क्या मेरा माउस गर्भवती है? उच्च आवृत्ति अल्ट्रासाउंड मूल्यांकन

Summary

उच्च संकल्प अल्ट्रासाउंड गर्भावस्था, गर्भावधि आयु, और गर्भावस्था के नुकसान की स्थिति का निर्धारण करके समय पर गर्भवती चूहों की आवश्यकता वाले प्रयोगों को कारगर बनाने में मदद कर सकते हैं। यहां प्रस्तुत माउस गर्भधारण के साथ-साथ संभावित नुकसान (छवि कलाकृतियों) का आकलन करने के तरीकों को चित्रित करने के लिए एक प्रोटोकॉल है जो गर्भावस्था की नकल कर सकता है।

Abstract

माउस कई मानव रोगों और जैविक प्रक्रियाओं के लिए पसंद का स्तनधारी पशु मॉडल है। विकासात्मक जीव विज्ञान को अक्सर विभिन्न समय बिंदुओं पर विकसित प्रक्रियाओं को निर्धारित करने के लिए मंचन-गर्भवती चूहों की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, मॉडल चूहों के इष्टतम और कुशल प्रजनन के लिए समय पर गर्भधारण का आकलन करने की आवश्यकता होती है। सबसे अधिक, चूहों को रात भर मिलाना जाता है, और योनि प्लग की उपस्थिति निर्धारित की जाती है; हालांकि, इस तकनीक का सकारात्मक भविष्य कहनेवाला मूल्य सबऑप्टिमल है, और किसी को यह जानने के लिए इंतजार करना होगा कि माउस वास्तव में गर्भवती है या नहीं। उच्च-रिज़ॉल्यूशन अल्ट्रासाउंड बायोमाइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए एक प्रभावी और कुशल उपकरण है: 1) क्या माउस गर्भवती है; 2) माउस किस गर्भावधि चरण तक पहुंच गया है; और 3) क्या अंतर्गर्भाशयी नुकसान हैं। भ्रूण और भ्रूण के अलावा, अन्वेषक को पेट की गुहा में आम कलाकृतियों को भी पहचानना चाहिए ताकि ग्रेविड गर्भाशय के लिए इन गलती न हो। यह लेख उदाहरण उदाहरणों के साथ इमेजिंग के लिए एक प्रोटोकॉल प्रदान करता है।

Introduction

माउस कई मानव रोगों और जैविक प्रक्रियाओं के लिए पसंदीदा स्तनधारी मॉडल है^1,2,^3,4. विकासात्मक जीव विज्ञान में अनुसंधान के लिए अक्सर मंचन - गर्भवती चूहों की आवश्यकता होती है ताकि विभिन्न समय बिंदुओं^5,6,7,8पर विकसित प्रक्रियाओं का निर्धारण किया जा सके । इसके अलावा, मॉडल चूहों के इष्टतम और प्रभावी प्रजनन के लिए समय पर गर्भधारण का आकलन करने की आवश्यकता होती है, खासकर जब जांचकर्ता विकास पर जीन उत्परिवर्तन के प्रभावों का अध्ययन कर रहे हों । आमतौर पर, जांचकर्ताओं रात भर विषम चूहों दोस्त, अगली सुबह जल्दी एक योनि प्लग के लिए देखो, और आशा है कि एक गर्भावस्था⁹ensues । अंतर्गर्भाशयी हानि का निर्धारण आम तौर पर जीनोटाइप के Mendelian अनुपात के लिए एक नवजात कूड़े की जांच के साथ शुरू होता है, तो विभिन्न गर्भावधि चरणों में गर्भवती चूहों का त्याग करके पीछे की ओर काम कर रहा है, और भ्रूण ठीक । जांचकर्ता वजन बढ़ाने को सकारात्मक गर्भावस्था^10,11के मीट्रिक के रूप में निर्धारित कर सकते हैं . हालांकि, विशेष रूप से आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों के साथ, कूड़े बहुत छोटे हो सकते हैं और बाद में जब अंतर्गर्भाशयी हानि होती है जिसके कारण वजन स्पष्ट नहीं हो सकता है (विशेष रूप से गर्भावस्था में जल्दी, ~ E6.5-8.5)। एक माउस झूठा गर्भवती कारण दिखाई दे सकता है, उदाहरण के लिए, एक सौम्य पेट ट्यूमर के लिए । संक्षेप में, एक "अंधा" काम करता है।

