Summary
Ultralyd i høj opløsning kan hjælpe med at strømline eksperimenter, der kræver tidsbestemte gravide mus ved at bestemme tilstanden af graviditet, svangerskabsalder og graviditetstab. Præsenteret her er en protokol til at illustrere metoder til at vurdere musegraviditeter samt potentielle faldgruber (billede artefakter), der kan efterligne graviditet.
Abstract
Musen er den foretrukne pattedyrsdyrmodel for mange menneskelige sygdomme og biologiske processer. Udviklingsbiologi kræver ofte iscenesatte gravide mus for at bestemme udviklende processer på forskellige tidspunkter. Desuden kræver optimal og effektiv opdræt af modelmus en vurdering af tidsbestemte graviditeter. Oftest parres mus natten over, og tilstedeværelsen af et vaginalt stik bestemmes; Men den positive forudsigende værdi af denne teknik er suboptimal, og man er nødt til at vente med at vide, om musen er virkelig gravid. Ultralydbiomikroskopi i høj opløsning er et effektivt værktøj til billeddannelse: 1) Om en mus er gravid; 2) Hvilken svangerskabsfase musen har nået; og 3) Om der er intrauterin tab. Ud over embryoner og fostre, skal investigator også genkende fælles artefakter i bughulen for ikke at forveksle disse for en gravid livmoder. Denne artikel indeholder en protokol til billedbehandling sammen med illustrative eksempler.
Introduction
Musen er den foretrukne pattedyrsmodel for mange menneskelige sygdomme og biologiske processer1,2,3,4. Forskning i udviklingsbiologi kræver ofte iscenesatte gravide mus for at bestemme udviklende processer på forskellige tidspunkter5,6,7,8. Desuden kræver optimal og effektiv opdræt af modelmus en vurdering af tidsbestemte graviditeter, især når efterforskere studerer virkningerne af en genmutation på udviklingen. Typisk, efterforskere mate heterozygous mus natten over, kigge efter en vaginal stik tidligt næste morgen, og håber, at en graviditet ensues9. Bestemmelse intrauterin tab starter typisk med at kontrollere et nyfødt kuld for mendelianske forhold af genotyper, derefter arbejde baglæns ved at ofre gravide mus på forskellige svangerskabsstadier og genvinde embryonerne. Efterforskere kan bestemme vægtøgning som en måling af en positiv graviditet10,11; Men, især med gensplejsede mus, kan kuldene være meget små og efterfølgende resorberes, når der er intrauterin tab, som vægtøgningen måske ikke er indlysende (især tidligt i graviditeten, ~ E6.5-8.5). En mus kan forekomme falsk gravid på grund af for eksempel en godartet abdominal tumor. I det væsentlige virker man "blind".
Ultralydbiomikroskopi i høj opløsning giver mulighed for direkte visualisering af den gravide livmoder og udvikling af museembryoner12,13,14,15,16. Selvom vi oprindeligt havde udviklet metoder til vurdering af embryonal mus hjerte-kar-fysiologi16,17, anerkendte vi nytten af denne billeddannelse modalitet for at strømline vores museavl. Specifikt måtte vi ikke længere vente med at "se", om en mus var gravid, baseret på enten den åbenlyse vægtforøgelse eller levering af et kuld; vi kunne bestemme gravid tilstand og re-mate mus hurtigt, hvis dæmningen ikke var gravid. Desuden kunne tab inden for livmoderen også let afbildes, og en tidslinje over tab kunne bestemmes uden at ofre musen (se figur 1 for en skematisk). Tid, værdifulde modelmus og midler kan således spares.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle trin i denne protokol følger vejledningen for pleje og brug af laboratoriedyr offentliggjort af National Institutes of Health og er blevet godkendt af Institutional Animal Care and Use Committee of New York University Grossman School of Medicine.
1. Parring af mus til tidsbestemte graviditeter
- Par den relevante kvindelige mus (normalt en heterozygote) i et bur med den passende mandlige mus (normalt en heterozygote) til parring natten over.
