור 2, החלונית התחתונה).

Figure 1
איור 1 : תמונות של ECM/SVF-הג'ל. Centrifuged קולמן ושומן ECM/SVF-ג'ל לאחר עיבוד (A). ECM/SVF-ג'ל יכול להיות מוזרק בקלות באמצעות מחט 27 G; עם זאת, קולמן שומן יכול להעביר רק דרך בצינורית 18 גרם (B). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Figure 2
איור 2 : שינוי היסטולוגית ECM/SVF-הג'ל לאחר ההשתלה. ECM/SVF-ג'ל הראה נרחב רקמת חיבור vascularized היטב, חדירה תאים דלקתיים ביום 3. כתוצאה מכך, רוב רקמת חיבור vascularized הוחלף על ידי מבנה המכיל בוגרת adipocytes (לוח העליון). Immunofluorescent מכתים מראה כי רוב הרקמה מורכבת של האזור perilipin-שלילי ביום 3. ביום 15, חלק גדול perilipin + adipocytes הופיע. Adipocytes perilipin-חיוביים רבים נמצאו לאחר 90 יום (החלונית התחתונה). פסי בקנה מידה = 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

טיפול משובי מבוססי תאי גזע הראה תועלת פוטנציאלית רבה במחלות שונות. השיקופיים הם מועמדים בולטים טיפולית כי הם קלים להשיג ואת יש יכולת התחדשות רקמות הרומן15ותיקון של רקמות. עם זאת, קיימות מגבלות להרחיב את היישום הקליני שלה, מכיוון שהיא דורשת פרוצדורות מסובכות לבודד תאים, collagenase לעיבוד6. לכן חיוני לפתח טכניקה פשוטה לקבל בתאי גזע ללא שימוש collagenase.

במחקר זה, הצגנו תהליך מכאנית בלבד של רקמת שומן להשיג SVF תאים, אשר מוגנים על-ידי ECM אדיפוז מקורית. יתר על כן, תהליך זה הוא ללא collagenase. הקודם המחקר בהשוואה שונים intersyringe הראה כי את intersyringe עיבוד של שומן קולמן סטנדרטי עבור 1 דקות בקצב הזרימה של 10 מ"ל/s הוא פרוטוקול אופטימלית עבור הפקת ECM/SVF-ג'ל12ועיבוד פעמים. באמצעות הסטה intersyringe, רוב adipocytes, lipoaspirates נהרסים, עם רוב של תאים SVF ECM נשמר. לפיכך, intersyringe הסטה הוא הצעד מפתח של התהליך כולו. את מהירות הסטה intersyringe ואת הזמן שהושקע ניצוח תזוזת לקבוע את רמת הרס של רקמת שומן כי הכוח sheering שנוצר על ידי התהליך, intersyringe מזוהה עם המהירות הסטה. אנו ממליצים כי המהירות הסטה צריכים להיות יציבים ב 20 מ"ל/ס הרס לא מספיקות מוביל adipocytes לא רצויים הנותרים, בעוד overdestruction גורמת נזק תאי SVF. המוצר של פרוטוקול זה יכולה להיות מוגדרת כ ECM/SVF-ג'ל רק אם הגיע הקריטריונים הבאים: 1) הנפח הסופי שלה הוא ~ 20% נפח הראשונית; 2) בקלות מוזרק דרך מחט 27 גרם. מחקר קודם הראה כי ECM/SVF-הג'ל מכיל צפיפות גבוהה של שני CD45-/ CD31 - CD34 + השיקופיים, צפיפות תא SVF זה > 4.0 x5 10 תאים למ"ל12.