हाई-रेजोल्यूशन अल्ट्रासाउंड बायोमाइक्रोस्कोपी ग्रेविड गर्भाशय के सीधे दृश्य और माउस भ्रूण^{12 , 13,14},^{15, 16}विकसित करने^कीअनुमति^देताहै। यद्यपि हमने शुरू में भ्रूणीय माउस हृदय शरीर विज्ञान^{16, 17}का आकलन करने के तरीके विकसित किए थे, लेकिन हमने अपने माउस प्रजनन को कारगर बनाने के लिए इस इमेजिंग मोडलिटी की उपयोगिता को पहचाना। विशेष रूप से, हमें अब "देखने" के लिए इंतजार नहीं करना पड़ा, अगर एक माउस गर्भवती थी, या तो स्पष्ट वजन या कूड़े की डिलीवरी के आधार पर; हम गुरुत्वाकर्षण राज्य निर्धारित कर सकते है और फिर से दोस्त चूहों जल्दी अगर बांध गर्भवती नहीं था । इसके अलावा, इंट्रायूटेरिन नुकसान भी आसानी से इमेज किया जा सकता है, और माउस का त्याग किए बिना नुकसान की एक समयरेखा निर्धारित की जा सकती है (एक योजनाबद्ध के लिए चित्रा 1 देखें)। समय, मूल्यवान मॉडल चूहों, और धन इस प्रकार बचाया जा सकता है।

Protocol

इस प्रोटोकॉल में सभी कदम स्वास्थ्य के राष्ट्रीय संस्थानों द्वारा प्रकाशित प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड का पालन करें और न्यूयॉर्क विश्वविद्यालय ग्रॉसमैन स्कूल ऑफ मेडिसिन की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है ।

1. समय पर गर्भधारण के लिए चूहों का संभोग

1. रात भर संभोग के लिए उपयुक्त पुरुष माउस (आमतौर पर एक विषमगोत्म) के साथ एक पिंजरे में उपयुक्त महिला माउस (आमतौर पर एक विषमगोत्गोट) जोड़ी।
2. अगली सुबह चूहों को अलग करें। वैकल्पिक रूप से, लगातार मादा और पुरुष चूहों को मिलाएं, इस प्रकार गर्भावस्था की संभावना बढ़ रही है।
   नोट: हालांकि, एक सही समय पर गर्भावस्था विकल्प के साथ आश्वासन नहीं दिया जा सकता है, और अल्ट्रासाउंड द्वारा माउस भ्रूण के मंचन स्पष्ट नहीं है, खासकर जब रोग प्रक्रिया अंतर्गर्भाशयी विकास मंदता में परिणाम है । यदि जीन संस्करण ले जाने वाले भ्रूण को छोटा मान लिया जाता है, तो गर्भावधि आयु को मापने के लिए बड़े वाइल्डटाइप लिटरमेट्स की तलाश करें।
   1. वैकल्पिक: योनि प्लग के लिए देखो। यदि योनि प्लग नहीं है, तो मादा माउस को संभोग नहीं किया गया है। यदि योनि प्लग है, तो अभी भी संभावना है कि मादा माउस गर्भवती नहीं हो जाती है।
3. ई0.5 के रूप में रात भर संभोग के बाद दिन समय।
4. गर्भावस्था का निर्धारण करने के लिए E6.5-E.8.5 पर इमेजिंग करें, और चूहों को फिर से लें यदि माउस गर्भवती नहीं है (चरण 1.1 देखें)।
   नोट: इस स्तर पर, मादा बांध स्पष्ट रूप से आंखों के लिए गर्भवती नहीं है; इसलिए, अल्ट्रासाउंड इमेजिंग जल्दी दृढ़ संकल्प और फिर से संभोग की अनुमति देता है।

