I denne prosedyren, en DsRed-basert epitope ligand er immobilisert å produsere en svært selektiv affinitet harpiks for fangst av monoklonale antistoffer fra rå planteekstrakter eller cellekultur supernatanter, som et alternativ til protein A.
Rensing av monoklonale antistoffer (mAbs) er vanligvis oppnås ved protein A affinitet kromatografi, som kan gjøre rede for opptil 25% av den samlede prosessen kostnader. Alternative, kostnadseffektive opptaks trinn er derfor verdifulle for industriell skala produksjon, der store mengder av en enkelt mAb produseres. Her presenterer vi en metode for immobilisering av en DsRed-basert epitope ligand til en tverrbundet agarose harpiks som tillater selektiv fangst av HIV-nøytralisere antistoff 2F5 fra rå planteekstrakter uten å bruke protein A. Den lineære epitope ELDKWA ble først genetisk smeltet til fluorescerende protein DsRed og fusjons proteinet ble uttrykt i transgene tobakk (Nicotiana tabacum) planter før rensing av immobilisert metal-ion affinitet kromatografi. Videre ble en metode basert på aktiverte tverrbundet agarose optimalisert for høy ligand tetthet, effektiv kopling og lave kostnader. Den pH og buffer sammensetning og løselig ligand konsentrasjon var de viktigste parametrene under koplings prosedyren, som ble forbedret ved hjelp av en design-of-eksperimenter tilnærming. Den resulterende affinitet harpiks ble testet for sin evne til å selektivt binde målet mAb i en rå plante ekstrakt og eluering buffer var optimalisert for høy mAb utvinning, produkt aktivitet og affinitet harpiks stabilitet. Metoden kan enkelt tilpasses andre antistoffer med lineær epitopes. Den nye harpikser tillate mildere eluering forhold enn protein A og kan også redusere kostnadene ved en innledende fangst trinn for mAb produksjon.
Biofarmasøytisk produkter er viktig for behandling av et bredt spekter av sykdommer i nesten alle gren av medisin1. Monoklonale antistoffer (mAbs) dominerer biofarmasøytisk markedet, med verdensomspennende salg forventes å nå nesten €110 000 000 000 i 20202. Den favoriserte uttrykks plattform for mAbs er kinesisk hamster eggstokk cellelinjer, som vanligvis produserer høy mAb titers på opptil 10 g ∙ L-1 i kulturen supernatanten3,4. Imidlertid er produksjonen av mAbs i pattedyr cellekulturer dyrt på grunn av den høye kostnaden av mediet og behovet for steril gjæring5. Alternative uttrykks plattformer som planter potensielt tilbyr en raskere, enklere, rimeligere og mer skalerbar tilnærming for industriell produksjon6,7.
I tillegg til kostnadene forbundet med pattedyr cellekulturer, er den utbredte bruken av protein en affinitet kromatografi for produkt opptak en stor kostnads fører for den industrielle produksjonen av mAbs. Protein A er naturlig funnet på overflaten av Staphylococcus aureus celler og det binder seg til fragment Crystallizable (FC) regionen av visse murine og menneskelige antistoffer, og dermed opptre som et forsvar mekanisme for å unngå det humoral immunsystemet8. Protein A har blitt industri gullstandarden for fangst av mAbs fra cellekultur supernatanter og er også mye brukt av forskningsmiljøet fordi det er svært selektiv, vanligvis oppnå mAb renheter av ~ 95% i ett trinn8. Ikke overraskende, salg av protein A i løpet av de siste to ti årene har tett speilet salget av mAbs8. Avhengig av produksjonsskala, kan kostnadene ved protein A tilsvare mer enn 25% av de totale prosesskostnader og dermed påvirke markedsprisen på terapeutisk mAbs, som kan være opp til €2 000 g-15,9. Derfor har alternative kromatografi harpikser med en tilsvarende rensing ytelse potensial til å redusere produksjonskostnadene betydelig, noe som gjør antistoff-baserte terapier tilgjengelig for et større antall pasienter10,11 ,12. Slike alternativer kan også omgå ulempene ved protein A-kromatografi, inkludert de tøffe eluering forholdene ved lav pH (vanligvis < 3.5) som potensielt kan føre til at mAbs gjennomgår conformational endringer som fremmer aggregering13 . Viktigere, protein A er selektiv bare for FC-regionen av visse IgG underklasser, så ikke-funksjonelle molekyler med avkortet bindende domener kan co-rense med intakt produkt5, mens mAb derivaties som enkelt kjede variabel fragmenter ikke binder til protein A i det hele tatt.
