Her præsenterer vi en protokol til at tage blodprøver fra subclavian vene af mus.
Musen er den forreste pattedyr model for at studere menneskelige sygdomme og menneskers sundhed. Men, blodprøve indsamling fra mus er udfordrende i forskning arbejde. Hale blodindsamling er en populær metode, når en lille mængde blodprøve er nødvendig. Orbital arterien kunne overvejes, hvis en stor mængde blod er nødvendig, men denne blod indsamlingsmetode har etiske spørgsmål. Tidligere, vi demonstreret gennemførligheden og sikkerheden af blodprøve indsamling gennem subclavian vene punktering i rotter, og her undersøger vi, om denne metode kan bruges i mus. Vi rapporterer, at denne metode er sikker og praktisk for blod opsamling i mus. Blod opsamling gennem subclavian venepunktur i mus kan være en bekvem metode i daglige forskning værker.
Blodprøve samling fra mus er afgørende i de fleste forskningslaboratorier. De konventionelle tilgange til blod opsamling i mus er hale skæring, når mindre end 100 μL af prøven er nødvendig1. Men hvis der er behov for mere end 100 μL blod på et ikke-terminale tidspunkt, er retroorbital, submandibulær blødning eller submental blod opsamling de hyppigst forekommende teknikker2. I nogle tilfælde blev den jugulære vene kateterisering gennem et kirurgisk indsnit vedtaget som en alternativ metode3.
Ikke desto mindre, de ovennævnte metoder er skadelige for mus. Efter vores bedste overbevisning, den retroorbital metode er ikke almindeligt accepteret på grund af den potentielle risiko for komplikationer4,5. Operation relaterede traumer ikke kun sker i det synlige område6,7, men også dybt inde i kredsløb6. Desuden er submandibulær blod opsamling stressende8 og kan være forbundet med overdreven blødning2,9. Baseret på vores tidligere forskning10,11, her introducerer vi en ny strategi for blod opsamling fra subclavian vene i mus. Sikkerhed, gennemførlighed, og opnået blodvolumen med denne teknik præsenteres og diskuteres.
Denne rapport er en udvidelse af tidligere forskning i blodprøvetagning gennem subclavian venepunktur i rotter11. Da musen er den mest almindeligt anvendte forskning dyr, ville det være værdifuldt at se, om denne teknik også kan anvendes på mus. Udfordringen kommer fra den relativt mindre diameter af subclavian vene.
I den nuværende forskning, fandt vi, at subclavian punktering i mus er en gennemførlig og pålidelig måde at indsamle blod. Sammenlignet med de konventionelle metoder såsom hale vene skæring eller orbital blodindsamling, der er ingen etiske spørgsmål af den nuværende metode. Alle dyr overlevede efter denne procedure uden væsketilskud efter ca. 200 μL blod ekstraktion, og dyr kunne anvendes til yderligere eksperimentelle undersøgelser. Teoretisk set kunne den totale udsugning af prøvevolumen ikke nå op på mere end 10% af det totale cirkulerende blodvolumen hver gang, og det samlede rumfang af et voksent dyr er 55 til 70 mL/kg legemsvægt5. For de mus, der anvendes i denne forskning (21,6-28,3 g), bør den maksimale volumen ekstraktion være omkring 200 μL. Vi indstiller således blod prøvetagningsmængden omkring 200 μL for hver mus. Den manglende evne til at måle blodtryk, puls og andre stress parametre er de vigtigste begrænsninger i denne rapport.
Tilstrækkelig generel anæstesi er et andet vigtigt spørgsmål for at sikre en vellykket punktering. Musene skal forblive tavse under punkterings proceduren for at undgå risikoen for at beskadige beholderen ved nålen. Vi fandt, at pentobarbital natrium på 60 mg/kg for generel anæstesi kunne tilfredsstille ideelle dybde af anæstesi. En ulempe ved denne agent er den relativt lange restitutidstid (i gennemsnit ca. 30 minutter). I nogle institutter, isofluran inhalation anvendes til den korte restitueringstiden og bør tages i betragtning som en alternativ anæstesi valg15.
Placeringen af subclavian vene er vist i figur 4. På grund af den tynde væg og lavt tryk i vene, vil den forreste og bageste væg af subclavian vene binde sig til hinanden Undertrykket af en nål, mens nålen bevæger sig fremad (figur 5a). Mens stemplet trækkes langsomt bagud, adskilles de vedlagte vægge spontant, og spidsen af nålen kan trænge ind i skibets sande hulrum, og blodet kan løbe ind i sprøjten under vedvarende negativt tryk (figur 5b). Brug af et vakuum blod indsamlingssystem16 kan også favorisere blod indsamlingen. På grund af den relativt lille diameter af musene subclavian vene, kan der være fejl selv for en erfaren operatør. For en novice, anbefaler vi subclavian venepunktur i rotter som rapporteret11. Efter flere vellykkede punktering forsøg i rotter, kunne succesraten for subclavian venepunktur i mus blive signifikant forbedret. Sørg for, at den nøjagtige punkterings placering er lige hale til midten af kravebenet. Nålen bevæger sig opad og kranie til den overlegne brystbenet fossa er andre vigtige punkter for at sikre en vellykket punktering.
Afslutningsvis, subclavian venepunktur er en sikker og effektiv metode til blod opsamling i mus. Udover hale vene skæring og retro-orbital plexus blod opsamling, denne metode er gennemførlig, sikker, og velegnet til observationsundersøgelser på flere tidspunkter i mus.
The authors have nothing to disclose.
Dette arbejde blev støttet af tilskuddet fra National Natural Science Foundation i China No. 81670269, No. 81500355 og No. 81500226.
1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
canvas gloves | for anesthesia | ||
electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C |