2. संज्ञाहरण और माउस की तैयारी

1. गर्भवती माउस को एनेस्थेटिक इंडक्शन चैंबर में रखें।
2. इंडक्शन चैंबर में गर्भवती माउस के स्नेडेशन को प्रेरित करने के लिए 1 एल/मिन प्रवाह दर पर 2%-3% की एकाग्रता पर कमरे की हवा या मेडिकल ऑक्सीजन के साथ आइसोफ्लुना को मिलाएं।
   नोट: Sedation आम तौर पर 1-2 मिनट के भीतर होता है । माउस अभी भी झूठ बोल रहा होगा, और उसकी सांस धीमी हो जाएगी।
3. जल्दी से इमेजिंग प्लेटफॉर्म पर माउस को स्थानांतरित करें। इमेजिंग प्लेटफॉर्म में आमतौर पर हीटिंग तत्व भी होते हैं, जो माउस को गर्म रखने में मदद कर सकते हैं।
4. माउस की नाक को एनेस्थेटिक नाक को लागोन में रखें।
5. इमेजिंग प्लेटफॉर्म नाककोन को आइसोफलून/ऑक्सीजन मिश्रण को जल्दी से फिर से रूट करें । 1 एल/मिन फ्लो पर 2%-3% पर आइसोफ्लुनेज बनाए रखें ।
6. पंजा चुटकी, कॉर्नियल पलटा, श्वसन के स्तर, और किसी भी आंदोलन द्वारा गतिन के स्तर का निर्धारण करें।
   नोट: कॉर्नियल पलटा शुरू में आंखों पर मॉइस्चराइजिंग मरहम लगाने के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है ताकि उन्हें सूखने से रखा जा सके जबकि माउस एनेस्थेटाइज्ड होता है (माउस उसकी आंखें बंद नहीं करता है)।
7. माउस के साथ (इसकी पीठ पर) लेटे हुए, इमेजिंग प्लेटफॉर्म के इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईकेजी) पैड पर पंजे को टेप करें।
   नोट: हालांकि, इमेजिंग के इस तरह के लिए एक ईकेजी आवश्यक नहीं है।
8. गर्भवती बांध के पेट से फर को इस प्रकार निकालें:
   1. पेट के फर को 70% इथेनॉल के साथ अच्छी तरह से गीला करें, जिसमें पार्श्व किनारों तक शामिल हैं। इतना लागू न करें कि मंच पर रन-ऑफ हो।
      नोट: इथेनॉल पानी की तुलना में शेविंग लुब्रिकेंट के रूप में बेहतर काम करता है।
   2. पेट को सावधानी से शेव करने के लिए रेजर ब्लेड का इस्तेमाल करें। निपल्स न काटे जाने का ध्यान रखें।
   3. पेट से मुंडा फर को धुंध या कुछ पोंछे के साथ पोंछें।
   4. वैकल्पिक रूप से, अधिकांश फर को हटाने के लिए फर क्लिपर्स का उपयोग करने के बाद एक डिपिलेटरी क्रीम का उपयोग करें।