Her beskriver vi en alternativ affinitet kromatografi harpiks for fangst av HIV-nøytralisere mAb 2F5 bruke sin lineære epitope ELDKWA (en bokstav amino acid kode)5,14. Vi genetisk smeltet 2F5 epitope til C-Terminus av fluorescerende protein DsRed, som fungerte som et transportør og reporter molekyl, og produserte den resulterende protein DsRed-2F5-Epitope (DFE) i transgene tobakk ( Nicotiana tabacum) planter. DFE ble renset med ett-trinns immobilisert-affinitet kromatografi (IMAC). Immobilisering av renset DFE affinitet ligand på en tverrbundet agarose harpiks ble oppnådd ved kjemisk kopling ved hjelp av N-hydroxysuccinimide (NHS)-aktivert tverrbundet agarose kolonner. Statistisk eksperimentell design ble deretter brukt til å optimalisere immobilisering prosedyre og kopling effektivitet15. Rensing strategien for mAb 2F5 ble evaluert i form av antistoff renhet, yield og ligand stabilitet. I motsetning til protein A, som binder FC-regionen, DFE bundet til den komplementaritet-fastsettelse regionen av 2F5, sikre rensing av molekyler med en intakt paratope. Vårt konsept kan enkelt tilpasses enhver mAb med en lineær epitope eller til andre peptid-baserte affinitet ligander som lett kan identifiseres ved Microarray studier16.
Figur 1: prosessflytskjema for utarbeidelse av epitope affinitet harpiks som kan brukes til fangst av mAbs fra råolje ekstrakter eller cellekultur supernatanter. (A) AFFINITET ligand DFE ble uttrykt i transgene tobakk planter. En varme nedbør trinn (B) ble tatt før høstet bladene ble homogenisert (C). (D) råolje plante ekstrakt ble avklart ved pose filtrering, dybde filtrering og 0,2 μm steril filtrering. (E) DFE ble deretter RENSET av iMac. (F, G) Den renset DFE affinitet ligand ble immobilisert på EDC/NHS-aktivert tverrbundet agarose kolonner. (H) bakterielle kulturer som bærer T-DNA-koding antistoff 2F5 ble brukt for forbigående uttrykk i N. Benthamiana planter (i) dyrket i en phytotron. (J) N. benthamiana bladene ble høstet og behandlet som beskrevet i D. (K) mAb 2F5 ble renset fra avklart ekstrakt ved hjelp av DFE affinitet kolonner (L). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Søknader av romanen affinitet harpiks
Vi har vist at tilpasset affinitet kromatografi harpiks for fangst av mAbs kan produseres av immobilizing en ligand som inneholder en mAb-spesifikk epitope til NHS-aktivert tverrbundet agarose. Å designe en slik harpiks, var det nødvendig å kjenne epitope sekvensen og å bruke en lineær epitope. Den resulterende harpiks er fordelaktig for fangst av mAbs fordi de potensielt kan erstatte dyre protein A affinitet kromatografi trinn. Samspillet mellom 2F5 og DFE i vårt tilfelle studien ble formidlet av epitope-paratope bindende, slik at våre ligand bør være mer selektiv enn protein A, som binder seg til FC-regionen i de fleste murine og menneskelige IgG. Fordi individuelle ligander er nødvendig for hver mAb, kan vår metode i utgangspunktet synes egnet hovedsakelig for antistoffer som produseres i svært stor skala. Men ved å kombinere vår tilnærming med hurtig plantebasert transient protein uttrykk, kan nye affinitet ligander være forberedt på mindre enn 2 uker27 med minimal innsats28. Derfor er metoden også egnet for småskala mAb rensing.
