Summary
स्टेम सेल उपचारों के बड़े पैमाने पर उत्थान के लिए विधियों और प्रोटोकॉल का सटीक प्रकटीकरण महत्वपूर्ण है। यहां, हम वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाओं को अलग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं, जिसका उपयोग रेडिकल प्रोस्टेटेक्टोमी (आरपी) के बाद स्तंभन दोष (ईडी) के उपचार के रूप में एकल इंट्राकैवर्नस इंजेक्शन के लिए किया जाता है।
Abstract
स्टेम कोशिकाओं का उपयोग पुनर्योजी चिकित्सा के भीतर कई शोध क्षेत्रों में किया जाता है क्योंकि ये उपचार रोगसूचक के बजाय उपचारात्मक हो सकते हैं। स्टेम कोशिकाओं को विभिन्न ऊतकों से प्राप्त किया जा सकता है और अलगाव के लिए कई तरीकों का वर्णन किया गया है। वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाओं (एडीआरसी) के अलगाव के लिए प्रस्तुत विधि का उपयोग कई चिकित्सीय क्षेत्रों के भीतर किया जा सकता है क्योंकि विधि एक सामान्य प्रक्रिया है और इसलिए, स्तंभन दोष (ईडी) चिकित्सा तक सीमित नहीं है। ईडी कट्टरपंथी प्रोस्टेटेक्टोमी (आरपी) के लिए एक आम और गंभीर दुष्प्रभाव है क्योंकि ईडी अक्सर पारंपरिक चिकित्सा के साथ अच्छी तरह से इलाज नहीं किया जाता है। ईडी के लिए उपचार के रूप में एडीआरसी का उपयोग करने से कॉर्पोरेट कैवर्नोसम में कोशिकाओं के एक इंजेक्शन के बाद प्रारंभिक सकारात्मक परिणामों के कारण बहुत रुचि आकर्षित हुई है। एडीआरसी के अलगाव के लिए उपयोग की जाने वाली विधि एक सरल, स्वचालित प्रक्रिया है, जो पुनरुत्पादक है और एक समान उत्पाद सुनिश्चित करती है। इसके अलावा, अलग-थलग उत्पाद की बाँझपन सुनिश्चित की जाती है क्योंकि पूरी प्रक्रिया एक बंद प्रणाली में होती है। संदूषण और संक्रमण के जोखिम को कम करना महत्वपूर्ण है क्योंकि स्टेम कोशिकाओं का उपयोग मनुष्यों में इंजेक्शन के लिए किया जाता है। पूरी प्रक्रिया 2.5-3.5 घंटे के भीतर की जा सकती है और एक वर्गीकृत प्रयोगशाला की आवश्यकता नहीं होती है जो ऑफ-साइट पर शिपिंग ऊतक की आवश्यकता को समाप्त करती है। हालांकि, प्रक्रिया में कुछ सीमाएं हैं क्योंकि अलगाव डिवाइस के लिए कार्य करने के लिए सूखा लिपोआस्पायरेट की न्यूनतम मात्रा 100 ग्राम है।
Introduction
स्टेम कोशिकाओं में विभिन्न सेल प्रकारों में अंतर करने की क्षमता होती है, और वे पैराक्राइन कारकों को स्रावित करते हैं जिन्हें क्षतिग्रस्त ऊतक 1,2,3,4 में उपचार प्रक्रिया को बढ़ावा देने के लिए माना जाता है। इसलिए, वे पुनर्योजी चिकित्सा के क्षेत्र में आकर्षक हैं, क्योंकि वे एक संभावित उपचारात्मक उपचार का प्रतिनिधित्व कर सकते हैं।
रेडिकल प्रोस्टेटेक्टोमी (आरपी) कम / मध्यवर्ती जोखिम वाले स्थानीयकृत प्रोस्टेट कैंसर और 10 साल > जीवन प्रत्याशा वाले रोगियों के लिए सुनहरा उपचारात्मक उपचार है। सर्जरी का उद्देश्य कैंसर का उन्मूलन है, लेकिन इसके कई दुष्प्रभाव हैं। पोस्ट-प्रोस्टेटेक्टोमी असंयम की व्यापकता 2-60% से होती है और स्तंभन दोष (ईडी) 20-90% रोगियों द्वारा अनुभव किया जाता है। तंत्रिका-बख्शने वाली तकनीक कुछ रोगियों में एक विकल्प है (ग्लीसन स्कोर < 7, एक्स्ट्राकैप्सुलर बीमारी का कम जोखिम)5। यह तकनीक उन नसों को बचाती है जो निर्माण के लिए जिम्मेदार हैं, लेकिन भले ही यह संभव है, कई रोगी अभी भी ईडी की रिपोर्ट करते हैं।
आरपी के बाद पेनाइल पुनर्वास के लिए उपचार के विकल्पों में मुख्य रूप से पीडीई -5 इनहिबिटर, इंजेक्शन या इंस्टिलेशन थेरेपी और वैक्यूम पंपों के साथ उपचार शामिल है। पेनाइल पुनर्वास के लिए उपयोग की जाने वाली दवाएं औषधीय रूप से भिन्न होती हैं, लेकिन उनकी कार्रवाई के तंत्र में कॉर्पस कैवर्नोसम में चिकनी मांसपेशी कोशिकाओं की छूट शामिल है। हालांकि, कई रोगी उपचार की विफलता का अनुभव करते हैं और कभी भी उस दवा का प्रभाव प्राप्त नहीं करते हैं जो संभोग6 को सक्षम बनाता है।
