Neste procedimento, um ligante de epítopo baseado em DsRed é imobilizado para produzir uma resina de afinidade altamente seletiva para a captação de anticorpos monoclonais de extratos de plantas brutas ou sobrenadantes de cultura celular, como uma alternativa à proteína A.
A purificação de anticorpos monoclonais (mAbs) é comumente alcançada por cromatografia de afinidade protein A, que pode ser responsável por até 25% dos custos gerais do processo. As etapas de captura alternativas e rentáveis são, portanto, valiosas para a produção em escala industrial, onde são produzidas grandes quantidades de um mAb único. Aqui nós apresentamos um método para a imobilização de um ligante dsred-baseado do epítopo mapeado a uma resina Cross-linked do agarose permitindo a captação seletiva do anticorpo 2f5 do HIV-neutralizing dos extratos crus da planta sem usar a proteína a. O epítopo linear ELDKWA foi primeiramente fundido geneticamente para a proteína fluorescente DsRed e a proteína de fusão foi expressa em plantas de tabaco transgênica (Nicotiana tabacum) antes da purificação por cromatografia de afinidade de íons metálicos imobilizados. Além disso, um método baseado no agarose reticulado ativado foi otimizado para alta densidade de ligantes, acoplamento eficiente e baixos custos. O pH e a composição tampão e a concentração de ligante solúvel foram os parâmetros mais importantes durante o procedimento de acoplamento, o que foi melhorado usando uma abordagem de design de experimentos. A resina de afinidade resultante foi testada por sua capacidade de ligar seletivamente o mAb alvo em um extrato de planta bruta e o tampão de eluição foi otimizado para alta recuperação de mAb, atividade do produto e estabilidade da resina de afinidade. O método pode ser facilmente adaptado a outros anticorpos com epítopos lineares. As novas resinas permitem condições de eluição mais suaves do que a proteína A e também podem reduzir os custos de uma etapa de captura inicial para a produção de mAb.
Os produtos biofarmacêuticos são importantes para o tratamento de um amplo espectro de doenças em quase todos os ramos da medicina1. Os anticorpos monoclonais (mAbs) dominam o mercado biofarmacêutico, com as vendas mundiais esperadas alcançar quase $110000000000 em 20202. A plataforma de expressão favorecida para mAbs são as linhagens de células de ovário de hamster chinês, que tipicamente produzem altos títulos de MAB de até 10 g ∙ L-1 no sobrenadante de cultura3,4. No entanto, a produção de mAbs em culturas de células de mamíferos é dispendiosa devido ao alto custo do meio e à necessidade de fermentação estéril5. As plataformas de expressão alternativa, como as plantas, potencialmente oferecem uma abordagem mais rápida, simples, menos dispendiosa e mais escalável para a manufatura industrial6,7.
Além dos custos associados às culturas de células de mamíferos, o uso generalizado de cromatografia de afinidade protein A para captação de produtos é um importante condutor de custos para a produção industrial de mAbs. A proteína a é encontrada naturalmente na superfície de pilhas de Staphylococcus aureus e liga-se à região cristalizável do fragmento (FC) de determinados anticorpos murino e humanos, agindo desse modo como um mecanismo da defesa para evadir o sistema imune humoral8. A proteína A tornou-se o padrão de ouro da indústria para a captura de mAbs de sobrenadantes de cultura celular e também é amplamente utilizado pela comunidade de pesquisa porque é altamente seletivo, tipicamente conseguindo puridades de mAb de ~ 95% em um único passo8. Sem surpresa, as vendas de proteína A nas últimas duas décadas têm espelhado de perto as vendas de mAbs8. Dependendo da escala de produção, os custos da proteína a podem corresponder a mais de 25% dos custos totais do processo e, assim, afetam o preço de mercado dos mAbs terapêuticos, que podem ser até $2000 g-15,6. Portanto, resinas de cromatografia alternativa com um desempenho de purificação semelhante têm o potencial de reduzir substancialmente os custos de produção, tornando as terapias baseadas em anticorpos acessíveis para um maior número de pacientes10,11 ,12. Tais alternativas também podem contornar as desvantagens da cromatografia de proteína A, incluindo as condições de eluição duras em pH baixo (tipicamente < 3,5) que podem potencialmente causar mAbs a sofrer alterações conformacionais que promovem a agregação13 . Importante, a proteína A é seletiva somente para a região de FC de determinadas subclasses de IgG, assim que as moléculas não-funcionais com domínios de ligação truncados podem co-purify com o produto intacto5, visto que Derivaties do MAB tais como fragmentos da variável da único-cadeia Não se ligam à proteína A.