Produksjon og potensielle forbedringer av affinitet ligand
Planter tilbyr en rask og sikker produksjonsplattform for affinitet ligander5,29,30, slik som DFE Fusion proteinet som er omtalt i vårt kasus studium. Blanchering anlegget materialet sterkt reduserte mengden av verten celle proteiner i et enkelt trinn, og ble lett integreres i en standard avklaring rutine. Imidlertid var utvinningen av ligand lav i dagens oppsett, sannsynligvis på grunn av sin moderate termiske stabilitet og noen ikke-spesifikk binding til filter lagene, som rapportert for andre produkter31,32,33. Engineering transportøren å øke sin termiske stabilitet kan derfor bidra til å forbedre ligand yield i fremtiden, som beskrevet for malaria vaksine kandidat CCT, det antitumor enzymet PpADI eller en mesofile β-glukosidase34, 35,36. Det samme gjelder for dybden filtrerings trinn, der protein engineering kan bidra til å redusere ikke-spesifikk binding til filtermaterialet37. Produksjonskostnadene for DFE og lignende ligander kan også reduseres ved å forbedre den generelle effektiviteten av avklaring ved hjelp av flokkulanter eller filter tilsetningsstoffer38,39.
Når DsRed brukes som en transportør, danner den et tetramerisk kompleks. Dette er fordelaktig fordi det øker antall epitopes per ligand, men det kan også gjøre ligand mer utsatt for demontering eller denaturering under affinitet kromatografi. En monomere carrier protein som mCherry kan derfor være å foretrekke, fordi det er stabilt ved lav pH40, og inkludering av tandem gjentar av epitope ville øke avidity av ligand og dermed øke harpiks kapasitet5, 26 i , 41. for enkle epitope proteiner (dvs. de uten disulfide obligasjoner eller etter translational modifikasjoner) mikrobielle produksjonssystemer kan redusere produksjonskostnadene og gjøre ligander mer konkurransedyktige med protein A. For eksempel har grønn fluorescerende protein blitt uttrykt i bakterielle celler med en avkastning på ~ 1 g · kg-1 biomasse, noe som vil redusere ligand produksjonskostnader42.
Uavhengig av uttrykket vert, en renset affinitet ligand var nødvendig under kopling for å minimere immobilisering av verten celle proteiner eller medie komponenter som ellers kan redusere harpiks selektivitet og kapasitet. Inkluderingen av en Poly-histidin kode for iMac rensing økte renheten til ~ 90% i et enkelt trinn, tilrettelegging rask og rimelig ligand produksjon5,43,44. Imidlertid er plasseringen av Fusion-taggen viktig fordi den har potensial til å sterically hindre epitope binding eller å indusere kløften av enten koden eller epitope fra carrier45,46.
Immobilisering av affinitet ligand på NHS-aktiverte kromatografi kolonner
Immobilisering ble utført manuelt eller ved hjelp av et kromatografi system. Den lille buffer volumer per kolonne syntes å favorisere Manuell håndtering (f. eks, på grunn av minimale avfallsvolumer). Imidlertid, hvis mangfoldig/større rekkene er behøvde, det kromatografi system lager koplingen vilkårene lettere å administrere (e.g., regulert flyte ratene) og er derfor flere sikkert å oppnå reproduserbar resultater inne pris av DBC. Våre data tyder på at koplings bufferen og pH-verdien har en viktig effekt på koblings effektiviteten og de totale Kol onne kostnadene. Screening faktorer som påvirker koplingen reaksjonen og justere dem for hvert carrier protein (eller til og med for hver transportør-ligand fusjon) kan derfor forbedre koplingen effektivitet og harpiks ytelse, og vi anbefaler denne tilnærmingen.
Testing 2F5 isolasjon ved hjelp av DFE affinitet harpiks
Produkt yield og renhet er viktige aspekter av harpiks ytelse, og i tilfelle av DFE vi oppnådd en avkastning på 105 ± 11% (± SD, n = 3) og en renhet på 97 ± 3% (± SD, n = 3), som er sammenlignbare med utførelsen av benchmark protein A harpikser25 ,26. En annen viktig ytelsesindikator for harpikser generelt (og spesielt for de som er basert på affinitet ligander) er DBC på 10% produkt gjennombrudd, fordi denne parameteren påvirker mengden harpiks som kreves for en bestemt prosess og dermed kostnadene. For DFE-ligand var den første DBC ~ 4 g · L-1 resin, som er ~ 13% av den tilsvarende verdien for protein A under lignende forhold (bare 2 min kontakt tid)25,47 men om 15 ganger høyere sammenlignet med andre tilpassede affinitet harpiks som anti-FSH-immunoaffinity-ligand med samme oppholdstid på 2 min48. DBC av DFE falt til 15% av startverdien etter 25 bind-og-eluere sykluser, mens mer enn 50 sykluser er nødvendig for samme tap av DBC i kommersielle protein A harpikser49. Det er imidlertid viktig å merke seg at vår transportør ennå ikke er optimalisert i samme grad som protein A, som har blitt grundig undersøkt og forbedret i løpet av de siste fire ti årene8.