- Adskil musene næste morgen. Alternativt parrer kontinuerligt de kvindelige og mandlige mus og øger dermed chancerne for graviditet.
BEMÆRK: En præcist timet graviditet kan dog ikke sikres med alternativet, og iscenesættelse af museembryoner ved ultralyd er ikke klar, især når sygdomsprocessen resulterer i intrauterin væksthæmning. Hvis embryonerne med genvarianten antages at være små, skal du kigge efter de større affaldskammerater af vild natur for at måle svangerskabsalderen.- Valgfrit: Kig efter vaginal stikket. Hvis der ikke er noget vaginalt stik, er den kvindelige mus ikke blevet parret. Hvis der er et vaginalt stik, er det stadig sandsynligt, at den kvindelige mus ikke bliver gravid.
- Tid dagen efter natten parring som E0.5.
- Udfør billeddannelse på E6.5–E.8.5 for at bestemme graviditeten, og styrk musene igen, hvis musen ikke er gravid (se trin 1.1).
BEMÆRK: På dette tidspunkt er den kvindelige dæmning ikke åbenlyst gravid med øjet; Ultralydsscanningen giver derfor mulighed for tidlig bestemmelse og ny parring.
2. Anæstesi og forberedelse af mus
- Placer den gravide mus i bedøvelsesinduktionskammeret.
- Isofluranen blandes med enten rumluft eller medicinsk ilt i en koncentration på 2%-3% ved 1 L/min strømningshastighed for at fremkalde sedation af den gravide mus i induktionskammeret.
BEMÆRK: Sedation forekommer typisk inden for 1-2 min. Musen vil ligge stille, og hendes vejrtrækning vil være aftaget. - Overfør hurtigt musen til billedplatformen. Billedplatformen har typisk også varmeelementer, som kan hjælpe med at holde musen varm.
- Placer musens næse i bedøvelses nosecone.
- Isoflurane/oxygen-blandingen omdirigeres hurtigt til billedplatformens næsekone. Isofluranen skal fastholdes ved 2%-3% ved 1 L/min flow.
- Bestem niveauet af sedation ved pote knivspids, hornhinderefleks, niveau af åndedræt og enhver bevægelse.
BEMÆRK: Hornhinderefleksen kan i første omgang bestemmes ved at påføre fugtgivende salve på øjnene for at forhindre dem i at tørre ud, mens musen bedøves (musen lukker ikke øjnene). - Med musen liggende liggende (på ryggen), tape poterne til billedbehandling platform elektrokardiogram (EKG) puder.
BEMÆRK: En EKG er dog ikke nødvendig for denne form for billedbehandling. - Fjern pelsen fra den gravide dæmnings underliv som følger:
- Våd abdominal pels grundigt med 70% ethanol, herunder op til sidekanterne. Anvend ikke så meget, at der er afstrøm på platformen.
BEMÆRK: Ethanol fungerer bedre som barbersmøremiddel end vand. - Brug barberbladet til forsigtigt at barbere maven. Pas på ikke at skære brystvorterne.
- Tør den barberede pels af maven med gasbind eller nogle klude.
- Alternativt kan du bruge en depilatory creme efter brug af pelsklipperen til at fjerne det meste af pelsen.
- Våd abdominal pels grundigt med 70% ethanol, herunder op til sidekanterne. Anvend ikke så meget, at der er afstrøm på platformen.
3. Transabdominal billeddannelse af den (formodede) gravide mus
- Når maven er barberet, reducere isoflurane til 1%-1,5%, stadig opretholde en strømningshastighed på 1 L/min. Overvåg graden af sedation med niveauet af åndedræt og eventuelle bevægelser samt pote knivspids og / eller hornhinde refleks.
