Summary
Högupplöst ultraljud kan hjälpa till att effektivisera experiment som kräver tidsbestämda gravida möss genom att bestämma graviditetstillstånd, graviditetsålder och graviditetsförluster. Presenteras här är ett protokoll för att illustrera metoder för att bedöma mus graviditeter samt potentiella fallgropar (bild artefakter) som kan efterlikna graviditet.
Abstract
Musen är däggdjursdjurmodellen för många mänskliga sjukdomar och biologiska processer. Utvecklingsbiologi kräver ofta iscensatta gravida möss för att bestämma utvecklingsprocesser vid olika tidpunkter. Dessutom kräver optimal och effektiv uppfödning av modellmöss en bedömning av tidsbestämda graviditeter. Oftast paras möss över natten, och närvaron av en vaginal plugg bestäms; Det positiva prediktiva värdet av denna teknik är dock suboptimalt, och man måste vänta för att veta om musen verkligen är gravid. Högupplöst ultraljud biomikroskopi är ett effektivt och effektivt verktyg för avbildning: 1) Om en mus är gravid; 2) Vilket graviditetsstadium musen har nått; och 3) Om det finns intrauterin förlust. Förutom embryon och foster måste prövaren också känna igen vanliga artefakter i bukhålan för att inte missta dessa för en gravid livmoder. Den här artikeln innehåller ett protokoll för avbildning tillsammans med belysande exempel.
Introduction
Musen är den föredragna däggdjursmodellen för många mänskliga sjukdomar och biologiska processer1,2,3,4. Forskning inom utvecklingsbiologi kräver ofta iscensatta gravida möss för att bestämma utvecklingsprocesser vid olika tidpunkter5,6,7,8. Dessutom kräver optimal och effektiv uppfödning av modellmöss en bedömning av tidsbestämda graviditeter, särskilt när utredare studerar effekterna av en genmutation på utvecklingen. Vanligtvis parar utredare heterozygous möss över natten, letar efter en vaginal plugg tidigt nästa morgon och hoppas att en graviditet följer9. Att bestämma intrauterin förlust börjar vanligtvis med att kontrollera en nyfödd kull för mendelian förhållanden av genotyper, sedan arbeta bakåt genom att offra gravida möss i olika graviditetsstadier och återställa embryona. Utredare kan bestämma viktökning som ett mått på en positiv graviditet10,11; Men särskilt med genetiskt konstruerade möss kan kullarna vara mycket små och därefter resorbed när det finns intrauterin förlust på grund av vilken viktökningen kanske inte är uppenbar (särskilt tidigt i graviditeten, ~ E6.5-8.5). En mus kan verka falskt gravid på grund av till exempel en godartad buktumör. I grund och botten fungerar man "blind".
Högupplöst ultraljud biomicroscopy möjliggör direkt visualisering av gravid livmodern och utveckla mus embryon12,13,14,15,16. Även om vi ursprungligen hade utvecklat metoder för att bedöma embryonal mus kardiovaskulär fysiologi16,17, kände vi igen nyttan av denna bildframställning modalitet för att effektivisera vår mus avel. Specifikt behövde vi inte längre vänta för att "se" om en mus var gravid, baserat på antingen den uppenbara viktökningen eller leveransen av en kull; vi kunde bestämma gravid tillstånd och re-mate möss snabbt om dammen inte var gravid. Dessutom kan intrauterin förlust också lätt avbildas, och en tidslinje över förlust kan bestämmas utan att offra musen (se figur 1 för ett schema). Tid, värdefulla modellmöss och medel kan därmed sparas.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla steg i detta protokoll följer guiden för vård och användning av laboratoriedjur som publicerats av National Institutes of Health och har godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee vid New York University Grossman School of Medicine.
1. Parning av möss för tidsbestämda graviditeter
- Para ihop lämplig kvinnlig mus (vanligtvis en heterozygot) i en bur med lämplig manlig mus (vanligtvis en heterozygot) för parning över natten.
- Separera mössen nästa morgon. Alternativt parar kontinuerligt de kvinnliga och manliga mössen, vilket ökar risken för graviditet.
OBS: En korrekt tidsanklickad graviditet kan dock inte garanteras med alternativet, och iscensättning av musembryon med ultraljud är inte klart, särskilt när sjukdomsprocessen resulterar i intrauterin tillväxtförsämring. Om embryona som bär genvarianten antas vara små, leta efter de större vilda kullarna för att mäta graviditetsåldern.- Tillval: Leta efter vaginalpluggen. Om det inte finns någon vaginal plugg har den kvinnliga musen inte parats. Om det finns en vaginal plugg är det fortfarande troligt att den kvinnliga musen inte blir gravid.