आरपी के बाद होने वाले ईडी को संरचनात्मक रूप से अपरिवर्तनीयपरिवर्तनों के कारण माना जाता है। ये परिवर्तन गुफाओं के ऊतकों में होते हैं और इसमें चिकनी मांसपेशियों और एंडोथेलियल कोशिकाओं और फाइब्रोसिस के एपोप्टोसिस शामिल होते हैं। वेनो-ऑक्लुसिव तंत्र जो निर्माण के एक केंद्रीय भाग के लिए जिम्मेदार है, परिवर्तनों से बिगड़ा हुआ है, जिसके परिणामस्वरूप लिंग7 के गरीब भरने और कठोरता होती है।
कई रोगियों की रिपोर्ट है कि ईडी वे अनुभव उनके जीवन की गुणवत्ता पर एक नकारात्मक प्रभावपड़ता है 8. वे सर्जरी के बाद अपनी यौन गतिविधि छोड़ने के लिए तैयार नहीं हैं और इसलिए, ईडी के लिए एक उपचारात्मक चिकित्सा आकर्षक है, जब पेनाइल पुनर्वास के लिए अन्य उपलब्ध उपचार विफल हो जाते हैं।
पिछले परीक्षणों में, मनुष्यों पर पशु और छोटे चरण 1 परीक्षणों सहित, स्टेम कोशिकाओं ने ईडी 2,9,10,11,12 के लिए एक वैकल्पिक उपचार के रूप में आशाजनक परिणाम दिखाए हैं। परिणाम बताते हैं कि एडीआरसी का उपयोग करना सुरक्षित है, और यह कि कार्पोरा कैवर्नोसम 2,9,10,11,12 में एक इंजेक्शन के बाद स्तंभन फ़ंक्शन में काफी सुधार हुआ है। वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाओं (एडीआरसी) को कई हार्मोन, न्यूरोट्रॉफिक- और अन्य विकास कारकों, साइटोकिन्स और संभवतः, माइक्रो-आरएनए13 की मुक्ति के माध्यम से पैराक्राइन तंत्र द्वारा ऊतक पुनर्जनन का समर्थन करने के लिए सोचा जाता है। इसके अलावा, एडीआरसी एंडोथेलियल और संवहनी मांसपेशी कोशिकाओं, उपास्थि कोशिकाओं, ओस्टियोसाइट्स और न्यूरॉन्स14,15 सहित कई परिपक्व सेल-प्रकारों में अंतर करने में सक्षम हैं। ये गुण ईडी के लिए एक स्थायी नया उपचार विकसित करने के लिए स्टेम कोशिकाओं को दिलचस्प बनाते हैं।
स्टेम कोशिकाओं को कई समूहों में विभाजित किया जाता है, मूल रूप से वे प्रारंभिक भ्रूण (भ्रूण स्टेम कोशिकाओं) से व्युत्पन्न होते हैं और वयस्क ऊतक (वयस्क स्टेम कोशिकाओं) से प्राप्त होते हैं। वयस्क स्टेम कोशिकाओं में मेसेनकाइमल स्टेम सेल (एमएससी) शामिल हैं जो मल्टीपोटेंट हैं और अस्थि मज्जा, वसा ऊतक, गर्भनाल रक्त, प्लेसेंटा और दंत लुगदी17 में पाए जा सकते हैं।
वसा ऊतक से स्टेम कोशिकाओं को अस्थि मज्जा से व्युत्पन्न स्टेम कोशिकाओं के विपरीत, पहुंच प्राप्त करना आसान होता है। अस्थि मज्जा से स्टेम कोशिकाओं की कटाई लिपोसक्शन की तुलना में एक जोखिम भरा और दर्दनाक प्रक्रिया है। अस्थि मज्जा से फसल के लिए संभव कोशिकाओं की संख्या सीमित होगी, जबकि केवल वसा ऊतक के रोगी के डिपो कोशिकाओं की संख्या के लिए सीमा निर्धारित करते हैं जिन्हें काटा जा सकता है। इसलिए, एक संतोषजनक राशि प्राप्त करने के लिए कोशिकाओं को संस्कृति करने की बाद की आवश्यकता के बिना वसा ऊतक से स्टेम कोशिकाओं की एक बड़ी मात्रा को अलग करना संभव है। वसा-व्युत्पन्न पुनर्योजी कोशिकाएं, जिन्हें अक्सर स्ट्रोमल संवहनी अंश (एसएफवी) के रूप में भी जाना जाता है, एमएससी, एंडोथेलियल कोशिकाओं, पेरिसाइट्स, प्रतिरक्षा कोशिकाओं औरपूर्वजों सहित कई सेल प्रकारों से बना होता है। ये सभी पुनर्योजी प्रक्रिया में एक भूमिका निभा सकते हैं।
वर्तमान अध्ययन का उद्देश्य आरपी के बाद ईडी पर स्टेम कोशिकाओं के प्रभाव की जांच करना है, जिसमें कार्पोरा कैवर्नोसम में इंजेक्शन के बाद ताजा काटे गए वसा ऊतक से अलग किए गए ऑटोलॉगस एडीआरसी के 4 एमएल का उपयोग किया जाता है।
Protocol