BEMÆRK: Den bedøvede muss puls vil typisk være 400-500/min. afhængigt af kernetemperaturen (rektal). Med henblik på en hurtig graviditetskontrol må musen ikke opvarmes til en fysiologisk kernetemperatur; pulsen vil være tættere på 400-450/min, men kan falde yderligere med en uregelmæssig rytme, hvis musen bliver kold med langvarig billeddannelse.- Det er vigtigt at sørge for, at åndedrætsåbningerne er moderate i dybden og regelmæssigheden, ikke uregelmæssige eller agonale (gispende: dyb, langsom og uregelmæssig med dybe intercostal og subcostal tilbagetrækninger).
BEMÆRK: Åndedrætsfrekvensen for den ikke-ventilerede, bedøvede mus vil typisk være 60-100/min. Se https://ahcs.ninds.nih.gov/ACUC_pages/pg_003_anesth_animals.html og https://az.research.umich.edu/animalcare/guidelines/guidelines-anesthesia-and-analgesia-mice.
- Det er vigtigt at sørge for, at åndedrætsåbningerne er moderate i dybden og regelmæssigheden, ikke uregelmæssige eller agonale (gispende: dyb, langsom og uregelmæssig med dybe intercostal og subcostal tilbagetrækninger).
- Påfør ultralyd (akustisk kobling) gel til maven generøst.
- Placer billedtransduceren på maven for at orientere den i et vandret plan: orientere sonden for at opnå en venstre-højre orientering på billeddannelsessystemet; den "prik" eller højderyg, der er angivet på siden af billedsonden, skal vende mod højre.
BEMÆRK: Hvis du glider billedsonden til højre for musen, skal det tilsvarende billede flyttes på ultralydssystemet til højre for musen (forestil dig at slå "op" fra musens hale – musens højre side vil blive efterladt på skærmen).- Brug typisk billedbehandlingssystemets transducermonterings- og skinnemanipulationssystem. Her er "fri hånd" billeddannelse blevet brugt, hvor billedbehandling transduceren er håndholdt (to hænder er mere stabile end en), og som giver mulighed for hurtigere bevægelser omkring maven. Disse bevægelser, som vil blive skitseret nedenfor, omfatter både rotations- og oversættelsesbevægelser. Dette kræver dog mere praksis.
- Identificer blæren på skærmen (Video 1).
- Scanning kausalt fra blæren, identificere skeden. Derefter scannes langsomt og glat i kranieretning, identificerer skedens bifurcation i venstre og højre livmoderhorn (Figur 2; Video 1).
- Begynd undersøgelsen af livmoderen (venstre og højre livmoderhorn)13 (Figur 3; Video 2).
BEMÆRK: Op til midten af svangerskabet (E10.5 eller E11.5) placeres museembrysterne langs højre og venstre periferi. Efterhånden som de vokser, vil de mere distale dele af livmoderen og deres tilsvarende embryoner vende udad og posteriorly. Efterhånden som embryonerne vokser yderligere (E15.5 og senere generelt), vil musefostrene blive placeret næsten tilfældigt i forskellige retninger, og det bliver svært at "spore" en livmoder fra proksimal til distal.- Scan hurtigt blot for at kontrollere, om en mus er gravid eller ej. Denne hurtige metode kræver kun anerkendelse af en gravid livmoder og musefostre.
- Alternativt kan du tage ekstra tid til at opregne embryonerne (levende, døde, resorberet) i hvert livmoderhorn.
BEMÆRK: Generelt vil et levende embryon udvise forskellige organer såsom et hjerte, lemmer, hoved med hjertekamre og øjne. Et dødt foster får et homogent, "grødet" udseende, medmindre det bare er dødt. Resorberede embryoner har et præcist ekkogent sted midt i en gravid livmoder (Figur 4, Figur 5, Figur 6, Figur 7, Figur 8). - For at afgøre, om et foster virkelig er i live, skal du kigge efter hjerteslag og / eller blodgennemstrømning.