Aqui, nós descrevemos uma resina alternativa da cromatografia da afinidade para a captação do MAB 2f5 de neutralização do HIV usando seu epítopo mapeado linear eldkwa (um código do ácido aminado da letra)5,14. Nós fundimos genetically o epítopo 2f5 ao C-Terminus da proteína fluorescente dsred, que funcionou como uma molécula do portador e do repórter, e produziu a proteína resultante Dsred-2F5-Epitope (DfE) no tabaco transgênicas ( Tabacum de Nicotiana) plantas. A DFE foi purificada por cromatografia de afinidade de íons metálicos imobilizados de passo único (IMAC). A imobilização do ligante purified da afinidade de DFE em uma resina Cross-linked do agarose foi conseguida pelo acoplamento químico usando colunas Cross-linked do Agarose do N-Hydroxysuccinimide (NHS)-lig. Os experimentos estatísticos experimentais foram utilizados para otimizar o procedimento de imobilização e a eficiência de acoplamento15. A estratégia de purificação para o MAB 2f5 foi avaliada em termos de pureza do anticorpo, rendimento e estabilidade do ligante. Em contraste com a proteína A, que liga a região FC, DFE vinculado à região de determinação de complementaridade de 2F5, assegurando a purificação de moléculas com um paratope intacto. Nosso conceito pode facilmente ser adaptado a todo o MAB com um epítopo linear ou a outros ligantes peptide-baseados da afinidade que podem facilmente ser identificados por estudos do microarray16.
Figura 1: esquema de fluxo do processo para a preparação de resinas de afinidade epítopo mapeado que podem ser utilizadas para a captação de mAbs de extratos de plantas brutas ou sobrenadantes de cultura celular. (A) o ligante de afinidade DFE foi expressado em plantas de tabaco transgénicas. Uma etapa de precipitação do calor (B) foi incluída antes que as folhas colhidas fossem homogeneizadas (C). (D) o extrato de planta bruta foi esclarecido por filtração de saco, filtração de profundidade e filtração estéril de 0,2 μm. (E) o DFE foi então purificado pelo iMac. (F, G) O ligante purified da afinidade de DFE foi imobilizado em colunas de agarose reticuladas EDC/NHS-ativadas. (H) culturas bacterianas portadoras de anticorpos de codificação T-DNA 2f5 foram utilizadas para expressão transitória em plantas de N. javanica (I) cultivadas em fitontron. (J) as folhas de N. javanica foram colhidas e processadas conforme descrito em D. (K) Mab 2f5 foi purificada a partir do extrato esclarecido utilizando as colunas de afinidade DFE (L). Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Aplicações da resina nova da afinidade
Nós mostramos que as resinas personalizadas da cromatografia da afinidade para a captação de mAbs podem ser manufacturados imobilizando um ligante que contem um epítopo mAb-específico ao agarose Cross-linked NHS-ativado. Para projetar tal resina, era necessário saber a seqüência do epítopo e usar um epítopo linear. As resinas resultantes são vantajosas para a captura de mAbs porque poderiam potencialmente substituir as etapas de cromatografia de afinidade de proteína A dispendiosas. A interação entre 2f5 e DFE em nosso estudo de caso foi mediada pela ligação do epítopo-paratope, assim que nosso ligante deve ser mais seletivo do que a proteína a, que liga à região de FC da maioria de iggs murino e humano. Porque os ligantes individuais são necessários para cada MAB, nosso método pode inicialmente parecer apropriado principalmente para os anticorpos que são produzidos em uma escala muito grande. Entretanto, combinando nossa aproximação com a expressão transiente rápida planta-baseada da proteína, os ligantes novos da afinidade podem ser preparados em menos de 2 semanas27 com esforço mínimo28. Assim, o método também é adequado para a purificação de mAb de pequena escala.