प्रोटोकॉल में वर्णित सभी तरीकों को डेनिश राष्ट्रीय नैतिकता समिति (संख्या 37054), डेनिश स्वास्थ्य और चिकित्सा प्राधिकरण (EUDRA-CT संख्या 2013-004220-11) और डेनिश डेटा सुरक्षा एजेंसी (2008-58-0035) द्वारा अनुमोदित किया गया था। यह अध्ययन ClinicalTrials.gov (NCT02240823) पर पंजीकृत किया गया था। अध्ययन ओडेंस विश्वविद्यालय अस्पताल में गुड क्लिनिकल प्रैक्टिस (जीसीपी) इकाई द्वारा निगरानी की गई हेलसिंकी की घोषणा के अनुसार किया गया था। ODENSE University Hospital (डेनिश स्वास्थ्य और दवा प्राधिकरण, प्राधिकरण संख्या 29035) में मानव ऊतकों और कोशिकाओं के संचालन के लिए एक अधिकृत ऊतक स्थापना में ADRC तैयारी की गई थी।
1. रोगी / प्रतिभागियों की भर्ती
- परीक्षण भर्ती रोगियों में भाग लेने के लिए जो शामिल करने के निम्नलिखित मानदंडों को पूरा करते हैं।
- उन रोगियों की भर्ती करें जो 18 वर्ष से अधिक उम्र के हैं, आरपी से पहले यौन रूप से सक्रिय हैं और यौन संचारित रोगों से संक्रमित नहीं हैं जैसे, मानव इम्यूनोडेफिशिएंसी वायरस संक्रमण, सिफलिस, या हेपेटाइटिस।
- सुनिश्चित करें कि वे एक आरपी के बाद स्तंभन दोष से पीड़ित हैं जो प्रोस्टेट कैंसर के कारण किया गया था।
नोट: इस अध्ययन में, रोगियों को आरपी के 5-18 महीने बाद अध्ययन में नामांकित किया गया था और सर्जरी विधि की परवाह किए बिना शामिल किया गया था: खुले / रोबोट सहायता प्राप्त या तंत्रिकास्पेरिंग / गैर-तंत्रिकास्पेरिंग। - सुनिश्चित करें कि प्रोस्टेट-विशिष्ट एंटीजन (पीएसए) का मूल्य आरपी के बाद नैदानिक अनुवर्ती पर पता लगाने योग्य नहीं था।
- सुनिश्चित करें कि रोगी आरपी से पहले यौन रूप से सक्रिय थे, और अभी भी आरपी के बाद यौन रूप से सक्रिय रहने की इच्छा व्यक्त कर रहे थे। सुनिश्चित करें कि एक फॉस्फोडिएस्टेरेज़ प्रकार 5 अवरोधक (पीडीई 5 अवरोधक) या प्रोस्टाग्लैंडीन ई 1 (पीजीई 1) के सिंथेटिक एनालॉग के साथ औषधीय हस्तक्षेप को भाग लेने से पहले कोशिश की गई है और अपर्याप्त माना जाता है।
- इसके अलावा, सुनिश्चित करें कि रोगियों के पेट या जांघ पर पर्याप्त चमड़े के नीचे वसा है।
- परीक्षण से रोगियों को बाहर निकालें, यदि आरपी के दौरान संज्ञाहरण के तहत गंभीर घटनाएं थीं या यदि उन्हें एंटीकोआगुलंट्स के साथ इलाज किया गया था।
2. लिपोसक्शन
नोट: लिपोसक्शन एक ऑपरेशन है जो चमड़े के नीचे के क्षेत्र से वसा या लिपोसाइट्स को हटा देता है। प्रोटोकॉल का यह हिस्सा एक मानक लिपोसक्शन के रूप में किया जाता है और प्रक्रिया एक ऑपरेटिंग थिएटर में बाँझ परिस्थितियों में की जाती है। प्रक्रिया के तहत उपयोग किए जाने वाले सभी उपकरणों को बाँझ होना चाहिए और सर्जन को स्क्रब, बाँझ सर्जिकल गाउन, बाँझ दस्ताने, सर्जिकल मास्क और टोपी पहनना चाहिए।
- रोगी को बेहोश करें।
- सुनिश्चित करें कि प्रक्रिया के दौरान रोगी सामान्य संज्ञाहरण के तहत है, और यह हिस्सा एनेस्थेसियोलॉजिस्ट द्वारा किया जाता है।
- क्लोरहेक्सिडीन 0.5% के साथ पेट और अंडकोश की त्वचा को कीटाणुरहित करें (clorhexidine भावना, 96% इथेनॉल मेडिकेटेड chlorhexidine digluconate 77% W / W = 83% v / v)। पेट पर क्षेत्रों को तैयार करने के लिए एक सर्जिकल मार्कर का उपयोग करें लिपोसक्शन किया जा रहा है। क्षेत्र आमतौर पर सिम्फिसिस और उम्बिलिकस के बीच का क्षेत्र होगा।
- एक स्केलपेल (संख्या 11) के साथ पेट की त्वचा में दो 6 मिमी चौड़े चीरों को बनाएं। लिपोसक्शन के अपड्रॉग क्षेत्र से चीरों को सममित रूप से और पार्श्व रूप से रखें।
- चीरों पर इस तरह के पेट्रोलियम जेली का एक सा रखो, यह सुनिश्चित करने के लिए कि घुसपैठ प्रवेशनी लिपोसक्शन के दौरान आसानी से चीरों के अंदर और बाहर स्लाइड करती है।
