Summary
هنا نصف طريقة لتوليد الكتاكيت الخالية من الجراثيم من بيض خط اللاحم التجاري ، Ross PM3. يمكن تكييف هذه الطريقة لتوليد الحيوانات الخالية من الجراثيم من أنواع الدواجن الأخرى.
Abstract
يتم تسهيل الدراسات المتعلقة بمساهمة ميكروبات الأمعاء في فسيولوجيا المضيف والكفاءة المناعية من خلال توافر النماذج الحيوانية الخالية من الجراثيم ، والتي تعتبر المعيار الذهبي. طيور التعشيش هي نماذج مثالية لإنتاج خالية من الجراثيم حيث لا توجد حاجة لتربية أقاربها في ظل ظروف معقمة. يتم توليد الدجاج الخالي من الجراثيم بشكل رئيسي من خطوط تجريبية محددة خالية من مسببات الأمراض (SPF) ، والتي تمثل بشكل سيئ خطوط الدجاج التجارية. سمحت الطريقة المقترحة هنا بإنتاج دجاج خال من الجراثيم من خط اللاحم سريع النمو Ross PM3 ، الذي يشيع استخدامه من قبل صناعة الدواجن. تم جمع البيض بسرعة بعد وضعه في مزرعة مربي اللاحم. خضعوا لعملية إزالة تلوث صارمة من المجموعة إلى الإدخال في عازل تفريخ البيض المعقم. تم تفريخ الكتاكيت والاحتفاظ بها في هذه العوازل المعقمة خلال الفترة اللازمة للتحكم في عقمها. تم تطوير البروتوكول الحالي في الأصل لخط الساق الأبيض SPF التجريبي ، وقد تم تكييفه ليس فقط مع خط الدجاج اللاحم Ross PM3 ولكن أيضا مع السمان. ولذلك فهو يمثل إجراء قويا وقابلا للتكيف بسهولة مع أنواع الدواجن الأخرى والطيور المعششة ذات الأهمية الاقتصادية أو البيولوجية أو الإيكولوجية.
Introduction
كانت هناك زيادة كبيرة في الاهتمام العلمي والشعبي فيما يتعلق بمساهمة الميكروبات المعوية في صحة الحيوان. الميكروبات ، التي تتكون من البكتيريا والفيروسات والفطريات والعتائق التي تعيش في منافذ مختلفة في أمعاء الحيوان ، متورطة بشكل مباشر أو غير مباشر في تنظيم الأمراض الالتهابية والمعدية والأيضية التي تؤثر ليس فقط على أنواع الثدييات ولكن أيضا على الماشية ، مثل الدواجن1. تم تطوير العديد من النماذج الحيوانية لدراسة مساهمة ميكروبات الأمعاء في الصحة والمرض بشكل أفضل. على سبيل المثال ، تسمح الحيوانات الخالية من الجراثيم والحيوانات الجنوتوبيوتيكية بدراسة الغياب التام للميكروبات أو الميكروبات المعروفة ، على التوالي ، على علم الأمراض الفسيولوجي للعدوى 2,3. ومع ذلك ، فإن توليد هذه الحيوانات وصيانتها يتطلب تقنيات ومرافق متخصصة ، والتكاليف والعمالة والمهارات اللازمة للحفاظ عليها تحد من وصولها إلى العديد من الباحثين. في الواقع، يجب مراقبة الحيوانات الخالية من الجراثيم بانتظام بحثا عن التلوث المحتمل باستخدام مزيج من طرق زراعة البكتيريا، والفحص المجهري، والأمصال، والمورفولوجيا الإجمالية، وتقنيات الكشف القائمة على التسلسل. وتنطبق إجراءات مماثلة أيضا على الأنواع الأخرى، مثل الماشية، حيث تكون الحيوانات أكبر عموما وتتطلب مرافق أكبر لتكاثرها وصيانتها، مما قد يعوق، إلى حد ما، البحث عن الميكروبات.
