Summary
Vascularized komposit transplantatavstötning erbjuder livsförändrande fördelar för transplantations mottagarna, men de biologiska orsakerna till transplantatavstötning och Vaskulopati är fortfarande dåligt förstådda. Den kirurgiska modellen som presenteras här erbjuder en reproducerbar, kliniskt relevant modell för transplantation, vilket gör det möjligt för forskare att utvärdera avstötnings händelser och potentiella terapeutiska strategier för att förhindra deras förekomst.
Abstract
Vascularized sammansatta allotransplantation (VCA) är ett relativt nytt område i rekonstruktiv kirurgi. Kliniska prestationer i mänskliga VCA inkluderar hand-och ansikts transplantationer och, mer nyligen, buk väggen, livmodern, och Urogenitala transplantationer. De funktionella resultaten har överskridit de initiala förväntningarna och de flesta mottagarna har en förbättrad livskvalitet. Men som klinisk erfarenhet ackumuleras, kronisk avstötning och komplikationer från immunsuppression måste åtgärdas. I många fall där transplantat har misslyckats, den orsakande patologi har varit ischemisk vasculopati. De biologiska mekanismerna för akut och kronisk avstötning i samband med VCA, särskilt ischemisk vasculopati, är viktiga forsknings områden. På grund av det mycket ringa antalet patienter med VCA behandlas dock utvärderingen av de föreslagna mekanismerna bättre i en experimentell modell. Flera grupper har använt djur modeller för att ta itu med några av de relevanta olösta frågorna i VCA avslag och vasculopathy. Flera modell mönster som involverar en mängd olika arter beskrivs i litteraturen. Här presenterar vi en reproducerbar modell av VCA heterotopisk bakben osteomyocutore flik i råtta som kan utnyttjas för translationell VCA forskning. Denna modell möjliggör en seriell utvärdering av transplantatet, inklusive biopsier och olika avbildnings metoder, samtidigt som en låg nivå av sjuklighet bibehålls.
Introduction
Rekonstruktiv kirurgi för den katastrofala vävnads förlusten från amputation, spräng skador, maligniteter, och medfödda defekter begränsas av till gången på vävnad från patienten och den ytterligare sjuklighet som orsakas på givar platsen. I vissa fall, såsom Bränn skador eller fyrsidiga amputerade, är livskraftig vävnad för återuppbyggnad inte tillgänglig från patienten. I 1964, den första moderna hand transplantation utfördes i Ecuador. Även om detta var en teknisk framgång, immunsuppression tillgänglig vid den tiden var otillräcklig för att förhindra avstötning, och transplantatet försvann på mindre än 3 veckor1. I 1998 och 1999, de första hand transplantationer i modern tid av immunsuppression utfördes i Lyon, France2 och Louisville, Kentucky, USA3. För den första tiden kunde rekonstruktiv kirurgar byta ut något liknande med något liknande. Ansikts transplantation utfördes först i 20054, och ett antal andra VCA-transplantat är nu rutinmässigt utförda, såsom buk väggen5, uterin, och Urogenitala transplantationer6.
Till skillnad från fast organ transplantation, de flesta VCA tekniker innebär närvaron av mycket antigena donator hud. Klinisk erfarenhet har fastställt att det akuta avstötning av huden är relativt lätt att kontrol lera, men kan bidra till kronisk avstötning av de underliggande vävnader och kärl, som inte svarar bra på behandling7. Den vaskulära dysfunktion i samband med en Alloimmun svar är ett mer olycksförande hinder för området VCA7. Makrovasculopathies leda till per fusion underskott, fördröjd läkning, och proinflammatoriska tillstånd. Både konflytande aggressiva stora kärl vasculopati och fokal intimans hyperplasi förekommer i hand transplanterade mottagare7. Dessutom, microvasculopathies sannolikt bidrar till VCA komplikationer samt och kan även leda till avslag händelser. Medan både immun och icke-immuna faktorer sannolikt spelar en roll i Vaskulopati av hand transplantation mottagare, de specifika mekanismerna främja distala kärl dysfunktion i VCA är inte kända, särskilt i samband med låggradig, kronisk avstötning. Dessa obesvarade frågor kräver utveckling av en djur VCA modell som gör det möjligt för den seriella bedömningen av transplantatet under den kliniska loppet av VCA avslag/underhåll och vasculopathy. En sådan modell kommer att erbjuda insikter i avstötning och vasculopati i ansiktet av immunsuppression, infektiös utmaning, och/eller andra postoperativa traumatisk skada8,9.