- त्वचा में चीरों के माध्यम से एक आकार 14 जी घुसपैठ प्रवेशनी का परिचय दें। त्वचा की सतह के समानांतर चिह्नित क्षेत्रों में चमड़े के नीचे संशोधित क्लेन्स समाधान इंजेक्ट करें। समाधान का इतना इंजेक्ट करें कि लक्षित ऊतक सूजन और फर्म, या tumescent हो जाता है।
नोट: संशोधित Kleins समाधान 1,000 mL रिंगर्स लैक्टेट और 1 मिलीग्राम adrenalin (एपिनेफ्रीन (1: 1,000,000)) का एक समाधान के होते हैं। समाधान के लिए स्थानीय संज्ञाहरण ass मत करो, के रूप में यह ADRCs पर एक नकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है.- संशोधित Kleins समाधान है कि वसा ऊतक के लिए 1: 1 के अनुपात से मेल खाती की एक मात्रा इंजेक्ट करें।
- एड्रेनालिन के प्रभाव को अधिकतम करने और काटे गए वसा ऊतक में रक्त की मात्रा को कम करने के लिए 10 मिनट तक प्रतीक्षा करें।
- वसा ऊतक के 200-300 मिलीलीटर फसल के लिए एक जेट जलसेक liposuction का उपयोग कर एक मानक liposuction प्रदर्शन। कुंद कैनुला का उपयोग करें जो खोखले हैं, जिसमें एक जलसेक ट्यूब और एक नोजल एकीकृत हैं। लिपोसक्शन के लिए एक सक्शन डिवाइस के लिए कैनुला संलग्न करें।
नोट: एक निरंतर प्रशंसक के आकार का पानी जलसेक वसा ऊतक को टुकड़ों में ढीला कर देता है जिसे आसानी से कैनुला में उद्घाटन के माध्यम से चूसा जा सकता है।- पेट पर चीरों के माध्यम से एक कुंद टिप के साथ एक 3 मिमी सिरिंज का परिचय दें
- एक बाँझ वातावरण में lipoaspirate को संरक्षित करने के लिए एक लाइपो-कलेक्टर में वसा ऊतक ले लीजिए। लिपोआस्पायरेट पानी के चरण से अलग होना शुरू हो जाएगा।
- लाइपो-कलेक्टर से lipoaspirate चूसने के लिए 50 mL बाँझ सिरिंज का उपयोग करें।
- सिरिंज में चूसा पानी की मात्रा को कम से कम करें और वसा ऊतक बाँझ रखने के लिए सिरिंज की नोक पर एक प्लग पर पेंच।
- पानी के चरण से लिपोआस्पायरेट के अलगाव को शुरू करने के लिए एक बाँझ प्लास्टिक बैग में नीचे की ओर टिप के साथ सिरिंज रखें। बाँझ कंटेनर में बैग अभी भी नीचे की ओर सामना करने वाले सुझावों के साथ अलगाव जारी रखने के लिए रखें।
- परिवहन के दौरान बाँझ वातावरण को सुरक्षित करने के लिए बाँझ ड्रेप के साथ कंटेनर को कवर करें।
नोट: अलगाव के लिए उपयोग की जाने वाली मशीन के उपयोगकर्ता मैनुअल के अनुसार, एडीआरसी के अलगाव से पहले लिपोआस्पायरेट को अधिकतम 4 घंटे तक संग्रहीत किया जा सकता है, हालांकि, हम हमेशा इसे तुरंत संसाधित करते हैं।
- परिवहन के दौरान बाँझ वातावरण को सुरक्षित करने के लिए बाँझ ड्रेप के साथ कंटेनर को कवर करें।
- सर्जन पसंदीदा सीवन सामग्री के साथ त्वचा के चीरों को बंद करें। पोस्टऑपरेटिव एडिमा को कम करने के लिए पेट के चारों ओर एक संपीड़न परिधान, एक पेट की बांधने की मशीन रखें।
- एड्रेनालाईन के 5 μg युक्त 20 mL bupivacaine 5 mg / mL इंजेक्ट करके एक पेनाइल ब्लॉक बनाएं।
- एक 20 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग करें और 23 जी सुई के साथ लागू करें, 1 1/4 इंच लंबा।
- subcutis में प्रत्येक चतुर्थांश में bupivacaine के 5 मिलीलीटर लागू होते हैं।
- दो साइटों पर bupivacaine इंजेक्ट करें, एक ventrally दूसरे पृष्ठीय रखा. चमड़े के नीचे के ऊतक में इसकी लंबाई के पूरे हिस्से में सुई का परिचय दें जो सुई को दाईं ओर पार्श्व रूप से इंगित करता है और संज्ञाहरण को इंजेक्ट करता है क्योंकि सुई वापस ले ली जाती है। सुई को बाईं ओर इंगित करते हुए इंजेक्शन को दोहराएं।
नोट: रोगी को अब एनेस्थेसियोलॉजिस्ट द्वारा सामान्य संज्ञाहरण से जगाया जा सकता है।
3. एडीआरसी का अलगाव