الدواجن ، وبشكل أكثر تحديدا الدجاج ، هي حجر الزاوية في الإنتاج الحيواني في جميع أنحاء العالم ، مع قطيع قد يتجاوز عدد الطيور 40 مليار طائر سنويا. وهو أهم مصدر للبروتين الحيواني في العالم (http://www.fao.org/poultry-production-products/en/). علاوة على ذلك ، لا توجد محرمات ثقافية أو دينية مرتبطة بتربية الدجاج أو استهلاكه. تشارك ميكروبات أمعاء الدواجن بشكل مهم في نمو الحيوان ، ونسبة تحويل الأعلاف ، والمناعة ، ومقاومة مسببات الأمراض ، من بين العديد من العمليات الغذائية أو الفسيولوجية أو المرضية الأخرى4. لذلك لا غنى عن توليد الدجاج الخالي من الجراثيم للتأكيد على الحوار بين الميكروبات ومضيفها4. حتى لو كانت المجتمعات الميكروبية تعيش في قناة البيض5 للدجاج ، فإن محتوى البيضة التي تضعها الدجاجة السليمة طازجة خال في الغالب من الكائنات الحية الدقيقة ، وقشر البيض والأغشية التي تمتلك حواجز ميكانيكية لتجنب غزو الكائنات الحية الدقيقة4. بالإضافة إلى ذلك ، يتم تربية الكتاكيت بسهولة في غياب أقاربها ، والتي ، على عكس الثدييات ، تسمح بإنتاج خالية من الجراثيم دون تربية الوالدين في ظل ظروف معقمة.
المرفق التجريبي "علم العدوى من المزرعة والنماذج والحيوانات البرية" (PFIE، UE-1277، مركز INRAE Val de Loire، Nouzilly، فرنسا، https://doi.org/10.15454/1.5572352821559333e12) هو جزء من الشبكة الوطنية الفرنسية للبنية التحتية EMERG'IN (https://www.emergin.fr/). وقد أتقنت PFIE إنتاج الدجاج الخالي من الجراثيم لإجراء دراسات تجريبية مختلفة لأكثر من 40 عاما7،8،9،10،11. تم إنتاج هذه الحيوانات من بيض محدد خال من مسببات الأمراض (SPF) من خط وضع الساق الأبيض الذي تم تربيته في تربية مغلقة منذ عام 1970. تستخدم الطيور الخالية من الجراثيم بشكل رئيسي للدراسات الميكروبيولوجية7،8،9 ، وتعاني من عودة الاهتمام مع أسئلة مثل مساهمة ميكروبات الأمعاء في السلوك 13 ، واستخدام المغذيات14 ، وتنمية المناعة15 ونشاط الغدد الصماء. حتى لو تم نشر بعض الدراسات باستخدام خطوط اللاحم الخالية من الجراثيم16 ، فإن هذه الدراسات تظل ممثلة تمثيلا ناقصا مقارنة بالدراسات التي تستخدم خطوط الطبقة التجريبية. أدى تطور الأسئلة العلمية نحو الحديث المتبادل بين الميكروبات ومضيفها في صحة الدواجن ورفاهيتها إلى تكييف بروتوكولنا التاريخي لإنتاج دجاج التسمين الخالي من الجراثيم من خط Ross PM3 ، وهو خط الدجاج اللاحم الأكثر استخداما في العالم.
Protocol
ونفذت إجراءات رعاية الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعها توجيه مجلس الجماعات الأوروبية (86/609/EEC) واللوائح الفرنسية المتعلقة بالتجارب على الحيوانات.
1. إعداد العازل
- أدخل المواد اللازمة في عازل صلب تحت ضغط إيجابي: أنابيب 50 مل ، ماصات بلاستيكية 5 و 10 و 25 مل ، تغذية مشععة ، مياه معقمة وحاويات بلاستيكية مغلقة معقمة.
- املأ مصيدة الجراثيم المنقولة بمحلول أمونيوم رباعي بنسبة 2٪.
- تعقيم العازل ثلاث مرات ببخار الفورمالديهايد باستخدام 60 مل من الفورمالين (24٪ فورمالديهايد) يضاف إلى 30 جم من برمنجنات البوتاسيوم لكل متر مكعب (م3). حرك المواد داخل العازل بين كل تعقيم لضمان تعقيم جميع الأسطح الملامسة.
- اضبط درجة حرارة العازل على 37 درجة مئوية لمدة 2 أيام على الأقل قبل إدخال البيض. اضبط مقياس الرطوبة على 65-70٪ من الرطوبة النسبية (RH) في يوم المقدمة.
2. جمع البيض وحضانته
- جمع البيض من المزارع المختارة على أساس معدل تفريخ جيد للدجاج البياض (80٪ على الأقل في ذروة إنتاج البيض) وحالتها الصحية الجيدة (أي عدم وجود مسببات أمراض الدواجن الشائعة وغياب الأمراض داخل القطيع). اختر بصريا بيضا نظيفا وخاليا من العيوب على جهاز المشي.
