סרטן השחלות האיתור באמצעות פוטואקוסטי זרימה Cy, לנסות

סיכום

פרוטוקול מוצג כדי לזהות במחזור תאים סרטניים בשחלות ניצול מערכת מותאמת אישית של הזרמת פוטואקוסטית וממוקד חומצה פולית-הכתיר נחושת גופרתי.

תקציר

מחקרים רבים מראים כי הספירה של תאים סרטניים במחזור (CTCs) עשוי להראות הבטחה ככלי התחזיות לסרטן השחלות. אסטרטגיות נוכחיות לאיתור CTCs כוללות זרימה cy, התקנים מיקרו-פלואידים, ותגובת שרשרת פולימראז בזמן אמת (RT-PCR). למרות ההתקדמות האחרונה, שיטות לאיתור גרורות סרטן השחלות המוקדמות עדיין חסר רגישות וספציפיות הנדרשות עבור תרגום קליני. כאן, שיטה הרומן מוצג לאיתור של תאים סרטניים במחזור השחלות על ידי הזרמת פוטואקוסטית cy, שימוש במערכת הדפסה תלת ממדית מותאמת אישית (3D), כולל תא זרימה ומשאבת מזרק. שיטה זו משתמשת חומצה פולית-הכתיר נחושת ננו חלקיקים (פא-CuS NPs) כדי למקד את סקוב-3 תאים סרטניים בשחלות על ידי פכ. עבודה זו ממחישה את האהדה של סוכני הניגוד האלה לתאים סרטניים בשחלות. התוצאות מציגות אפיון NP, זיהוי פג, ו קליטת NP על ידי מיקרוסקופ פלואורסצנטית, ובכך להפגין את הפוטנציאל של המערכת הזאת הרומן לזהות CTCs השחלות בריכוזים רלוונטיים מבחינה פיזיולוגית.

מבוא

סרטן השחלות הוא אחד ממאירות גינקולוגית הקטלנית והביא המשוער 184,800 מקרי מוות ברחבי העולם ב 2018¹. מחקרים מרובים הראו את הקורלציה בין התקדמות סרטן השחלות (כלומר, גרורות) ונוכחות של ctcs^2,3,4. השיטה הנפוצה ביותר לאיתור ובידוד של CTCs מנצל את מערכת Cellsearch, אשר מטרות קולטן EpCam⁵. ביטוי EpCam, עם זאת, הוא מוסדר באפיתל למעבר mesenchymal, אשר היה מעורב גרורות סרטן⁶. למרות ההתקדמות, הטכנולוגיות הקליניות הנוכחיות עדיין סובלות מדיוק נמוך, מעלות גבוהה וממורכבות. בשל החסרונות האלה, טכנולוגיות חדשות לגילוי וספיר....

פרוטוקול

1. סינתזה הננו-חלקיק והפונקציונליזציה

הערה: סינתזה של ה-FA-CuS NPs מושגת באמצעות שיטת סינתזה של סיר אחד המותאמת לפרוטוקול²¹שפורסם בעבר.
התראה: כל הסינתזה אמורה להופיע במיזוג כימי מאוורר.

1. לפני סינתזה, לסנן כ 300 mL של מים מוכי (DI) למרות 0.2 יקרומטר מסנן סטרילי.
2. נקה בקבוקון זכוכית 250 mL עם פתרון לניקוי ולשטוף עם מים DI. הוסף 0.0134 g של CuCl₂ לתוך 100 mL של מים די כדי ליצור פתרון 1 מ"מ.
3. הוסף 0.015 גרם של חומצה פולית (FA) לפתרון CuCl₂ ומערבבים עבור ~ 5 דקות באמצעות בר מגנטי מעורר.
4. הוסף Na₂S · 9h₂O (0.024 g ב 100 μl די מים) מעל כ 10 ....

תוצאות

איור 1A מראה תמונה אופיינית של חלקיקים מסונתז. הגודל הממוצע של ננו-חלקיק אופייני הוא כ 8.6 ננומטר ± 2.5 nm. מדידת ננו-חלקיק בוצעה ב-ImageJ. הפונקציות של הסף ופרשת השדה הוחלו כדי להפריד בין החלקיקים למדידה. הקטרים האופקיים והאנכיים של כל חלקיק נמדדו בניצב אחד לשני וממוצעים עוד יותר. עבור DLS, מדידה ייצוגית מוצגת באיור 1ב. קוטר ההידרודינמי הממוצע לחלקיקים אלה הוא 73.6 ננומטר. חלקיקי נחושת גופרתי יש.......