Hittil har vi forbedret harpiks stabiliteten og produkt utvinningen ved å bytte fra en lav-pH eluering buffer til en høy konsentrasjon av magnesium klorid (Figur 3), som anbefalt i tidligere studier13. Den karakteristiske røde fargen på affinitet ligand ikke visne betydelig i løpet av de 25 bind-og-eluere sykluser, så vi spekulere at endogene anlegget proteaser i avklart anlegget ekstrakter31 kan ha avkortet og dermed deaktivert epitope av ligand. Derfor kan utforming av protease-resistente Linkers for å koble transportøren og epitope hjelpe til med å opprettholde den første DBC over et lengre antall sykluser. Gitt den raske og enkle uttrykk og rensing av DFE ligand, dens grei kopling til kommersiell kromatografi harpiks, og dens utmerkede produkt avkastning og renhet, tror vi at vår metode tilbyr et egnet alternativ til protein A for rensing av mAbs og antistoff derivater som ikke binder til protein A, spesielt hvis forbedringer til transportøren og linker kan forbedre DBC og ligand stabilitet. Denne antakelsen ble støttet av den lille forskjellen i den dissosiasjon konstanten av DFE-renset og protein A-renset 2F5 antistoff5, noe som indikerer at vår nye affinitet ligand tillater gjenvinning av høy kvalitet mAbs.
Fordeler og nåværende begrensninger av metoden
Produsere affinitet ligand som en genetisk fusjon med et carrier protein øker løselighet i vandige buffere og dermed kompatibilitet med typiske ligand kopling forhold. I kontrast, tomme peptider avledet fra solid fase peptid syntese kan ha begrenset løselighet under disse forholdene på grunn av deres sekvens50, som ikke kan endres fordi det er diktert av aminosyren sekvens av epitope anerkjent av mAb å bli renset. Andre har derfor brukt en på-harpiks syntese av peptid ligander51. Den statiske bindende kapasitet på den resulterende harpiks var høy (~ 80 g · L-1), men prosessen med harpiks forberedelse er lang, en dynamisk bindende kapasitet ble ikke rapportert, og den oppnådde renhet og utvinning var lavere enn i vår tilnærming. En ekstra fordel med et fusjons protein ligand i laboratorie skala er at ligand og varianter av disse kan produseres raskt, renses og testes med minimal innsats i en brukervennlig høy-gjennom uttrykks system52.
De to nåværende begrensninger av metoden som presenteres her er den lave dynamiske bindende kapasitet på 3 g · L-1 og 90% reduksjon i løpet av 25 bind-og-eluere sykluser5. Disse begrensningene kan løses i fremtiden ved å bruke mindre strenge belastningsforhold og erstatte gjeldende DsRed-transportør med en konstruert, mer stabil variant hhv. For eksempel, dobling av gjeldende kontakt tid fra 2 til 4 minutter har potensial til å doble den dynamiske bindings kapasiteten som ble vist for noen protein A harpikser26.
Feilsøking
Tabellen nedenfor fremhever potensielle problemer som kan oppstå under denne protokollen, og gir tips om hvordan du løser dem (tabell 1).