Presenteras här är en allogena råtta VCA heterotopisk hindlem osteomyocutore flik modell. Baserat på tidigare publicerade VCA-modeller är denna procedur tekniskt lätt att utföra, reproducerbar i ett stort antal, och uppvisar minimal morbiditet och obehag för mottagar djuret. Denna modell har utformats för att möjliggöra kliniska och histopatologiska bedömningar av VCA acceptans vs avslag, och ger en möjlighet att utvärdera underliggande immun försvar och icke-immunologiska mekanismer inblandade i avstötning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djur operationer utfördes i enlighet med protokoll som godkänts av University of Louisville s institutionella djur vård och användning kommittén (IACUC-godkänd protokoll 18198) och de nationella institut of Health (NIH) Guide för vård och användning av Laboratorie djur10. Fyra månader gammal hane brun-Norge (RT1. Enn) och 4-månaders-gammal hane Lewis (RT1. Al) råttor användes som VCA givare och mottagare, respektive.
1. skörd av donatortransplantat
- Sedate donator djuret med förångad isofluran som appliceras genom en kammare.
- Raka transplantatdonets område (bakbenet), liksom ljummen och buken. Efter det, behandla med hår borttagnings kräm för att minska mängden fuzz kvar av Clippers.
- Djupt bedövande donator djur som använder intraperitoneal (IP) Ketamin (60 mg/kg)/xylazin (15 mg/kg)/Acepromazin (2 mg/kg). Administrera en initial dos på 0,2 mL/100 g kropps vikt och ytterligare doser på 0,2 mL varje timme. För enkelhetens skull är det valfritt att utföra det här steget före steg 2.
- Kontinuerligt övervaka djur medan under anestesi för andning, kropps temperatur, och djup anestesi, med tån nypa tillbaka dragande reflex test.
- Administrera 30 e heparin lösning subkutant (SC) i skrud-området före operationen för att förhindra koagulering.
- Bär en mask, ett huvud omslag, en disponibel isolerings klänning, och engångshandskar.
- Placera donator djuret liggande på en värme dyna. Producera en steril kirurgisk fält genom prepping, skrubbning, och drainering Operations området inklusive både ventrala och dorsala aspekter av benet. Don sterila handskar.
- Gör en 3 cm hud snitt i ljummen konkavitet med skalpell blad #15 och reflektera ljumsk fett pad sidled med Iris sax.
- Exponera de vanliga femorala fartygen och placera en trådkrok med ett elastiskt band för att dra tillbaka mag musklerna.
- Med hjälp av en dissekera Mikroskop (40x), dissekera BLOMSTJÄLK proximalt från uppkomsten av den gemensamma femorala fartyg under ljumsk ligament och distalt om sammanflödet av popliteal fartyg i transplantatet.
- Använda microclips och bipolär juvelerare pincett, ligera och dela stora arteriella och venösa grenar, såsom laterala cirkumflex lår bens hals fartyg, ytliga stjärtfenan epigastriska fartyg, den saphenösa artären, och proximala stjärtfenan femorala fartyg, att mobilisera de viktigaste femorala fartygen. Cauterize några små grenar med hjälp av fina bipolär pincett.
- Gör en hudsnitt från mitten av den tidigare huden skära längs den ventrala sidan av bakbenet, till vristen området, med hjälp av Iris sax.