3. ट्रांसाडोमिनल इमेजिंग (माना) गर्भवती माउस

1. पेट मुंडा होने के बाद, आइसोफ्लुएरे को 1%-1.5% तक कम करें, फिर भी 1 एल/मिनट की प्रवाह दर को बनाए रखें। श्वसन और किसी भी आंदोलन के स्तर के साथ ही पंजा चुटकी और/या कॉर्नियल पलटा द्वारा गतिन के स्तर की निगरानी करें ।
   नोट: एनेस्थेटाइज्ड माउस की हृदय गति आमतौर पर कोर (गुदा) तापमान के आधार पर 400-500/मिनट होगी। तेजी से गर्भावस्था की जांच के उद्देश्य से, माउस को शारीरिक कोर तापमान पर गर्म न करें; हृदय गति 400-450/मिनट के करीब होगी, लेकिन एक अनियमित लय के साथ आगे गिर सकती है माउस को लंबे समय तक इमेजिंग के साथ ठंडा हो जाना चाहिए।
   1. महत्वपूर्ण बात, सुनिश्चित करें कि श्वसन गहराई और नियमितता में मध्यम हैं, अनियमित या पीड़ादायक नहीं (हांफते: गहरे, धीमे और अनियमित, गहरे इंटरकोस्टल और उपकोस्टल रिऐक्शन के साथ)।
      नोट: गैर हवादार, एनेस्थेटाइज्ड माउस की श्वसन दर आमतौर पर 60-100/मिनट होगी । https://ahcs.ninds.nih.gov/ACUC_pages/pg_003_anesth_animals.html और https://az.research.umich.edu/animalcare/guidelines/guidelines-anesthesia-and-analgesia-mice देखें ।
2. पेट में अल्ट्रासाउंड (ध्वनिक युग्मन) जेल उदारता से लागू करें।
3. इमेजिंग ट्रांसड्यूसर को क्षैतिज विमान में उन्मुख करने के लिए पेट पर रखें: इमेजिंग सिस्टम पर बाएं-दाएं अभिविन्यास प्राप्त करने के लिए जांच को उन्मुख करें; इमेजिंग जांच के पक्ष में इंगित "डॉट" या रिज सही सामना करना चाहिए।
   नोट: माउस के दाईं ओर इमेजिंग जांच फिसलने से अल्ट्रासाउंड प्रणाली पर इसी छवि को माउस के दाईं ओर स्थानांतरित करना चाहिए (माउस की पूंछ से "ऊपर" देखने की कल्पना करें- माउस का अधिकार मॉनिटर पर छोड़ दिया जाएगा)।
   1. आमतौर पर इमेजिंग सिस्टम के ट्रांसड्यूसर माउंट और रेल-मैनिपुलेटर सिस्टम का इस्तेमाल करें। यहां, "फ्री हैंड" इमेजिंग का उपयोग किया गया है जिसमें इमेजिंग ट्रांसड्यूसर हाथ से आयोजित किया जाता है (दो हाथ एक से अधिक स्थिर होते हैं) और जो पेट के चारों ओर अधिक तेजी से आंदोलनों के लिए अनुमति देता है। इन आंदोलनों, जैसा कि नीचे रेखांकित किया जाएगा, दोनों घूर्णन और अनुवादात्मक आंदोलनों में शामिल हैं । हालांकि, इसके लिए अधिक अभ्यास की आवश्यकता है।
4. स्क्रीन पर मूत्राशय की पहचान करें(वीडियो 1)।
5. मूत्राशय से कोडली स्कैनिंग, योनि की पहचान करें। फिर, धीरे-धीरे और आसानी से कपाल दिशा में स्कैन करना, योनि के विभाजन को बाएं और दाएं गर्भाशय सींगों मेंपहचानें (चित्र 2; वीडियो 1)।
6. गर्भाशय (बाएं और दाएं गर्भाशय सींग)¹³ (चित्र 3) कासर्वेक्षण शुरू करें; वीडियो 2)।
   नोट: मध्य गर्भ (E10.5 या E11.5) तक, माउस भ्रूण सही और बाएं परिधि के साथ तैनात किया जाएगा । जैसे-जैसे वे बढ़ते हैं, गर्भाशय के अधिक डिस्टल हिस्से और उनके संबंधित भ्रूण बाहर और पीछे की ओर मुड़ जाएंगे। जैसे-जैसे भ्रूण आगे बढ़ते हैं (E15.5 और बाद में, आम तौर पर), माउस भ्रूण लगभग बेतरतीब ढंग से विभिन्न दिशाओं में तैनात होंगे, और गर्भाशय को समीपस्थ से डिस्टल तक "ट्रैक" करना मुश्किल हो जाता है।
   1. माउस गर्भवती है या नहीं, यह जांचने के लिए जल्दी से स्कैन करें। इस तेजी से विधि एक ग्रेविड गर्भाशय और माउस भ्रूण की ही मांयता की आवश्यकता है ।
   2. वैकल्पिक रूप से, प्रत्येक गर्भाशय सींग में भ्रूण (लाइव, मृत, पुनर्संरक्षित) की गणना करने के लिए अतिरिक्त समय लें।
      नोट: सामान्य तौर पर, एक जीवित भ्रूण दिल, अंग, निलय के साथ सिर और आंखों जैसे अलग-अलग अंगों का प्रदर्शन करेगा। एक मृत भ्रूण एक सजातीय, "भावुक" उपस्थिति पर ले जाता है जब तक कि सिर्फ मर न जाए। रिसोरब्ड भ्रूण में एक गुरुत्वाकर्षण दिखने वालेगर्भाशय (चित्र 4, चित्र 5, चित्र 6, चित्र 7,चित्र 8) के बीच में एक तुच्छ इकोजेनिक स्पॉट होता है।
   3. यह निर्धारित करने के लिए कि क्या कोई भ्रूण वास्तव में जीवित है, तो दिल की धड़कन और/या रक्त प्रवाह की तलाश करें ।
      नोट: रंग डॉप्लर प्रवाह मानचित्रण रक्त प्रवाह की उपस्थिति का निर्धारण करने में सहायता कर सकते हैं, दोनों भ्रूण में और गर्भनाल में । सामान्य तौर पर, यह E8.5 से पुराने भ्रूण के लिए लागू किया जा सकता है।
   4. संभावित कलाकृतियों को पहचानें जो ग्रेविडगर्भाशय (चित्रा 9, चित्रा 10) कीनकल कर सकते हैं। इसके अलावा, आंत्र गैस और अन्य अल्ट्रासाउंड "छाया" कलाकृतियों के रूप में गर्भाशय सींग के खंडों को अस्पष्ट कर सकते हैं, गर्भाशय के पर्याप्त दृश्य सुनिश्चित करने के लिए कई सुविधाजनक बिंदुओं से इमेजिंग करते हैं।
7. सर्वेक्षण पूरा होने के बाद, पेट से जेल को धुंध या पोंछे से पोंछें। जितना संभव हो उतना हटाने की कोशिश करें क्योंकि जेल माउस को ठंडा करने की आदत है।
8. पंजे को अनटेप करें, और एनेस्थेटिक नाक से माउस को हटा दें।
9. धीरे से माउस को उसके पिंजरे में वापस ले जाएं। वह जाग जाना चाहिए और एक मिनट के भीतर चारों ओर घूमना शुरू करते हैं ।
   नोट: आनुवंशिक रूप से संशोधित चूहों संज्ञाहरण से उबरने के लिए थोड़ा समय लग सकता है और अधिक बारीकी से देखा जाना चाहिए ।