- قم بإزالة التلوث على الفور من سطح البيض عن طريق غمسه لمدة 5 دقائق في محلول حمض بيراسيتيك بنسبة 1.5٪ في درجة حرارة الغرفة.
- انقل البيض إلى المنشأة التجريبية باستخدام صندوق ملوث ببخار الفورمالديهايد.
- تخزين البيض لمدة 24 ساعة في 4 درجة مئوية. كرر عملية إزالة التلوث الموضحة في الخطوة 2.2 ، وضعها في حاضنة الفقس (اليوم 0) لمدة 19 يوما.
3. الفقس
- في اليوم 19 ، تحقق من الخصوبة والجدوى (الحركة) وتطور الجنين عن طريق تبليغها باستخدام شمعة بيض خفيفة في ظل ظروف معقمة. أدخل البيض الحي الجنيني فقط في عوازل الفقس المعقمة.
- قم بإزالة التلوث من البيض المختار عن طريق رش محلول حمض بيراسيتيك بنسبة 1.5٪ لمدة 30 ثانية أو حتى يتم تغطية كامل سطح كل بيضة. سيبقى البيض على اتصال بالرذاذ لمدة 16 دقيقة و 30 ثانية أثناء النقل إلى العوازل.
- انقل البيض إلى عوازل الفقس المعقمة وشطفه بالماء المعقم الخالي من المعادن قبل وضعه في مساحة الفقس.
ملاحظة: تفقس الحيوانات وتربى في عوازل معقمة. يتم إطعامهم بنظام غذائي تجاري معقم بواسطة تشعيع غاما ويسقى بمياه الصنبور المعقمة التي توفرها موزعات المياه.
4. تحليل الحالة البكتريولوجية
- بعد يوم واحد من الفقس ، خذ عينة براز مباشرة من مستقيم الكتاكيت المختلفة وقم بجمعها في أنبوب زجاجي معقم من أجل جعل هذه العينة ممثلة لجميع الحيوانات داخل عازل معين.
- عينات البراز كونها سائلة إلى حد ما ، أضف ما يعادل 1 مل من البراز إلى 9 مل من مرق ثيوجليكولات مع ريسازورين. أضف عينة البراز المتبقية إلى 9 مل من مرق تسريب القلب في الدماغ (BHI) واحتضن الأنابيب عند 37 درجة مئوية دون اهتزاز لمدة 18 إلى 48 ساعة. سيسمح ذلك بنمو مجموعة واسعة من الأنواع الهوائية والهوائية الاختيارية وغير اللاهوائية.
ملاحظة: مرق ثيوغليكولات مع ريسازورين مخصص للكشف عن البكتيريا اللاهوائية غير الصارمة ولكنه يتيح أيضا الكشف عن البكتيريا الهوائية. يتوافق هذا الوسيط مع دستور الأدوية الأوروبي والأمريكي والياباني لاختبار العقم18،19،20. - راقب بصريا ما إذا كان أي تعديل في وسائط النمو يحدث بعد 18 ساعة من الحضانة. بعد 48 ساعة ، خذ قطرة من وسائط مرق البراز BHI ، وضعها على شريحة زجاجية وراقب تحت المجهر (تكبير 40X) لغياب أو وجود البكتيريا.
- إذا كان هناك اشتباه في وجود بكتيريا ، خذ عينة من ثقافة BHI وزرعها على ألواح أجار BHI. تحضن عند 37 درجة مئوية لمدة 18 إلى 48 ساعة.
- في حالة وجود مستعمرات ، قم بتنفيذ تقنيات عالية الإنتاجية مثل قياس الطيف الكتلي MALDI-TOF لتحديد الميكروبات بدقة.
ملاحظة: بعد 72 ساعة ، إذا كانت التحليلات البكتريولوجية سلبية ، يتم إعلان الحيوانات خالية من الجراثيم.
Representative Results
أجريت ستة أشواط من جيل الكتاكيت الخالية من الجراثيم باستخدام بيض روس PM3 القادم من مزرعتين فرنسيتين مختلفتين (الجدول 1). تم جمع ما مجموعه 853 بيضة وبعد خطوتين لإزالة التلوث و 19 يوما من الحضانة ، كانت 86.40٪ قابلة للحياة. خضعت 490 من هذه البيض القابلة للحياة لخطوة ثالثة لإزالة التلوث وتم إدخالها في مختلف عوازل الفقس ، بمتوسط معدل تفريخ يبلغ 79.80٪. وهذا يمثل معدل تفريخ يبلغ 68.94٪ مقارنة بالعدد الأولي للبيض الذي تم جمعه.
