Summary
Klinik olarak, menopozal kadınlarda östrojen eksikliği lipid bozulması ve ateroskleroz insidansını ağırlaştırabilir. ApoE-/- farelerde çift dorsal-lateral kesi ile bilateral ovariektomi ile in vivo östrojen eksikliği modeli oluşturduk. Fare modeli menopoz sonrası kardiyovasküler disfonksiyon eksojen östrojen tedavileri tarama için geçerlidir.
Abstract
Postmenopozal kadınlar premenopozal kadınlara göre kardiyovasküler hastalıklara yakalanma riski daha fazladır. Kadın fareler ovariectomized (OVX) weaning ekranda bozulmamış yumurtalık fonksiyonu ile kadın fareler ile karşılaştırıldığında aort aterosklerotik lezyonlar arttı. Ancak, ateroskleroz eğilimli durumu ile östrojen eksikliği fareler içeren laboratuvar modelleri eksiktir. Menopozal kadınlarda klinik östrojen eksikliği önceden var olan veya devam eden lipid bozulması ve ateroskleroz insidansını ağırlaştırabilir, çünkü bu açık çok önemlidir. Bu çalışmada apolipoprotein E (apoE)-/- farelerde çift dorsal-lateral kesi ile bilateral ovariektomi ile in vivo östrojen eksikliği olan bir fare modeli oluşturuldu. Daha sonra 17β-estradiol ve psödoprotodiosin (PPD) (bir fitoöstrojen) peroral fındık yayılması yoluyla uygulanan etkilerini karşılaştırın. PPD'nin OVX apoE-/- farelerde nihai vücut ağırlığını ve plazma TG'yi azaltmada bir miktar etki yemesine rağmen, 17β-estradiol muadili ile karşılaştırılabilir anti-aterosklerotik ve kardiyak koruyucu kapasitelere sahip olduğunu görüyoruz. PPD anti-tümör özellikleri uygulamak için bildirilmiştir bir fitoöstrojen olduğunu. Bu nedenle, önerilen yöntem postmenopozal kadınlarda geleneksel hormon replasman tedavisi yerine peroral uygulama yoluyla fitoöstrojentarama için geçerlidir, potansiyel olarak zararlı tümörigenetik olduğu bildirilmiştir Kapasite. Fındık yayılımı yoluyla peroral uygulama noninvaziv, yaygın birçok hasta için geçerli hale. Bu makalede, apoE-/- farelerde çift dorsal-lateral kesi ve fındık yayılımı yoluyla peroral 17β-estradiol veya fitoöstrojen hormon replasmanı yoluyla ikili ovariektominin adım adım gösterilişi yer almaktadır. Ekokardiyografi ile plazma lipid ve kardiyovasküler fonksiyon analizleri takip eder.
Introduction
Epidemiyolojik ve klinik çalışmalar postmenopozal kadınların premenopozal kadınlara göre kardiyovasküler hastalık riski çok daha fazla olduğunu göstermiştir1,2. Hormon replasman tedavisi (HRT) kardiyovasküler hastalık göreceli riskini azaltabilir 0.37-0.793. Diğer komplikasyonlar ın yanı sıra, kardiyovasküler hastalıkların neden olduğu ateroskleroz dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir4. Ancak, ateroskleroz eğilimli durum sunan östrojen eksikliği fareler içeren laboratuvar modelleri eksiktir. Bu protokol menopoz sonrası kardiyovasküler disfonksiyon eksojen östrojen tedavileri tarama için bir in vivo östrojen eksikliği fare modeli sağlar.
Önceki çalışmalar da yüksek kolesterol diyet beslenen aterosklerotik kemirgenler OVX uygulaması aterosklerozmuzdarippostmenopozal kadınlar taklit edebilirsiniz göstermektedir5 ,6,7,8. Menopozal kadınlarda aterosklerotik durumu andıran tekrarlanabilir ve uygun bir hayvan modeli eksojen östrojen araştırmalarının temelidir. Burada ateroskleroz-prone apolipoprotein E nakavt (apoE-/-)farelerdebilateral ovariektominin çift dorsal-lateral kesisi uygulanmıştır. Orta karın veya dorsal insizyon ile karşılaştırıldığında, çift dorsal-lateral insizyon şiddetli karın boşluğu adezyon ve inflamasyon önleyebilirsiniz daha kolay, daha az zaman alıcı bir yöntemdir. Fındık yayılımı yoluyla peroral uygulama (Bkz. MalzemeTablosu) noninvaziv ve kullanışlıdır, uzun vadeli bir yönetim modu 11 olarak yaygın olarak uygulanabilir hale. Yavaş salınımlı pelet implantasyonu da popüler6. Ancak implantlar özellikle OVX'e maruz kalan farelerde enfeksiyon insidansını ağırlaştırabilir. Oral gavaj ve su idaresi gibi diğer noninvaziv yönetim modları da birçok dezavantajları vardır. Oral gavage genellikle fareleri strese sosif ve özofagus yaralanmasına neden olabilir. İçme suyu ile hormon verilmesi son derece yararlıdır; ancak, ekseksen östrojenler suda çözünmez olduğu gibi bir emülgatör olarak DMSO eklenmesi kaçınılmazdır. Burada, uzun süreli uygulama için fındık yayılmış yoluyla peroral 17β-estradiol veya fitoöstrojen hormon replasmanı seçti.
Son zamanlarda, postmenopozal kadınların kardiyovasküler sistem üzerinde HRT yararlı etkisi kadın sağlığı girişimi (WHI) çalışmalarda itiraz edilmiştir12. Bir yandan, eksojen östrojen tek başına kardiyovasküler sistem üzerinde yararlı bir etki uygular; Öte yandan, bu kardiyovasküler olayların riskini artırmak için metohidroksiprogesteron asetat ile birleştirebilir. Daha ciddi, HRT meme ve rahim tümörü ilerlemesine yol açabilir, ve bu etki belirgin kullanımı sınırlı olmuştur13,14. Daha fazla ilgi tümör hücrelerinde mitotik aktivite olmayan eksojen östrojenlerin kardiyovasküler-koruyucu etkileri üzerinde duruldu15,16,17. Insanlar ve hayvanlarda birden fazla çalışma, östrojenbenzer yapıları ile fitoöstrojenler kardiyovasküler koruma yararlı bir rol oynayabilir düşündürmektedir15,18.
Bu nedenle, bu çalışmanın amacı (i) apoE-/- farelerde çift dorsal-lateral kesi ile bilateral ovariektomi ile in vivo östrojen eksikliği fare modeli oluşturmak ve (ii) peroral kardiyovasküler koruyucu etkilerini karşılaştırmak için fındık yayılımı yoluyla 17β-estradiol ve psödoprotodiosin (PPD) uygulanır. 17β-estradiol kadın cinsel hormonlar6,11,19ait eksojen östrojen bir türüdür. PPD, Dioscorea bitkilerden bir steroid saponin ve fitoöstrojen, daha önce anti-tümör özellikleri uygulamak bildirilmiştir20.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvan bakımı ve deneysel protokoller Çin Tıp Bilimleri Akademisi ve Pekin Birliği Tıp Koleji Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (İzin No.: SYXK (Pekin) 2013-0023). ApoE-/- farelerin kökeni C57BL/6J9,10'dur.