Produção e melhorias potenciais do ligante da afinidade
As plantas oferecem uma plataforma de produção rápida e segura para ligantes de afinidade5,29,30, como a proteína de fusão DFE apresentada no nosso estudo de caso. Blanching o material de planta reduziu extremamente a quantidade de proteínas de pilha do anfitrião em uma única etapa e foi integrado facilmente em uma rotina padrão do esclarecimento. No entanto, a recuperação do ligante foi baixa na configuração atual, provavelmente devido à sua estabilidade térmica moderada e alguma ligação não específica às camadas filtrantes, conforme relatado para outros produtos31,32,33. A engenharia o portador para aumentar sua estabilidade térmica pode conseqüentemente ajudar a melhorar o rendimento do ligante no futuro, como descrito para o candidato vacinal da vacina da malária, a enzima antitumoral ppadi ou um β-glucosidase mesófilos34, 35,36. O mesmo vale para a etapa de filtração de profundidade, onde a engenharia de proteínas pode ajudar a reduzir a ligação não específica ao material filtrante37. Os custos de produção para DFE e ligantes semelhantes também podem ser reduzidos melhorando a eficiência geral de esclarecimento utilizando floculantes ou aditivos filtrantes38,39.
Quando dsred é usado como um portador, dá forma a um complexo tetramérica. Isso é vantajoso porque aumenta o número de epítopos por ligantes, mas também pode tornar o ligador mais suscetível à desmontagem ou desnaturação durante a cromatografia de afinidade. Uma proteína transportadora monomérica como a mCherry pode, portanto, ser preferível, pois é estável em pH baixo40, e a inclusão de repetições em tandem do epítopo aumentaria a avidez do ligador e, assim, aumentará a capacidade da resina5, 26 anos de , 41. para as proteínas simples do portador-epitope (isto é, aquelas sem ligações do dissulfeto ou modificações borne-translational) os sistemas de produção microbianos podem reduzir os custos de fabricação e fazer os ligantes mais competitivos com proteína a. Por exemplo, a proteína verde fluorescente tem sido expressa em células bacterianas com um rendimento de ~ 1 g · kg-1 de biomassa, o que reduziria significativamente os custos de produção de ligantes42.
Independentemente do hospedeiro de expressão, foi necessário um ligante de afinidade purificada durante o acoplamento para minimizar a imobilização de proteínas de células hospedeiras ou componentes de mídia que, de outra forma, podem reduzir a seletividade e capacidade da resina. A inclusão de uma etiqueta poli-histidina para a purificação do iMac aumentou a pureza para ~ 90% em uma única etapa, facilitando a produção rápida e barata de ligante5,43,44. Entretanto, a posição da etiqueta da fusão é importante porque tem o potencial para obstruir aberta a ligação do epítopo mapeado ou para induzir o clivagem da etiqueta ou do epítopo do portador45,46.
Imobilização da ligadura de afinidade em colunas de cromatografia ativadas pelo NHS
A imobilização foi realizada manualmente ou por meio de um sistema de cromatografia. Os pequenos volumes de buffer por coluna pareciam favorecer o manuseio manual (por exemplo, devido aos volumes mínimos de desperdício). No entanto, se forem necessárias colunas múltiplas/maiores, o sistema de cromatografia torna as condições de acoplamento mais fáceis de controlar (por exemplo, taxas de fluxo reguladas) e, portanto, é mais provável que consiga resultados reprodutíveis em termos de DBC. Nossos dados sugerem que o tampão de acoplamento e o pH têm um efeito importante na eficiência do acoplamento e nos custos totais da coluna. Fatores de triagem que influenciam a reação de acoplamento e ajustá-los para cada proteína transportadora (ou mesmo para cada transportadora – ligand Fusion) poderia, portanto, melhorar a eficiência de acoplamento e desempenho de resina, e recomendamos esta abordagem.
Testando o isolamento de 2F5 usando a resina de afinidade DFE
O rendimento e a pureza do produto são aspectos importantes do desempenho da resina e, no caso da DFE, obteve-se um rendimento de 105 ± 11% (± DP, n = 3) e uma pureza de 97 ± 3% (± DP, n = 3), o que é comparável ao desempenho das resinas de benchmark protein A25 ,26. Outro indicador-chave de desempenho para resinas em geral (e particularmente para aqueles baseados em ligantes de afinidade) é o DBC a 10% de avanço do produto, porque este parâmetro afeta a quantidade de resina necessária para um processo específico e, portanto, os custos. Para o ligand de DFE, o DBC inicial era ~ 4 g · L-1 resina, que é ~ 13% do valor correspondente para a proteína A em condições semelhantes (apenas 2 min tempo de contato)25,47 mas cerca de 15 vezes maior em comparação com outras resinas de afinidade personalizada, como o ligantes anti-FSH-imunoafinidade utilizando o mesmo tempo de permanência de 2 min48. O DBC de DFE declinou a 15% do valor começar após 25 ciclos do BIND-e-elute, visto que mais de 50 ciclos são exigidos para a mesma perda de DBC em resinas comerciais de A da proteína A49. No entanto, é importante notar que o nosso transportador ainda não foi otimizado na mesma medida que a proteína A, que tem sido exaustivamente investigado e melhorado ao longo das últimas quatro décadas8.