ومع ذلك ، تختلف نتائج الفقس اختلافا كبيرا وفقا للسلسلة التي تم تنفيذها: من 41.67٪ إلى 88.16٪ من الكتاكيت القابلة للحياة مقارنة بعدد البيض الذي تم جمعه. وقد لوحظت هذه الاختلافات أيضا بين الفتحات المختلفة خلال نفس التجربة. نظرا لأنه لم يتم استخدام جميع العوازل لجميع عمليات التشغيل ، فمن الصعب استبعاد التأثير المعتمد على العازل. ومع ذلك ، كان تأثير الدفعة هذا مرتبطا ارتباطا مباشرا بعمر الدجاج البياض (الشكل 1) ، حيث كان البيض القادم من الدجاج الأكبر سنا أقل قابلية للحياة.
تم تنفيذ الأشواط الستة باستخدام أربعة عوازل تفريخ مختلفة. بعد السيطرة البكتريولوجية ، تم تأكيد أن الحيوانات من 14 من أصل 16 عازلا خالية من الجراثيم. هذا يتوافق مع معدل نجاح 87.5 ٪. وكان العازلان المتبقيان ملوثين ببكتيريا بيئية واحدة وغير مسببة للأمراض.
ظلت جميع الحيوانات المستخدمة في التجارب العلمية خالية من الجراثيم حتى نهاية الدراسات ، لمدة ثلاثة أسابيع على الأقل بعد الفقس.
الشكل 1: تأثير عمر الدجاجة على معدل الفقس يسلط الشكل الحالي الضوء على معدلات الفقس التي لوحظت بناء على عمر قطيع الدجاج البياض ، والتي تم التعبير عنها في أسابيع من الزرع. يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| البيض الذي تم جمعه | D19 بيض قابل للحياة | D19 بيض قابل للحياة / بيض تم جمعه | البيض المنقول إلى عازل 1 | البيض المنقول إلى عازل 2 | البيض المنقول إلى عازل 3 | البيض المنقول إلى عازل 4 | مجموع البيض المنقول | فراخ قابلة للحياة تفقس في عازل 1 | فراخ قابلة للحياة تفقس في عازل 2 | الكتاكيت القابلة للحياة تفقس في عازل 3 | فراخ قابلة للحياة تفقس في عازل 4 | مجموع الكتاكيت المفرخة القابلة للحياة | عازل بيض فقس / منقولة قابل للحياة1 | عازل بيض فقس / منقولة قابل للحياة2 | عازل بيض مفرخ / منقول قابل للحياة3 | عازل بيض فقس / منقولة قابل للحياة4 | بيض فقس / منقولة قابلة للحياة عالميا | |
| تشغيل 1 | 101 | 93 | 92.08% | 23 | 24 | - | - | 47 | 22 | 23 | - | - | 45 | 95.65% | 95.83% | 95.74% | ||
| تشغيل 2 | 130 | 117 | 90.00% | 25 | 25 | 25 | 75 | 20 | 24 | 18 | - | 62 | 80.00% | 96.00% | 72.00% | 82.67% | ||
| تشغيل 3 | 132 | 97 | 73.48% | 26 | - | 26 | 45 | 97 | 14 | - | 13 | 28* | 27 | 53.85% | 50.00% | 62.22% | 56.70% | |
| تشغيل 4 | 130 | 116 | 89.23% | 36 | 35 | - | - | 71 | 33 | 34 | - | - | 67 | 91.67% | 97.14% | 94.37% | ||
| تشغيل 5 | 180 | 148 | 82.22% | 30 | 30 | 30 | 30 | 120 | 26* | 25 | 17 | 24 | 66 | 86.67% | 83.33% | 56.67% | 80.00% | 76.67% |
| تشغيل 6 | 180 | 166 | 92.22% | - | 40 | 40 | - | 80 | - | 35 | 35 | - | 70 | 86.67% | 87.50% | 87.50% | 87.50% | |
| مجموع | 853 | 737 | 86.40% | 140 | 154 | 121 | 75 | 490 | 89 | 141 | 83 | 24 | 337 | 82.14% | 91.56% | 68.60% | 69.33% | 79.80% |
الجدول 1: النتائج الفنية لتجارب الفقس المختلفة. يسلط هذا الجدول الضوء على نتائج 6 سلسلة من الفقس الخالي من الجراثيم التي تم تنفيذها: عدد البيض الذي تم جمعه ، وصلاحية الجنين في 19 يوما ، والكتاكيت القابلة للحياة في مختلف العوازل.