- Skär gracilis muskeln, liksom de andra adductor musklerna under den, i ett vertikalt sätt att exponera och ligera den mediala proximala genicular fartyg, djupt förgrening små fartyg, och ischiasnerven.
Anmärkning: Vid denna punkt, på ett separat Operations bord, bör den andra kirurgen intubera och bedöva (2.5% – 3% isofluran) det mottagande djuret. Detta gör det möjligt för kirurgerna att förbereda mottagar Operations stället i tid för transplantatplacering och minimera grafens ischemiska tid. - På donator djuret, göra omkretsriktningen hud snitt i nivå med knä och fotled. Disarticulate knäet och fotleden, ta bort främmande muskler och vävnad, och göra en vertikal hud snitt på rygg sidan av bakbenet för att frigöra transplantatet. Vid denna punkt, transplantatet (bestående av vadben och Tibia, täckt med relaterade muskler och hud ön näring genom sina Perforatorer) är ansluten endast av pedicle.
- Placera små klämmor så proximalt som möjligt på femorala artär och ven, och skär BLOMSTJÄLK så proximalt som möjligt, nära ljumsk ligament.
- För att spola graften av blod, injicera hepariniserad saltlösning (30 U/mL) i lår bens hals artären med en 27 G rodnad trubbig kanyl.
Anmärkning: Dilating artären före heparin Flush möjliggör enkel åtkomst för insättning av kanylen. Under flush, noga övervaka utflöde från femorala venen. När klar vätska lämnar femorala venen, stoppa Flush. - Linda den isolerade transplantatet i varm saltlösning fuktad gasväv och transportera den omedelbart till mottagar djurets bord. Vid denna tid, den mottagande kirurgiska stället bör redan vara beredd på vaskulär anastomosis.
- Efter transplantatskörden, euthanize omedelbart donator råtta via pneumothorax.
2. kirurgi för mottagar transplantation
- Efter sedering induktion med förångad isofluran appliceras genom en kammare, djupt bedöva det mottagande djuret via en ventilator-kontrollerade endotrakealtub och 2.5%-3% isofluran.
Anmärkning: I detta skede är donator råtta fortfarande bedövas. - Kontinuerligt övervaka hjärt frekvens, andnings frekvens, kropps temperatur, och djup anestesi av mottagar djuret, med hjälp av tå nypa tillbaka dragande reflex test.
- För att förhindra uttorkning och hypoglykemi, injicera 2 mL av Ringers lösning och 2,5% dextros subkutant i början och ytterligare 2 mL i slutet av operationen.
- Raka ljummen, sedan behandla med hår borttagnings kräm för att minska mängden fuzz kvar av Clippers.
- Bär en mask, ett huvud omslag, en engångs isolering klänning, och sterila handskar.
- Placera djuret liggande på en värme dyna. Applicera oftalmisk salva för att förhindra horn hinnan skrubbsår under anestesi. Producera en steril kirurgisk fält genom prepping, skrubbning, och draden Operations området.
- Gör en 3 cm hud snitt i ljummen konkavitet med skalpell blad #15 och reflektera ljumsk fett pad sidled med Iris sax.
- Exponera de vanliga femorala fartygen och placera en trådkrok med ett elastiskt band för att dra tillbaka mag musklerna.
- Ligate och dela Murphy grenar.
- Med hjälp av 10-0 av nylon avbrutna suturer, anastomose givar fartyg till mottagar fartyg via venös end-to-Side-teknik och arteriell end-to-end-teknik. Gradvis frigöra klämmor från artären och sedan venen. Övervaka de anastomotiska platserna för blödning och tillsätt ytterligare suturer om det behövs.
- Visuellt bedöma vaskulär anastomos för att säkerställa effektiv graft reperfusion.
- Insätta transplantatet i ljumsk fickan och orientera den upp och ner, med fotleden gemensamma överlägsen och knä leden sämre.
- Använda tucking suturer, säkra transplantatet till angränsande muskler. Stäng huden via avbrutna horisontella madrass hud resorberbara 4-0 suturer.