Até o momento, melhoramos a estabilidade da resina e a recuperação do produto, alternando de um tampão de eluição de baixo pH para uma alta concentração de cloreto de magnésio (Figura 3), como recomendado em estudos anteriores13. A cor vermelha característica do ligante de afinidade não se desvaneceu substancialmente durante os 25 ciclos de ligamento-e-elute, então nós especulamos que as proteases endógenas de plantas nos extratos de plantas esclarecidas31 podem ter truncado e, assim, inativado o epítopo da o ligand. Conseqüentemente, projetar os linkers protease-resistentes para conectar o portador e o epítopo pode ajudar a manter o DBC inicial sobre um número prolongado de ciclos. Dada a rápida e simples expressão e purificação do ligador DFE, seu acoplamento direto às resinas de cromatografia comercial, e seu excelente rendimento e pureza do produto, acreditamos que nosso método oferece uma alternativa adequada à proteína a para o purificação de mAbs e derivados de anticorpos que não se ligam à proteína a, especialmente se as melhorias para o portador e Linker pode melhorar a estabilidade do DBC e ligante. Esta suposição foi apoiada pela diferença pequena na constante da dissociação de DFE-purified e de proteína A-purified o anticorpo5de 2f5, indicando que nosso ligante novo da afinidade permite a recuperação de mAbs de alta qualidade.
Benefícios e limitações atuais do método
Produzindo o ligante da afinidade como uma fusão genética com uma proteína do portador aumenta a solubilidade em amortecedores aquosos e assim a compatibilidade com condições típicas do acoplamento do ligante. Em contrapartida, peptídeos em branco derivados da síntese de peptídeos em fase sólida podem ter solubilidade limitada nestas condições devido à sua sequência50, que não pode ser alterada porque é ditada pela sequência de aminoácidos do epítopo reconhecida pelo MAB para ser purificada. Outros usaram conseqüentemente uma síntese da em-resina de ligantes do peptide51. A capacidade de ligação estática da resina resultante foi alta (~ 80 g · L-1), mas o processo de preparo da resina é demorado, não foi relatada uma capacidade de ligação dinâmica e a pureza e recuperação obtidas foram menores do que em nossa abordagem. Uma vantagem adicional de um ligante da proteína da fusão na escala do laboratório é que o ligante e as variações dele podem ràpida ser produzidos, purified e testado com esforço mínimo em um sistema Easy-to-use da expressão da elevado-através de52.
As duas limitações atuais do método apresentado aqui são a baixa capacidade de ligação dinâmica de 3 g · L-1 e sua redução de 90% ao longo do ciclo de 25 ciclos de ligação e elute5. Essas limitações podem ser abordadas no futuro, aplicando condições de carga menos rigorosas e substituindo a transportadora DsRed atual por uma variante projetada e mais estável, respectivamente. Por exemplo, dobrar o tempo de contato atual de 2 a 4 minutos tem o potencial de dobrar a capacidade de ligação dinâmica como foi mostrado para algumas resinas protein A26.
Solucionando problemas
A tabela a seguir destaca os possíveis problemas que podem ser encontrados durante este protocolo e fornece dicas sobre como resolvê-los (tabela 1).