BEMÆRK: Farve Doppler flow kortlægning kan støtte i fastsættelsen af tilstedeværelsen af blodgennemstrømningen, både i embryoet og i navlestrengen. Generelt kan dette anvendes på embryoner, der er ældre end E8.5. - Genkende potentielle artefakter, der kan efterligne en gravid livmoder (Figur 9, Figur 10). Hertil kommer, som tarm gas og andre ultralyd "skygge" artefakter kan skjule segmenter af livmoderhornet, udføre billeddannelse fra flere udsigtspunkter for at sikre tilstrækkelig visualisering af livmoderen.
- Når undersøgelsen er afsluttet, skal du tørre gelen fra maven med gasbind eller klude. Prøv at fjerne så meget som muligt som gel tendens til at køle musen ned.
- Tag poterne ud, og fjern musen fra bedøvelses nosecone.
- Flyt forsigtigt musen tilbage i hendes bur. Hun bør vågne op og begynde at bevæge sig rundt inden for et minut eller deromkring.
BEMÆRK: Genetisk modificerede mus kan tage lidt længere tid at komme sig efter anæstesi og skal overvåges nøjere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne protokol vil gøre det muligt for en efterforsker at afgøre trygt, om en mus er gravid, herunder i de tidlige stadier og at afgøre, om der er åbenlyse prænatal embryonale eller fostertab uden at skulle ofre den gravide dæmning. Denne protokol er især nyttig, når der opdrættes gensplejsede mus; typisk, heterozygotiske x heterozygous krydser at give homozygous afkom fører til manglende ordentlig udvikling, som forårsager prænatal dødelighed. Figur 1 viser en repræsentativ situation, hvor embryoner gradvist dør og derefter gensorberes gennem midten af svangerskabet. Figur 2 viser, hvordan man finder venstre og højre livmoderhorn ved at følge skeden op gennem sin bifurcation. Figur 3, Figur 4, Figur 5, Figur 6, Figur 7, Figur 8og Video 3 viser musefostre på forskellige udviklingsstadier. Tidlige musefostre, døde embryoner eller resorberet embryoner kan ligne andre organer i maven eller afføring i tarmene, eller omvendt kan tarmsløjfer efterligne den ikke-gravide livmoder. Figur 9 og figur 10, samt Video 4 og Video 5, demonstrere sådanne potentielle billeddannelse artefakter, der kan efterligne den gravide livmoder, som investigator skal være på vagt.
Figur 1: Skematisk diagram af en teoretisk gravid mus mave, afbildet på E11.5, så igen på E14.5. Op til midten af svangerskabet (E10.5 eller E11.5), vil musen embryoner blive placeret langs højre og venstre perifere aspekter af maven. Efterhånden som embryonerne vokser, vil de mere distale dele af livmoderen og deres tilsvarende embryoner vende udad og posteriorly. Efterhånden som embryonerne vokser yderligere (E15.5 og senere generelt), vil musefostrene blive placeret næsten tilfældigt i forskellige retninger, og det bliver svært at "spore" en livmoder fra proksimal til distal. Når der er prænatal dødelighed i en genetisk manipuleret musemodel, kan embryonerne (åbne cirkler) dø; de døde embryoner (udklækkede cirkler) vil i sidste ende blive resorberet (faste cirkler). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Når man finder skeden (A), umiddelbart til højre for blæren, fejer cranially vil demonstrere bifurcation (B) til højre og venstre livmoder horn (D)-(F).