1. ApoE-/- Farelerde Çift Dorsal-lateral Kesi ile Bilateral Ovariektomi
- Evlendirmede (28 gün), avertin (tribromoetanol; 200 mg/kg; intraperitoneally) ile dişi apoE-/- C57BL/6J fareler anestezik.
NOT: 32 apoE-/- fare rastgele 4 gruba ayrıldı: SHAM, OVX, OVX/E2 ve OVX/PPD grubu (grup başına n = 8). - Bir ısıtma yastığı üzerinde eğilimli pozisyonda hayvan yerleştirin. Anestezi sırasında göz koruması için göz yağlayıcı uygulayın.
- Vücut ısısını 36 ± 0,5 °C'de koruyun. Analjezik karprofenin 5 mg/kg vücut ağırlığını farenin boynunun lateral yönüne subkutan olarak uygulayın.
- Iliak tepeden 3 x 5 cm2 fare alanını sefalik olarak tıraş edin. 3 x 5 cm2 diyafram cerrahi levha ile hayvan kaplama önce, iyot ve daha sonra% 70 etanol ile iyice tıraş alanı temizleyin. Deney sırasında steril aletler ve eldivenler kullanın.
- Orta hatta 1 cm lateral ve costal kaburga 1 cm lateral yapmak için makas ve forceps kullanın.
- Deri altı dokuyu forceps kullanarak kesip inceleyin.
- Karın boşluğundaki beyaz yağ dokusunu tanımlamak için diseksiyon gözlüklerini (Bkz. MalzemeTablosu) kullanın.
- Karın boşluğuna ulaşılıncaya kadar fasya dan 0.5-1 cm'lik bir kesi yapmak için mikrosksorve mikrokoseps kullanın.
NOT: Sahte işletilen grup için, yaraları doğrudan kapatın. Tekfilament sütür kullanarak kas tabakasını ve deriyi ayrı ayrı dikin. - Karın boşluğundaki beyaz yağ dokusu görülebildiği zaman, mikroforceps kullanarak yağ dokusu kapmak ve yavaşça dışarı çekin. Karın boşluğunda yağ dokusu ile sarılmış pembe dut şeklinde bir yumurtalık görülebilir.
- 0,5-1 cm proksimal damar ılıman ve rahim boynuzu bir monofilament dikiş kullanarak. Mikroskalatör kullanarak yumurtalık çıkarın ve karın boşluğuna geri kalan doku yerleştirin.
NOT: OVX operasyonunun başlıca yan semptomları, OVX ile çalışan farelerde yüksek mortaliteye yol açan üreteral ligasyondur. Bu bir diseksiyon gözlüğü kullanarak dokuların belirlenmesi ile önlenebilir. - Yaraları kapatın. Tekfilament sütür kullanarak kas tabakasını ve deriyi ayrı ayrı dikin.
- Başka bir kesi yapmak için makas ve forceps kullanın 1 orta hatta lateral cm ve diğer tarafta costal kaburga 1 cm lateral. Yukarıdaki yordamı tekrarlayın (1,5 ila 1,11).
- Hayvan anesteziden uyansın. Ayrı ayrı ameliyattan sonraki ilk gün fare tutun.
- Kurtarma aşamasında kafesi sık sık temizleyin veya değiştirin.
- Ameliyattan yaklaşık 24 saat sonra, analjezik karprofenin vücut ağırlığını 5 mg/kg vücut ağırlığına subkutan olarak uygulayın.
2. Fındık Yayılımı ile 17β-estradiol veya PPD Peroral İdaresi
- Susam yağı içinde 17β-estradiol veya PPD'yi iyice eritin ve susam yağını fındık serpmesiyle karıştırın (Bkz. MalzemelerTablosu). Her 30 g fare için günlük bir porsiyon 17β-estradiol veya PPD 15 μg 3 μg, 4 l susam yağı ve fındık yayılmış 60 mg içerir. Her 30 g fare için bir plasebo hazırlamak 4 susam yağı ve fındık yayılmış 60 mg içerir.
NOT: 17β-estradiol veya PPD'nin günlük yönetim kısmıönceki çalışmalar6,11 ve ön deneylere dayanıyordu. - OVX sonra bir hafta, 12 hafta boyunca yüksek kolesterol diyet (%1.25 kolesterol, 0% cholate) ile fareler beslemek. Bu çalışmada kullanıldığı gibi tipik bir deneysel tedavi şeması Şekil1'de gösterilmiştir.
- 4. haftada yayılan fındığın peroral uygulamasından 5 gün önce, fareleri yaklaşık 30 mg fındık içeren plaseboyu 5 gün boyunca 2-5 fareye yaymaları için eğitin. İlk 3 gün boyunca fareleri ev kafeslerinde gruplar halinde eğitin. Eğitim dördüncü ve beşinci gün ayrı kafeslerde fareler yerleştirin ve deneysel durum benzemek için günlük kısmı hizmet vermektedir.
- Son 9 hafta boyunca fareleri ayrı kafeslere yerleştirin ve her beslenme vesilesi için günlük fındık yayılımı porsiyonu servis edin.
NOT: Ovx/E2 ve OVX/PPD grubunda fındık serpme yoluyla sırasıyla 17β-estradiol (0.1 mg·kg-1) veya PPD (0.5 mg·kg-1)içeren günlük porsiyon hizmet; SHAM ve OVX grubunda hormonsuz fındık serpme içeren günlük bir porsiyon hizmet vermektedir.
3. Mikroultrason Sistemi Kullanarak İntima-Media Kalınlığı ve Kardiyak Disfonksiyonun Belirlenmesi
-
Ultrasonografik biyomikroskopi
- Fesihbir gün önce, intima-media kalınlığı ve kardiyak disfonksiyon bir mikroultrason sistemi kullanarak incelemek (Malzemeler Tablosubakınız) daha önce açıklandığı gibi21.
- Muayeneden önce, her fareye anestezi (grup başına n = 8 fare) olarak 200 mg/kg intraperitoneal avertin (tribromoetanol) enjeksiyonu verin.
- Her farenin boyun kıllarını dikkatlice tıraş edin. En iyi görüntü kalitesini sağlamak için sıcak ultrason iletim jelini serbestçe uygulayın.
- 12,7 mm odakve 40 μm çözünürlükte 30 MHz'lik tbmköz kafa ile aort kökünün ve yükselen aortun temel ultrasonografik görüntülerini elde edin.
- İzleme için kurşun II konfigürasyonu ile elektrokardiyografi kullanın.
- Systole bir düzlemde yükselen aort, aort kemerve brakiyosefalik arter dalı sağ parasternal uzun eksenli görüntüleri yakalayın (Şekil3).
-
İntima-media ve maksimal plak kalınlığı ölçümleri
- Net görüntüler elde etmek için transdüser ve arteriyel bölge arasındaki mesafeyi kolayca ayarlayın.
- Görüntü analiz sisteminde çevrimdışı inceleme için 10'lar cine döngüyü dijital olarak saklayın.