- Ta bort mottagar djuret från anestesi och avvanda det från ventilatorn. Placera djuret på en värme dyna för värme stöd.
Anmärkning: Den totala drift tiden är mellan 3 till 4 timmar, beroende på kirurgens erfarenhet och bekant skap med det kirurgiska ingreppet. - Administrera meloxikam (1 mg/kg) subkutant för smärt Lind ning och övervakning tills djuret är helt återhämtat och rörligt.
3. övervakning av VCA-mottagare
- House mottagaren råttor ensamma och övervaka dem dagligen för kliniska tecken på smärta, uttorkning, viktminskning, och minskad aktivitet utöver kirurgiska misslyckande (för de första 48-72 h) eller avslag. Administrera meloxikam subkutant (1 mg/kg) dagligen under de första 3 dagarna för smärt Lind-
- Baserat på forsknings Endpoint, Välj ett Immunsuppressivt läkemedel som ska administreras.
4. histologi
- Under inhalerad isofluran anestesi (2,5% – 3%), få den seriella huden och underliggande muskelbiopsier från givarens transplantat vid önskade tidpunkter. Huden bör skrubbas och drainerad innan du erhåller en biopsi, och ett sterilt fält och teknik bör utföras.
- Stäng såret med en till två stygn, med absorberbara 4-0 suturer. Returnera djuret till sin bur och låt den återhämta sig från anestesi.
- Fixera de biopsier vävnaderna i separata rör i 10% formalin.
- Vid terminalens tidpunkt och under inhalerad isofluran anestesi (2,5% – 3%), ta en större hudbiopsi som spänner över givar-/mottagar gränsen. Försiktigt lokalisera fartyget koppel par på platsen för anastomoser; den rätta platsen kommer att vara uppenbar på grund av suturer. Ta de önskade kärlet prover från artären och/eller ven. Fixa alla prover separat i 10% formalin. Efter insamling av vävnadsprover, och medan djuret är fortfarande under isofluran anestesi, omedelbart euthanize djuret via pneumothorax.
- Med hjälp av en vävnads processor (eller andra föredragna inbäddnings teknik), paraffin-bädda in varje biopsi i sitt eget block. För hudprover, orientera vävnaden så att alla Epidermal och hud lagren kan ses i en enda skiva. För fartygs prov, orientera kärlen så att tvärsnitt kan erhållas.
- Med hjälp av en mikrotom, skära 6 μm-tjocka sektioner och tillämpa dem på dia bilder för hematoxylin och eosin (H & E) färgning.
- Fläck för H & E med ett standard protokoll.
- Få representativa bilder av alla önskade vävnadsprover med hjälp av brightfield mikroskopi tekniker.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Råtta VCA heterotopisk bakbenet osteomyocutore flik modell möjliggör långvarig transplantatavstötning överlevnad under immunosuppression. Modellen är pålitlig, reproducerbar och enkel att utföra. Klaffen är väl gömd i ljummen och utgör minimal morbiditet och obehag för djuret. Hud presentationen är en klinisk manifestation av allografens överlevnad och avstötning (figur 1). Luckan designen möjliggör grov klinisk övervakning och skapar en möjlighet för olika Imaging tekniker, såsom Laser Doppler (figur 2). Seriella biopsier av hud, muskler och artärer gör det möjligt att uppnå histopatologisk uppföljning och analys vid olika avstötnings stadier (figur 3).