Tabell 1: potensielle problemer som kan oppstå og mulige feilrettinger. | |||
Protokoll trinn | Problem | Kurset | Fikse |
1 | Planter vokser ikke | Kompromittert vekstforhold | Sjekk pH og ledningsevne av gjødsel |
Kontrollere temperatur-og lysforholdene | |||
2 og 3 | Store mengder av verts celle proteiner er til stede etter ekstraksjon | Ufullstendig nedbør | Kontroller temperaturen under blanchering |
Sjekk agitasjon i blanchering bad | |||
2 og 3 | Ingen produkter funnet i anlegget ekstrakt | Blanchering temperatur for høy | Kontroller temperatur og pH under blanchering |
pH i blanchering buffer for lav | |||
3 | Store stamme-eller blad deler forblir etter ekstraksjon | Ufullstendig blanding i blender | Kontroller at plantematerialet ikke danner en plugg i blender |
3 | Rask TRYKKØKNING under dybde filtrering | Feil filtervalg og/eller orientering | Kontrollere filtertype og-retning |
4 | Little Fusion protein under eluering/mye av Fusion protein i Flow-through | IMAC harpiks ble ikke ladet med metall ioner | Kontroller om IMAC-harpiks var riktig ladet med ioner |
Fusion protein mistet affinitet tag | Unngå intens sollys og høye temperaturer under plante dyrking | ||
4 | Fusjons protein tapt under konsentrasjon | Fusion protein bundet til membranen | Kontroller membran typen |
Kontroller at konsentrasjons faktoren ikke var for høy | |||
5 | Lav kopling yield | Feil sekvens av koplings reagens tillegg | Kontroller reagensene etiketter og sekvens av tillegg |
Feil utarbeidelse av kolonnene før kopling | Kontroller Kol onne preparaiton vilkår | ||
5 og 6 | Lav mAb yield | Lav mAb uttrykk i anlegget biomasse | Test mAb uttrykk i biomasse |
Lav ligand tetthet | Sjekk renheten av Fusion protein forberedelse | ||
7 | Svært lave/høye protein konsentrasjoner i Bradford-analysen | Boble dannelse under pipettering | Se etter bobler i 96-brønnen palte |
7 | Lav mAb-konsentrasjon under SPR-måling | Kompromittert protein en chip | Sammenlign med resultatene av standard mAb med kjent konsentrasjon |
Feil eksempel fortynning | Kontroller fortynnings raten og buffer |
Tabell 1: feilsøking.
The authors have nothing to disclose.
Vi vil gjerne anerkjenne Ibrahim Al Amedi for dyrking av transgene tobakk planter og Dr. Thomas Rademacher for å gi tobakk uttrykket vektor. Forfatterne ønsker å takke Dr. Richard M. Twyman for redaksjonell bistand og Markus Sack for fruktbare diskusjoner om DFE affinitet ligand struktur. Dette arbeidet ble finansiert delvis av Fraunhofer-Gesellschaft interne programmer under Grant no. Tiltrekke seg 125-600164 og staten Nord-Rhinen-Westfalen under Leistungszentrum Grant no. 423 “nettverk, adaptive produksjon”. Dette arbeidet ble støttet av Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) i rammen av Research Training Group “tumor-målrettede Drug Delivery” Grant 331065168. GE helsetjenester støttet Open-Access publisering av denne artikkelen.
10L/20L Bucket | n/a | n/a | Blanching equipment |
2100P Portable Turbidimeter | Hach | 4650000 | Turbidimeter |
ÄKTApure | GE Helthcare | 29018226 | Chromatography system |
Allegra 25R | Beckman Coulter | 369434 | Centrifuge |
Amine Coupling Kit | GE Healthcare | BR100050 | SPR chip coupling kit |
Amine Coupling Kit | GE Healthcare | BR100050 | SPR chip coupling kit |
Antibody 2G12 | Fraunhofer IME | n/a | Standard for SPR quantification |
Blender | Waring | 800EG | Blender |
BP-410 | Fuhr | 2632410001 | Bag filter |
CanoScan 5600F | Canon | 2925B009 | Scanner |
Centrifuge tube 50 mL self-standing | Labomedic | 1110504 | Reaction tube |
Chelating Sepharose FF | GE Helthcare | 17-0575-01 | Chromatography resin |
Cond 3320 | WTW | EKA 3338 | Conductometer |
Design-Expert(R) 8 | Stat-Ease, Inc. | n/a | DoE software |