- Daha fazla ölçüm için el ile en uygun dondurma çerçevesi ultrasonografik görüntü seçin. Yükselen aort küçük eğrilik görüntüleri kontrol edin. Artan aortta plak görülebiliyorsa, maksimal plak kalınlığını ölçün. Artan aorttaki plak görülemiyorsa, maksimal IMT'yi ölçün.
- IMT'yi ölçün (vasküler luminal-intimal arabirimi ile medial-adventif arabirim arasındaki mesafe). Maksimum plak kalınlığını ölçün (vasküler lümen ve adventif tabaka sınırı arasındaki en kalın mesafe).
- Üç lezyon sitesinden ortalama veri (Şekil3).
-
Ekokardiyografi ile kardiyak disfonksiyon tayini
NOT: Daha önce açıklandığı gibi, bir mikroultrason sistemi kullanarak ekokardiyografi yoluyla kardiyak fonksiyon inceleyin22.- Kalp doğru bir ultrason ışını doğrudan, papiller kasların yakın.
- İki boyutlu elektrokardiyogram tabanlı kilohertz görselleştirme elde edin.
- Sol ventrikülün in vivo transtorasik ekokardiyografisini 30 MHz'lik bir tazyik kafası kullanarak gerçekleştirin.
- M-mod izlemelerinden kardiyak fonksiyonla ilişkili parametreleri dijital olarak ölçün.
- Üç ila beş kardiyak döngüdenortalama veri (Tablo 1).
-
İç ve intergözlemci değişkenliği
- Gözlemci değişkenliğinin doğrulanması için, verileri iki farklı durumda bir operatör tarafından analiz edin.
- Gözlemciler arası değişkenliğin değerlendirilmesi için, verileri farklı bir işleç tarafından analiz edin.
4. Haftalık Vücut Ağırlığı Ölçümü ve Plazma Toplam Kolesterol (TC) ve Trigliserid (TG) Tayini
- Haftalık vücut ağırlığı ölçümü
- Hafta -1'den 12 haftaya kadar haftada bir vücut ağırlıklarını ölçün.
NOT: grup başına n = 8 fare.
- Hafta -1'den 12 haftaya kadar haftada bir vücut ağırlıklarını ölçün.
- Plazma hazırlığı
- İntrakardiyak delinme yoluyla kan örnekleri toplamadan önce şırınga ve tüpler hazırlayın. EDTA'yı antikoagülan olarak kullanın. Her 2 mL şırıngaya 10 μL 0,5 M EDTA ekleyin ve her 1,5 mL tüpe 0,5 M EDTA 8 l ekleyin.
- 12. haftada, bir gecede hızlı bir şekilde fareleri avertin (tribromoetanol; 200 mg/kg; intraperitoneally) ile anestezik.
NOT: grup başına n = 3 fare. - % 70 etanol ile ventral göğüs bölgesihazırlayın.
- Göğüs boşluğu açmak ve atan kalp maruz kalana kadar kaburga kesmek için makas ve forceps kullanın.
- 25 G iğneyi sağ ventriküle takın. Kan şırınganın içine akmaya başlayana kadar yavaşça aspire edin.
NOT: Steril durumda 25 G iğneile tek kullanımlık şırıngalar kullanıyoruz (Bkz. MalzemeTablosu). - Sabit, eşit basınçla aspire etmeye devam edin. Kan görülmezse, iğneyi yeniden konumlandırın ve aspirasyonu tekrarlayın.
- Gerekli kan hacmitoplamadan önce fareler derinden anestezi tutun. Normalde 1 mL'ye kadar kan toplanabilir. Bu derin anestezik durum altında servikal çıkığı ile fareler ötenazi.
- Pipet kan örnekleri 1,5 mL tüpler içine ve iyice kan içine EDTA karıştırma sağlamak için kan ters. O zaman kan örneklerini hemen buza yerleştirin.
- 30 dk içinde 4 °C'de 400 x g'de 20 dk santrifüj numuneleri.
- Supernatant dikkatle toplayın. Aliquot ve depolamak plazma örnekleri -80 °C.
- TC veya TG içerik ölçümü için standart eğriler oluşturma
- TC standart eğrisi için, kolesterol standartlarının çeşitli konsantrasyonlarını hazırlayın: 0 mmol/L, 0.52 mmol/L, 1.03 mmol/L, 2.07 mmol/L, 4.14 mmol/L, 6.20 mmol/L, 8.27 mmol/L ve 10.34 mmol/L. Ölçü O.D. her kolesterol standardı için. Her kolesterol standardı için ortalama o.D. ayarlayın. Dikey (Y) eksen değeri olarak, konsantrasyonu yatay (X) eksen değeri olarak ayarlayın. İstatistiksel bir yazılım kullanarak standart bir eğri oluşturun.
- TG standart eğrisi için, tg standartlarının çeşitli konsantrasyonlarını hazırlayın: 0 mmol/L, 0,45 mmol/L, 0,90 mmol/L, 1,81 mmol/L, 3,62 mmol/L, 5,42 mmol/L, 7,23 mmol/L ve 9,04 mmol/L. Ölçü O.D. her TG standardı için. Her TG standardı için ortalama o.D.'yi dikey (Y) eksen değeri olarak ayarlayın; konsantrasyonu yatay (X) eksen değeri olarak ayarlayın. İstatistiksel bir yazılım kullanarak standart bir eğri oluşturun.
NOT: Bu çalışmada standart eğri yapımı için dört parametreli Lojistik eğri montajı (4-pl) kullanılmıştır. Plazma örneklerini ölçmeden önce standart eğriyi kontrol edin ve r 2'nin 0,995'ten büyük olduğundan emin olun.
- TC içerik ölçümü
- TC sayma kitinden renk reaktifi şişesini (25 mL) "TC Çalışma Çözümü" olarak etiketlendirin.
- Soğumuş numuneleri kısa bir süre girdap. Seyreltmeleri hazırlayın: 80 μL distile suda 20 μL plazma. Kısaca girdap seyreltmeleri.
- 96 kuyulu bir plakanın uygun kuyularına 2,5 l kolesterol standardı (5,17 mmol/L) veya seyreltilmiş plazma veya 2,5 μL distile su (boş) ekleyin. Triplikasyon önerilir.
- Tüm kuyulara, renk reaktifinin 250°L'sini ekleyin.
- 37 °C'de 10 dk kuluçkaya yatırın.
- Mikroplaka okuyucuyu açın ve 10 dk ısınmaya izin verin.
- Plakayı(lar) kuvözden çıkarın ve 510 nm'de mikroplaka okuyucuyu okuyun. Mikrotiter kuyularında veya plakanın alt kısmında sırasıyla kabarcık veya toz bulunmadığından emin olun.
- TC konsantrasyonu aşağıdaki gibi hesaplayın:
TC cont. = kolesterol standartları cont. × (plazma örneği O.D.-boş O.D)/(kolesterol standartları O.D.-boş O.D)
- TG içerik ölçümü
- TG tsay kitinden renk reaktifi şişesini (25 mL) "TG Çalışma Çözümü" olarak etiketleyin.