नोट:: ADRCs की अलगाव प्रक्रिया डिवाइस के बाद उपयोगकर्ता मैन्युअल में विस्तार से वर्णित के रूप में किया जाता है ( सामग्री की तालिका देखें)। यह महत्वपूर्ण है कि प्रक्रिया बाँझ परिस्थितियों में की जाती है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि एडीआरसी के शुद्धिकरण के दौरान लिपोआस्पायरेट किसी भी संदूषक के संपर्क में नहीं है। एडीआरसी के अलगाव के लिए लिया गया समय लिपोआस्पायरेट की मात्रा पर निर्भर करता है, लेकिन पूरी प्रक्रिया में यहां वर्णित अर्ध-स्वचालित डिवाइस का उपयोग करके लगभग 2.5 घंटे लगेंगे।
- एक बाँझ डिस्पोजेबल सर्जिकल तौलिया द्वारा कवर की गई मेज पर सभी उपभोग्य वस्तुओं और एंजाइमों को एसेप्टिक रूप से रखें।
नोट: एक प्रक्रिया किट में एक रोगी से एडीआरसी के अलगाव के लिए आवश्यक सभी आवश्यक उपभोग्य वस्तुएं और एंजाइम होते हैं। इसके अलावा, तीन 37-39 डिग्री सेल्सियस, लैक्टेट किए गए रिंगर्स के एक लीटर जलसेक बैग कीटाणुशोधन के लिए बाँझ कपड़े, दस्ताने और तौलिया और इथेनॉल के साथ उपलब्ध होने चाहिए। उपभोक्ता और एंजाइमों की सभी बहुत संख्याओं को नोट करें और सिस्टम से जुड़े होने पर लैक्टेड रिंगर्स के तापमान को भी नोट करें।- इथेनॉल के साथ डिवाइस को पोंछें और निर्माता के निर्देशों का पालन करें
- डिवाइस पर उपभोक्ता सेट लोड करें और सिस्टम के लिए लैक्टेड रिंगर्स का एक बैग कनेक्ट करें।
- lipoaspirate जोड़ने से पहले अर्ध-स्वचालित परीक्षणों (सिस्टम चेक और रिसाव परीक्षण) की श्रृंखला का प्रदर्शन करें।
- लिपोएस्पायरेट को 50 एमएल ट्यूबों में खड़े होने दें, जबकि 3.1 में चरणों का प्रदर्शन किया जाता है। यह वसा को तरल चरण से अलग करने की अनुमति देगा। वसा ऊतक की कुल मात्रा (एमएल में) को नोट करें और यह सुनिश्चित करने के लिए इसका उपयोग करें कि लोड किए गए वसा की मात्रा डिवाइस क्षमता की सीमा में होगी।
- डिवाइस द्वारा संकेत दिए जाने पर ऊतक को लोड करें। मशीन अब अतिरिक्त तरल पदार्थ को बंद कर देगी और लैक्टेड रिंगर्स के साथ धोने से पहले लोड किए गए वसा ऊतक की मात्रा का वजन करेगी।
- जब ऊतक को फिर से धोया और सूखा दिया जाता है, तो मशीन द्वारा अनुरोध किए जाने पर 37-39 डिग्री सेल्सियस लैक्टेट रिंगर्स के साथ एक नया जलसेक बैग कनेक्ट करें।
- 5 एमएल लैक्टेड रिंगर्स में कोलेजेनेस और प्रोटीज मिश्रण युक्त व्यावसायिक रूप से उपलब्ध एंजाइम का पुनर्गठन करें (एंजाइम की एक शीशी 270 मिलीलीटर तक वसा की मात्रा के लिए पर्याप्त है)।
- सुनिश्चित करें कि डिवाइस वसा ऊतक के साथ कनस्तर में इंजेक्ट करने के लिए एंजाइम की मात्रा (ऊतक के वजन के आधार पर) प्रदर्शित करता है। एक बार इंजेक्ट किए जाने के बाद, आंदोलन के तहत किए जाने वाले एंजाइमेटिक पाचन लगभग 20 मिनट तक चलेगा।
- ऊतक पाचन के बाद, आंदोलनकारी को रोकने दें और जांचें कि सामग्री को दो चरणों में विभाजित किया गया है: एक ऊपरी लिपिड युक्त, पीला चरण और एक निचली गुलाबी परत जिसमें एडीआरसी होते हैं। बाद की परत को सेल प्रोसेसिंग चैंबर (जो डिवाइस बिल्ट-इन सेंट्रीफ्यूज में जाता है) में निकलने दें, जबकि लिपिड परत को पीछे छोड़ दें।
- एडीआरसी को सेंट्रीफ्यूजेशन के कई दौरों के दौरान सेल प्रोसेसिंग चैंबर में ध्यान केंद्रित करने दें। अब Intravase के 10 मिलीलीटर जोड़ें (DNase शामिल है, कि अंतिम ADRC निलंबन में clumping से बचने में मदद करता है) लैक्टेटेड रिंगर्स में पुनर्गठित. एंजाइमेटिक प्रतिक्रिया 10 मिनट तक रहती है जिसके बाद एडीआरसी को धोया जाता है।
नोट:: यह चरण पूरी तरह से स्वचालित है, और प्रक्रिया पूरी होने पर मशीन सूचित करेगी। - जब एडीआरसी का अलगाव पूरा हो जाता है, तो रिंगर लैक्टेट के 5 एमएल में कोशिकाओं को फिर से निलंबित करें। एक 5 मिलीलीटर सिरिंज में समाधान aspirate.