- Tid dagen efter övernattningsparningen som E0.5.
- Utför avbildning på E6.5–E.8.5 för att bestämma graviditeten och parera om mössen om musen inte är gravid (se steg 1.1).
OBS: I detta skede är den kvinnliga dammen inte uppenbart gravid för ögat; ultraljudsavbildningen möjliggör därför tidig bestämning och omparning.
2. Anestesi och beredning av mus
- Placera den gravida musen i anestesiinduktionskammaren.
- Blanda isofluran med antingen rumsluft eller medicinskt syre, vid en koncentration av 2–3 % vid 1 L/min flöde för att inducera sedering av den gravida musen i induktionskammaren.
OBS: Sedering sker vanligtvis inom 1–2 min. Musen kommer att ligga stilla, och hennes andning kommer att ha saktat ner. - Överför snabbt musen till bildplattformen. Bildplattformen har vanligtvis värmeelement också, vilket kan hjälpa till att hålla musen varm.
- Placera musens näsa i bedövningsnäskonen.
- Dra snabbt om isofluran/syreblandningen till avbildningsplattformens noskon. Håll isofluran vid 2%-3% vid 1 L/min flöde.
- Bestäm sederingsnivån genom tassnypa, hornhinnans reflex, andningsnivån och eventuella rörelser.
OBS: Hornhinnans reflex kan ursprungligen bestämmas genom att applicera fuktgivande salva på ögonen för att hindra dem från att torka ut medan musen är sövd (musen stänger inte ögonen). - Med musen liggande supine (på ryggen), tejpa tassarna till bildplattformens elektrokardiogram (EKG) kuddar.
OBS: Ett EKG är dock inte nödvändigt för denna typ av avbildning. - Ta bort pälsen från den gravida dammens buk enligt följande:
- Blöt bukpälsen noggrant med 70% etanol, inklusive upp till sidokanterna. Applicera inte så mycket att det finns körning på plattformen.
OBS: Etanol fungerar bättre som raksmörjmedel än vatten. - Använd rakbladet för att försiktigt raka buken. Var försiktig så att du inte skär bröstvårtorna.
- Torka av den rakade pälsen från buken med gasväv eller några våtservetter.
- Alternativt kan du använda en depilatory cream efter att ha använt pälsklipparen för att ta bort det mesta av pälsen.
- Blöt bukpälsen noggrant med 70% etanol, inklusive upp till sidokanterna. Applicera inte så mycket att det finns körning på plattformen.
3. Transabdominal avbildning av den (förmodade) gravida musen
- När buken har rakats, minska isofluranen till 1%-1,5%, fortfarande upprätthålla en flödeshastighet på 1 L/ min. Övervaka sederingsnivån genom andningsnivån och eventuella rörelser samt tassnypa och / eller hornhinnans reflex.
OBS: Hjärtfrekvensen för den sövd musen kommer vanligtvis att vara 400-500/min, beroende på kärnans (rektal) temperatur. För en snabb graviditetskontroll, värm inte musen till en fysiologisk kärntemperatur; hjärtfrekvensen kommer att vara närmare 400–450/min, men kan sjunka ytterligare med oregelbunden rytm om musen blir kall med långvarig avbildning.- Viktigt, se till att andningarna är måttliga i djup och regelbundenhet, inte oberäkneliga eller agonal (flämtande: djup, långsam och oberäknelig, med djupa interkostala och subkostala upprullningar).
OBS: Andningshastigheten för den icke-ventilerade, sövd musen är vanligtvis 60–100/min. Se https://ahcs.ninds.nih.gov/ACUC_pages/pg_003_anesth_animals.html och https://az.research.umich.edu/animalcare/guidelines/guidelines-anesthesia-and-analgesia-mice.
- Viktigt, se till att andningarna är måttliga i djup och regelbundenhet, inte oberäkneliga eller agonal (flämtande: djup, långsam och oberäknelig, med djupa interkostala och subkostala upprullningar).
- Applicera ultraljud (akustisk koppling) gel på buken generöst.
- Placera bildgivaren på buken för att orientera den i ett horisontellt plan: orientera sonden för att få en vänster-höger-orientering på bildsystemet; Den "prick" eller ås som anges på sidan av avbildningssonden ska vara vänd åt höger.