- Soğumuş numuneleri kısa bir süre girdap.
- 96 kuyulu bir plakanın uygun kuyularına 2,5 l TG (2,26 mmol/L) veya seyreltilmiş plazma veya 2,5 μL distile su (boş) ekleyin. Triplikasyon önerilir.
- Tüm kuyulara, renk reaktifinin 250°L'sini ekleyin.
- 37 °C'de 10 dk kuluçkaya yatırın.
- Mikroplaka okuyucuyu açın ve 10 dk ısınmaya izin verin.
- Plakayı(lar) kuvözden çıkarın ve 510 nm'de mikroplaka okuyucuyu okuyun.
NOT: Mikrotiter kuyularda veya plakanın alt kısmında kabarcık veya toz bulunmadığından emin olun. - TG konsantrasyonu aşağıdaki gibi hesaplayın:
TG cont. = TG standartları, × (plazma numunesi O.D.-boş O.D)/(TG standartları O.D.-boş O.D)
5. En Atortik Aterosklerotik Lezyonların Yüz Analizi
- Aort izolasyonu ve eksizyonu
- 12. haftada, bir gecede hızlı bir şekilde fareleri avertin (tribromoetanol; 200 mg/kg; intraperitoneally) ile anestezik. Bu derin anestezik durum altında servikal çıkığı ile fareler ötenazi.
NOT: Grup başına 3 fare kullandık. - % 70 etanol ile ventral göğüs bölgesihazırlayın. Göğüs boşluğu açmak ve atan kalp maruz kalana kadar kaburga kesmek için makas ve forceps kullanın.
- 50 mL'lik bir şırıngayı pH 7.4'te fosfat tamponlu tuzlu ile doldurun (bkz. MalzemelerTablosu). Sol ventriküliçine 25 G iğne yerleştirin ve perfüzyondan yüksek basınç tan kaçınmak için sağ atriyumu kesin.
- Yerinde perfüzyonu 0.05-0.08 mL/dk.
- Makas ve forceps ile torasik kavite kaburga ve akciğerleri çıkarın. Sonra, karın boşluğu açın ve aort daha iyi bir görünüm için içinde organları çıkarın.
- Mikroforceps ile kalp tutarak ve iliak bifurkasyon kadar mikroscisssors ile omurga dorsally aortu ayırarak aort çıkarın.
NOT: Böbrek atriyal dalları yakınında diseksiyon yaparken, aort hasarı önlemek için mikroskalaz kullanarak derinden kesilmiş. - Kalp ve aortu %4 paraformaldehitte 48 saat eve sabitle. Aortu tuzlu sularda oda sıcaklığında veya 2-8 °C'de birkaç saat saklayın.
NOT: Bu işlem temizliği kolaylaştıracaktır.
- 12. haftada, bir gecede hızlı bir şekilde fareleri avertin (tribromoetanol; 200 mg/kg; intraperitoneally) ile anestezik. Bu derin anestezik durum altında servikal çıkığı ile fareler ötenazi.
- Aort hazırlanması
- Kalbi çıkar. Stereomikroskop altında mikrokops ve mikrosisepsörler kullanarak aortlardan adventif dokuları dikkatlice çıkarın. Temizlik sırasında doku nemli tutmak için tuzlu kullanın.
NOT: Gözyaşı veya aort nick ve bazı önemli dalları dikkatli olun, innominate arter gibi, ortak karotis arter sol, ve sol subklavian arter. - Innominate 1 mm bırakın ve ortak karotis arterler sol ve tüm sol subklavian arter kesti.
- Kesin innominate arter yoluyla dış eğrilik açık, sonra sol ortak karotis arter, ve sonra sol subklavian arter.
- Karın kısmının altına yükselen kısmın iç eğriliği boyunca açık kesin.
- Siyah plastik bir levha üzerine aort düz pin ve kurumasını aort tutmak için tuzlu uygulayın.
- Kalbi çıkar. Stereomikroskop altında mikrokops ve mikrosisepsörler kullanarak aortlardan adventif dokuları dikkatlice çıkarın. Temizlik sırasında doku nemli tutmak için tuzlu kullanın.
- Aort intimal bölgenin görüntüsü
- Stereo mikroskopile yüz aortlarının fotoğraflarını çekin. Ölçümleri kalibre etmek için görüntülere bir milimetre ölçekli cetvel ekleyin.
- Kemer ve torasik bölgeleri aynı görüntüye, karın bölgesini ise başka bir görüntüye dahil edin. Görüntüleri JPEG veya TIFF olarak kaydedin.
NOT: Kemer bölgesi miyokardin kesiştiği yerden sol subklavian arterden 3 mm distal, torasik bölge sol subklavian arterden son interkostal artere 3 mm distal ve abdominal bölge iliyak'a giden son interkostal arterdir. Çatallanma.
- Aterosklerotik lezyon-en yüz yönteminin nicelleştirilmesi
- Kalibrasyon
- Görüntüyü görüntü analiz yazılımıyla açın (Bkz. MalzemeTablosu), Mekansal Kalibrasyon'a gidin ve talimatları izleyin.
- Cetveli çizgiüzerinde konumlandırarak referans birimlerini mm olarak değiştirin.
- Ölçüm
- Her görüntü için doğru kalibrasyon ayarlayın.
- Cetvelüzerinde 3 mm ölçün.
- Kemer ve torasik bölge ölçümü: Miyokardkavşağından sol subklavian arterden 3 mm distal ve sol subklavian arterden sol subklavian artere 3 mm distal torasik bölgeye kadar kemer bölgesini son interkostal artere kadar anahat. Kemer ve torasik bölgede lezyonların izini sürmek ve mikroskoptan aorta bakmak.
- Abdominal bölge ölçümü: Torasik bölgenin sonundan iliak bifurkasyona kadar karın bölgesini anahat. Abdominal bölgede lezyonların izini sürmek ve mikroskopla aorta bakın.
- Aort iç yüzeyine göre lezyon alanını hesaplayın.
- Çalışma gruplarını kör eden ikinci bir gözlemci aracılığıyla niceliği doğrulayın.