Skalalinje (A) = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: Billeder af ikke-gravid (ikke-gravid) livmoder (identificeret ved rækkerne af pile). Livmoderen kan variere i tykkelse: tykkere i (A), (B), (E); tynd med en central tynd ekkogen linje (C),meget tynd (D), eller kan endda indeholde små, cystiske strukturer, der ikke bør forveksles med concepti (B) og (E) især, selv om dette kan være vanskeligt at bestemme. (A)er et højre livmoderhorn; dette er vanskeligere at følge distally i vores erfaring på grund af tarmgas. (B)–(F) er tilbage livmoderhorn; (F) er ganske distal / lateral og så bliver vanskeligere at billedet på grund af stigende tarm gas artefakt. Skalalinje (A) = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Resorbed og døde embryoner har forskellige udseender. Resorberede embryoner, som meget almindeligt findes, er indkapslet i en rund (gravid) livmodersæk, der forekommer relativt homogen bortset fra en central ekkogen (meget lys) "spot"-pile i (A) og (B). c) udviser resorberede eller døde embryoner der er en helt homogen, "grødet" udseende til livmoderen, og vi ser formentlig 3-4 døde embryoner i denne ramme. d) udviser et nyligt dødt embryon, som stadig udviser visse strukturer; der synes også at være cellulære vragrester i fosterhinden. I (E) er det døde foster meget indskrumpet og stadig forbundet med moderkagen ("P"). (F) udviser et homogent, "grødet" udseende af et foster, der sandsynligvis døde 1-2 dage tidligere, men endnu ikke er helt resorberet. Skalalinje for (A) og (D) = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Tidlige embryoner fra ca. E5.5 (A) og E6.5 (B) til E8.5(C) og (D)). Der er variationer i udseende, og de anslåede stadier her var baseret på timingen af parring samt udseendet af embryonerne selv. Skalalinje (A) = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6: E9.5 embryoner er betydeligt større end E8.5 embryoner og er begyndt at tage form. Repræsentative billeder, der viser tilstødende embryoner, er vist i (A) og (B). Skalalinjer = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7: E10.5 embryoner udviser endnu klarere organer såsom hoved, rygsøjle og hjerte. Repræsentative billeder, der viser tilstødende embryoner, vises i alle paneler. i (D) ligger et dødt/resorbing-foster ved siden af et levende embryon. Skalalinje = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 8: Ældre embryoner, ca. E12.5 (A), E14.5 (B) og E15.5 (C). Skrå planer af billeddannelse tilsløre den præcise anatomi noget, men hjertet (pil) er i den centrale del af hvert foster; i(C),myokardiet er nu mere ekkogent end blodet. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 9: Tarmen, som er det organ, der med størst sandsynlighed vil blive forvekslet med livmoderen. I (E) ligger et resorberet embryo (pilespidser) over et segment af tarm (pile). I (F), en ikke-gravid livmoder (pilespidser) overser et kort segment af tarm (pile) Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 10: Yderligere billeddannelse artefakter i den gravide maven omfatter nyrerne, milt, og leveren. a)højre nyre (B) Højre nyre med nyrepulsåre (pile); c) venstre nyre; (D) Venstre nyre med nyrepulsåre (pile); (E)Milt; f) lever, der ligger over et segment af tarmen g) nyreoverliggende tarmsegment; (H) Milt, lever og venstre nyre set i et billeddiagnostikplan. B = tarm; K= nyre; L= lever; S= milt. Skalalinje (A) = 2 mm. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det vigtigste første skridt i billeddannelsen er at identificere skeden og derefter at bestemme bifurcation af livmoderhornet til venstre og højre. Ved at følge hver livmoderhorn, imager er mindre tilbøjelige til at mis-identificere sløjfer af tarmen som livmoderen. Desuden er det vigtigt at forstå variationerne i tarmens udseende (med / uden fækalt stof) for at skelne disse fra livmoderen; lejlighedsvis, fækal "bolde" i tarmen sløjfer kan efterligne en gravid (gravid) livmoder. Selv om andre forfattere har beskrevet diagnosen graviditet og iscenesættelse af mus embryonale udvikling17,18,19 herunder påvisning af resorberet embryoner20, denne undersøgelse er den første til at skitsere de skridt og potentielle faldgruber i billeddannelse den gravide murine livmoderen.
Billeddanneren skal genkende potentielle artefakter, der kan efterligne en tidlig graviditet eller gravid livmoder, eller som kan forstyrre billeddannelsen af livmoderen og embryoner. Efter livmoderhornene vil det reducere sandsynligheden for at forveksle andre organer og artefakter i maven for livmoderen (og små embryoner). Potentielle artefakter, der kan forveksles med livmoder, embryoner, og / eller obstruktiv elementer omfatter tarm og tarm gas, afføring, milt, lever og mave.