OBS: Om du skjuter avbildningssonden åt höger om musen bör motsvarande bild på ultraljudssystemet flyttas till musens högra sida (föreställ dig att titta "upp" från musens svans – musens högra sida kommer att lämnas på skärmen).- Använd vanligtvis bildsystemets givare och rälsmanipulatörssystem. Här har "frihandsbilder" använts där bildgivaren är handhållen (två händer är stadigare än en) och som möjliggör snabbare rörelser runt buken. Dessa rörelser, som kommer att beskrivas nedan, omfattar både rotations- och translationella rörelser. Detta kräver dock mer övning.
- Identifiera blåsan på skärmen (Video 1).
- Skanna kaudally från urinblåsan, identifiera vaginan. Skanna sedan långsamt och smidigt i en kranial riktning, identifiera bifurcation av slidan i vänster och höger livmoderhorn (Figur 2; Video 1).
- Påbörja undersökningen av livmodern (vänster och höger livmoderhorn)13 (Figur 3; Video 2).
OBS: Upp till mitten av dräktigheten (E10.5 eller E11.5) kommer musembryon att placeras längs höger och vänster periferi. När de växer kommer de mer distala delarna av livmodern och deras motsvarande embryon att vända sig utåt och bakåt. När embryona växer ytterligare (E15.5 och senare, i allmänhet), kommer musfostren att placeras nästan slumpmässigt i olika riktningar, och det blir svårt att "spåra" en livmoder från proximal till distal.- Skanna snabbt helt enkelt för att kontrollera om en mus är gravid eller inte. Denna snabba metod kräver endast erkännande av en gravid livmoder och musembryon.
- Alternativt kan du ta extra tid att räkna upp embryona (levande, döda, resorbed) i varje livmoderhorn.
OBS: I allmänhet kommer ett levande embryo att uppvisa distinkta organ som ett hjärta, lemmar, huvud med ventriklar och ögon. Ett dött embryo får ett homogent, "mushy" utseende om det inte bara är dött. Resorbed-embryon har en exakt ekogen fläck mitt i en gravid livmoder (Figur 4, Figur 5, Figur 6, Figur 7, Figur 8). - För att avgöra om ett embryo verkligen lever, leta efter hjärtslag och / eller blodflöde.
OBS: Färg Doppler flödeskartläggning kan hjälpa till att bestämma närvaron av blodflödet, både i embryot och i navelsträngen. I allmänhet kan detta tillämpas på embryon som är äldre än E8.5. - Känn igen potentiella artefakter som kan efterlikna en gravid livmoder (Figur 9, Figur 10). Dessutom, som tarmgas och andra ultraljud "skugga" artefakter kan dölja segment av livmoderhornet, utföra avbildningen från flera utsiktspunkter för att säkerställa adekvat visualisering av livmodern.
- När undersökningen är klar, torka gelén från buken med gasväv eller våtservetter. Försök att ta bort så mycket som möjligt eftersom gelén tenderar att kyla ner musen.
- Ta bort tassarna och ta bort musen från bedövningsnäskonen.
- Flytta försiktigt tillbaka musen i hennes bur. Hon borde vakna och börja röra på sig inom en minut eller så.
OBS: Genetiskt modifierade möss kan ta lite längre tid att återhämta sig från anestesi och måste övervakas närmare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Detta protokoll kommer att göra det möjligt för en utredare att avgöra säkert om en mus är gravid, inklusive under de tidiga stadierna och att avgöra om det finns uppenbara prenatala embryonala eller fetala förluster utan att behöva offra den gravida dammen. Detta protokoll är särskilt användbart vid uppfödning av genetiskt modifierade möss; Vanligtvis leder heterozygous x heterozygous kors för att ge homozygous avkommor till misslyckande av korrekt utveckling, vilket orsakar fostertoxicitet. Figur 1 skildrar en representativ situation där embryon gradvis dör och sedan genomförstärkars genom mitten av dräktigheten. Figur 2 visar hur man hittar vänster och höger livmoderhorn genom att följa vaginan upp genom sin bifurcation. Figur 3, Figur 4, Figur 5, Figur 6, Figur 7, Figur 8och Video 3 visar musembryon i olika utvecklingsstadier. Tidiga musembryon, döda embryon eller resorbedembryon kan likna andra organ i buken eller avföring i tarmarna, eller omvänt kan tarmslingor efterlikna den icke-gravida livmodern. Figur 9 och figur 10, liksom Video 4 och Video 5, visar sådana potentiella bildartefakter som kan efterlikna den gravida livmodern, för vilken prövaren måste vara uppmärksam.