במהלך התהליך של יצירת ECM/SVF-ג'ל, צנטריפוגה היה מתנהל 2 x, לפני ואחרי הסטה intersyringe. לפני intersyringe הסטה, אנו משתמשים צנטריפוגה כדי ליצור "מדורגים צפיפויות" של שומן. זהו צעד מפתח נוסף. הוכח כי שכבת השומן בצפיפות גבוהה בחלק התחתון, לאחר צנטריפוגה, עשיר ב- ECM מרוכז אבל יש פחות שמן, בעוד שכבת השומן בצפיפות נמוכה בחלק העליון יש עוד שמן אבל פחות ECM סיבים16,17. לכן, שתי שכבות אלה תעובד בשתי דרכים שונות. שומן בצפיפות נמוכה ניתן לעבור ישירות את העיבוד intersyringe להשמיד את adipocytes. עם זאת, השומן בצפיפות גבוהה-השכבה התחתונה דורש שמן נוספים כדי להקל על ההרס של adipocytes. שמן נוסף יכול להפחית את הצפיפות של שומן בצפיפות גבוהה, ביצוע התנועה. הרבה יותר קל. יתר על כן, השמן יכול לעזור לחלץ עוד שמן adipocytes שבור; עם זאת, לא נוזלית מימית. לפיכך, הוספנו שמן תוספת השומן בצפיפות גבוהה. צנטריפוגה לאחר intersyringe הסטה היא להפריד את החלק שמן מן התאים SVF ECM. שמן יש להימנע במוצר הסופי.

ההשתלה של ECM/SVF-ג'ל הביא שיעור שמירה מעולה. כפי שהזכרנו לעיל, לשלב המפתח של העיבוד של ה-ECM/SVF-ג'ל הוא intersyringe הסטה, וזה מקלקל את רוב adipocytes. לפיכך, adipocytes הקטן נשאר ב- ECM/SVF-הג'ל. כפי שמוצג באיור2, אזור perilipin-חיובי קטן הופיעו המושתלים ECM/SVF-הג'ל ביום 3. עם זאת, לאחר 15 ימים, הרבה perilipin-חיוביות adipocytes הופיע והפך בוגר לאחר 90 יום. מחקר קודם הראה כי השתלת של ECM/SVF-ג'ל המושרה התחדשות תאית רקמת שומן מארח14. באמצעות אנטיגן לויקוציטים נגד לזיהוי מקור adipocytes שהוקם, גילינו כי, אמנם רוב התאים SVF היו הנגזרות שתל, רוב רקמת שומן שהוקם היה נגזר המארח. ECM/SVF-ג'ל יש פונקציה משובי נהדר, דיווחנו בעבר. מוצר זה היה נהדר אפקטים טיפולית12ריפוי הפצע. יתר על כן, זה עזר לשפר את שיעור ההישרדות של רצועת העור בחינם במודל של עכברים על ידי האצת אנגיוגנזה10.

SVF-ג'ל הוא בהזרקה עצמיים המכיל ECM יליד ורכיבים הסלולר פונקציונלי. המוצר מופק lipoaspirate על ידי תהליך מכני פשוט, אשר יכול להתבצע בקלות ללא כל דאגות בנוגע לסוגיות רגולטוריות. עם זאת, ההשפעה של ECM/SVF-ג'ל משובי עדיין לא ברור. כדי לאפיין טוב יותר את ההשפעות המיטיבות של ECM/SVF-ג'ל, חקירות נוספות כדי לאפיין את המנגנונים המולקולריים שבבסיס השפעת ה-ECM/SVF-ג'ל משובי הנמצאים בדרך.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

עבודה זו נתמכה על ידי הקרן הלאומית למדע הטבע של סין (81471881, 81601702, 81671931), קרן מדעי הטבע של גואנג-דונג פרובינציה של סין (2014A030310155), מנהל קרן של Nanfang החולים (2014B009, 2015Z002, 2016Z010, 2016B001).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Alexa Fluor 488-conjugated isolectin GS-IB4 Molecular Probes I21411
guinea pig anti-mouse perilipin Progen GP29
DAPI Thermofisher D1306
wide tip pipet Celltreat 229211B
Confocal microscope  Leica  TCS SP2
nude nice  Southern Mdical University /
light microscope  Olympus /
50 mL tube Cornig 430828
sterile bag Laishi /
microtome Leica  CM1900
centrifuge Heraus