- Kalibrasyon
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Bu çalışmada kullanıldığı gibi tipik bir deneysel tedavi şeması Şekil1'de gösterilmiştir. Evlendirme de (28 gün), dişi apoE-/- C57BL/6J fareler ile anestezi edildi (tribromoetanol; 200 mg/kg; intraperitoneally). Fareler 1 cm'lik dorsal kesi ile iki taraflı OVX veya sham ile işletildi. Bir hafta bilateral OVX sonra, fareler 12 hafta boyunca yüksek kolesterol diyet (%1.25 kolesterol, 0% cholate) beslendi. 17β-Estradiol (0.1 mg·kg-1) veya PPD (0.5 mg·kg-1)tedavinin son 9 haftasında fındık serpme yoluyla peroral olarak uygulandı. Tüm fareler haftalık tartılırdı. Şekil2'de gösterildiği gibi, östrojen eksikliğinden sonra apoE-/- farelerin plazma lipidleri ve haftalık vücut ağırlığı üzerinde hem eksojen östrojenlerin (17β-estradiol ve PPD) etkileri değerlendirildi. Yüksek kolesterol diyet 12 hafta sonra, OVX fareler plazma TC ve TG konsantrasyonlarında dikkate değer bir artış gösterdi. Fındık serünü ile 17β-estradiol veya PPD ile peroral olarak uygulanan OVX fareler, şamlı çalışan farelere göre önemli ölçüde daha düşük plazma TC konsantrasyonları sergilenmiştir (Şekil2A). Plazma TG düzeyleri 17β-estradiol ile peroral olarak uygulanan OVX farelerde azalmıştır, ancak PPD ile uygulanmaz (Şekil2B). Şekil2C'de gösterildiği gibi, OVX farelerinde şam'la çalışan farelere göre vücut ağırlığının (BW) artış eğilimi gözlenirken, OVX farelerinde BW yüksek kolesterollü bir diyetten sonra fındık yoluyla 17β-estradiol veya PPD ile peroral olarak uygulanır. OVX farelerde bunun tersi bir eğilim gösterdi. Ancak, farklı gruplardaki farelerin son vücut ağırlığında önemli bir değişiklik saptanmadı.
Kardiyovasküler fonksiyon ekokardiyografi kullanılarak değerlendirildi. Şekil3'te gösterildiği gibi, yükselen aortun maksimal plağı veya IMT'si, fındık yayılımı yoluyla 17β-estradiol veya PPD ile peroral olarak uygulanan OVX farelerinde ölçüldü. Yüksek kolesterol-diyet le beslenen apoE-/- farelerin aort kemeri B-mod ekokardiyografi ile gözlendi. Yükselen aortun temsili uzunlamasına görüntüleri ultrasonografik biyomikroskopi ile yakalandı. Kırmızı oklar plakları gösteriyor. OVX fareler, artan aort unmital plak veya IMT'sini şamlı farelere göre artırdı. Fındık yayılımı ile 17β-estradiol veya PPD'nin peroral şekilde uygulanmasının ardından, artan aortun maksimal plağı veya IMT'si OVX farelerininkine göre belirgin bir şekilde azalmıştır. (Şekil 3). Ayrıca 12 haftalık yüksek kolesterol-diyet beslenmesi sonrası apoE-/- farelerde OVX'e yanıt olarak kardiyak disfonksiyon gözlendi(Tablo1). Kardiyak fonksiyon ekokardiyografi ile incelendi. OVX farelerde, fındık yayılımı yoluyla 17β-estradiol veya PPD'nin peroral uygulaması kardiyak disfonksiyon gösteren parametreleri kısmen zayıflatabilir.
Daha sonra aort aterosklerotik lezyonları belirlemek için en yüz analizini kullandık. Daha önce bildirildiği gibi, 12 hafta sonra, yüksek kolesterol lüleat aort luminal yüzeyinde aterosklerotik plak oluşumuna yol açtı. Şekil4'te gösterildiği gibi, OVX farelerde aort lezyon alanının tamamına göre ortalama yüzdesi önemli ölçüde artmıştır. Fındık yayılımı ile 17β-estradiol veya PPD ile peroral uygulama sonrasında, aort lezyon alanı OVX farelerin muadili ile karşılaştırıldığında belirgin bir azalma. Bu sonuç Şekil3'te sunulan ateroskleroz gelişiminden 17β-estradiol veya PPD'nin korunması ile tutarlıdır.
Sonuç olarak, apoE-/- farelerde çift dorsal-lateral insizyon yoluyla bilateral ovariektomi kullanan önerilen prosedür, menopoz sonrası kardiyovasküler disfonksiyonun noninvaziv eknojen östrojen tedavilerinin taranması için uygulanabilir. Ayrıca zararlı tümörigenetik kapasitekaçınmak için özellikle yararlıdır.
Şekil 1. Fare tedavi şeması. Evlendirmede (yaş, 28 gün), dişi apoE-/- C57BL/6J fareler avertin (tribromoetanol; 200 mg/kg; intraperitoneally) ile anestezi edildi. Fareler bilateral olarak ovariectomized (OVX) veya sham 1 cm dorsal kesi ile çalıştırıldı. OVX'ten bir hafta sonra fareler 12 hafta boyunca yüksek kolesterollü diyet (%1.25 kolesterol, %0 cholate) ile beslendi. 17β-Estradiol (0.1 mg·kg-1) veya PPD (0.5 mg·kg-1)tedavinin son 9 haftasında fındık serpme yoluyla peroral olarak uygulandı. Bütün fareler her hafta tartılırdı. 12. haftada kardiyovasküler fonksiyon analizi ekokardiyografi ile değerlendirildi. Yüksek kolesterol diyet 12 hafta sonra, tüm fareler ötenazi edildi, ve kan örnekleri ve dokular daha fazla araştırma için hasat edildi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2. Çeşitli eksojen östrojenlerin apoE-/- farelerde plazma lipidleri ve haftalık vücut ağırlığı üzerine etkileri. Sham fareler sahte bir operasyon almıştır ve yüksek kolesterol diyet aldı. OVX farelere bilateral ovariektomi yapıldı ve daha sonra rastgele aşağıdaki gruplara ayrıldı: yüksek kolesterol diyeti ile tedavi edilen OVX grubu; tedavinin son 9 haftasında fındık yoluyla peroral uygulama yoluyla 12 hafta artı 0.1 mg/kg E2 ile yüksek kolesterol diyeti alan OVX/E2 (17β-estradiol) grubu; ve 12 hafta boyunca yüksek kolesterol diyeti alan OVX/PPD grubu ile tedavinin son 9 haftasında fındık serpme yoluyla peroral uygulama yoluyla 0.5 mg/kg PPD Plazmanın toplam kolesterol ve trigliserid düzeyleri enzimatik yöntemlerle ölçüldü(A-B). Veriler grup başına n = 5 farenin ± SEM aracı olarak ifade edilir. Haftalık vücut ağırlıkları hafta -1 haftadanhafta 12 (C) ölçüldü. Veriler grup başına n = 8 farenin ± SEM aracı olarak ifade edilir. Tek yönlü ANOVA dunnett sonrası hoc testi takip birden fazla karşılaştırma lar için yapılmıştır. *p < 0.05 sham grubu ile karşılaştırıldığında; # p < OVX grubu ile karşılaştırıldığında 0.05. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3. ApoE-/- farelerde IMT veya maksimal plak kalınlığı ölçümleri. ApoE-/- farelerinin aort kemerini gösteren B-mod lu görüntüler sunulmaktadır. Yükselen aort uzunlamasına görüntüleri ultrasonografik biyomikroskopi ile elde edilmiştir. Artan aortun maksimal plağı veya IMT'si ölçüldü. Ultrasonografik görüntüler yükselen aort küçük eğrilik plak göstermektedir; kırmızı oklar plakları gösterir. Veriler grup başına n = 8 farenin ortalaması ± SEM olarak ifade edilir. Tek yönlü ANOVA dunnett sonrası hoc testi takip birden fazla karşılaştırma lar için yapılmıştır. *p < 0.05 sham grubu ile karşılaştırıldığında; # p < OVX grubu ile karşılaştırıldığında 0.05. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 4. ApoE-/- farelerde aort aterosklerotik lezyonların en yüz analizi. Tüm aort bölgesine göre aort lezyon alanının ortalama yüzdesi tüm gruplarda ölçüldü. Aortin intimal lezyonlarının (en yüz) temsili mikrografları gösterilmiştir. Veriler grup başına n = 3 farenin ortalaması ± SEM olarak ifade edilir. Tek yönlü ANOVA dunnett sonrası hoc testi takip birden fazla karşılaştırma lar için yapılmıştır. *p < 0.05 sham grubu ile karşılaştırıldığında; # P < 0.05 OVX grubu ile karşılaştırıldığında. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Şam | OVX | OVX/E2 | OVX/PPD | |
| LVIDd (mm) | 3.72 ± 0.10 | 3.74 ± 0. 24 | 3.68 ± 0.16 | 3.88 ± 0.16 |
| LVID'ler (mm) | 2.34 ± 0.11 | 2.16 ± 0.22 | 2.12 ± 0.13 | 2.55 ± 0.12# |
| IVSd (mm) | 0,83 ± 0,09 | 0,84 ± 0,07 | 0,91 ± 0,05 | 0.74 ± 0.06# |
| IVSs (mm) | 1.24 ± 0.02 | 1.35 ± 0.06* | 1.45 ± 0.04# | 1.09 ± 0.04# |
| PWTd (mm) | 0.7± 0.10 | 0,68 ± 0,04 | 0,72 ± 0,07 | 0.58 ± 0.07# |
| PWT'ler (mm) | 1.10 ± 0.12 | 1.17 ± 0.08 | 1.24 ± 0.04 | 0.98 ± 0.08# |
| EDV (mm3) | 58,89 ± 3,74 | 59,88 ± 9,02 | 57,39 ± 5,79 | 65,11 ± 6,13 |
| ESV (mm3) | 18,86 ± 2,17 | 15,75 ± 4,00 | 14,85 ± 2,37 | 23.45 ± 2.64# |
| EF (%) | 67,84 ± 1,52 | 73,91 ±3 ,63* | 74,23 ± 1,50 | 63.91 ± 3.61# |
| FS (%) | 37.19 ± 1.53 | 42,22 ± 1,17* | 42,36 ± 1,21 | 34.28 ± 2.69# |
| LVIDd = diastole sırasında LV iç çapı; LVIDs = lv iç çapı sisstole sırasında; IVSd = diastole sırasında internal ventriküler septum; IVSs = sisstole sırasında internal ventriküler septum; PWTd = diastole sırasında posterior duvar kalınlığı; PWTs = systole sırasında posterior duvar kalınlığı; EF = fırlatma fraksiyonu; FS = kesirli kısaltma; EDV = end-diyastolik hacim; ESV = son sistolik hacim. | ||||
Tablo 1: Ekokardiyografi kullanılarak kardiyak fonksiyon değerlendirmesi. M-mod izlemelerinden dijital olarak kardiyak fonksiyonla ilişkili parametreler tüm gruplarda ölçüldü. Veriler grup başına n = 8 farenin ortalaması ± SEM olarak ifade edilir. Tek yönlü ANOVA dunnett sonrası hoc testi takip birden fazla karşılaştırma lar için yapılmıştır. *p < 0.05 sham grubu ile karşılaştırıldığında; # p < OVX grubu ile karşılaştırıldığında 0.05.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Burada açıklanan metodoloji, menopozlu kadınlarda görülen lipid bozulması ve ateroskleroza benzeyen bir fare modelidir. Postmenopozal kadınlarda östrojen eksikliğinin, giderek karmaşık ve yaygın aterosklertik lezyonlarla önceden var olan veya devam eden hiperkolesterolemi insidansını kötüleştirebileceği iyi belgelenmiştir1. Klinikte ateroskleroza yatkın lık durumunu taklit etmek için, apoE eksikliği olan fareler, atherogenez 23,24,25ile çalışılan hayvanların tekrarlanabilir ve uygun bir kaynağı uygulanmıştır. Bu çalışmada gösterildiği gibi, dişovs apoE-/- dişsız fareler bozulmamış yumurtalık fonksiyonu ile kadın apoE-/- fareler ile karşılaştırıldığında aort aterosklerotik lezyonlarda bir artış gösterdi. Bu hayvan modelinde, biz de kontrollü bir diyet durumu altında aterosklerotik lezyon boyutu üzerinde çeşitli eksojen östrojen replasman tedavilerin etkisi karşılaştırıldı.
Bu makalede sunulan bilateral ovariektominin çift dorsal lateral kesisi teknik olarak daha kolay, daha az zaman alan ve apoE'de bilateral ovariektominin orta dorsal-lateral insizyonu veya orta karın kesiile karşılaştırıldığında daha güvenlidir-/- fareler. Orta abdominal insizyon yoluyla bilateral ovariektomi önemli bir sakınca sunar: şiddetli abdominal kavite yapsele neden olabilir, bu da ilaç emilimini etkileyebilir. Son raporlar düşük doz 17β-estradiol peroral uygulama serebral iskemi karşı korur26olduğunu göstermektedir. Bu nedenle bu çalışmada fındık serpme yoluyla peroral uygulama seçtik. Ticari yavaş salınımlı peletler bir fare modelinde farmakolojik etkileri test etmek için sık kullanılan bir yönetim modu, ancak zararlı serebral hasara neden olabilir27. İmplantlar enfeksiyonlara yatkındır, özellikle fareler çift sırt-lateral kesi ile bilateral OVX'e maruz kalıyorsa. Kesiden önce derinin dikkatli dezenfeksiyonu yapılsa da enfeksiyondan kaçınmak zordur. Su idaresi ve oral gavaj test edilmiş iki daha az kullanılan yöntemlerdir. Neredeyse hiçbir hayvan kullanımı gerekli olduğu için içme suyu ile hormon verilmesi son derece noninvaziv olması nedeniyle son derece yararlıdır. Ancak, 17β-estradiol bir emülgatör olmadan suda çözünmez. Böylece, dmso'nun %0,5'in altında bir konsantrasyonda kullanarak içme suyundaki çözeltisini kolaylaştırdık. Ancak, düşük doz DMSO uzun vadeli uygulama için bu yaklaşım kontrol etmek zordur ve fareler veya insanlar için toksik. Fareler ayrıca 24 saat gözetim in tamamında su içebilir, bu da gerçek ilaç tüketimini belirlemeyi zorlaştırır. Bu yaklaşımın bir diğer dezavantajı bireyin su alımını kontrol etmek zor olmasıdır. Oral gavajın en büyük dezavantajı hayvanlar için stresli olması ve özofagus yaralanmasına neden olması ve yeme davranışını etkilemesidir. Burada açıklanan metodolojide, deney öncesinde hormonsuz fındık yayılımı nın 5 günlük bir beslenme eğitimi yapılmıştır. Protokol bölümünde bahsedilen gibi eğitilirse farelerin yaklaşık %95'inden fazlası fındık yayılımını kabul edecektir. Bir kez tamamen alışkanlık, farelerin çoğu saniye içinde tüketecek. Bir önceki çalışma ile tutarlı6,11, plazma E2 düzeyleri HAFTA 4 (veri gösterilmez) de sham-işletilen meslektaşı ile karşılaştırıldığında OVX farelerde azaldı. 12. haftada, OVX ile çalışan farelerde rahim atrofisi gözlendi. Ancak, bu çalışmada OVX sonra dolaşan östrojen düzeyleri izlenmedi.