Discussion
تم وصف العديد من الطرق لتوليد دجاج خال من الجراثيم سابقا7،21،22. تستخدم الطرق البسيطة ، مثل تلك المعروضة هنا ، مطهرات مختلفة لتقليل الحمل البكتيري في سطح البيض وفي العوازل. المطهرات الأكثر استخداما هي كلوريد الزئبق والأمونيوم الرباعي واليود وهيبوكلوريت الصوديوم ومحاليل ثاني أكسيد الكلور. وغالبا ما تكون النتائج مرضية. ومع ذلك ، على الرغم من إمكانية الوصول إلى هذه الطرق ، إلا أن القليل من الهياكل يمكنها تطبيق الطريقة وتربية الحيوانات على نطاق واسع ، مما يجعل استخدام الدجاج الخالي من الجراثيم نهجا نادرا نسبيا ، يستخدم فقط لمعالجة أسئلة علمية محددة للغاية. تسمح الطرق والمواد والمعدات الموصوفة هنا بنسبة تفريخ عالية الكفاءة من الفراريج الخالية من الجراثيم ، والتي تظل صحية ومعقمة لمدة 3 أسابيع على الأقل (مدة التجارب العلمية التي تم إنتاجها لها).
وأظهرت النتائج أن تكييف البروتوكول لإنتاج الكتاكيت الخالية من الجراثيم من البيض الذي تم جمعه في مزارع الدواجن التجارية ناجح. تكشف الخبرة في إنتاج بيض SPF أن كفاءة الفقس تعتمد في المقام الأول على عمر الدجاج البياض وعلى جودة البيض الذي تم جمعه. وقد أخذت كلتا المعلمتين في الاعتبار عند اختيار المزارع وجمع البيض. باستخدام نفس الطريقة ، فإن متوسط معدل تفريخ الدجاج اللاحم الخالي من الجراثيم أفضل بكثير من ذلك الذي تم الحصول عليه في آخر إنتاج للدجاج البياض SPF في منشأتنا (79٪ مقابل 35٪) ، دون التأثير على عقم الحيوانات (87٪ مقابل 83٪). قد ترتبط هذه الاختلافات بالخلفية الوراثية للطيور (الدجاج اللاحم مقابل الطبقات) وكذلك بجودة قشر البيض ، الذي من المحتمل أن يكون أكثر هشاشة في بيض SPF ، التي يتم الاحتفاظ بها في تربية مغلقة لأكثر من 40 عاما. علاوة على ذلك ، نظهر أيضا أن نقل أكثر من 2 ساعة (من المزارع إلى المنشأة التجريبية) لا يؤثر على كفاءة الفقس وجودته.
على الرغم من تحسين عملية التعقيم المستخدمة في عوازل الفقس وبروتوكول إزالة تلوث البيض ، إلا أن حوالي 10٪ من العوازل لم تكن خالية من الجراثيم. من أجل فهم أصل التلوث ، من المهم جدا إجراء مراقبة العقم الروتينية للعوازل المفقوسة قبل إدخال البيض.