Tabela 1: problemas potenciais que podem ser encontrados e possíveis correções. | |||
Etapa do protocolo | Problema | Couse | Corrigir |
1 | As plantas não crescem | Condições de crescimento comprometidas | Verifique o pH e a condutividade do fertilizante |
Verifique as condições de temperatura e luz | |||
2 e 3 | Grandes quantidades de proteínas de células hospedeiras estão presentes após a extração | Precipitação incompleta | Verifique a temperatura durante a branqueamento |
Verifique a agitação no banho de branqueamento | |||
2 e 3 | Nenhum produto encontrado no extrato da planta | Temperatura de blanching demasiado elevada | Verifique a temperatura e o pH durante o branqueamento |
pH no tampão de branqueamento muito baixo | |||
3 | As grandes partes da haste ou da folha permanecem após a extração | Mistura incompleta no liquidificador | Certifique-se de que o material vegetal não é um plugue no liquidificador |
3 | Aumento rápido da pressão durante a filtração da profundidade | Seleção e/ou orientação incorreta do filtro | Verifique o tipo de filtro e a orientação |
4 | Pouca proteína de fusão durante a eluição/um monte de proteína de fusão em fluxo-através de | A resina IMAC não foi carregada com íons metálicos | Verifique se a resina IMAC foi corretamente carregada com íons |
A proteína de fusão perdeu a tag de afinidade | Evite a luz solar intensa e altas temperaturas durante o cultivo da planta | ||
4 | Proteína de fusão perdida durante a concentração | Proteína de fusão ligada à membrana | Verifique o tipo de membrana |
Certifique-se que o factor de concentração não foi demasiado elevado | |||
5 | Baixo rendimento do acoplamento | Seqüência incorreta de adição de reagente de acoplamento | Verifique os rótulos dos reagentes e a sequência de adição |
Preparação incorreta das colunas antes do acoplamento | Verifique as condições da coluna preparaiton | ||
5 e 6 | Baixo rendimento de mAb | Baixa expressão de mAb na biomassa vegetal | Teste de expressão de mAb em biomassa |
Baixa densidade do ligante | Verifique a pureza da preparação da proteína de fusão | ||
7 | Concentrações de proteínas muito baixas/elevadas no ensaio de Bradford | Formação de bolhas durante a pipetagem | Verifique se há bolhas no 96-bem palte |
7 | Baixa concentração de mAb durante a medição da SPR | Microplaqueta comprometida da proteína A | Compare com os resultados do mAb padrão com concentração conhecida |
Diluição incorrecta da amostra | Verifique a taxa de diluição e o tampão |
Tabela 1: problemas de disparo.
The authors have nothing to disclose.
Nós gostaríamos de reconhecer Ibrahim Al Amedi para cultivar as plantas de tabaco transgénicas e Dr. Thomas Rademacher para fornecer o vetor da expressão do tabaco. Os autores desejam agradecer ao Dr. Richard M. Twyman pela assistência editorial e Markus Sack por discussões frutíferas sobre a estrutura ligante de afinidade da DFE. Este trabalho foi financiado em parte pelos programas internos da Fraunhofer-Gesellschaft o n º Grant. Atraia 125-600164 e o estado de Norte-Rhine-Westphalia o Grant do Leistungszentrum no. 423 rede, produção adaptável. Este trabalho foi apoiado pelo Deutsche Forschungsgemeinschaft (DFG) no âmbito do grupo de formação de investigação “Drug-alvo de entrega de medicamentos” subvenção 331065168. A GE Healthcare apoiou a publicação de acesso aberto deste artigo.
10L/20L Bucket | n/a | n/a | Blanching equipment |
2100P Portable Turbidimeter | Hach | 4650000 | Turbidimeter |
ÄKTApure | GE Helthcare | 29018226 | Chromatography system |
Allegra 25R | Beckman Coulter | 369434 | Centrifuge |
Amine Coupling Kit | GE Healthcare | BR100050 | SPR chip coupling kit |
Amine Coupling Kit | GE Healthcare | BR100050 | SPR chip coupling kit |
Antibody 2G12 | Fraunhofer IME | n/a | Standard for SPR quantification |
Blender | Waring | 800EG | Blender |
BP-410 | Fuhr | 2632410001 | Bag filter |
CanoScan 5600F | Canon | 2925B009 | Scanner |