דיון

פרוטוקול זה הוא שיטה ישירה לזיהוי של CTCs השחלות ניצול פג ו סוכן ניגודיות ממוקד של CuS. שיטות רבות נחקרו לאיתור ctcs השחלות, כולל התקנים microflu, RT-PCR, ו זרם הזריחה^{cy, 22,24,25}. טווח זה במורכבות, עלות ודיוק, הגבלת האפקטיביות שלהם בהגדרות הקליניות. פגלה מציג מספר יתרונות על פני שיטות מסורתיות אלה לאיתור CTCs, כולל היכולת לזהות CTCs בתוך דגימות החולה, ואת קלות התרגום שלה ביישומים vivo. פלק הוכח לזהות במדויק את ctcs ב מבחנה ובvi.......

חומרים

רשימת החומרים שנעשה בהם שימוש במאמר זה

שם	חברה	מספר קטלוג	הערות
0.025% טריפסין עם EDTA	Corning	25-053-Cl
0.2 ומיקרו; יחידת סינון ואקום m 1,000 מ"ל	VWR	10040-440	לסינון כמויות גדולות יותר של מי DI.
0.2 ומיקרו; מסנן מזרק סטרילי m	VWR	28145-477
	מודפס בתלת מימד	בהתאמה
	Instruments PXIe-5170R	250 MS/s, 8 ערוצים, 14 סיביות
Alconox	Sigma-Aldrich	242985-1.8KG	חומר ניקוי המשמש לניקוי כלי זכוכית.
Amicon Ultra-15 מסננים צנטריפוגליים	Millipore	UFC903024
Amicon Ultra-4 מסננים צנטריפוגליים	Millipore	UFC803024
Bright-Line Hematocytometer	Hausser Scientific	1492
נחושת (II) כלוריד	ACROS ORGANICS	206532500
צימוד אובייקטיבי	Thorlabs	LMH-10x-532	לזוג אור פועם לסיב אופטי.
שלב צימוד	ניופורט	F-91-C1-T	שלב לצימוד אור פועם למטרה. מחזיק FP-1A ו-LMH-10x-532
CPX סדרת ניקוי דיגיטלי אולטרסאונד אמבטיה	פישרברנד	דגם CPX3800
תוכנת רכישת נתונים	National Instruments NI	LabVIEW 2017 (32 סיביות)	LabVIEW המשמשת לסנכרון פולסי לייזר עם רכישת נתונים.
תוכנה לעיבוד נתונים	Mathworks	Matlab R2016a	שחזורים וגרפים שהופקו באמצעות תוכנת Matlab.
FBS	Sigma-Aldrich	F2442-500ML
סיבים צ'אק	ניופורט	FPH-DJ	משמש להחזקת הסיבים החשופים.
מצמד סיבים	ניופורט	FP-1A	שלב 3 צירים למיקום צ'אק סיבים וסיבים אופטיים במוקד המטרה.
חומצה פולית	סיגמא-אולדריץ'	F7876-10G
Formvar מצופה TEM רשתות	מדעי מיקרוסקופיה	FCF300-CU-SB
Masterflex Tubing	Cole Parmer	EW-96420-14
McCoy's 5A בינוני	ATCC	30-2007
נורמה-הזרקה 10 מ"ל מזרקים	HENKE SASS WOLF	4100-X00V0
סיבים אופטיים	Thorlabs	FG550LEC	משמש לחשיפת הדגימה לאור פועם.
PBS	Alfa Aesar	J62036
פניצילין סטרפטומיצין	GIBCO	15140-122
לייזר פועם	RPMC לייזרים בע"מ	Quantus-Q1D-1053	מקור לייזר פועם עם מפרט 1053 ננומטר, דופק 8 ns, מקסימום 10 הרץ.
פולסר/מקלט	Olympus	5077PR	מקבל, מסנן ומגביר אותות פוטו-אקוסטיים. מופעל עם רווח של 59 dB.
מכשיר סאטר	צינור נימי קוורץ	QF150-75-10
RPMI Midum 1640 (1x) ללא חומצה פולית	Gibco	27016-021
סיליקון	Momentive Performance Materials, Inc.	GE284
SKOV-3 תאים	ATCC	HTB-77
נתרן ביקרבונט	סיגמא-אולדריץ'	S5761
נתרן קרבונט	סיגמא-אולדריץ'	S7795-500G
נתרן הידרוקסיד חרוזים	BDH	BDH9292-500G
נתרן גופרתי Nonahydrate	Sigma-Aldrich	431648-50G
משאבות מזרק	New Era Pump Systems Inc	DUAL-1000
Texas Red-X-Succinimydl ester	Invitrogen	1949071
מתמר	Olynmpus	V214-BB-RM	גלאי אולטרסאונד עם תדר מרכזי של 50 מגה-הרץ ורוחב פס חלקי של -6 dB של 82%.
Trypan Blue Solution 0.4%	Amresco	K940-100ML
Tween 20	Sigma-Aldrich	P7949-100ML
אולטרסאונד ג'ל	Parker Laboratories Inc.	ג'ל אולטרסאונד Aquasonic 100	לצימוד מתמר

טנק כרטיס רכישה אישית National אלקטרונים