فيما يتعلق بحالة عقم الطيور ، حاولنا تطبيق طرق تسمح بنمو البكتيريا اللاهوائية الهوائية وغير السريعة من عينات البراز ، وبالتالي ضمان أننا نكتشف البكتيريا الحية القابلة للحياة. تتوافق هذه الطرق مع دستور الأدوية الدولي لاختبار العقم وتمثل تقنيات سريعة وسهلة ومخفضة التكلفة لاستخدامها بشكل روتيني. ومع ذلك ، يمكن تطبيق تقنيات البيولوجيا الجزيئية مثل تسلسل الجينات 16S rRNA ، على الرغم من عدم إعطاء معلومات عن صلاحية البكتيريا ، لتأكيد وجود بكتيريا غير قابلة للزراعة. في الواقع ، اقترحت دراسة حديثة أن بعض بكتيريا ميكروبات قناة البيض للأمهات يبدو أنها تنتقل إلى الجنين من خلال بياض البيض ، مما يشكل لاحقا معظم السكان البكتيريين في الأمعاء الجنينية5. علاوة على ذلك ، اقترحت دراسة أخرى أن جزءا من المستعمرين الميكروبيين الذين تم إيواؤهم في الأجنة المبكرة كانوا موروثين من دجاج الأمهات ، وأن وفرة ميكروبات الأمعاء وتنوعها تأثرا لاحقا بالعوامل البيئية وعلم الوراثة المضيف أثناء التطور23. ومع ذلك ، تستند نتائج هذه الدراسات إلى تحليل تسلسل الحمض النووي ، حيث يمكن أن يكون عدد كبير من هذه البكتيريا ميتا أو غير قابل للتكرار في بياض البيض (محمل بشكل كبير بجزيئات مضادة للميكروبات). أجرى توماس والمتعاونونمعه 16 اختبار العقم من خلال تقييم البكتيريا الهوائية والهوائية الاختيارية القابلة للزراعة من خلال إسقاط البراز على ألواح BHI ، وبالتالي تسليط الضوء على كفاءة الطرق البكتريولوجية القياسية للتحكم في العقم الخالي من الجراثيم. علاوة على ذلك ، في البروتوكول المقترح ، استخدمنا مراقبة النمو في مرق الثيوجليكولات مع ريسازورين لتكون قادرة على اكتشاف نمو البكتيريا اللاهوائية غير القوية.
يستخدم البروتوكول بالفعل لإنتاج السمان والدجاج الخالي من الجراثيم ، وهو قابل للتكيف مع إنتاج الحيوانات الخالية من الجراثيم من معظم الطيور المعششة ويقدم وجهات نظر لدراسة مساهمة الميكروبات في فسيولوجيا هذه الحيوانات. إلى جانب استخدام هذا النموذج للتحقيق في التفاعلات المتبادلة بين المضيف والميكروبات في أمعاء الدواجن ، يمكن أن يكون مفيدا أيضا للبحوث التطبيقية. على سبيل المثال ، يمكن استخدامه لتقييم سلامة وفعالية البروبيوتيك المشتقة من الكائنات الحية الدقيقة المشتركة في أمعاء الدجاج لتحسين صحة الحيوان ومتانته.
Disclosures
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
المؤلفون ممتنون للمربين وجمعية Boyé accouvage (La Boissière en Gâtine ، فرنسا) لتوريد البيض المخصب. أجريت هذه الدراسة تحت رعاية اتحاد الأبحاث APR-IA "INTEGRITY" (2017-2019) ، والذي تم تمويله من قبل مركز Région Centre Val de Loire ، فرنسا.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2 mL sterile plastic pipettes | Starsted | 86.1252.001 | |
| 50 mL tubes | Falcon | ||
| BHI agar plates | Thermo fisher diagnostic | PO1198A | |
| Brain Heart Infusion broth | Thermo fisher diagnostic | CM1135 | |
| Glass tubes with 9 mL BHI broth | home made and sterilized by autoclaving | ||
| Glass tubes with 9 mL thioglycolate broth with resazurin | home made and sterilized by autoclaving | ||
| Hatching incubator | Fieme | MG 576 | |
| Incubator | Memmert | for bacteriological culture, 37 °C | |
| Irradiated feed | Safe | U8983G10R | 40 kG irradiated |
| Isolators | home made. 1 m3 rigid isolator under positive pressure | ||
| Microbiological safety cabinet | thermon electron corporation | model: Hera Safe | |
| Microscope Visiscope series 300 | VWR | ||
| Pipette aid | Drummond | ||
| Plastic pipettes | |||
| Sterile sealed boxes | Tuperware | diameter | |
| Sterilized glass tube | "sovirel" | ||
| Thioglycolate Broth with Resazurin | Merck | 90404-500G | |
| Water bath | Fisher scientific | model: polystat 36, used to incubate 10 min at 100 °C the glass tubes with 9 mL thioglycolate broth with resazurin in order to regenerate the medium |
References
- Shang, Y., Kumar, S., Oakley, B., Kim, W. K. Chicken microbiota: importance and detection echnology. Frontiers in Veterinary Science. 23, 5 (2018).
- Grover, M., Kashyap, P. C. Germ-free mice as a model to study effect of gut microbiota on host physiology. Neurogastroenterology & Motility. 26 (6), 745-748 (2014).