Representative Results

यह प्रोटोकॉल एक अन्वेषक को आत्मविश्वास से यह निर्धारित करने की अनुमति देगा कि क्या माउस गर्भवती है, जिसमें प्रारंभिक चरणों के दौरान और यह निर्धारित करना है कि गर्भवती बांध का बलिदान करने की आवश्यकता के बिना स्पष्ट जन्म के जन्म के भ्रूण या भ्रूण के नुकसान हैं या नहीं। आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों के प्रजनन के दौरान यह प्रोटोकॉल विशेष रूप से उपयोगी है; आमतौर पर, विषम एक्स विषम संतानों को प्राप्त करने के लिए पार करने से उचित विकास की विफलता होती है, जो जन्म के पूर्व घातकता का कारण बनती है। चित्रा 1 एक प्रतिनिधि स्थिति है जिसमें भ्रूण उत्तरोत्तर मर जाते है और फिर मध्य गर्भ के माध्यम से फिर से घेर रहे है दर्शाया गया है । चित्रा 2 से पता चलता है कि इसके विभाजन के माध्यम से योनि का पालन करके बाएं और दाएं गर्भाशय के सींग कैसे खोजें। चित्रा 3, चित्रा 4, चित्रा 5, चित्र 6, चित्रा 7, चित्र 8,और वीडियो 3 विकास के विभिन्न चरणों में माउस भ्रूण दिखाते हैं। प्रारंभिक चरण के माउस भ्रूण, मृत भ्रूण, या पुनर्संस्रित भ्रूण पेट या आंतों में मल में अन्य अंगों के समान हो सकते हैं, या इसके विपरीत, आंतों के छोरों गैर-ग्रेविड गर्भाशय की नकल कर सकते हैं। चित्रा 9 और चित्रा 10,साथ ही वीडियो 4 और वीडियो 5,ऐसी संभावित इमेजिंग कलाकृतियों का प्रदर्शन करता है जो ग्रेविड गर्भाशय की नकल कर सकते हैं, जिसके लिए अन्वेषक को सतर्क रहना चाहिए।

