Summary
Høyoppløselig ultralyd kan bidra til å strømlinjeforme eksperimenter som krever tidsinnstilte gravide mus ved å bestemme tilstanden til graviditet, svangerskapsalder og graviditetstap. Presentert her er en protokoll for å illustrere metoder for å vurdere musegraviditeter samt potensielle fallgruver (bildeartefakter) som kan etterligne graviditet.
Abstract
Musen er den pattedyr dyremodellen du velger for mange menneskelige sykdommer og biologiske prosesser. Utviklingsbiologi krever ofte iscenesatte gravide mus for å bestemme utviklende prosesser på ulike tidspunkter. Videre krever optimal og effektiv avl av modellmus en vurdering av tidsdømte graviditeter. Vanligvis er mus parret over natten, og tilstedeværelsen av en vaginal plugg bestemmes; Imidlertid er den positive prediktive verdien av denne teknikken suboptimal, og man må vente med å vite om musen virkelig er gravid. Ultralydbiomikroskopi med høy oppløsning er et effektivt verktøy for avbildning: 1) Om en mus er gravid; 2) Hvilket svangerskapsstadium musen har nådd; og 3) Om det er intrauterine tap. I tillegg til embryoer og fostre må undersøkeren også gjenkjenne vanlige gjenstander i bukhulen for ikke å forveksle disse for en gravid livmor. Denne artikkelen inneholder en protokoll for avbildning sammen med illustrasjonseksempler.
Introduction
Musen er den foretrukne pattedyrmodellen for mange menneskelige sykdommer og biologiske prosesser1,2,3,4. Forskning på utviklingsbiologi krever ofte iscenesatte gravide mus for å bestemme utviklende prosesser på ulike tidspunkter5,6,7,8. Videre krever optimal og effektiv avl av modellmus en vurdering av tidsmessige graviditeter, spesielt når etterforskere studerer effekten av en genmutasjon på utvikling. Vanligvis parrer etterforskere heterozygote mus over natten, ser etter en vaginal plugg tidlig neste morgen, og håper at en graviditet følger9. Å bestemme intrauterin tap starter vanligvis med å sjekke et nyfødt søppel for mendeliske forhold mellom genotyper, og deretter jobbe bakover ved å ofre gravide mus på ulike svangerskapsstadier, og gjenopprette embryoene. Etterforskere kan bestemme vektøkning som en beregning av en positiv graviditet10,11; Men spesielt med genetisk konstruerte mus kan kullene være svært små og deretter resorbert når det er intrauterin tap på grunn av hvilken vektøkningen kanskje ikke er åpenbar (spesielt tidlig i svangerskapet, ~ E6,5-8,5). En mus kan virke falsk gravid på grunn av for eksempel en godartet magesvulst. I hovedsak fungerer man "blind".
Høyoppløselig ultralydbiomikroskopi muliggjør direkte visualisering av gravid livmor og utvikling av museembryoer12,13,14,15,16. Selv om vi i utgangspunktet hadde utviklet metoder for å vurdere embryonal mus kardiovaskulær fysiologi16,17, anerkjente vi nytten av denne avbildningsmodaliteten for å effektivisere museavlen vår. Spesielt måtte vi ikke lenger vente med å "se" om en mus var gravid, basert på enten den åpenbare vektøkningen eller leveringen av et søppel; vi kunne bestemme gravid tilstand og re-mate mus raskt hvis demningen ikke var gravid. Videre kan intrauterine tap også lett avbildes, og en tidslinje for tap kan bestemmes uten å ofre musen (se figur 1 for et skjematisk). Tid, verdifulle modellmus og midler kan dermed spares.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle trinnene i denne protokollen følger Guide for the Care and Use of Laboratory Animals publisert av National Institutes of Health og er godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee ved New York University Grossman School of Medicine.
1. Parring av mus for tidsbetimede graviditeter
- Par den aktuelle kvinnelige musen (vanligvis en heterozygote) i et bur med riktig mannlig mus (vanligvis en heterozygote) for parring over natten.
- Skill musene neste morgen. Alternativt, kontinuerlig mate kvinnelige og mannlige mus, og dermed øke sjansene for graviditet.
MERK: En nøyaktig tidsinnstilt graviditet kan imidlertid ikke sikres med alternativet, og iscenesettelse av museembryoer ved ultralyd er ikke klart, spesielt når sykdomsprosessen resulterer i intrauterin veksthemming. Hvis embryoene som bærer genvarianten antas å være små, se etter de større wildtype kullkameratene for å måle svangerskapsalderen.- Valgfritt: Se etter vaginalpluggen. Hvis det ikke er noen vaginal plugg, har den kvinnelige musen ikke blitt parret. Hvis det er en vaginal plugg, er det fortsatt sannsynlig at den kvinnelige musen ikke blir gravid.
- Tid dagen etter nattparingen som E0,5.
- Utfør avbildning på E6.5–E.8.5 for å fastslå graviditet, og re-mate musene hvis musen ikke er gravid (se trinn 1.1).
MERK: På dette stadiet er den kvinnelige demningen ikke åpenbart gravid for øyet; Derfor tillater ultralydavbildningen tidlig bestemmelse og reparring.
2. Anestesi og tilberedning av mus
- Plasser den gravide musen i bedøvelseskammeret.
- Bland isofluran med enten romluft eller medisinsk oksygen, i en konsentrasjon på 2%-3% ved 1 L / min strømningshastighet for å indusere sedasjon av den gravide musen i induksjonskammeret.
MERK: Sedasjon skjer vanligvis innen 1–2 min. Musen vil ligge stille, og pusten hennes vil ha avtatt. - Overfør musen raskt til bildeplattformen. Bildeplattformen har vanligvis varmeelementer også, noe som kan bidra til å holde musen varm.
- Plasser musens nese inn i bedøvelses nosecone.
- Omdiriger isofluran/oksygenblandingen raskt til bildeplattformen nosecone. Oppretthold isofluran ved 2%–3 % ved 1 L/min-strømning.
- Bestem nivået av sedasjon ved poteknip, hornhinnen refleks, nivå av åndedrett og enhver bevegelse.
MERK: Hornhinnen refleks kan i utgangspunktet bestemmes ved å bruke fuktighetsgivende salve på øynene for å holde dem fra å tørke ut mens musen er bedøvet (musen lukker ikke øynene). - Med musen liggende supine (på ryggen), tape potene til bildeplattformens elektrokardiogram (EKG) pads.
MERK: En EKG er imidlertid ikke nødvendig for denne typen avbildning. - Fjern pelsen fra den gravide dammens underliv som følger:
- Fukt bukpelsen grundig med 70% etanol, inkludert opp til sidekantene. Ikke bruk så mye at det er avrenning på plattformen.
MERK: Etanol fungerer bedre som skjæresmøremiddel enn vann. - Bruk barberbladet til å barbere magen forsiktig. Vær forsiktig så du ikke kutter brystvorten.
- Tørk den barberte pelsen av magen med gasbind eller noen våtservietter.
- Alternativt kan du bruke en depilatorisk krem etter bruk av pelsklipperne for å fjerne det meste av pelsen.
- Fukt bukpelsen grundig med 70% etanol, inkludert opp til sidekantene. Ikke bruk så mye at det er avrenning på plattformen.
3. Transabdominal avbildning av den (antatt) gravide musen
- Etter at magen er barbert, reduser isofluranen til 1%-1,5%, og opprettholder fortsatt en strømningshastighet på 1 l / min. Overvåk nivået av sedasjon etter nivået av åndedrett og eventuelle bevegelser samt pote klype og / eller hornhinnen refleks.
MERK: Pulsen til den bedøvede musen vil vanligvis være 400–500/min, avhengig av kjernetemperaturen (rektal). For en rask graviditetskontroll, ikke varm musen til en fysiologisk kjernetemperatur; hjertefrekvensen vil være nærmere 400-450/min, men kan falle ytterligere med en uregelmessig rytme hvis musen blir kald med langvarig bildebehandling.- Viktigst, sørg for at åndedrettene er moderate i dybde og regelmessighet, ikke uberegnelig eller smertefull (gisping: dyp, langsom og uberegnelig, med dype intercostal og subcostal tilbaketrekninger).
MERK: Åndedrettsfrekvensen til den ikke-ventilerte, bedøvede musen vil vanligvis være 60–100/min. Se https://ahcs.ninds.nih.gov/ACUC_pages/pg_003_anesth_animals.html og https://az.research.umich.edu/animalcare/guidelines/guidelines-anesthesia-and-analgesia-mice.
- Viktigst, sørg for at åndedrettene er moderate i dybde og regelmessighet, ikke uberegnelig eller smertefull (gisping: dyp, langsom og uberegnelig, med dype intercostal og subcostal tilbaketrekninger).
- Påfør ultralyd (akustisk kobling) gel på magen sjenerøst.
- Plasser bildetransduseren på magen for å orientere den i et horisontalt plan: orienter sonden for å oppnå en venstre-høyre orientering på bildesystemet; "prikken" eller åsen som er angitt på siden av bildebehandlingssonden, skal vende mot høyre.
MERK: Hvis du skyver bildesonden mot høyre for musen, bør du flytte det tilsvarende bildet på ultralydsystemet til høyre for musen (tenk deg å se "opp" fra musens hale - musens høyre vil bli igjen på skjermen).- Bruk vanligvis bildesystemets svingerfeste og skinnemanipulatorsystem. Her har "fri hånd" avbildning blitt brukt der bildetransduseren er håndholdt (to hender er jevnere enn en) og noe som gir raskere bevegelser rundt magen. Disse bevegelsene, som beskrevet nedenfor, inkluderer både rotasjons- og translasjonsbevegelser. Dette krever imidlertid mer øvelse.
- Identifiser blæren på skjermen (Video 1).
- Skanning årsaksmessig fra blæren, identifiser skjeden. Deretter skanner du sakte og jevnt i kranial retning, identifiserer bifurkasjonen av skjeden i venstre og høyre livmorhorn (Figur 2; Video 1).
- Begynn undersøkelsen av livmor (venstre og høyre livmor horn)13 (Figur 3; Video 2).
MERK: Frem til midten av svangerskapet (E10,5 eller E11,5) plasseres museembryoene langs høyre og venstre periferi. Etter hvert som de vokser, vil de mer distale delene av livmoren og deres tilsvarende embryoer vise seg utover og bakre. Etter hvert som embryoene vokser videre (E15,5 og senere, generelt), vil musefostrene plasseres nesten tilfeldig i forskjellige retninger, og det blir vanskelig å "spore" livmor fra proksimal til distal.- Skann raskt bare for å sjekke om en mus er gravid eller ikke. Denne raske metoden krever bare anerkjennelse av en gravid livmor og museembryoer.
- Alternativt kan du ta ekstra tid til å liste opp embryoene (levende, døde, resorberte) i hvert livmorhorn.
MERK: Generelt vil et levende embryo vise forskjellige organer som hjerte, lemmer, hode med ventrikler og øyne. Et dødt embryo får et homogent, "grøtaktig" utseende med mindre det bare er dødt. Resorberte embryoer har et presist ekkogent sted midt i en gravid utseende livmor (Figur 4, Figur 5, Figur 6, Figur 7, Figur 8). - For å finne ut om et embryo virkelig er i live, se etter hjerteslag og / eller blodstrøm.
MERK: Farge Doppler strømningskartlegging kan bidra til å bestemme tilstedeværelsen av blodstrøm, både i embryoet og i navlestrengen. Generelt kan dette brukes på embryoer eldre enn E8.5. - Gjenkjenne potensielle artefakter som kan etterligne en gravid livmor (Figur 9, Figur 10). I tillegg, som tarmgass og andre ultralyd "skygge" artefakter kan skjule segmenter av livmorhornet, utføre bildet fra flere utsiktspunkter for å sikre tilstrekkelig visualisering av livmoren.
- Etter at undersøkelsen er fullført, tørk gelen fra magen med gasbind eller våtservietter. Prøv å fjerne så mye som mulig som gelen har en tendens til å avkjøle musen ned.
- Løsne potene, og fjern musen fra bedøvelses nosecone.
- Beveg musen forsiktig tilbake i buret hennes. Hun burde våkne og begynne å bevege seg i løpet av et minutt eller så.
MERK: Genetisk modifiserte mus kan ta litt lengre tid å komme seg etter anestesi og må overvåkes nærmere.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Denne protokollen vil tillate en undersøker å avgjøre trygt om en mus er gravid, inkludert i de tidlige stadiene og for å avgjøre om det er åpenbare prenatale embryonale eller fostertap uten å måtte ofre den gravide demningen. Denne protokollen er spesielt nyttig ved avl av genetisk konstruerte mus; vanligvis fører heterozygote x heterozygote kryss for å gi homozygote avkom til svikt i riktig utvikling, noe som forårsaker prenatal dødelighet. Figur 1 skildrer en representativ situasjon der embryoer gradvis dør og deretter resorneres gjennom midten av svangerskapet. Figur 2 viser hvordan du finner venstre og høyre livmorhorn ved å følge skjeden opp gjennom bifurkasjonen. Figur 3, Figur 4, Figur 5, Figur 6, Figur 7, Figur 8og Video 3 viser museembryoer i ulike utviklingsstadier. Tidlige museembryoer, døde embryoer eller resorberte embryoer kan ligne andre organer i magen eller avføring i tarmene, eller omvendt kan tarmløkker etterligne ikke-gravid livmor. Figur 9 og figur 10, i tillegg til Video 4 og Video 5, viser slike potensielle bildeartefakter som kan etterligne livmoren, som undersøkeren må være i beredskap for.
Figur 1: Skjematisk diagram over en teoretisk gravid mus underliv, avbildet på E11,5, deretter igjen på E14.5. Opp til midten av svangerskapet (E10,5 eller E11,5) vil museembryoene plasseres langs høyre og venstre perifere aspekter av magen. Etter hvert som embryoene vokser, vil de mer distale delene av livmoren og deres tilsvarende embryoer vende utover og bakre. Etter hvert som embryoene vokser videre (E15,5 og senere, generelt), vil musefostrene plasseres nesten tilfeldig i forskjellige retninger, og det blir vanskelig å "spore" livmor fra proksimal til distal. Når det er prenatal dødelighet i en genetisk konstruert musemodell, kan embryoene (åpne sirkler) dø; de døde embryoene (klekkede sirkler) vil til slutt bli resorbert (faste sirkler). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2: Når man finner skjeden (A), umiddelbart til høyre for blæren, vil feiende kranialt demonstrere bifurkasjonen (B) til høyre og venstre livmorhorn (D)–(F).
Skalastang (A) = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Bilder av ikke-gravid (ikke-gravid) livmor (identifisert av rader med piler). Livmoren kan variere i tykkelse: tykkere i (A), (B), (E); tynn med en sentral tynn ekkolinje (C), veldig tynn (D), eller kan til og med inneholde små, cystiske strukturer som ikke bør forveksles med concepti (B) og (E) spesielt, selv om dette kan være vanskelig å bestemme. (A) er et riktig livmorhorn; dette er vanskeligere å følge distally i vår erfaring på grunn av tarmgass. (B)–(F) er venstre livmor horn; (F) er ganske distal/ lateral og blir derfor vanskeligere å bilde på grunn av økende tarmgassartefakt. Skalastang (A) = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Resorbert og døde embryoer har tydelig utseende. Resorberte embryoer, som er svært vanlige, er innkapslet i en rund (gravid) livmorsekk som virker relativt homogen, bortsett fra en sentral ekkogen (veldig lys) "spot" - piler i (A) og (B). (C) viser resorberte eller døde embryoer; det er et helt homogent, "grøtaktig" utseende på livmoren, og vi ser sannsynligvis 3-4 døde embryoer i denne rammen. (D) viser et nylig dødt embryo, som fortsatt viser noen strukturer; Det ser også ut til å være cellulært rusk i fostersekken. I (E) er det døde embryoet mye krympet og fortsatt koblet til morkaken ("P"). (F) viser et homogent, "grøtaktig" utseende av et embryo som sannsynligvis døde 1-2 dager tidligere, men som ennå ikke er fullstendig resorbert. Skalalinje for (A) og (D) = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 5: Tidlige embryoer, fra ca. E5,5 (A) og E6,5 (B) til E8,5 ((C) og (D)). Det er variasjoner i utseende, og de estimerte stadiene her var basert på tidspunkt for parring samt utseendet på embryoene selv. Skalastang (A) = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 6: E9,5 embryoer er betydelig større enn E8,5 embryoer og begynner å ta form. Representative bilder, som viser tilstøtende embryoer, vises i (A) og (B). Skalastenger = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 7: E10,5 embryoer viser enda klarere organer som hode, ryggrad og hjerte. Representative bilder, som viser tilstøtende embryoer, vises i alle paneler; i (D), ligger et dødt/resorbing embryo ved siden av et levende embryo. Skalastang = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 8: Eldre embryoer, ca. E12,5 (A), E14,5 (B) og E15,5 (C). Skrå plan for avbildning skjuler den nøyaktige anatomien noe, men hjertet (pilen) er i den sentrale delen av hvert embryo; i (C), er myokardiet nå mer ekkogent enn blodet. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 9: Tarmen, som er orgelet som mest sannsynlig vil bli forvekslet med livmoren. I (E) ligger et resorbert embryo (pilspisser) over et segment av tarm (piler). I (F), en ikke-gravid livmor (pilspisser) overlies et kort segment av tarm (piler) Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 10: Ytterligere avbildningsartefakter i gravidlivet inkluderer nyrene, milten og leveren. (A) Høyre nyre; (B) Høyre nyre med nyrearterie (piler); (C) Venstre nyre; (D) Venstre nyre med nyrearterie (piler); (E) Milt; (F) Leveren overlyser et segment av tarmen; (G) Nyre overlysende segmentet av tarmen; (H) Milt, lever og venstre nyre sett i ett bildeplan. B = tarm; K = nyre; L = lever; S= milt. Skalastang (A) = 2 mm. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det viktigste første trinnet i bildet er å identifisere skjeden og deretter bestemme bifurkasjonen av livmorhornet til venstre og høyre. Ved å følge hvert livmorhorn er det mindre sannsynlig at imageren feil identifiserer tarmens løkker som livmor. Videre er det viktig å forstå variasjonene i tarmens utseende (med / uten fekal materie) å skille disse fra livmoren; av og til kan fekale "baller" i tarmløkker etterligne en gravid (gravid) livmor. Selv om andre forfattere har beskrevet diagnosen graviditet og iscenesettelse av musen embryonal utvikling17,18,19 inkludert påvisning av resorbert embryoer20, denne studien er den første til å skissere trinnene og potensielle fallgruver i avbildning av gravid murine livmor.
Imager må gjenkjenne potensielle gjenstander som kan etterligne en tidlig graviditet eller gravid livmor eller som kan forstyrre avbildningen av livmor og embryoer. Etter livmorhornene vil lateralt redusere sannsynligheten for å ta feil av andre organer og gjenstander i magen for livmoren (og små embryoer). Potensielle gjenstander som kan forveksles med livmor, embryoer og/ eller obstruktive gjenstander inkluderer tarm- og tarmgass, avføring, milt, lever og mage.