Figur 1 : Representativa bilder från transplanterade djur. (A) syngenisk VCA långtids överlevnad, utan immunsuppression, på postoperativ dag 45 (Pod 45); Notera skillnaden i riktning av päls tillväxt på grund av grafens inverterade orientering. (B) ALLOGEN VCA, som dagligen behandlas med ett Immunsuppressivt läkemedel, på pod 5. (C) ALLOGEN VCA långsiktig överlevnad, behandlas dagligen med ett Immunsuppressivt läkemedel, på pod 40; Notera normal päls tillväxt som indikerar korrekt per fusion av transplantatet, utan tecken på avstötning. (D) allogena VCA i avslag på POD 33. Immunosuppressiva behandling avbröts helt på POD 14; notera de kliniska tecknen på avstötning (hudatrofi, desquamation, förlust av päls). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2 : Laser Doppler Imaging system för att övervaka ytliga hud revaskularisering av allograft. Det transplantatavstötning som presenterades övervakades på postoperativa dagar 4, 14 och 64. Panelerna till vänster visar blod per fusion mätt med Doppler Imaging, medan panelerna på höger visar det område som avbildas av Doppler. Notera skiftet från minimal blod per fusion omedelbart efter VCA till full revaskularisering av klaffen på dag 64. Detta transplantatavstötning hölls under korrekt immunsuppression utan tecken på avstötning. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3 : H & E histopatologi av transplantatavstötning i syngena eller allogena transplantationer. (A) hudbiopsi av ett syngent transplantatavstötning på pod 45 (10x förstoring); Notera den normala morfologin av huden komponenter (epidermis, adnexa, och inga tecken på mononukleär cell infiltration). (B) hudbiopsi av ett allogent transplantat i AVSTÖTNING på pod 75, behandlas dagligen med en lägre dos av ett Immunsuppressivt medel (10x förstoring); epidermala atrofi, adnexa atrofi, mononukleära cell infiltration, perivaskulär infiltration, och kapillär trombos. (C) muskelbiopsi av ett syngent transplantatavstötning på pod 45 (10x förstoring); Notera den tvärstrimmig muskel normal morfologi. (D) muskelbiopsi av ett allogent transplantat i AVSTÖTNING på pod 98, behandlas dagligen med en lägre dos av ett Immunsuppressivt medel (10x förstoring); Notera muskelatrofi och mononukleär cell infiltration. (E) femoral artärbiopsi av en syngen transplantatavstötning på pod 45 (20x förstoring); Notera den normala morfologin av artären. (F) femoral artärbiopsi av ett allogent transplantat i AVSTÖTNING på pod 98, behandlas dagligen med en lägre dos av ett Immunsuppressivt medel (20x förstoring); Observera intimans hyperplasi, smala lumen, och perivaskulär infiltration. Skalbar = 200 μm (a–D); 100 μm (E och F). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I utvecklingen av denna modell av VCA, flera viktiga frågor övervägdes. Först var det viktigt att inkludera intakt ben (Tibia och Fibula), benmärg, och hud i transplantatet. Medan kliniska hand transplantationer från vuxna donatorer inte överföra betydande mängder aktivt hematopoetisk benmärg, studier av den roll som benmärg nisch är bättre speglas med en intakt, vaskulariserad ben snarare än en klippa lång ben, vilket resulterar i fibros i den exponerade märgen. Dessutom minskar den slutna ben osteomyocutore lock design risken för infektion och blödning. Både benmärg och hud är mycket immunogena vävnader, som kan användas för att utlösa ett immun svar om så önskas. För det andra var det inte nödvändigt för transplantatet att vara funktionella, vilket eliminerar behovet av en ortotopisk modell som kräver komplex osteosyntes och åter enervation av transplantatet. Detta förhindrar också några av de välkända besvär ande konsekvenserna av ortotopiska modeller, såsom ett långvarigt kirurgiskt ingrepp och djurens obehag11,12. Det är dock viktigt att notera att heterotopisk designen inte tillåter funktionella resultat åtgärder av ben och brosk, samt muskel funktion, som alla är av stort intresse för VCA forskning. För det tredje behövde transplantatet vara tillgängligt för avbildnings system, klinisk uppföljning och seriella biopsier. Slutligen, för genom strömning ändamål, ympning operationer som behövs för att vara lätt utföras utan komplikationer. Med dessa överväganden i åtanke, en modifierad råtta osteomyocutore modell av VCA utvecklades där distala bakbenet, mellan knä och fotled av givaren (Brown-Norge), inklusive den överliggande huden och tillhör ande kärl teckning, transplanterades in i ljumsk region på mottagaren (Lewis). I detta fall, den vaskulära tillförseln till transplantatet inträffade via femorala artär och ven anastomoser.