- Umesaki, Y. Use of gnotobiotic mice to identify and characterize key microbes responsible for the development of the intestinal immune system. Proceedings of the Japan Academy, Ser. B, Physical and Biological Sciences. 90 (9), 313-332 (2014).
- Carrasco, J. M., Casanova, N. A., Fernández, M. E. Microbiota, gut health and chicken productivity: what is the connection? Miyakawa. Microorganisms. 7 (10), 374 (2019).
- Lee, S., et al. Characterization of microbial communities in the chicken oviduct and the origin of chicken embryo gut microbiota. International Journal of Scientific Reports. 9 (1), 6838 (2019).
- Hincke, M. T., et al. Dynamics of structural barriers and innate immune components during incubation of the avian egg: critical interplay between autonomous embryonic development and maternal anticipation. Journal of Innate Immunity. 11 (2), 111-124 (2019).
- Le Bars, J. Demonstration of a protocol for obtaining germ-free chickens. Annals of Veterinary Research. 7, 383-396 (1976).
- Lafont, J. P., et al. Experimental study of some factors limiting 'competitive exclusion' of Salmonella in chickens. Research in Veterinary Science. 34 (1), 16-20 (1983).
- Brée, A., Dho, M., Lafont, J. P. Comparative infectivity for axenic and specific-pathogen-free chickens of O2 Escherichia coli strains with or without virulence factors. Avian Diseases. 33 (1), 134-139 (1989).
- Dozois, C. M., et al. Bacterial colonization and in vivo expression of F1 (type 1) fimbrial antigens in chickens experimentally infected with pathogenic Escherichia coli. Avian Diseases. 38 (2), 231-239 (1994).
- Schouler, C., Taki, A., Chouikha, I., Moulin-Schouleur, M., Gilot, P. A genomic island of an extraintestinal pathogenic Escherichia coli strain enables the metabolism of fructooligosaccharides, which improves intestinal colonization. Journal of Bacteriology. 191 (1), 388-393 (2009).
- Porcheron, G., Chanteloup, N., Trotereau, A., Brée, A., Schouler, C. Effect of fructooligosaccharide metabolism on chicken colonization by an extra-intestinal pathogenic Escherichia coli strain. PLoS One. 7 (4), 35475 (2012).
- Kraimi, N., et al. Effects of a gut microbiota transfer on emotional reactivity in Japanese quails (Coturnix japonica). of Experimental Biology. 222, (2019).
- Stanley, D., et al. Intestinal microbiota associated with differential feed conversion efficiency in chickens. Applied microbiology and biotechnology. 96, 1361-1369 (2012).
- Han, Z., et al. Influence of the gut microbiota composition on Campylobacter jejuni colonization in chickens. Infection and Immunity. 85 (11), 0038017 (2017).
- Thomas, M., et al. Gut microbial dynamics during conventionalization of germ-free chicken. mSphere. 4 (2), 00035-00119 (2019).
- Langhout, D. J., Schutte, J. B., de Jong, J., Sloetjes, H., Verstegen, M. W., Tamminga, S. Effect of viscosity on digestion of nutrients in conventional and germ-free chicks. British Journal of Nutrition. 83 (5), 533-540 (2000).
- European Pharmacopoeia. European Pharmacopoeia (Ph. Eur.): Supplement 6.3, Sterility. , reference 01/2009:20601 (2009).
- Japanese Pharmacopoeia, Japanese Pharmacopoeia. Japanese Pharmacopoeia (JP): The 4.06 Sterility Test as it appeared in the partial revision of the JP 15th edition. , made official March 31, 2009, by the Ministry of Health, Labour and Welfare Ministerial Notification No. 190 (2009).
- United States Pharmacopeia (USP). United States Pharmacopeia (USP): Sterility Tests as presented in Pharmacopeial Forum, Interim Revision Announcement No. 6. 34 (6), December 1, 2008, official on May 1, 2009 (2008).
- Harrison, G. F. Production of germ-free chicks: a comparison of the hatchability of eggs sterilized externally by different methods. Laboratory Animals. 3 (1), 51-59 (1969).
- Yokota, H., Furuse, M., Okumura, J., Iwao Task, I. A simple method for production and rearing of the germ-free chick. J-STAGE home Nihon Chikusan Gakkaiho. 55 (8), (1984).
- Ding, J., et al. Inheritance and establishment of gut microbiota in chickens. Frontiers in Microbiology. 8, 1967 (2017).