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bateman, M. E., et al. Using Fat to Fight Disease: A Systematic Review of Non-Homologous Adipose-Derived Stromal/Stem Cell Therapies. Stem Cells. 36 (9), 1311-1328 (2018).
  2. Baer, P. C., Geiger, H. Adipose-derived mesenchymal stromal/stem cells: tissue localization, characterization, and heterogeneity. Stem Cells International. , 812693 (2012).
  3. Gimble, J. M., Katz, A. J., Bunnell, B. A. Adipose-derived stem cells for regenerative medicine. Circulation Research. 100 (9), 1249-1260 (2017).
  4. Halme, D. G., Kessler, D. A. FDA regulation of stem-cell-based therapies. New England Journal of Medicine. 355 (16), 1730-1735 (2006).
  5. Cheng, N. C., Wang, S., Young, T. H. The influence of spheroid formation of human adipose-derived stem cells on chitosan films on stemness and differentiation capabilities. Biomaterials. 33 (6), 1748-1758 (2012).
  6. van Dongen, J. A., et al. Comparison of intraoperative procedures for isolation of clinical grade stromal vascular fraction for regenerative purposes: a systematic review. Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 12 (1), 261-274 (2018).
  7. van Dongen, J. A., et al. The fractionation of adipose tissue procedure to obtain stromal vascular fractions for regenerative purposes. Wound Repair and Regeneration. 24 (6), 994-1003 (2016).
  8. Mashiko, T., et al. Mechanical Micronization of Lipoaspirates: Squeeze and Emulsification Techniques. Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (1), 79-90 (2017).
  9. Feng, J., et al. Micronized cellular adipose matrix as a therapeutic injectable for diabetic ulcer. Regenerative Medicine. 10 (6), 699-708 (2015).
  10. Zhang, P., et al. Ischemic flap survival improvement by composition-selective fat grafting with novel adipose tissue derived product - stromal vascular fraction gel. Biochemistry and Biophysics Research Communication. 495 (3), 2249-2256 (2018).
  11. Tonnard, P., et al. Nanofat grafting: basic research and clinical applications. Plastic and Reconstructive Surgery. 132 (4), 1017-1026 (2013).
  12. Yao, Y., et al. Adipose Extracellular Matrix/Stromal Vascular Fraction Gel: A Novel Adipose Tissue-Derived Injectable for Stem Cell Therapy. Plastic and Reconstructive Surgery. 139 (4), 867-879 (2017).
  13. Yao, Y., et al. Adipose Stromal Vascular Fraction Gel Grafting: A New Method for Tissue Volumization and Rejuvenation. Dermatologic Surgery. 44 (10), 1278-1286 (2018).
  14. Zhang, Y., et al. Improved Long-Term Volume Retention of Stromal Vascular Fraction Gel Grafting with Enhanced Angiogenesis and Adipogenesis. Plastic and Reconstructive Surgery. 141 (5), 676-686 (2018).
  15. Sun, B., et al. Applications of stem cell-derived exosomes in tissue engineering and neurological diseases. Reviews in the Neurosciences. 29 (5), 531-546 (2018).
  16. Allen, R. J., et al. Grading lipoaspirate: is there an optimal density for fat grafting. Plastic and Reconstructive Surgery. 131 (1), 38-45 (2013).
  17. Qiu, L., et al. Identification of the Centrifuged Lipoaspirate Fractions Suitable for Postgrafting Survival. Plastic and Reconstructive Surgery. 137 (1), 67-76 (2016).

Tags

רפואה גיליון 145 נגזר שומן בתאי גזע תהליך מכני lipoaspirates שומן השתלת עור טיפול בתאי גזע השבר בכלי הדם סטרומה ג'ל
Micronization מכני של Lipoaspirates לטיפול רגנרטיבית
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhu, H., Ge, J., Chen, X., Lu, F.,… More

Zhu, H., Ge, J., Chen, X., Lu, F., Cai, J. Mechanical Micronization of Lipoaspirates for Regenerative Therapy. J. Vis. Exp. (145), e58765, doi:10.3791/58765 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter