Summary
Proceduren beskriver isolering af villi fra musen tarm epitel under dedifferentiation at bestemme deres organoid danner potentiale.
Abstract
Clonogenicitet af organoider fra tarmepilem tilskrives tilstedeværelsen af stamceller deri. Musens lille tarmepilem er opdelt i krypter og villi: stammen og de spredte celler er begrænset til krypterne, mens villi epitelet kun indeholder differentierede celler. Derfor kan de normale tarmkrypter, men ikke villi, give anledning til organoider i 3D-kulturer. Den procedure, der er beskrevet her, gælder kun for villus epitel under dedifferentiation, der fører til dængle. Den beskrevne metode anvender Smad4-tab-af-funktion:β-catenin gain-of-funktion (Smad4KO:β-cateninGOF)betinget mutant mus. Mutationen får tarm villi til at dedifferentiate og generere stamceller i villi. Intestinal villi under dedifferentiation skrabes af tarmen ved hjælp af glas dias, placeret i en 70 μm si og vaskes flere gange for at filtrere eventuelle løse celler eller krypter før plating i BME-R1 matrix til at bestemme deres organoid-dannende potentiale. To hovedkriterier blev anvendt for at sikre, at de resulterende organoider blev udviklet fra dedifferentierende villus-rum og ikke fra krypterne: 1) mikroskopisk evaluering af den isolerede villi for at sikre fravær af tøjrede krypter, både før og efter plating i 3D-matrixen, og 2) overvågning af tidspunktet for organoidudvikling fra villi. Organoid indledning fra villi forekommer kun to til fem dage efter plating og vises uregelmæssigt formet, mens krypt-afledte organoider fra samme intestinale epitel er synlige inden for seksten timer efter plating og synes sfærisk. Begrænsningen af metoden er imidlertid, at antallet af organoider dannet, og den tid, der kræves for organoid indledning fra villi varierer afhængigt af graden af dedifferentiation. Afhængigt af mutationens specificitet eller den fornærmelse, der forårsager dedifferentiationen, skal det optimale stadium, hvor villi kan høstes for at analysere deres organoiddannende potentiale, derfor bestemmes empirisk.
Introduction
Tarmklypterne, men ikke villi, danner organoider, når de dyrkes i Matrigel eller BME-R1 matrix. Disse organoider er selvorganiserende strukturer, ofte omtalt som "mini-gut" på grund af tilstedeværelsen af de forskellige differentierede slægter, stamfader og stamceller, der er til stede i tarmepilet in vivo. Potentialet til at danne organoider fra krypter tilskrivestilstedeværelsenaf stamceller 1 . Tarm villi på den anden side består kun af differentierede celler, og kan derfor ikke danne organoider. Mutationer2 eller tilstande, der tillader dedifferentiation af villus epitel, kan dog føre til stamceller i villi2,3. Denne skæbneændring, der resulterer i dængle i villi epitelet, kan bekræftes ved at plating den dedifferentierende villus epitel i 3D-matrix for at bestemme deres organoiddannende potentiale som en indikator for de-novo stilk i villus epitel. Derfor er det kritiske aspekt af denne procedure at sikre fravær af kryptforurening.
Smad4KO:β-cateninGOF betingede mutation forårsager dedifferentiation i tarmepilet, der er præget af udtrykket spredning og stamcellemarkører i villien, og til sidst dannelsen af kryptlignende strukturer i villi kaldet ektopiske krypter Tilstedeværelsen af stamceller disse dedifferentierede villi blev bestemt af ekspressionen af stamceller markører i de ektopiske krypter (in vivo) og mutant villiens evne til at danne organoider wh en forgyldt Matrigel3. Nedenstående procedure uddyber den metode, der anvendes til at bekræfte stammen af det dedifferentierende tarmepilet i Smad4KO: β-cateninGOF mutantmus. Et centralt element i denne metode til isolering af villi var brugen af skrabning af tarm lumen, i modsætning til EDTA kelation metode4. I modsætning til EDTA-kelationsmetoden bevarer villi isolation ved skrabning størstedelen af det underliggende mesenchyme og gør det muligt at justere skrabetrykket for at give villi uden tøjrede krypter. Skrabningens tryk er subjektivt for operatøren, og derfor skal det optimale tryk for at give villi uden krypter bundet bestemmes empirisk af operatøren. Det afgørende ved denne procedure er at sikre, at der ikke er tale om kryptforurening ved mikroskopisk undersøgelse af villien både før og efter plating i BME-R1-matrixen.
Intestinal villi skrabes af tarm lumen med glas dias og placeres i en 70 μm filter og vaskes med PBS at slippe af med løse celler eller krypter, hvis nogen, før plating i BME-R1 matrix. Metoden understreger følgende kriterier for at undgå kryptforurening: a) begrænsning af villihøsten den proksimale halvdel af duodenum, hvor villien er længst, b) minimering af antallet af villi-givende skrammer, c) vask af filteret, der indeholder villi gennem en række PBS i en seks-brønds skål, og d) bekræfter fraværet af kryptforurening ved mikroskopisk undersøgelse før og efter plating i BME-R1 matrix. Villi isolation ved skrabning, snarere end ved EDTA kelation, forhindrer det fuldstændige tab af den underliggende mesenchyme, der kan give nichesignaler5,6,7,8, hvis det kræves, for organoid indledning fra villus epitel.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle mus eksperimenter udført, herunder brugen af Tamoxifen og aktiv dødshjælp ved cervikal dislokation, havde godkendelse af den institutionelle Animal Care and Use Udvalg på Stevens Institute of echnology.
1. Mus
BEMÆRK: Produktionen af Smad4f/f; Fremstilling på grund af den anden 1000 og1980'ereog den10. Villin-CreERT2 mus er tidligere blevet beskrevet3. Voksne hunmus mellem otte og tolv uger blev brugt.
- Fremkalde Smad4KO:β-cateninGOF-mutationen i Smad4f/f; Fremstilling på grund af den anden 1000 og1980'ereog den10. Villin-CreERT2 med intraperitoneal injektion af Tamoxifen i majsolie i fire på hinanden følgende dage.
- Ofre miceby cervikal dislokation ti dage efter den første tamoxifen injektion.
- Spray maven med 70% ethanol for at forhindre musepels i at komme ind i bughulen.
- Åbn bughulen med dissektionssaks for at eksponere tarmen. Isoler tarmen ved hjælp af saksen og sammentvingerne.
BEMÆRK: Samtidig tab af Smad4 sammen med gevinst af funktionsmutation af β-catenin (Smad4KO;β-cateninGOF) i tarmepilem blev opnået ved injektion afSmad4f/f; Fremstilling på grund af den anden 1000 og1980'ereog den10. Villin-CreERT2 mus hver dag i fire på hinanden følgende dage med 0,05 g Tamoxifen /kg kropsvægt i majsolie. Disse mus høstes ti dage efter den første tamoxifen injektion for at sikre tilstedeværelsen af celler, der udtrykker stamcelle-associerede markører i dedifferentiating villi.
2. Duodenum isolation og forberedelse
- Dissekere den proksimale halvdel af duodenum.
- Skyl duodenum med 5 mL iskold PBS i en 10 mL sprøjte for at rydde det lysende indhold.
- Åbn tolvfingertarmen i længderetningen med en vinklet saks og læg tolvfingertarmen fladt på en 15 cm petriplade på is med tolvfingertarmens lumen vendt mod operatøren.
3. Villi isolation ved skrabning
- Før skrabningen påbegyndes, skal du placere en 70 μm mesh si i en af brøndene på en 6-brønd vævskulturplade. Fyld alle brønde med 4 mL 1x PBS og læg 6-brøndvævskulturpladen på is (figur 1).
- Skrab villi som følger ved hjælp af to mikroskopiske glasrutschebaner: den ene til at holde duodenumet nede og det andet at skrabe (Figur 1B1).
- Skrab den lysende side af duodenum overfladisk frem og tilbage to gange for at fjerne slim. Påfør tryk, så dette trin fjerner slimlaget, men ikke villi.
- Skrabe duodenum igen, frem og tilbage to gange anvender det samme tryk som i 3..1, hvor villi kan ses indsamling på dias (Figur 1B2). Dette er det optimale tryk (som skal bestemmes empirisk af operatøren) for at give villi uden krypter bundet.
- Brug en 1 mL-overførselspipet, der indeholder PBS, til at overføre villien (som opsamles på diaset fra trin 3.2.2.) til en 70 μm mesh-si, der er anbragt i en 6-brønds skål. Villi indsamles således efter hver skrabe(figur 1B2).
- Villi opsamles i 70 μm si (fra trin 3.3) ved at overføre si (med villi) gennem en række brønde i en 6-brønds skål, der indeholder kold PBS (~ 4 mL / brønd). Dette er for at fjerne løse krypter, hvis nogen.
- Ved hjælp af en p1000 pipet overføres villiaffjedringen i PBS (~ 3 mL) fra 70 μm-sien til et nyt 15 mL rør på is.
- Brug en 0,1% BSA belagt stump-ended p200 pipet spids til at aspirere 50 μL volumen af villi suspension på et glas dias. Tæl antallet af villi i 50 μL-dråben under 4x forstørrelse for at bestemme koncentrationen af villi i PBS-suspensionen. For eksempel, hvis der er 10 villi i 50 μL suspension undersøgt, så villi koncentration er 0,2 villi/μL. Det er også tid til at bekræfte fraværet af tøjrede krypter.
- Den mængde villiaffjedring, der kræves for at plade, beregnes i en koncentration på 0,5 villi/μL BME-R1 matrix. Tilføj en ekstra 100 μL for at tage højde for pipettering fejl og det volumen, der kræves for mikroskopisk undersøgelse er nødvendige for at sikre renheden af villi.
FORSIGTIG: Det tryk, der anvendes i de to første skrammer, der fjerner slim, men ikke villi, bør anvendes i de efterfølgende skrammer, hvor villi vil blive frigivet. Begræns antallet af frem og tilbage skrabninger til to efter villi frigivelsen er først observeret. Denne foranstaltning undgår frigivelse af villi med krypter bundet. Det er vigtigt at mikroskopisk evaluere villi for at sikre fraværet af de tøjrede krypter.
4. Plating af villi på BME-R1 matrix
- Ved hjælp af en 0,1% BSA belagt p200 stump-ended pipet tip, overføre til en mikrocentrifuge rør mængden af villi (fra trin 3,6), der kræves for at plade på en tæthed af ~ 6 villi per brønd i 12,5 μL af BME-R1 matrix. Brugen af BSA-coatede stumpe spids på dette punkt sikrer, at villi, som er for stor til en spids spids, suges uden at blive blokeret eller tabt fra at sidde fast på spidsens sider.
- Skru ned for villi i 2 min ved 200 x g i en nedkølet centrifuge (4 °C) og fjern supernatanten.
- Gentag trin 4.2 for at fjerne eventuelle resterende PBS og gå videre til næste trin under en laminar flow-hood.
- Resuspend villi pellet forsigtigt i den nødvendige mængde af kolde BME-R1 optøet på is.
- Ved hjælp af en p20 pipet, plade 12,5 μL/brønd af villi i BME-R1 matrix i 3D i en forwarmed 96-godt U-bund plade.
- Inkuberes pladen i en vævskulturkuvøse ved 37 °C i 15 minutter for at muliggøre størkning af BME-R1-matrixen.
- Tilsæt 125 μL/brønd af forvarmet ENR (Epidermal vækstfaktor/Noggin/R-spondin1) medier: avancerede DMEM F-12 medier, suppleret med 1x Penicillin: Streptomycin, 10 mM HEPES, Glutamax, 50 ng/mL EGF, 100 ng/mL Noggin, 5% konditionerede medier fra HEK293-T-celler, der udtrykker R-Spondin1, 1x N2, 1x B27, 1 mM N-acetylcystein og 0,05 mg/mL Primocin.
- Inkubere den belagt villi i en vævskultur inkubator vedligeholdes ved 37 °C med 5% CO2, og ændre medierne hver anden dag.
- Kassér enhver brønd, hvor organoider vises før to dage efter plating, da det tidligste tidspunkt, hvor villi-afledte organoider forventes, er efter to dage.
BEMÆRK: Enhver villi, der har halvdelen eller mere end halvdelen af længden af villi tælles som en villus. I modsætning til kryptafledte organoider forventes villi-afledte organoider ikke inden for 24 timer efter plating. Den organoid-indledende villi synes at være mørkere og skrumpende forud for dannelsen af organoider. Derfor bør eventuelle brønde med organoider, der udvikler sig inden for en dag efter plating, kasseres for at undgå sandsynligheden for at have afledt af plausibel kryptforurening. Den metode, der anvendes til at fremstille de konditionerede medier, kan rek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den afgørende faktor for procedurens succes er at forhindre kryptforurening. Organoidudvikling fra villien (og ikke fra nogen kontaminerende krypter) sikres ved at bekræfte fire hovedkriterier: 1) at sikre renheden af den høstede villi ved mikroskopisk undersøgelse før og efter plating af villi i BME-R1, 2) plating begrænset antal villi pr. brønd for at muliggøre visualisering af alle de belagt villi individuelt, 3) omitoring af udviklingen af organoid dagligt; billeder af tidskurset viser udviklingen af organoider fra villi (figur 3) og 4) omitoring af kinetika og morfologiske udseende af organoider indleder fra villi; organoider, der starter fra villi, forekommer uregelmæssigt formet i starten og tager to til fem dage, før de kan ses under 4x forstørrelse i modsætning til de kryptafledte organoider (kultiveret ved at isolere krypter ved hjælp af EDTA/PBS-kelationsmetoden1,4), der fra den ene dag til den anden fremstår som sfæriske strukturer med veldefinerede kanter (figur 2).
Den optimale tid til at ofre musene til test af villisens organoiddannende potentiale er efter dedifferentierende villi-epitel express stamcellemarkører og begynder udviklingen af ektopiske krypter i villi in vivo (ca. 10 dage efter Tamoxifen injektion af Smad4f/f; Fremstilling på grund af den anden 1000 og1980'ereog den10. Villin-CreERT2 mus). Disse mus har en tamoxifen inucible cre-rekombininase, der forårsager Smad4 tab samtidig med β-catenin aktivering med tamoxifen. De ektopiske krypter udvikler sig fuldt ud inden for to uger efter induktion af mutationen, mens stamcellerne i villus epitel vises inden for en uge efter induktion af mutation in vivo. Antallet af villi, der danner organoider, når de er forgyldt i Matrigel, er rapporteret at variere mellem 2% og 12%3. Høst af mutant mus til plating villi omkring det tidspunkt, hvor stamceller er til stede (omkring en uge efter cre-recombinase induktion) vil forlænge den tid, der kræves for villi-afledte organoider vises, mens forsinke høsten til senere end ti dage efter cre-induktion øger risikoen krypt af forurening.
Figur 1: Eksperimentel opsætning og villi-skrabning fra tarmepilet. A) PBS-fyldt sprøjte (syrg) med slanger og filter (Fltr) i PBS. B) Villi-isolering ved skrabning (B1) og overførsel til et filter (B2). Pilen peger den villi indsamlet på diaset. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Sondring i udseendet af organoider, der kommer ud af krypterne versus den dedifferentierede villi epitel fra samme mus tarm: A) Cartoon viser villus og krypter. B) Hele mount (i PBS) af villi udarbejdet ved skrabning (øverste panel) og krypter udarbejdet af EDTA-kelation (lavere panel). C) Villi-afledte (øverste panel) og krypt-afledte (lavere panel) organoider fra samme mus intestinal epitel i BME-R1 (skala barer, 500 um). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Tidsforløb af organoid dannelse fra dedifferentierende villi. Organoid indledning fra to forskellige villi er vist (de boxed regioner er forstørret i midten og bunden paneler). Villi med organoiddannende potentiale synes tæt, muligvis på grund af fastholdelsen af det underliggende mesenchyme. Organoid indledning fra villus er tydelig på dag to (fast pil) fra en af villi (boks med brudt grænse), mens der i den anden villus (kasse med fast grænse) organoid vises på dag fire (pil). Den øverste boks i dag 6 panelet viser en udviklet villi-afledt organoid. Skalalinje, 100 μm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne metode kan bekræfte selvfornyelseskapaciteten ved at dedifferentiere villi epitelium, der erhverver stamcellemarkører in vivo. Den normale intestinale epitel kan give anledning til organoider fra krypten, men ikke villi-rummet, når det dyrkes i 3D på grund af tilstedeværelsen af stamceller i krypterne1. Således bekræfter organoid dannelse fra dedifferentiated villi epitel dyrkes i 3D-kulturer stamcelledannelse fra celle skæbne vending. Rapporter om omvendt celle skæbne i tarmepilet som følge af mutationer og/eller skade stiger2,3,9,10,11,12. Derfor anvendes denne metode i lignende scenarier, hvor dedifferentierende villi epitel express stamcellemarkører in vivo.
Vi bekræftede udviklingen af organoiderne fra villi af Smad4KO:β-cateninGOF mutant gennem tiden, der viser udviklingen af organoid fra villi (figur 3). Det mest kritiske aspekt er at træffe forebyggende foranstaltninger mod kryptforurening, hvilket ville føre til falske positiver. Der blev truffet følgende foranstaltninger for at sikre renheden af villipræparatet før og efter plating: a) isolering af villi fra den proksimale halvdel af duodenum, hvor villien er længst, b) minimering af antallet af skrammer og justering af skrabetrykket for at give villi uden tøjrede krypter, c) vask villi med PBS efter at have placeret dem i en 70 μm mesh si for at udelukke løse krypter eller celler d) mikroskopisk undersøgelse af den høstede villi før og efter plating, og e) minimere antallet af villi belagt pr brønd, så de kan visualiseres individuelt i den belagt matrix.
Der blev gjort flere overvejelser for at optimere proceduren. For det første høstede vi villi fra det proksimale duodenum, hvor villi er længst. Den fysiske afgrænsning mellem differentiering og de proliferative rum i tyndtarmen giver os mulighed for at vedtage skrabning for mekanisk at adskille villi fra krypterne. Denne metode kan således kun anvendes i de tilfælde, hvor opdelingen mellem differentiering og proliferative rum er strengt afgrænset - som det er tilfældet i tyndtarmen, men ikke i tyktarmen. For det andet optimerede vi tidspunktet for villi isolation efter induktion af mutationen baseret på graden af dedifferentiation observeret in vivo. Dedifferentiation i den betingede Smad4KO:β-cateninGOF mutant er præget af udseendet in vivo af stamcelle markører og ektopiske krypter i villus epitel inden for syv og ti dage henholdsvis3. Således falder den tid, der kræves for at indlede organoider fra mutant villi, efterhånden som tiden er gået efter induktion af mutationen, øges. Derfor, mens tilpasning af denne metode til andre dedifferentiation modeller af tarmen, den optimale tid til at ofre mus for villi isolation bør bestemmes empirisk afhængigt af den slags mutation eller skade og graden af efterfølgende dedifferentiation in vivo. For det tredje valgte vi at isolere villi ved skrabning snarere end ved EDTA-kelationsmetoden for at bevare den underliggende mesenchyme, da epitel-mesenkymale krydsforhandlinger har været impliceret i tarmstamcellefunktionen i tarmen5,6,7,8,13. Villi, der indleder organoiderne, forekommer hovedsageligt mørke, muligvis på grund af tilstedeværelsen af det underliggende mesenchyme (Figur 2B og 3). Vi verificerede udtrykket af stamcelle tilhørende markør CD4414,15, og tarmen specifikke transskription faktor Cdx216,17,18,19,20 bekræfter epitel oprindelse villi-afledte organoider ( FigurS1).
Sammenlignet med in vivo-tilgange er organoider mere modtagelige for genmanipulation og screening. Da vi observerer fænotypiske forskelle mellem de organoider, der kommer ud af krypterne og villi af samme Smad4KO: β-cateninGOF intestinal epitel (Figur 2B), vi spekulere molekylære forskelle mellem de to, som i øjeblikket er ved at blive undersøgt. Således er denne metode nyttig til at undersøge konsekvenserne af dedifferentiation-forårsager mutationer og dens differentialvirkninger i stamfader versus differentiering rum.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen interessekonflikter.
Acknowledgments
Denne publikation blev støttet af Award Number K22 CA218462-03 fra NIH National Cancer Institute. HEK293-T-cellerne, der udtrykte R-Spondin1, var en generøs gave fra Dr. Michael P. Verzi.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Advanced DMEM F-12 media | Gibco | 12634010 | |
| 3,3-diaminobenzidine | Vector Labs | SK-4105 | |
| 96 well U-bottom plate | Fisher Scientific | FB012932 | |
| ABC kit | Vector Labs | PK4001 | |
| Angled scissor | Fisher Scientific | 11-999 | |
| Animal-Free Recombinant Human EGF | Peprotech | AF-100-15 | |
| B-27 Supplement (50X), minus vitamin A | Gibco | 12587010 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) Protease-free Powder | Fisher Scientific | BP9703100 | |
| CD44 antibody | BioLegend | 1030001 | |
| Cdx2 antibody | Cell Signaling | 12306 | |
| Corn oil | Sigma-Aldrich | C8267-500ML | |
| Corning 70-micron cell strainer | Life Sciences | 431751 | |
| Cultrex Reduced Growth Factor Basement Membrane Extract, Type R1 | R&D | 3433-005-R1 | |
| Dissection scissors | Fisher Scientific | 22-079-747 | |
| Forceps | Fisher Scientific | 17-456-209 | |
| Glutamax (100X) | Gibco | 35050-061 | |
| HEK 293-T cells expressing RSPO-1 | Gift from Dr. Michael Verzi | ||
| HEPES (1M) | Gibco | 15630-080 | |
| Histogel | Thermoscientific | HG-4000-012 | |
| Mesh filter | Fisher Scientific | 07-201-431 | |
| Micrscope glass slide | VWR | 89218-844 | |
| N-2 Supplement (100X) | Gibco | 17502048 | |
| N-acetyl cysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
| p200 Blunt tips | VWR | 46620-642 | |
| Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL) | Gibco | 15140-122 | |
| Primocin (50mg/mL) | Invivogen | ant-pm-1 | |
| Quality Biological Inc PBS (10X) | Fisher Scientific | 50-146-770 | |
| Recombinant Murine Noggin | Peprotech | 250-38 | |
| Signal diluent | Cell Signaling | 8112L | |
| Tamoxifen | Sigma-Aldrich | T5648-1G | |
| 6-well tissue culture plate | Fisher Scientific | 50-146-770 |
References
- Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
- Schwitalla, S., et al. Intestinal tumorigenesis initiated by dedifferentiation and acquisition of stem-cell-like properties. Cell. 152 (1-2), 25-38 (2013).
- Perekatt, A. O., et al. SMAD4 Suppresses WNT-Driven Dedifferentiation and Oncogenesis in the Differentiated Gut Epithelium. Cancer Research. 78 (17), 4878-4890 (2018).
- Roche, J. K. Isolation of a purified epithelial cell population from human colon. Methods in Molecular Medicine. 50, 15-20 (2001).
- Aoki, R., et al. Foxl1-expressing mesenchymal cells constitute the intestinal stem cell niche. Cellular and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 2 (2), 175-188 (2016).
- Seiler, K. M., et al. Tissue underlying the intestinal epithelium elicits proliferation of intestinal stem cells following cytotoxic damage. Cell and Tissue Research. 361 (2), 427-438 (2015).
- Stzepourginski, I., et al. CD34+ mesenchymal cells are a major component of the intestinal stem cells niche at homeostasis and after injury. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (4), 506-513 (2017).
- Roulis, M., et al. Paracrine orchestration of intestinal tumorigenesis by a mesenchymal niche. Nature. 580 (7804), 524-529 (2020).
- Haramis, A. P., et al. De novo crypt formation and juvenile polyposis on BMP inhibition in mouse intestine. Science. 303 (5664), 1684-1686 (2004).
- Madison, B. B., et al. Epithelial hedgehog signals pattern the intestinal crypt-villus axis. Development. 132 (2), 279-289 (2005).
- van Es, J. H., et al. Dll1+ secretory progenitor cells revert to stem cells upon crypt damage. Nature Cell Biology. 14 (10), 1099-1104 (2012).
- Tetteh, P. W., et al. Replacement of Lost Lgr5-Positive Stem Cells through Plasticity of Their Enterocyte-Lineage Daughters. Cell Stem Cell. 18 (2), 203-213 (2016).
- Baulies, A., et al. The Transcription Co-Repressors MTG8 and MTG16 Regulate Exit of Intestinal Stem Cells From Their Niche and Differentiation Into Enterocyte vs Secretory Lineages. Gastroenterology. 159 (4), 1328-1341 (2020).
- Zeilstra, J., et al. Stem cell CD44v isoforms promote intestinal cancer formation in Apc(min) mice downstream of Wnt signaling. Oncogene. 33 (5), 665-670 (2014).
- Gracz, A. D., et al. Brief report: CD24 and CD44 mark human intestinal epithelial cell populations with characteristics of active and facultative stem cells. Stem Cells. 31 (9), 2024-2030 (2013).
- Gao, N., White, P., Kaestner, K. H. Establishment of intestinal identity and epithelial-mesenchymal signaling by Cdx2. Developmental Cell. 16 (4), 588-599 (2009).
- Verzi, M. P., Shin, H., Ho, L. L., Liu, X. S., Shivdasani, R. A. Essential and redundant functions of caudal family proteins in activating adult intestinal genes. Molecular and Cellular Biology. 31 (10), 2026-2039 (2011).
- Verzi, M. P., Shin, H., San Roman, A. K., Liu, X. S., Shivdasani, R. A. Intestinal master transcription factor CDX2 controls chromatin access for partner transcription factor binding. Molecular and Cellular Biology. 33 (2), 281-292 (2013).
- Grainger, S., Hryniuk, A., Lohnes, D. Cdx1 and Cdx2 exhibit transcriptional specificity in the intestine. PLoS One. 8 (1), 54757 (2013).
- Stringer, E. J., et al. Cdx2 determines the fate of postnatal intestinal endoderm. Development. 139 (3), 465-474 (2012).