Denne metoden krever generell anestesi, og vi er nøye med å begrense: 1) tidspunkt for avbildning og 2) hyppighet av graviditetskontroller, for å redusere enhver sjanse for intrauterin tap på grunn av anestesi. Selv om bedøvelse og smertestillende midler ser ut til å være trygge generelt under graviditet21, kan betydelig eksponering ha konsekvenser for musens embryonale vekst22. Som mus knockout modeller ofte demonstrere prenatal eller tidlig perinatal død, eksponering av embryoer til generell anestesi under denne avbildningen kan (i det minste teoretisk) øke risikoen for død eller påvirke deres biologi på ukjente måter. Selv om en absolutt tidsbegrensning er ukjent, prøver vi å begrense hver bildeøkt til ikke mer enn 15 minutter, og til 2–3 bildebehandlingsøkter (maksimum) per graviditet. "ALARA-prinsippet" er forsvarlig her: Så lavt som rimelig oppnåelig.
Denne metoden gir mulighet for mer effektiv avl samt rask bestemmelse av intrauterin død. Dette er spesielt viktig i eksperimenter ved hjelp av knockout-modeller som dør tidlig; Andre eksempler er toksikologiske studier. Mens noen få studier har detaljert vektøkningen under graviditet, er det ganske klart at vektøkningen tidlig (før E8.5) er liten og kanskje ikke er forskjellig fra daglige vektendringer. Videre ble dataene bare avledet fra førstegangs gravide mus og kan ikke gjenspeile de forvirrende effektene av multi-gravid mus10,11. Tidsbedagede graviditeter kan ikke være tydelige tidlig, og spesielt med genetisk konstruerte mus kan intrauterin tap være vanlig eller til og med påvirke hele søppelet. Dermed, bare fordi en mus ikke leverer et søppel, betyr ikke det at hun aldri var gravid. Mus kan parres om en uke hvis kvinnen ikke er gravid; Ellers må forskerne bare vente på det for å se om kvinnen har blitt gravid. Etter at ferdigheter er utviklet for å gjøre mer enn bare å sjekke for graviditet, vil denne metoden også tillate kartlegging og overvåking av embryoer etter hvert som graviditeten utvikler seg. På denne måten kan den optimale timingen for embryohøsting bestemmes om vev må høstes før død23.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
ingen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Depilatory cream | |||
| Ethanol, 70% | |||
| Fur clippers | |||
| Gauze or KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Medical oxygen (optional) | |||
| Medical tape | |||
| Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
| Razor blade (not a safety razor) | |||
| Scale (to weigh mouse) | |||
| Ultrasound gel |
References
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. Humanized mouse models: Application to human diseases. Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).
- Law, M., Shaw, D. R. Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse. Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).
- Rydell-Törmänen, K., Johnson, J. R. The applicability of mouse models to the study of human disease. Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).
- Hinton, R. B., Yutzey, K. E. Heart valve structure and function in development and disease. Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).
- Dickinson, M. E., et al. High-throughput discovery of novel developmental phenotypes. Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).
- Tam, P. P. L., et al. Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network. Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).
- Palis, J. Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo. FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).
- Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. Selecting female mice in estrus and checking plugs. Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).
- Heyne, G. W., et al. A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).
- Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).
- Zhou, Y. Q., et al. Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood. Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).
- Ji, R. P., Phoon, C. K. L. Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation. Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).
- Kulandavelu, S., et al. Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice. ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).
- Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound. Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).
- Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H.
- Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development. Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).
- Peavey, M. C., et al. A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse. Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).
- Greco, A., et al. High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice. PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).
- Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kühl, A. A., Drews, B. Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy. Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).
- Norton, W. B., et al. Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival. Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).
- Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse. Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).
- Phoon, C. K. L., et al. Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction. Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).
