Gli ultrasuoni ad alta risoluzione possono aiutare a semplificare gli esperimenti che richiedono topi in gravidanza a tempo determinando lo stato di gravidanza, l'età gestazionale e le perdite di gravidanza. Presentato qui è un protocollo per illustrare i metodi per valutare le gravidanze del mouse e potenziali insidie (artefatti dell'immagine) che possono imitare la gravidanza.
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Articolo metodologico
Il mio topo è incinta? Valutazione ecografico ad alta frequenza
In questo articolo
Sommario
Abstract
Il topo è il modello animale di mammiferi preferito per molte malattie umane e processi biologici. La biologia dello sviluppo richiede spesso topi in gravidanza a fasi per determinare i processi in evoluzione in vari punti di tempo. Inoltre, l'allevamento ottimale ed efficiente dei topi modello richiede una valutazione delle gravidanze a tempo. Più comunemente, i topi vengono accoppiati durante la notte e viene determinata la presenza di una spina vaginale; tuttavia, il valore predittivo positivo di questa tecnica è non ottimale e bisogna aspettare per sapere se il topo è veramente incinta. La biomicroscopia ad ultrasuoni ad alta risoluzione è uno strumento efficace ed efficiente per l'imaging: 1) Se un topo è incinta; 2) Quale stadio gestazionale ha raggiunto il topo; e 3) Se ci sono perdite intrauterina. Oltre agli embrioni e ai feti, l'investigatore deve anche riconoscere artefatti comuni nella cavità addominale in modo da non scambiarli per un utero gravide. Questo articolo fornisce un protocollo per l'imaging insieme ad esempi illustrativi.
Introduzione
Il topo è il modello di mammifero preferito per molte malattie umane e processibiologici 1,2,3,4. La ricerca in biologia dello sviluppo richiede spesso topi in gravidanza a fasi per determinare i processi in evoluzione in varipunti di tempo 5,6,7,8. Inoltre, l'allevamento ottimale ed efficace di topi modello richiede una valutazione delle gravidanze a tempo, in particolare quando gli investigatori stanno studiando ....
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Protocollo
Tutte le fasi di questo protocollo seguono la Guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio pubblicata dal National Institutes of Health e sono state approvate dall'Institutional Animal Care and Use Committee della Grossman School of Medicine della New York University.
1. Accoppiamento di topi per gravidanze a tempo
- Abbina il topo femmina appropriato (di solito un eterozigote) in una gabbia con il topo maschio appropriato (di solito un eterozigote) per l'accoppiamento notturno.
- Separare i topi la mattina successiva. In alternativa, accoppia continuamente i topi femmine e maschi, aumentando così le possibilità di....
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Risultati
Questo protocollo consentirà a uno sperimentatore di determinare con sicurezza se un topo è incinta, anche durante le prime fasi e di determinare se ci sono evidenti perdite embrionali o fetali prenatali senza dover sacrificare la diga incinta. Questo protocollo è particolarmente utile quando si allevano topi geneticamente modificati; tipicamente, le croci eterozigoti x eterozigoti per produrre prole omozigota portano al fallimento di uno sviluppo adeguato, che causa letalità prenatale. La figura 1
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Discussione
Il primo passo più importante nell'imaging è identificare la vagina e quindi determinare la biforcazione del corno uterino a sinistra e a destra. Seguendo ogni corno uterino, è meno probabile che l'imager identifichi erroneamente i loop dell'intestino come utero. Inoltre, comprendere le variazioni nell'aspetto dell'intestino (con /senza materia fecale) è importante per distinguerli dall'utero; occasionalmente, le "palle" fecali negli anelli intestinali possono imitare un utero gravide (incinta). Sebbene altri autori abbi.......
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| depilatoria | |||
| Etanolo, 70% | |||
| Tagliacapelli | |||
| Garza o KimSalviette | |||
| Isoflurano | |||
| Ossigeno medico (opzionale) | |||
| Nastro | |||
| medicoSistema di imaging del mouse (incluso il set-up dell'anestesia e la piattaforma di imaging) | Fujifilm Visual Sonics | Vari | Qualsiasi sistema con sonda del trasduttore a ultrasuoni a frequenza centrale da 40 MHz |
| Lama di rasoio (non un rasoio di sicurezza) | |||
| Bilancia (per pesare il mouse) | |||
| Gel |
Riferimenti
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M.
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Ristampe e permessi
Esplora altri articoli
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