- एडीआरसी युक्त 5 एमएल सिरिंज पर एक 3-तरफ़ा स्टॉपकॉक मादा ल्यूर-लॉक माउंट करें, और एक और 5 एमएल बाँझ सिरिंज में एडीआरसी के एस्पिरेट 4 एमएल।
- पिछले 1 एमएल को 1 एमएल सिरिंज में स्थानांतरित करें। ADRC लक्षण वर्णन के लिए इस 1 mL का उपयोग करें जैसे, सेल गिनती, सेल व्यवहार्यता, प्रवाह cytometry और ADRC भेदभाव क्षमता द्वारा सतह मार्करों का विश्लेषण।
- 5 एमएल सिरिंज पर एक 25 जी सुई पर रखो जिसमें एडीआरसी के 4 एमएल शामिल हैं, इससे पहले कि यह एक बाँझ ड्रेप में पैक किया जाए। प्राप्तकर्ता में इंजेक्शन के लिए ADRCs का उपयोग करें। इस मामले में, एडीआरसी के समाधान में औसतन 8.4-32.7 मिलियन कोशिकाएं होंगी।
4. कॉर्पोरेट cavernosum में ADRCs का आरोपण
नोट: यह एक बाँझ प्रक्रिया है। सभी उपकरणों को बाँझ होना चाहिए, और कॉर्पोरेट कैवर्नोसम में स्टेम कोशिकाओं वाले समाधान को इंजेक्ट करने वाले व्यक्ति को बाँझ दस्ताने पहनना चाहिए। रोगी इस प्रक्रिया के दौरान जाग रहा है और अपनी स्वयं की स्टेम कोशिकाओं को प्राप्त करेगा। एडीआरसी को इंजेक्शन से पहले कोशिकाओं की गिनती किए बिना इंजेक्ट किया जाता है।
- सिरिंज को धीरे से झुकाकर एडीआरसी के समाधान को सजातीय रखें जब तक कि इसे कॉर्पोरेट कैवर्नोसम में इंजेक्ट नहीं किया जाता है।
- लिंग के ऊपर एक एपर्चर ड्रेप रखें। एक सिलिकॉन पोत पाश का उपयोग करके लिंग की जड़ में एक tourniquet जगह. पाश को कसें और संदंश घुमावदार पीन के साथ इसे सुरक्षित करें। टॉर्निकेट को लिंग से रक्त के प्रवाह को रोकने के लिए पर्याप्त तंग करें।
- इंजेक्शन साइट (कॉर्पोरेट cavernosum के पार्श्व साइट) पर penile त्वचा कीटाणुरहित करने के लिए दो एंटीसेप्टिक स्वैप का उपयोग करें। एडीआरसी युक्त समाधान के 1 मिलीलीटर इंजेक्ट करें, दो अलग-अलग स्थानों पर दाईं ओर कार्पोरा कैवर्नोसम में एक प्रत्यक्ष कोण में, इस चरण को बाद में बाएं कॉर्पोरेट कैवर्नोसम में दोहराएं। इंजेक्टेड एडीआरसी की कुल मात्रा 4 एमएल है।
- 30 मिनट के लिए प्रतीक्षा करें और फिर tourniquet निकालें।
- एडीआरसी के इंजेक्शन के बाद अवलोकन के 2 घंटे के बाद रोगी को डिस्चार्ज करें, यह सुरक्षित करने के लिए कि रोगी को संज्ञाहरण के बाद अच्छी तरह से ठीक किया गया है।
5. पश्चात की देखभाल
- रोगी को किसी भी शारीरिक प्रदर्शन को न करने की सलाह दें जो हेमेटोमा के विकास को रोकने के लिए पहले सप्ताह के भीतर रक्तचाप को बढ़ा सकता है।
- रोगी को सर्जरी के बाद पहले 14 दिनों में 24 घंटे के लिए पेट की बांधने की मशीन पहनने की सलाह दें और इसके बाद दिन के दौरान 14 दिनों के लिए।
- मौखिक एसिटामिनोफेन (जैसे, पेरासिटामोल; 1,000 मिलीग्राम, दिन में 4 बार) और मौखिक विरोधी भड़काऊ (जैसे, इबुप्रोफेन; 400 मिलीग्राम दिन में 3 बार) के साथ पोस्टसर्जिकल दर्द का इलाज करें।
Representative Results
प्रस्तुत प्रक्रिया का उपयोग एक ओपन-लेबल चरण 1 नैदानिक परीक्षण के लिए किया गया है जिसमें 21 रोगी19 शामिल हैं। परीक्षण का प्राथमिक समापन बिंदु मनुष्यों में एडीआरसी के उपयोग की सुरक्षा थी और द्वितीयक समापन बिंदु स्तंभन समारोह पर एडीआरसी का प्रभाव था।
इक्कीस पुरुषों को 60 वर्ष (रेंज 46-69) की औसत आयु और प्रोस्टेट कैंसर के कारण आरपी से पहले एक सामान्य निर्माण और सक्रिय यौन जीवन के साथ परीक्षण में शामिल किया गया था। वे सभी आरपी के बाद ईडी से पीड़ित थे, जिसमें पेनाइल पुनर्वास के लिए उपलब्ध दवा से वसूली के कोई संकेत नहीं थे। छह पुरुषों को आरपी के लिए एक दुष्प्रभाव के रूप में असंयम से पीड़ित था। सभी पुरुषों को प्रस्तुत विधि के साथ अलग-थलग एडीआरसी का एक एकल इंट्राकैवरनस इंजेक्शन प्राप्त हुआ।
सभी 21 पुरुषों को इंजेक्शन के बाद 1,3,6 और 12 महीने में आउट पेशेंट क्लिनिक में 4 यात्राओं के साथ पीछा किया गया था। यौन समारोह का मूल्यांकन मान्य प्रश्नावली के साथ किया गया था - इरेक्टाइल फ़ंक्शन -5 (आईआईईएफ -5) और इरेक्शन हार्डनेस स्कोर (ईएचएस) के अंतर्राष्ट्रीय सूचकांक (परिशिष्ट के रूप में संलग्न)।