Discovery Compfort | Gilson | F81029 | Multichannel pipette |
Disodium phosphate | Carl Roth GmbH | 4984.3 | Media component |
Diverse bottles | Schott Duran | n/a | Glas bottles |
Dri Block DB8 | Techne | Z381373 | Heat block |
DsRed | Fraunhofe IME | n/a | Standart |
EDTA | Carl Roth GmbH | 8043.2 | Buffer component |
EnSpire | Perkin Elmer | 2390-0000 | Plate reader |
ETHG-912 | Oregon Scientific | 086L001499-230 | Thermometer |
F9-C | GE Helthcare | 29027743 | Fraction collector |
Ferty 2 Mega | Kammlott | 5.220072 | Fertilizer |
Forma -86C ULT freezer | ThermoFisher | 88400 | Freezer |
HEPES | Carl Roth GmbH | 9105.3 | Buffer component |
Hettich Centrifuge Mikro 200 | Hettich | 2400 | Centrifuge |
HiPrep 26/10 | GE Helthcare | GE17-5087-01 | Chromtography column |
HiTrap NHS-activated Sepharose HP, 1 mL | GE Helthcare | 17-0716-01 | Chromatography columns |
Hydrochloric acid | Carl Roth GmbH | 4625.1 | Buffer component |
Imidazole | Carl Roth GmbH | 3899.2 | Buffer component |
K700 | Pall | 5302305 | Depth filter layer |
KM02 basic | IKA | n/a | Magnetic stirrer |
KS50P 60D | Pall | B12486 | Depth filter layer |
L/S 24 | Masterflex | SN-06508-24 | Tubing |
Lauda E300 | Lauda Dr Wobser GmbH | Z90010 | Immersion circulator |
Magnesium chloride | Carl Roth GmbH | KK36.2 | Buffer component |
Masterflex L/S | Masterflex | HV-77921-75 | Peristaltic pump |
Minisart 0.2 µm | Sartorius | 16534K | Filter unit |
Nalgene Rapid-Flow PES bottle top filter | Thermo Fischer Scientific | 595-4520 | Vacuum filtration of SPR buffers |
Nickel sulphate | Carl Roth GmbH | T111.1 | Buffer component |
Novex NuPAGE 4-12% BisTris LDS gels | Invitrogen | NP0336BOX | LDS-PAA gels |
Novex X-cell Mini Cell | Invitrogen | EI0001 | PAGE chamber |
NuPAGE 20x running buffer | Invitrogen | NP0002 | Buffer concentrate |
NuPAGE antioxidant | Invitrogen | NP0005 | Antioxidant |
PageRuler protein ladder (10-180 kDa) | Invitrogen | 26616 | Protein standart |
Perforated bucked | n/a | n/a | Blanching |
PH 3110 | WTW | 2AA110 | PH meter |
PowerPac HC | Biorad | 1645052 | Electrophoresis module |
Protein A from Staphylococcus aureus | Sigma-Aldrich | P7837-5MG | Coating of SPR chips |
Sephadex G-25 fine, cross linked dextran | GE Helthcare | 17003301 | Chromatography resin |
Silicone spoon | n/a | n/a | Spoon |
Simply Blue SafeStain | Invitrogen | LC6060 | Gel staining solution |
Sodium acetate | Carl Roth GmbH | 6773.1 | Buffer component |
Sodium acetate | Carl Roth GmbH | X891.1 | Media component |
Sodium azide | Sigma Aldrich | S2002-100G | Media component |
Sodium chloride | Carl Roth GmbH | P029.2 | Buffer component |
Sodium citrate | Carl Roth GmbH | HN13.2 | Buffer component |
Sodium bisulfite | Carl Roth GmbH | 243973-100G | Media component |
Sodium phosophate | Carl Roth GmbH | T877.2 | Media component |
SPR Affinity Sensor – High Capacity Amine | Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics | SPR-AS-HCA | SPR chip |
SPR-2/4 Surface Plasmon Resonance Analyzer | Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics | n/a | SPR device |
SSM3 | Stuart | 10034264 | Mini Gyro-rocker |
Heated vessel, 20 L | Clatronic | n/a | Blanching chamber |
Sterile syringes, 2 mL | B. Braun | 4606027V | Syringes |
Syringe adpter (Union Luer F) | GE Helthcare | 181112-51 | Syringe adapter |
TE6101 | Sartorius | TE6101 | Precision scale |
Tween-20 (Polysorbate) | Merck | 8170721000 | Buffer component |
Unicorn 6.4 | GE Helthcare | 29056102 | Chromatography software |
Vacuum bags | Ikea | 203.392.84 | Plant storge |
VelaPad 60 | Pall | VP60G03KNH4 | Filter housing |
Vortex-Genie 2 | Scientific industries | SI-0236 | Vortex |
XK-26/20 column housing | GE Helthcare | 28-9889-48 | Chromtography column |