Centrifuge tube 50 mL self-standing | Labomedic | 1110504 | Reaction tube |
Chelating Sepharose FF | GE Helthcare | 17-0575-01 | Chromatography resin |
Cond 3320 | WTW | EKA 3338 | Conductometer |
Design-Expert(R) 8 | Stat-Ease, Inc. | n/a | DoE software |
Discovery Compfort | Gilson | F81029 | Multichannel pipette |
Disodium phosphate | Carl Roth GmbH | 4984.3 | Media component |
Diverse bottles | Schott Duran | n/a | Glas bottles |
Dri Block DB8 | Techne | Z381373 | Heat block |
DsRed | Fraunhofe IME | n/a | Standart |
EDTA | Carl Roth GmbH | 8043.2 | Buffer component |
EnSpire | Perkin Elmer | 2390-0000 | Plate reader |
ETHG-912 | Oregon Scientific | 086L001499-230 | Thermometer |
F9-C | GE Helthcare | 29027743 | Fraction collector |
Ferty 2 Mega | Kammlott | 5.220072 | Fertilizer |
Forma -86C ULT freezer | ThermoFisher | 88400 | Freezer |
HEPES | Carl Roth GmbH | 9105.3 | Buffer component |
Hettich Centrifuge Mikro 200 | Hettich | 2400 | Centrifuge |
HiPrep 26/10 | GE Helthcare | GE17-5087-01 | Chromtography column |
HiTrap NHS-activated Sepharose HP, 1 mL | GE Helthcare | 17-0716-01 | Chromatography columns |
Hydrochloric acid | Carl Roth GmbH | 4625.1 | Buffer component |
Imidazole | Carl Roth GmbH | 3899.2 | Buffer component |
K700 | Pall | 5302305 | Depth filter layer |
KM02 basic | IKA | n/a | Magnetic stirrer |
KS50P 60D | Pall | B12486 | Depth filter layer |
L/S 24 | Masterflex | SN-06508-24 | Tubing |
Lauda E300 | Lauda Dr Wobser GmbH | Z90010 | Immersion circulator |
Magnesium chloride | Carl Roth GmbH | KK36.2 | Buffer component |
Masterflex L/S | Masterflex | HV-77921-75 | Peristaltic pump |
Minisart 0.2 µm | Sartorius | 16534K | Filter unit |
Nalgene Rapid-Flow PES bottle top filter | Thermo Fischer Scientific | 595-4520 | Vacuum filtration of SPR buffers |
Nickel sulphate | Carl Roth GmbH | T111.1 | Buffer component |
Novex NuPAGE 4-12% BisTris LDS gels | Invitrogen | NP0336BOX | LDS-PAA gels |
Novex X-cell Mini Cell | Invitrogen | EI0001 | PAGE chamber |
NuPAGE 20x running buffer | Invitrogen | NP0002 | Buffer concentrate |
NuPAGE antioxidant | Invitrogen | NP0005 | Antioxidant |
PageRuler protein ladder (10-180 kDa) | Invitrogen | 26616 | Protein standart |
Perforated bucked | n/a | n/a | Blanching |
PH 3110 | WTW | 2AA110 | PH meter |
PowerPac HC | Biorad | 1645052 | Electrophoresis module |
Protein A from Staphylococcus aureus | Sigma-Aldrich | P7837-5MG | Coating of SPR chips |
Sephadex G-25 fine, cross linked dextran | GE Helthcare | 17003301 | Chromatography resin |
Silicone spoon | n/a | n/a | Spoon |
Simply Blue SafeStain | Invitrogen | LC6060 | Gel staining solution |
Sodium acetate | Carl Roth GmbH | 6773.1 | Buffer component |
Sodium acetate | Carl Roth GmbH | X891.1 | Media component |
Sodium azide | Sigma Aldrich | S2002-100G | Media component |
Sodium chloride | Carl Roth GmbH | P029.2 | Buffer component |
Sodium citrate | Carl Roth GmbH | HN13.2 | Buffer component |
Sodium bisulfite | Carl Roth GmbH | 243973-100G | Media component |
Sodium phosophate | Carl Roth GmbH | T877.2 | Media component |
SPR Affinity Sensor – High Capacity Amine | Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics | SPR-AS-HCA | SPR chip |
SPR-2/4 Surface Plasmon Resonance Analyzer | Sierra Sensors GmbH/Bruker Daltonics | n/a | SPR device |
SSM3 | Stuart | 10034264 | Mini Gyro-rocker |
Heated vessel, 20 L | Clatronic | n/a | Blanching chamber |
Sterile syringes, 2 mL | B. Braun | 4606027V | Syringes |
Syringe adpter (Union Luer F) | GE Helthcare | 181112-51 | Syringe adapter |
TE6101 | Sartorius | TE6101 | Precision scale |
Tween-20 (Polysorbate) | Merck | 8170721000 | Buffer component |
Unicorn 6.4 | GE Helthcare | 29056102 | Chromatography software |
Vacuum bags | Ikea | 203.392.84 | Plant storge |
VelaPad 60 | Pall | VP60G03KNH4 | Filter housing |
Vortex-Genie 2 | Scientific industries | SI-0236 | Vortex |
XK-26/20 column housing | GE Helthcare | 28-9889-48 | Chromtography column |