Här presenterar vi ett protokoll för att ta blodprover från den subclavia venen av möss.
Musen är den främsta däggdjurs modellen för att studera sjukdomar hos människor och människors hälsa. Blod provs insamling från möss är dock utmanande i forsknings arbetet. Svans blod insamling är en populär metod när en liten mängd blod prov behövs. Orbital artär kan övervägas om en stor mängd blod behövs men denna blod insamlings metod har etiska frågor. Tidigare visade vi genomförbarheten och säkerheten av blod prov insamling genom subclavia ven punktering hos råttor, och här undersöker vi om denna metod kan användas i möss. Vi rapporterar att denna metod är säker och praktisk för blod insamling hos möss. Blod insamling genom subclavia ven punktering hos möss kan vara en bekväm metod i dagliga forsknings arbeten.
Blod prov insamling från möss är viktigt i de flesta forsknings laboratorier. Konventionella metoder för blod insamling hos möss är svans skärning när mindre än 100 μL av provet behövs1. Men, om mer än 100 μL blod krävs vid en nonterminal tid punkt, retroorbital, submandibular blödning eller submental blod insamling är de mest allmänt anses tekniker2. I vissa fall, den jugular ven kateterisering genom ett kirurgiskt snitt antogs som en alternativ metod3.
Trots ovanstående metoder är skadliga för möss. Såvitt vi vet är retroorbital-metoden inte allmänt accepterad på grund av den potentiella risken för komplikationer4,5. Operation relaterade trauma inte bara sker i det synliga området6,7, men också djupt inne i omlopps bana6. Dessutom är submandibular blod insamling stressigt8 och kan associeras med överdriven blödning2,9. Baserat på vår tidigare forskning10,11, här introducerar vi en ny strategi för blod insamling från subclavia ven hos möss. Säkerheten, genomförbarheten, och erhållna blod volym med denna teknik presenteras och diskuteras.
Denna rapport utgör en förlängning av tidigare forskning om blod prov tagning genom subclavia ven punktering hos råttor11. Eftersom musen är den mest använda forsknings djuret, skulle det vara värdefullt att se om denna teknik kan också tillämpas på möss. Utmaningen kommer från den relativt mindre diametern av den subclavia venen.
I den nuvarande forskningen fann vi att subclavia punktering hos möss är ett genomförbart och tillförlitligt sätt att samla blod. Jämfört med konventionella metoder såsom svans ven skärning eller orbital blod insamling, det finns inga etiska frågor av den nuvarande metoden. Alla djur överlevde efter detta förfarande utan flytande kost tillskott efter cirka 200 μL av blod utvinning, och djur skulle kunna användas för ytterligare experimentella studier. Teoretiskt sett kunde den totala prov volymens extraktion inte uppgå till mer än 10% av den totala cirkulerande blod volymen varje gång och den totala volymen av ett vuxet djur är 55 till 70 mL/kg kropps vikt5. För möss som används i denna forskning (21,6-28,3 g), bör den maximala volymen extraktion vara runt 200 μL. Vi ställer därför in blod provs beloppet runt 200 μL för varje mus. Oförmågan att mäta blod tryck, hjärt frekvens, och andra stress parametrar är de viktigaste begränsningarna i denna rapport.
Tillräcklig generell anestesi är en annan viktig fråga för att garantera framgången för punkteringen. Mössen bör förbli tysta under punkteringsprocessen för att undvika risken för att skada kärlet genom nålen. Vi fann att pentobarbital natrium vid 60 mg/kg för generell anestesi kunde tillfredsställa ideal djup anestesi. En nackdel med denna agent är den relativt långa återhämtnings tiden (i genomsnitt ca 30 minuter). I vissa institut används isofluran inandning för den korta återhämtnings tiden och bör tas i beaktande som ett alternativt anestesi val15.
Placeringen av subclavia ven visas i figur 4. På grund av den tunna väggen och lågt tryck i venen, den främre och bakre väggen i subclavia ven skulle fästa vid varandra under trycket av en nål medan nålen rör sig framåt (figur 5a). Medan dra tillbaka kolven långsamt bakåt, kommer de bifogade väggarna separera spontant, och spetsen av nålen kan komma in i den sanna kaviteten av kärlet och blod kan rinna in i sprutan under ihållande negativt tryck (Figur 5b). Användning av ett vakuum blod insamlings system16 kan också gynna blod samlingen. På grund av den relativt lilla diametern hos mössen subclavia ven, det kan finnas misslyckanden även för en erfaren operatör. För en nybörjare, vi rekommenderar subclavia ven punktering hos råttor som rapporterades11. Efter flera lyckade punkteringsförsök hos råttor kunde framgångs graden av subclavia venpunktering hos möss förbättras avsevärt. Se till att den exakta punkteringsstället är bara stjärtfenan till mitten av nyckelbenet ben. Nålen rör sig uppåt och kranial till den överlägsna Sternal fossa är andra viktiga punkter för att garantera en lyckad punktering.
Sammanfattnings vis, subclavia ven punktering är en säker och effektiv metod för blod insamling hos möss. Förutom svans ven skärning och retro-orbital plexus blod insamling, denna metod är genomförbar, säker, och lämplig för observationella undersökningar vid flera tidpunkter i möss.
The authors have nothing to disclose.
Detta arbete stöddes av bidraget från National Natural Science Foundation i Kina nr 81670269, nr 81500355 och nr 81500226.
1.0 mL syringe | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co., Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
75% ethanol | Department of Pharmacy, The Second Xiangya Hospital of Central South University | made in Department of Pharmacy,The Second Xiangya Hospital of Central South Univesity | |
adhesive tape | 3M Deutschland GmbH (Kamen, Germany) | 1534-1 | |
canvas gloves | for anesthesia | ||
electronic scale | Dongguan Shengheng Electronics Co. Ltd (Dongguan, Guangdong Province, China) | KP-3000 | |
epilating agent | France Yi Sha Cosmetics Co. Ltd (Guangzhou, Guangdong Province, China) | 8281744 | |
heparin (used concentration 10 U/mL, 2 mL, 12500 IU) | Nanjing Xinbai Pharmaceutical Co. Limited (Nanjing, Jiangsu Province, China) | H32025851 | |
mice | Hunan SJA Laboratory Animal Co. Ltd (Changsha, Hunan Province, China) | Kunming spcies | |
needle, 26G, 0.45 mm x 16 mm | Shandong Weigao Group Medical Polymer Co. Ltd (Weihai, Shandong Province, China) | 20163151593 | |
pentobarbital sodium (used solution 1%) | Merck | P-010-1ML | |
physiological saline, 100 mL | Hunan Kelun Pharmaceutical Co. Ltd (Yueyang, Hunan Province,China) | H43020454 | |
stastical software | International Business Machines | SPSS Statistics 25 | |
tube, 2 mL | Hubei Jinxing Technology & Development Co. Ltd (Wuhan Hubei Province, China) | MCT-150-C |