Artan aortta aterosklerotik lezyonların saptanmaması durumunda, aort IMT lümen-intimal arabirim ile medial-adventif arabirim arasındaki mesafenin ölçülmesi ile değerlendirilebilir. Bu ölçüm, insanlarda daha önce doğrulanmış bir protokole dayanmaktadır28. Birbirinden yaklaşık 100 μm uzaklıktaki üç siteden ortalama veri. ApoE'de OVX'ten sonra kardiyak iş yükü artar-/- fareler de kardiyak debinin artmasına yol açabilecek tek tek kardiyomiyositlerin telafi edici hipertrofik büyümesine bağlı olabilir (Tablo1). PpD'nin 9 hafta süreyle peroral olarak uygulanması üzerine kompansatör kardiyak hipertrofi sahte muadili ile karşılaştırılabilir bir EF% ile zayıflatıldı. Gözlemciler arası veya gözlemciler arası değişkenliğin doğrulanması için, aterosklerotik kalınlık ölçümleri ve kardiyak fonksiyonla ilişkili parametreler için varyasyon katsayılarını iki farklı durumda veya farklı bir operatör tarafından analiz edin.
Çalışmamızda da belirtildiği gibi, fındık serünü ile peroral olarak uygulanan OVX fareleri vücut ağırlığının artmasını önlemeye ve östrojen eksikliğine bağlı lipid bozulmasını azaltmaya eğilimli olmakla birlikte, nihai vücut ağırlığında önemli bir farklılık Gözlenen. Önceki çalışmalar da lipid parametreleri varyasyon hormonların antiaterosklerotik etkilerini açıklamak için çok küçük olabileceğini göstermiştir29. Östrojen in yararlı etkileri lipid protein özellikleri değişiklikleri ile sınırlı değildir. Östrojen bazı nonlipid etkileri30,31, inflamasyon gibi, endotel disfonksiyonu, ve hemodinamik staz, insan hastalığında kardiyovasküler koruma kolaylaştırabilir. Bu çalışmada gözlenen sonuçlar göz önüne alındığında, eksojen östrojenin ateroskleroz gelişiminden korunması kısmen sistemik lipid düzeylerinden bağımsızdır. Endotel hücrelerinde PPD, yapışma molekülü ve inflamatuar mediatörlerin ekspresyonunu inhibe etti (veriler gösterilmedi). Ayrıca PPD, endotel anti-kontrendikasyonu ile yakından ilişkili perivasküler yağ oluşumunu baskılayabilir. Böylece PPD ve 17β-estradiol'ün eylemi farklı ydı ve altta yatan mekanizma daha da araştırılacak. Kuşkusuz, fındık yayılımı gibi enerji açısından zengin gıdaların aşırı tüketimi kilo alımına neden olabilir. Ancak, bu çalışmada da belirtildiği gibi az miktarda fındık yayılımı (200 mg·kg-1·gün-1)hayvanların günlük enerji alımının sadece %5'inden sorumlu tutulabilmektedir. Ayrıca bu miktarda fındık yayılımı kullanılarak belirgin bir kilo artışı saptanmadı. 17β-estradiol ve PPD kullanımı esas olarak kardiyovasküler hastalıkların tedavisindeydi. Çünkü, OVX tarafından işletilen aopE-/- farelerde aterosklerozun ilerlemesi sırasında, 4.
HRT klinik kullanımının önemsiz olmayan bir nokta, yumurtalık ve meme kanserleri 13 dahil zararlı yan etkilerivardır13,14. Bu çalışmada test fitoöstrojen Dioscorea bitkilerde bulunan bir steroid saponin bileşiktir. PPD bazı kanser hücresi hatları üzerinde inhibitör etkisi olduğu bildirilmiştir20. Buna ek olarak, PPD 17β-estradiol olanlar ile karşılaştırılabilir antiaterosklerotik özellikleri gösterir. Burada sunduğumuz model, tümör proliferasyonu üzerinde minimal bir etki uygulayan fitoöstrojen de dahil olmak üzere potansiyel aday bileşikleri taramamıza yardımcı olabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar çıkar çatışması beyan etmezler.
Acknowledgments
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81202526 J.X.), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81302769 - B.S.), Pekin Belediye Doğa Bilimleri Vakfı (47144226- B.S.), Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (20110490325 j.x.), ve Doktora Programları Vakfı Çin Eğitim Bakanlığı (2012110612031 için B.S.).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 17β-estradiol, >98% | Sigma-Aldrich | E8875-250MG | Estrogen |
| Disposable syringes (with 25 G needles) | Hunan Luzhou Huikang Development Co., Ltd | 0.5*19TWLB | Cardiac bleeding |
| High-cholesterol mouse diet | Huafukang Bio-Technology | N/A | 1.25% cholesterol, 0% cholate |
| High-Resolution In Vivo Micro-Imaging System | VisualSonics | Vevo®770 | Measurements of intima-media thickness and cardiac dysfunction |
| 2-Methyl-2-butanol | Sigma-Aldrich | 152463-250ML | Preparation of avertin |
| Micro Dissecting forceps, Curved 8mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting forceps, Straight 8 mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting Scissors, Curved/Sharp 8 mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Micro Dissecting Scissors, Straight/Sharp 8 mm | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Monofilament suture 4-0 1/2 5 x 12 19 mm | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd | R413 | Suture and ligation of the tissues |
| Nut cream (Nutella) | Ferrero | N/A | Medium for peroral 17β-estradiol or PPD |
| OptiVisor optical glass binocular magnifier | Dohegan Optical Company Inc. | N/A | Assistant of identifying the tissues during ovariectomy |
| Phosphate-buffered saline at pH 7.4 | SIGMA | P3813 | Preparing 1 L saline |
| Pro MultiLabel Microplate Reader | Tecan | Infinite M1000 | Plasma TC and TG determination |
| Pseudoprotodioscin | Shanghai Winherb Medical S & T Development | W-0427 | CAS registry no. 102115-79-7 |
| Rimadyl, 50 mg/mL | Pfizer Pharma GmbH | 462986 | Postoperative analgesia after ovariectomy |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich | S3547-1L | Dissolving the 17β-estradiol or PPD |
| Solcoseryl Eye-Gel | Menarini, Solco Basle Ltd. | Eye protection during anesthesia | |
| Stereo microscope | MCALON | MCL-6STV | Image of the intimal region of aorta |
| Table model high speed centrifuge | SIGMA | 1-14K | Preparation of plasma |
| Scissors, slight Curve (14 cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Scissors, straight Flat (14 cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tissue forceps, serrated, slight Curve (14 cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tissue forceps, serrated, straight Flat (14 cm) | Kanghua Medical Equipment Co., Ltd | Surgical tools | |
| Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402-5G | Preparation of avertin |
| Triglycerides (TG) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A110-1 | Plasma TG determination |
| Total cholesterols (TC) assay kit | Institute of Nanjing Jiancheng Biology Engineering | A111-1 | Plasma TC determination |
References
- Mozaffarian, D., et al. Heart Disease and Stroke Statistics-2016 Update: A Report From the American Heart Association. Circulation. 133 (4), e38-e360 (2016).