Eftersom huden är en viktig viktig faktor för att övervaka VCA avstötning, var särskild försiktighet vidtagits för att förbereda transplantatet för att bevara den lilla artären Perforatorer stödja huden per fusion. Vid upprättandet av denna modell, utförde vi preliminära experiment med indocyaningrönt grön (ICG) angiografi (resultat visas inte) för att bekräfta modellens hud per fusion design.
Eftersom graften är orienterad upp och ner, så att den distala delen av transplantatet är överlägsen och den proximala delen av transplantatet är sämre, en lång pedikel krävs för att undvika kinking. Därför bör det betonas att givaren femorala fartyg bör delas så proximalt som möjligt och att mottagaren femorala artären bör delas så distalt som möjligt.
Samtidig medverkan av två kirurger rekommenderas vid den slutliga beredningen/isoleringen av givar transplantatet. en kirurg bör avsluta transplantatisoleringen, medan den andra kirurgen bedövar och intubates mottagar djuret och börjar förbereda fartygen för anastomoser. Om utrymmet och utrustningen är tillgängliga kan en tredje kirurg förbereda ett andra mottagar djur och båda givar benen får användas för VCA-transplantat. Kirurger måste samordna med varandra för att säkerställa minimal graft ischemisk tid före anastomoser. Enligt vår erfarenhet är de flesta av de postoperativa mortaliteter hänföras till anestesi teknik. Om möjligt rekommenderar vi att en annan medlem i teamet ska ansvara för anestesi övervakning under operationen. Det är självklart att, för att kunna utföra denna modell framgångs rikt, krävs en utbildad kirurg med grundläggande mikrovaskulär teknik. Beroende på kirurgens erfarenhet, kan modellen uppnås framgångs rikt efter två till sex kirurgiska försök.
Syngena råttor kan användas som en kontroll grupp för att redogöra för helande dynamik utan samband med avslag. Den kontralaterala benet av mottagaren råtta kan också användas som en kontroll, särskilt när man utför avbildning och biopsier.
Päls återväxt över den transplanterade huden är en av de bästa indikationer på framgångs rik transplantatavstötning per fusion. Å andra sidan, päls förlust, hudrodnad, och de-epithelization kan tyda på en avvisande händelse och minskad blodtillförsel till vissa delar av luckan. I en mycket avancerad avstötnings fas kan huden Visa nekros och exfoliering. En minskning av transplantatavstötning muskel massa visas i ett framskridet stadium på grund av denervering atrofi. Djuren tappar vanligen kropps vikten (upp till 10%) under de första 7 – 10 dagarna, men sedan återhämta sig och frodas. Vi rekommenderar att lägga näringsmässigt berikade vatten gel (t. ex., DietGel Recovery) i de första postoperativa dagar för att stödja mottagaren råtta Nutrition. I ett mycket litet antal djur (två av över 50 försöks djur), bevittnade vi hud infektion och autophagy.