चित्रा 1: एक सैद्धांतिक गर्भवती माउस पेट का योजनाबद्ध आरेख, E11.5 पर चित्रित, फिर E14.5 पर फिर से। मध्य गर्भ (E10.5 या E11.5) तक, माउस भ्रूण पेट के दाएं और बाएं परिधीय पहलुओं के साथ तैनात किया जाएगा । जैसे-जैसे भ्रूण बढ़ते हैं, गर्भाशय के अधिक डिस्टल हिस्से और उनके संबंधित भ्रूण बाहर और पीछे की ओर मुड़ जाएंगे। जैसे-जैसे भ्रूण आगे बढ़ते हैं (E15.5 और बाद में, आम तौर पर), माउस भ्रूण लगभग बेतरतीब ढंग से विभिन्न दिशाओं में तैनात होंगे, और गर्भाशय को समीपस्थ से डिस्टल तक "ट्रैक" करना मुश्किल हो जाता है। जब आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल में जन्म के पूर्व घातकता होती है, तो भ्रूण (खुले घेरे) मर सकते हैं; मृत भ्रूण (रची हलकों) अंततः (ठोस हलकों) resorbed हो जाएगा । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 2: एक बार जब कोई योनि(ए)पाता है, तो तुरंत मूत्राशय के दाईं ओर, व्यापक कपाल दाएं और बाएं गर्भाशय सींग (डी)-(एफ) के विभाजन(बी)को प्रदर्शित करेगा।
स्केल बार(A)= 2 मिमी . कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 3: गैर-गुरुत्वाकर्षण (गैर-गर्भवती) गर्भाशय (तीर की पंक्तियों द्वारा पहचाने गए) की छवियां। गर्भाशय मोटाई में भिन्न हो सकता है: मोटा(ए),(बी),(ई); एक केंद्रीय पतली इकोजेनिक लाइन(सी),बहुत पतली(डी)के साथ पतली, या यहां तक कि छोटे, सिस्टिक संरचनाएं भी हो सकती हैं जिन्हें अवधारणा(बी)और(ई)के लिए विशेष रूप से गलत नहीं होना चाहिए, हालांकि यह निर्धारित करना मुश्किल हो सकता है। (क)एक सही गर्भाशय सींग है; यह आंत्र गैस के कारण हमारे अनुभव में distally का पालन करने के लिए और अधिक कठिन है। (B)-(F) गर्भाशय सींग छोड़ दिया जाता है; (एफ)काफी डिस्टल/पार्श्व है और इसलिए आंत्र गैस विरूपण साक्ष्य में वृद्धि के कारण छवि के लिए और अधिक कठिन हो जाता है । स्केल बार(A)= 2 मिमी . कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 4: Resorbed और मृत भ्रूण अलग दिखावे है । पुनः निर्मित भ्रूण, जो बहुत आमतौर पर पाए जाते हैं, एक दौर (ग्रेविड) गर्भाशय थैली के भीतर संलग्न होते हैं जो केंद्रीय इकोजेनिक (बहुत उज्ज्वल) "स्पॉट"-तीर(ए)और(बी)के अलावा अपेक्षाकृत सजातीय दिखाई देता है। (ग)resorbed या मृत भ्रूण से पता चलता है; गर्भाशय के लिए एक पूरी तरह से सजातीय, "भावुक" उपस्थिति है, और हम इस फ्रेम में शायद 3-4 मृत भ्रूण देखते हैं। (घ)हाल ही में एक मृत भ्रूण है, जो अभी भी कुछ संरचनाओं से पता चलता है दिखाता है; वहां भी एमनियोटिक थैली में सेलुलर मलबे प्रतीत होता है । (ई)में, मृत भ्रूण बहुत सिकुड़ा हुआ है और अभी भी प्लेसेंटा ("पी") से जुड़ा हुआ है। (एफ)एक सजातीय, एक भ्रूण है कि शायद 1-2 दिन पहले मर गया की "भावुक" उपस्थिति से पता चलता है, लेकिन अभी तक पूरी तरह से resorbed नहीं है । स्केल बार फॉर(ए)और(D)= 2 मिमी . कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 5: प्रारंभिक चरण के भ्रूण, लगभग E5.5(A)और E6.5(B)से E8.5 ((C) और(D))तक। दिखावे में भिन्नताएं हैं, और यहां अनुमानित चरण संभोग के समय के साथ-साथ भ्रूण की उपस्थिति पर आधारित थे। स्केल बार(A)= 2 मिमी . कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 6: E9.5 भ्रूण E8.5 भ्रूण की तुलना में काफी बड़े हैं और फार्म लेने लगे हैं। प्रतिनिधि छवियों, आसन्न भ्रूण दिखा,(ए)और(बी)में दिखाया गया है । स्केल बार = 2 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 7: E10.5 भ्रूण सिर, रीढ़ और दिल जैसे स्पष्ट अंगों को भी प्रदर्शित करते हैं। प्रतिनिधि छवियों, आसन्न भ्रूण दिखा, सभी पैनलों में दिखाया गया है; (घ)में, एक मृत/resorbing भ्रूण एक जीवित भ्रूण के निकट स्थित है । स्केल बार = 2 मिमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 8: पुराने भ्रूण, लगभग E12.5(A),E14.5(B),और E15.5(C)। इमेजिंग के तिरछे विमानों सटीक शरीर रचना विज्ञान कुछ अस्पष्ट है, लेकिन दिल (तीर) प्रत्येक भ्रूण के केंद्रीय भाग में है; (ग)में, मायोकार्डियम अब रक्त की तुलना में अधिक इकोजेनिक है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 9: आंत्र, जो अंग सबसे गर्भाशय के साथ भ्रमित होने की संभावना है। (ई)में, एक resorbed भ्रूण (तीर) आंत्र (तीर) के एक खंड overlies । (एफ)में, एक गैर-ग्रेविड गर्भाशय (तीर) आंत्र (तीर) के एक छोटे खंड को ओवरलीस करता है कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 10: ग्रेविड पेट में अतिरिक्त इमेजिंग कलाकृतियों में गुर्दे, तिल्ली और यकृत शामिल हैं। (A)राइट किडनी; (ख)गुर्दे की धमनी (तीर) के साथ सही गुर्दे; (ग)बाईं किडनी; (घ)गुर्दे की धमनी (तीर) के साथ बाईं किडनी; (ई)तिल्ली; (एफ)जिगर आंत्र के एक खंड overlying; (जी)आंत्र के गुर्दे की अतिवित खंड; (ज)तिल्ली, जिगर, और इमेजिंग के एक विमान में देखा गुर्दे छोड़ दिया । B = आंत्र; कश्मीर = गुर्दे; एल = जिगर; एस= तिल्ली। स्केल बार(A)= 2 मिमी . कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Discussion