अवलोकन के समय के दौरान कोई गंभीर घटना नहीं हुई। आठ पुरुषों ने इंजेक्शन साइटों पर क्षणिक लालिमा और सूजन की सूचना दी, तीन ने पेनाइल क्षेत्र में प्रतिक्रिया की सूचना दी। लिपोसक्शन से संबंधित आठ अनुभवी प्रतिवर्ती मामूली घटनाओं की सूचना दी गई थी जैसे कि हल्के पेट की असुविधा और मामूली पेट हेमेटोमा। किसी भी रोगी ने 1 महीने के अनुवर्ती में असुविधा की सूचना नहीं दी। महाद्वीप समूह में पंद्रह में से आठ (53%) ने बताया कि स्तंभन समारोह 12 महीनों में संभोग के लिए पर्याप्त था। 6 असंयमित पुरुषों के समूह ने स्तंभन समारोह में कोई सुधार नहीं दिखाया।
| महाद्वीप | असंयत | |
| शामिल रोगियों | 15 | 6 |
| महत्वपूर्ण प्रभाव | 8 | 0 |
तालिका 1: तालिका महाद्वीप और असंयमित रोगियों के बीच उपचार के महत्वपूर्ण प्रभाव में अंतर दिखाती है।
Discussion
एडीआरसी को अलग करने के लिए प्रस्तुत प्रक्रिया केवल ईडी थेरेपी के लिए उपयोग किए जाने तक सीमित नहीं है, बल्कि उपचार और प्रयोगों के कई अन्य रूपों में उपयोग की जा सकती है। हमारे परीक्षण से पता चला है कि ऑटोलॉगस, ताजा अलग-थलग एडीआरसी उपयोग करने के लिए सुरक्षित हैं, और उपचार 12 महीने के अनुवर्ती में अच्छी तरह से सहनीय है।
प्रक्रिया का उपयोग करने से पहले कुछ विचार किए जाने हैं। इस प्रक्रिया का एक नुकसान यह है कि रोगी को लिपोसक्शन के दौरान सामान्य संज्ञाहरण के तहत होना चाहिए। लिपोसक्शन स्थानीय संज्ञाहरण के तहत प्रदर्शन करना संभव है, लेकिन पिछले परीक्षण से पता चला है कि स्थानीय एनेस्थेटिक्स और एड्रेनालाईन के संयोजन सेफाइब्रोब्लास्ट्स 20 के सेल विकास पर नकारात्मक प्रभाव पड़ सकता है। सामान्य संज्ञाहरण के तहत होने का जोखिम आमतौर पर कम होता है, लेकिन एक नकारात्मक परिणाम अभी भी देखा जाता है। इस जोखिम को ध्यान में रखा जाना चाहिए जब रोगियों को उपचार के लिए चुना जाता है। लिपोसक्शन एक सर्जिकल प्रक्रिया है और इसलिए, हमेशा जटिलताओं के जोखिम में रहेगी। अन्य सभी सर्जिकल प्रक्रियाओं के साथ, पोस्ट-ऑपरेटिव रक्तस्राव का खतरा होता है जिसके परिणामस्वरूप हेमेटोमा का गठन होता है और संक्रमण का खतरा होता है। हमारे कुछ रोगियों ने पेट की त्वचा की क्षणिक कम संवेदनशीलता की भी रिपोर्ट की थी। लिपोसक्शन के लिए एक तत्काल जटिलता रक्तस्राव है। यह ज्ञात है कि रोगियों को प्रणालीगत जटिलताओं को प्राप्त करने का जोखिम होता है जब बड़ी मात्रा में ऊतक को हटा दिया जाता है। इस प्रक्रिया में लिपोसक्शन अपेक्षाकृत छोटा था और इसलिए इसे जोखिम कारक नहीं माना जाता था।
कोशिकाओं के इंजेक्शन के लिए जटिलताओं को क्षणिक लालिमा, कोमलता और हेमेटोमा के रूप में सूचित किया जाता है।
एडीआरसी के अलगाव के लिए उपयोग किए जाने वाले डिवाइस को चुना गया था, क्योंकि सिस्टम सीई अनुमोदित है। डेनमार्क में, सीई अनुमोदित उपकरणों का उपयोग करना अनिवार्य है क्योंकि अधिकारी स्टेम कोशिकाओं के साथ उपचार को दवा परीक्षण परीक्षण के रूप में वर्गीकृत करते हैं, जब मनुष्यों में इंजेक्शन के लिए एडीआरसी का उपयोग किया जाता है।
डिवाइस के फायदे हैं जैसे कि पूरी प्रक्रिया को मानकीकृत किया जा रहा है और अत्यधिक वर्गीकृत प्रयोगशाला की आवश्यकता के बिना एक बंद बाँझ वातावरण में प्रदर्शन किया जा रहा है। इसलिए, संदूषण का खतरा कम हो जाता है। यह सुनिश्चित करता है कि प्रक्रिया समान और पुन: प्रस्तुत करने योग्य है, और यह कि अंत-उत्पाद की गुणवत्ता हमेशा हर बार समान होती है (हालांकि, यह इनपुट ऊतक की गुणवत्ता पर भी निर्भर करता है)। डिवाइस पर अलगाव करना आसान है और इसके लिए विशेष रूप से शिक्षित ऑपरेटरों की आवश्यकता नहीं है।
डिवाइस की एक सीमा यह है कि मशीन में न्यूनतम इनपुट 100 ग्राम सूखा लिपोआस्पारेट है। जैसा कि सेल प्रोसेसिंग शुरू होने से पहले लिपोसक्शन पूरी तरह से समाप्त हो गया है (और हमारे मामले में, एक अलग स्थान पर, या में नहीं) हमारे अनुभव में, इसके लिए लिपोआस्पायरेट की मात्रा को 50 एमएल सिरिंज के किसी न किसी उपाय का उपयोग करके कम से कम 125 एमएल होने की आवश्यकता होगी। अन्यथा एक जोखिम है कि मशीन के साथ आगे बढ़ने के लिए पर्याप्त सामग्री नहीं होगी। इसके अलावा, ऊपरी अंत सीमा (अधिकतम इनपुट 425 एमएल है) का उपयोग करने के परिणामस्वरूप एक बहुत लंबी अलगाव प्रक्रिया होगी।