Sammanfattnings vis, den modifierade modellen av heterotopisk, allogena bakbenen osteomyokutan VCA graft presenteras här erbjuder en reproducerbar, mångsidig transplantation paradigm. Seriella biopsier och bild behandling ger information om tidpunkten för avstötnings händelserna. Mångfalden av kliniska symtom som kan studeras med denna metod gör det en mycket anpassningsbar translationell modell med potential för många insiktsfulla upptäckter under de kommande åren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av kansliet för biträdande sekreterare i försvaret för hälso frågor genom Kongressiskt riktat medicinskt forsknings program under Award nr. W81XWH-13-2-0057. Åsikter, tolkningar, satser och rekommendationer är de av författarna och är inte nödvändigt vis godkänts av försvarsdepartementet.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acepromazine | Henry Schein | 5700850 | |
| Adventitia Scissors | ASSI | SAS15R8 | |
| Approximator Clamp (Double) | ASSI | ABB2V, ABB22V | |
| Approximator Clamp (single) | FST | 00398-02 | |
| Clamp Applying Forceps | ASSI | CAF4 | |
| Dissecting Scissors | ASSI | SDS18R8 | |
| Flushing blunt needle 27 G | SAI | ||
| Heparin Sodium | Sagent | 25021-400-30 | |
| Isoflurane | Patterson Veterinary | 14043-704-06 | |
| Jewelers Bipolar | ASSI | 103000BPS03 | |
| Jewelers forceps #3 | FST | 11231-30 | |
| Ketamine HCl 100 mg/mL | Zoetis | 043-304 | DEA License required |
| Lactated Ringer Solution | Hospira | 0409-7953-03 | |
| Lactated Ringer Solution + 5% Dextrose | Hospira | 0409-7953-09 | |
| Meloxicam | Henry Schein | 11695-6925-2 | |
| Micro forceps | ASSI | JFAL3 | |
| Micro needle holder | ASSI | B138 | |
| Prograf (Tacrolimus) 5 mg/mL | Astellas | 0469-3016-01 | |
| Suture, 10-0 Prolene | Ethicon | W2790 | or 10-0 Ethilon (2830) |
| Suture, 4-0 Coated Vicryl | Ethicon | J714D | |
| Vessel Dilator Forceps | ASSI | D5AZ | |
| Xylazine | VetOne | 13985-612-50 |
References
- Gilbert Fernandez, J. J., Febres-Cordero, R. G., Simpson, R. L. The Untold Story of the First Hand Transplant: Dedicated to the Memory of one of the Great Minds of the Ecuadorian Medical Community and the World. Journal of Reconstructive Microsurgery. , (2018).
- Dubernard, J. M., et al. Human hand allograft: report on first 6 months. Lancet. 353 (9161), 1315-1320 (1999).
- Jones, J. W., Gruber, S. A., Barker, J. H., Breidenbach, W. C. Successful hand transplantation. One-year follow-up. Louisville Hand Transplant Team. The New England Journal of Medicine. 343 (7), 468-473 (2000).
- Devauchelle, B., et al. First human face allograft: early report. Lancet. 368 (9531), 203-209 (2006).
- Broyles, J. M., et al. Functional abdominal wall reconstruction using an innervated abdominal wall vascularized composite tissue allograft: a cadaveric study and review of the literature. Journal of Reconstructive Microsurgery. 31 (1), 39-44 (2015).
- Kollar, B., et al. Innovations in reconstructive microsurgery: Reconstructive transplantation. Journal of Surgical Oncology. 118 (5), 800-806 (2018).
- Kaufman, C. L., et al. Graft vasculopathy in clinical hand transplantation. American Journal of Transplantation. 12 (4), 1004-1016 (2012).
- Brandacher, G., Grahammer, J., Sucher, R., Lee, W. P. Animal models for basic and translational research in reconstructive transplantation. Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 96 (1), 39-50 (2012).
- Kaufman, C. L., et al. Immunobiology in VCA. Transplantation International. 29 (6), 644-654 (2016).
- Committee for the Update of the Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Institute for Laboratory Animal Research, Division on Earth and Life Studies, National Research Council of the National Academies. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, 8th edition. , National Academies Press. Washington, DC. (2011).
- Nazzal, J. A., Johnson, T. S., Gordon, C. R., Randolph, M. A., Lee, W. P. Heterotopic limb allotransplantation model to study skin rejection in the rat. Microsurgery. 24 (6), 448-453 (2004).
- Ulusal, A. E., Ulusal, B. G., Hung, L. M., Wei, F. C. Heterotopic hindlimb allotransplantation in rats: an alternative model for immunological research in composite-tissue allotransplantation. Microsurgery. 25 (5), 410-414 (2005).