इमेजिंग में सबसे महत्वपूर्ण पहला कदम योनि की पहचान करना और फिर गर्भाशय सींग के विभाजन को बाईं और दाईं ओर निर्धारित करना है। प्रत्येक गर्भाशय सींग का पालन करके, इमेजर गर्भाशय के रूप में आंत्र के छोरों को गलत पहचानने की संभावना कम है। इसके अलावा, आंत्र की उपस्थिति में विविधताओं को समझना (मल पदार्थ के साथ/बिना) गर्भाशय से इन्हें अलग करने के लिए महत्वपूर्ण है; कभी-कभी, आंत्र छोरों में मल "बॉल्स" एक ग्रेविड (गर्भवती) गर्भाशय की नकल कर सकता है। यद्यपि अन्य लेखकों ने गर्भावस्था के निदान और माउस भ्रूणीय विकास^17,18,19 के मंचन का वर्णन किया है, जिसमें²⁰को फिर से निर्मित भ्रूणों का पता लगाना शामिल है, यह अध्ययन गुरुत्वाकर्षण मुरीन गर्भाशय इमेजिंग में कदमों और संभावित नुकसानों को रेखांकित करने वाला पहला है।

इमेजर को संभावित कलाकृतियों को पहचानना चाहिए जो प्रारंभिक गर्भावस्था या ग्रेविड गर्भाशय की नकल कर सकते हैं या जो गर्भाशय और भ्रूण की इमेजिंग में हस्तक्षेप कर सकते हैं। गर्भाशय सींग के बाद बाद बाद में गर्भाशय (और छोटे भ्रूण) के लिए पेट में अन्य अंगों और कलाकृतियों को गलत करने की संभावना कम हो जाएगी। संभावित कलाकृतियों कि गर्भाशय, भ्रूण के लिए गलत हो सकता है, और/या ऑब्सट्रक्टिव आइटम आंत्र और आंत्र गैस, मल, तिल्ली, जिगर, और पेट शामिल हैं ।