वसा ऊतक और अस्थि मज्जा दोनों से वयस्क स्टेम कोशिकाओं में भ्रूण स्टेम कोशिकाओं की तरह आत्म-नवीकरण और भेदभाव की क्षमता होती है। हीमोपोइटिक स्टेम कोशिकाओं पर एडीआरसी के फायदों में से एक अस्थि मज्जा21,22 की तुलना में प्रति ऊतक मात्रा में 100-500 गुना अधिक उपज है, और इसलिए, एडीआरसी को सुसंस्कृत होने की आवश्यकता नहीं है। इसके अलावा, हेमोपोइटिक स्टेम कोशिकाएं वसा ऊतक की तुलना में रोगी से फसल के लिए अधिक कठिन और अधिक दर्दनाक होती हैं। कई स्थितियों में, वसा ऊतक सर्जरी के बाद सिर्फ एक अपशिष्ट उत्पाद है। एंजियोजेनेसिस के लिए उपयुक्त उच्च उपज देने के लिए स्टेम कोशिकाओं को संस्कृति करना संभव है, हालांकि ताजा अलग-थलग एडीआरसी में सुसंस्कृत23 की तुलना में उच्च एंजियोजेनिक क्षमता हो सकती है।
Disclosures
लेखक सोरेन पी शेख ब्लू सेल थेरेप्यूटिक्स, कोपेनहेगन, डेनमार्क में सीईओ हैं।
Acknowledgments
इस काम की स्थापना Odense University Hospital (11/31936), The Danish Centre for Regenerative Medicine (14/50427) और डेनिश कैंसर सोसाइटी द्वारा की गई है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Liposuction | |||
| Abdominal Binder | Dale | Size depent of the patient | |
| Adhessive OP-towel | Mölnlycke Health Care | 906677 | 90x75 cm |
| Adrenalin 1 mg/ml | Amgros I/s | 74 44 23 | 1 ml |
| Basic OP supplies | Mölnlycke Health Care | 97010873-07 | |
| Carbon Steel blade 11 | Swann-Morton | ||
| Chlorhixidine Ethanol | Faarborg Pharma | 5% colored | |
| Disposable set Lipocollector 3 | Human Med | 670200 | |
| Extension hoses | Extrudan | 5.8/8.3 mm, Ch 25, 3,5 M long | |
| Gaze Rags | Barrier | 175201 | 30x45 cm |
| Jelonet | Smith and Nephew Medical Ltd | 90509225 | 10 x 10 cm |
| Marcaine 5 mg/ml + Adrenaline 5 micrigram | Astra Zeneca | 20 mL | |
| Mesorb Bandage | Mölnlycke Health Care | 677001 | 10x13 cm |
| Microlance | Becton Dickinson | 304622 | 18 G + 23 G |
| Monocryl suture | Ethicon | 04:00 | |
| Ringer-lactat | Fresinus Kabi | ||
| Sterile gloves | Gammex | 330052065 | |
| Surgical Gown | Mölnlycke Health Care | 690103-01 | |
| Surgical Marker | Richard-Allan | ||
| Surgical Mask | 3M | ||
| Syringe | Codan Medical | 6,28,402 | 50/60 ml cath tip |
| Syringe | Becton Dickinson | 700016181 | 1 ml |
| WAL- Applikator for cannulae 25/30 cm | Human Med | REF 500001 | |
| Isolation of ADRC's | |||
| 1 ml Syringe | Becton Dickinson | REF 303172 | |
| 3 way stopcock | One Med | REF 10554-01 | |
| Adhesive OP-towel | Mölnlycke Health Care AB | REF 906677 | 90x75 cm |
| Cytori Celution 800IV device | Cytori | ||
| Desinfection swaps | Mediq Danmark | 3340010 | |
| Microlance | Becton Dickinson | 25G (0,5*25 mm) | |
| Nitril Gloves | Abena | Powder free | |
| OR drape Sheet, 2 layers | Lohmann & Rauscher | REF 33005 | |
| Ringers Lactate | Fresinus Kabi | 06756 (DK) | |
| Sterile gloves | |||
| Sterile gown | |||
| Supplemental kit for Cytori Celution 800IV devise | Cytori | ||
| Termometer | Thomas Scientific | traceable | |
| Injection of ADRC's | |||
| Aperture drape | One Med | REF1565-01 | 75*90 cm |
| Desinfection swap | Mediq Danmark | 3340010 | |
| Pean | Leibinger | 32-01257 | |
| Silicone Vessel Loop | Purple Surgical | REF PS3203 | |
| Sterile gloves | Sempermed | Or Use your favorite |
References
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