- Packard, B. L. Cardiovascular health and disease in women. The New England Journal of Medicine. 329 (4), 247-256 (1993).
- Samaan, S. A., Crawford, M. H. Estrogen and cardiovascular function after menopause. Journal of the American College of Cardiology. 26 (6), 1403-1410 (1995).
- Libby, P. Inflammation in atherosclerosis. Nature. 420 (6917), 868-874 (2002).
- Tremollieres, F. A., et al. Effect of hormone replacement therapy on age-related increase in carotid artery intima-media thickness in postmenopausal women. Atherosclerosis. 153 (1), 81-88 (2000).
- Bourassa, P. A., Milos, P. M., Gaynor, B. J., Breslow, J. L., Aiello, R. J. Estrogen reduces atherosclerotic lesion development in apolipoprotein E-deficient mice. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 93 (3), 10022-10027 (1996).
- Squadrito, F., et al. Genistein supplementation and estrogen replacement therapy improve endothelial dysfunction induced by ovariectomy in rats. Cardiovascular Research. 45 (2), 454-462 (2000).
- Wang, D., et al. Endothelial dysfunction and enhanced contractility in microvessels from ovariectomized rats: roles of oxidative stress and perivascular adipose tissue. Hypertension. 63 (5), 1063-1069 (2014).
- Zhang, S. H., Reddick, R. L., Piedrahita, J. A., Maeda, N. Spontaneous Hypercholesterolemia and Arterial Lesions in Mice Lacking Apolipoprotein E. Science. 258 (5081), 468-471 (1992).
- Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-Deficient Mice Develop Lesions of All Phases of Atherosclerosis Throughout the Arterial Tree. Arteriosclerosis and Thrombosis. 14 (1), 133-140 (1994).
- Ström, J. O., Theodorsson, A., Ingberg, E., Isaksson, I. M., Theodorsson, E. Ovariectomy and 17-estradiol Replacement in Rats and Mice: A Visual Demonstration. Journal of Visualized Experiments. 64 (e4013), 1-4 (2012).
- Rossouw, J. E., et al. Risks and benefits of estrogen plus progestin in healthy postmenopausal women: principal results From the Women's Health Initiative randomized controlled trial. The Journal of the American Medical Association. 288 (3), 321-333 (2002).
- Kumle, M. Declining breast cancer incidence and decreased HRT use. Lancet. 372 (9639), 608-610 (2008).
- Jager, W., et al. A randomized comparison of triptorelin and tamoxifen as treatment of progressive ovarian cancer. Anticancer Research. 15 (6B), 2639-2642 (1995).
- Bhathena, S. J., Velasquez, M. T. Beneficial role of dietary phytoestrogens in obesity and diabetes. The American Journal of Clinical Nutrition. 76 (6), 1191-1201 (2002).
- Wang, L., Qiu, X. M., Hao, Q., Li, D. J. Anti-inflammatory effects of a Chinese herbal medicine in atherosclerosis via estrogen receptor beta mediating nitric oxide production and NF-kappaB suppression in endothelial cells. Cell Death and Disease. 4 (e551), 1-13 (2013).
- Xiao, J., Wang, N. L., Sun, B., Cai, G. P. Estrogen receptor mediates the effects of pseudoprotodiocsin on adipogenesis in 3T3-L1 cells. American Journal of Physiology-Cell Physiology. 299 (1), C128-C138 (2010).
- Guivarc'h, E., et al. Predominant Role of Nuclear Versus Membrane Estrogen Receptor alpha in Arterial Protection: Implications for Estrogen Receptor alpha Modulation in Cardiovascular Prevention/Safety. Journal of the American Heart Association. 7 (13), 1-17 (2018).
- Osako, M. K., et al. Estrogen inhibits vascular calcification via vascular RANKL system: common mechanism of osteoporosis and vascular calcification. Circulation Research. 107 (4), 466-475 (2010).
- Ivanova, A., et al. Screening of some saponins and phenolic components of Tribulus terrestris and Smilax excelsa as MDR modulators. In vivo. 23 (4), 545-550 (2009).
- Xiao, J., Zhu, T., Yin, Y. Z., Sun, B. Notoginsenoside R1, a unique constituent of Panax notoginseng, blinds proinflammatory monocytes to protect against cardiac hypertrophy in ApoE(-/-) mice. European Journal of Pharmacology. 833 (15), 441-450 (2018).
- Sun, B., Xiao, J., Sun, X. B., Wu, Y. Notoginsenoside R1 attenuates cardiac dysfunction in endotoxemic mice: an insight into oestrogen receptor activation and PI3K/Akt signalling. British Journal of Pharmacology. 168 (7), 1758-1770 (2013).
- Adams, M. R., et al. Inhibition of coronary artery atherosclerosis by 17-beta estradiol in ovariectomized monkeys. Lack of an effect of added progesterone. Arteriosclerosis. 10 (6), 1051-1057 (1990).
- Keaney, J. F. Jr, et al. 17 beta-estradiol preserves endothelial vasodilator function and limits low-density lipoprotein oxidation in hypercholesterolemic swine. Circulation. 89 (5), 2251-2259 (1994).
- Nakashima, Y., Plump, A. S., Raines, E. W., Breslow, J. L., Ross, R. ApoE-deficient mice develop lesions of all phases of atherosclerosis throughout the arterial tree. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 14 (1), 133-140 (1994).
- Saleh, T. M., Cribb, A. E., Connell, B. J. Estrogen-induced recovery of autonomic function after middle cerebral artery occlusion in male rats. American Journal of Physiology- Regulatory, Integrative and Comparative Physiology. 281 (5), R1531-R1539 (2001).
- Bingham, D., Macrae, I. M., Carswell, H. V. Detrimental effects of 17beta-oestradiol after permanent middle cerebral artery occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow & Metabolism. 25 (3), 414-420 (2005).
- Pignoli, P., Tremoli, E., Poli, A., Oreste, P., Paoletti, R. Intimal plus medial thickness of the arterial wall: a direct measurement with ultrasound imaging. Circulation. 74 (6), 1399-1406 (1986).
- Hodgin, J. B., Maeda, N. Minireview: estrogen and mouse models of atherosclerosis. Endocrinology. 143 (12), 4495-4501 (2002).
- Bush, T. L., et al. Cardiovascular mortality and noncontraceptive use of estrogen in women: results from the Lipid Research Clinics Program Follow-up Study. Circulation. 75 (6), 1102-1109 (1987).
- Marsh, M. M., Walker, V. R., Curtiss, L. K., Banka, C. L. Protection against atherosclerosis by estrogen is independent of plasma cholesterol levels in LDL receptor-deficient mice. Journal of Lipid Research. 40 (5), 893-900 (1999).