इस विधि को सामान्य संज्ञाहरण की आवश्यकता होती है, और हम सीमित करने के लिए सावधान हैं: 1) इमेजिंग का समय और 2) गर्भावस्था की जांच की आवृत्ति, संज्ञाहरण के कारण अंतर्गर्भाशयी हानि के किसी भी अवसर को कम करने के लिए। गर्भावस्था के^{दौरान}एनेस्थेटिक्स और एनाल्जेसिक सुरक्षित प्रतीत होते हैं , लेकिन माउस भ्रूणीय विकास पर महत्वपूर्ण एक्सपोजर का परिणाम हो सकता है^। माउस नॉकआउट मॉडल अक्सर प्रसव पूर्व या प्रारंभिक प्रसवकालीन मृत्यु का प्रदर्शन करते हैं, इस इमेजिंग के दौरान सामान्य संज्ञाहरण के लिए भ्रूण के जोखिम (कम से कम सैद्धांतिक रूप से) निधन के अपने जोखिम को बढ़ा सकते हैं या अज्ञात तरीकों से उनके जीव विज्ञान को प्रभावित कर सकते हैं। जबकि एक पूर्ण समय सीमा अज्ञात है, हम प्रत्येक इमेजिंग सत्र को 15 मिनट से अधिक नहीं, और गर्भावस्था के अनुसार 2-3 इमेजिंग सत्र (अधिकतम) तक सीमित करने की कोशिश करते हैं। "ALARA सिद्धांत" यहां विवेकपूर्ण है: यथोचित प्राप्त के रूप में कम के रूप में ।

यह विधि अधिक कुशल प्रजनन के साथ-साथ अंतर्गर्भाशयी निधन के तेजी से निर्धारण के लिए अनुमति देती है। यह नॉकआउट मॉडल है कि जल्दी मर का उपयोग कर प्रयोगों में विशेष रूप से महत्वपूर्ण है; अन्य उदाहरणों में विषाक्त अध्ययन शामिल हैं। जबकि कुछ अध्ययनों ने गर्भावस्था के दौरान वजन बढ़ाने के बारे में विस्तृत जानकारी दी है, यह बिल्कुल स्पष्ट है कि वजन जल्दी (E8.5 से पहले) छोटा है और दैनिक वजन परिवर्तन से अलग नहीं हो सकता है। इसके अलावा, डेटा केवल पहली बार गर्भवती चूहों से प्राप्त किए गए थे और बहु-गुरुत्वाकर्षण चूहों^{10, 11}के भ्रामक प्रभावों को प्रतिबिंबित नहीं कर सकते^हैं। समय पर गर्भधारण जल्दी स्पष्ट नहीं हो सकता है, और विशेष रूप से आनुवंशिक रूप से इंजीनियर चूहों के साथ, अंतर्गर्भाशयी नुकसान आम हो सकता है या यहां तक कि पूरे कूड़े को प्रभावित कर सकता है। इस प्रकार, सिर्फ इसलिए कि एक माउस कूड़े को वितरित नहीं करता है इसका मतलब यह नहीं है कि वह कभी गर्भवती नहीं थी। यदि मादा गर्भवती नहीं है तो चूहों को एक सप्ताह में फिर से संभोग किया जा सकता है; अन्यथा, शोधकर्ताओं को बस यह देखने के लिए इंतजार करना होगा कि क्या मादा गर्भवती हो गई है। कौशल के बाद बस गर्भावस्था के लिए जांच से अधिक करने के लिए विकसित कर रहे हैं, इस विधि भी मानचित्रण और गर्भावस्था की प्रगति के रूप में भ्रूण की निगरानी की अनुमति होगी । इस तरह, भ्रूण फसल के लिए इष्टतम समय निर्धारित किया जा सकता है अगर ऊतकों²³निधन से पहले काटा जाना चाहिए ।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Depilatory cream
Ethanol, 70%
Fur clippers
Gauze or KimWipes
Isoflurane
Medical oxygen (optional)
Medical tape
Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform)	Fujifilm Visual Sonics	Various	Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe
Razor blade (not a safety razor)
Scale (to weigh mouse)
Ultrasound gel