Denne metode kræver generel anæstesi, og vi er omhyggelige med at begrænse: 1) tidspunkt for billeddannelse og 2) hyppigheden af graviditetskontrol, for at reducere enhver chance for intrauterin tab på grund af anæstesi. Selv om bedøvelsesmidler og smertestillende midler generelt synes at være sikre under graviditet21, kan betydelig eksponering have konsekvenser for musens embryonale vækst22. Da muse knockout-modeller ofte demonstrerer prænatal eller tidlig perinatal død, kan eksponering af embryonerne for generel anæstesi under denne billeddannelse (i det mindste teoretisk) øge deres risiko for død eller påvirke deres biologi på ukendte måder. Mens en absolut tidsbegrænsning er ukendt, forsøger vi at begrænse hver billedsession til højst 15 minutter og til 2-3 billedsessioner (maksimum) pr. graviditet. "ALARA-princippet" er klogt her: Så lavt som rimeligt opnåeligt.
Denne metode giver mulighed for mere effektiv avl samt hurtig bestemmelse af intrauterin død. Dette er især vigtigt i eksperimenter ved hjælp af knockout-modeller, der dør tidligt; andre eksempler omfatter toksikologiske undersøgelser. Mens et par undersøgelser har detaljeret vægtøgning under graviditeten, er det helt klart, at vægten vokser tidligt (før E8.5) er lille og kan ikke være forskellig fra døgnvægt ændringer. Desuden blev dataene kun udledt af førstegangs gravide mus og afspejler muligvis ikke de forvirrende virkninger af multi-gravid mus10,11. Tidsbestemte graviditeter er muligvis ikke tydelige tidligt, og især med genetisk manipulerede mus kan intrauterin tab være almindelige eller endda påvirke hele kuldet. Således betyder simpelthen fordi en mus ikke leverer et kuld, ikke, at hun aldrig var gravid. Mus kan parres om en uge, hvis kvinden ikke er gravid; Ellers bliver forskerne simpelthen nødt til at vente det ud for at se, om kvinden er blevet gravid. Efter færdigheder er udviklet til at gøre mere end blot at kontrollere for graviditet, vil denne metode også tillade kortlægning og overvågning af embryoner som graviditeten skrider frem. På denne måde kan den optimale timing for embryohøst bestemmes, hvis væv skal høstes inden død23.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
ingen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Depilatory cream | |||
| Ethanol, 70% | |||
| Fur clippers | |||
| Gauze or KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Medical oxygen (optional) | |||
| Medical tape | |||
| Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
| Razor blade (not a safety razor) | |||
| Scale (to weigh mouse) | |||
| Ultrasound gel |
References
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. Humanized mouse models: Application to human diseases. Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).
- Law, M., Shaw, D. R. Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse. Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).
- Rydell-Törmänen, K., Johnson, J. R. The applicability of mouse models to the study of human disease. Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).
- Hinton, R. B., Yutzey, K. E. Heart valve structure and function in development and disease. Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).
- Dickinson, M. E., et al. High-throughput discovery of novel developmental phenotypes. Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).
- Tam, P. P. L., et al. Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network. Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).
- Palis, J. Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo. FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).
- Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. Selecting female mice in estrus and checking plugs. Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).
- Heyne, G. W., et al. A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).
- Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).
- Zhou, Y. Q., et al. Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood. Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).
- Ji, R. P., Phoon, C. K. L. Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation. Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).
- Kulandavelu, S., et al. Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice. ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).
- Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound. Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).
- Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H.
- Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development. Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).
- Peavey, M. C., et al. A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse. Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).
- Greco, A., et al. High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice. PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).
- Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kühl, A. A., Drews, B. Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy. Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).
- Norton, W. B., et al. Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival. Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).
- Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse. Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).
- Phoon, C. K. L., et al. Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction. Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).