Figur 1: Schematiskt diagram över en teoretisk gravid mus buk, avbildad på E11,5, sedan igen på E14,5. Upp till mitten av dräktigheten (E10.5 eller E11.5) kommer musembryon att placeras längs bukens högra och vänstra perifera aspekter. När embryona växer kommer de mer distala delarna av livmodern och deras motsvarande embryon att vända sig utåt och bakåt. När embryona växer ytterligare (E15.5 och senare, i allmänhet), kommer musfostren att placeras nästan slumpmässigt i olika riktningar, och det blir svårt att "spåra" en livmoder från proximal till distal. När det finns prenatal dödlighet i en genetiskt konstruerad musmodell kan embryona (öppna cirklar) dö; de döda embryona (kläckta cirklar) kommer så småningom att bli resorbed (fasta cirklar). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 2: När man hittarslidan( A ), omedelbart till höger om blåsan, kommer svepande hjärnskålen att visa bifurcation (B) till höger och vänster livmoderhorn (D) - (F).
Skalstreck (A) = 2 mm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Bilder av icke-gravid (icke-gravid) livmoder (identifieras av raderna av pilar). Livmodern kan variera i tjocklek: tjockare i (A), (B), (E); tunn med en central tunn ekogen linje(C),mycket tunn (D), eller kan till och med innehålla små, cystiska strukturer som inte bör misstas för concepti (B) och (E) särskilt, även om detta kan vara svårt att bestämma. A)är ett rätt livmoderhorn; detta är svårare att följa distally i vår erfarenhet på grund av tarmgas. (B)–(F) lämnas livmoderhorn; (F) är ganska distala / laterala och blir därför svårare att avbilda på grund av ökande tarmgas artefakt. Skalstreck (A) = 2 mm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Resorbed och döda embryon har distinkta utseenden. Resorbed embryon, som är mycket vanliga, är inneslutna i en rund (gravid) livmodersäck som verkar relativt homogen förutom en central echogenic (mycket ljus) "spot"-pilar i (A) och (B). C)visar resorbed eller döda embryon, det finns ett helt homogent, "mushy" utseende på livmodern, och vi ser förmodligen 3-4 döda embryon i denna ram. Dvisar ett nyligen dött embryo, som fortfarande visar vissa strukturer. det verkar också finnas cellulära skräp i fosterhinnan säcken. I (E) är det döda embryot mycket krympt och fortfarande anslutet till placentan ("P"). (F) visar ett homogent, "mushy" utseende av ett embryo som förmodligen dog 1-2 dagar tidigare, men är ännu inte helt resorbed. Skala streck för (A) och (D) = 2 mm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 5: Embryon i tidigt skede, från cirka E5,5(A)och E6,5(B)till E8,5(C)och(D)). Det finns variationer i utseenden, och de uppskattade stadierna här baserades på tidpunkten för parning samt utseendet på embryona själva. Skalstreck (A) = 2 mm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 6: E9.5-embryon är betydligt större än E8,5-embryon och börjar ta form. Representativa bilder, som visar angränsande embryon, visas i( A) och (B). Skalstänger = 2 mm. Klicka här för att se en större version av den här figuren.
Figur 7: E10.5 embryon uppvisar ännu tydligare organ som huvud, ryggrad och hjärta. Representativa bilder, som visar angränsande embryon, visas i alla paneler; I (D) ligger ett dött/resorberande embryo intill ett levande embryo. Skalstreck = 2 mm. Klicka här för att se en större version av den här figuren.
Figur 8: Äldre embryon, cirka E12,5(A),E14.5(B)och E15.5(C). Sneda plan av avbildning döljer den exakta anatomin något, men hjärtat (pilen) ligger i den centrala delen av varje embryo; i (C), är myokardiet nu mer ekogent än blodet. Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 9: Tarmen, som är det organ som mest sannolikt kommer att förväxlas med livmodern. I (E) översmältar ett resorbed embryo (pilspetsar) ett segment av tarm (pilar). I (F), en icke-gravid livmoder (pilspetsar) överlies ett kort segment av tarm (pilar) Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 10: Ytterligare bild artefakter i gravid buken inkluderar njurar, mjälte och lever. A)Höger njure. B)Höger njure med njurartär (pilar). C)Vänster njure. D)Vänster njure med njurartär (pilar). e)Mjälte. F)Lever som överhetsar ett tarmsegment. G)Njure överytring segment av tarm; (H) Mjälte, lever och vänster njure sett i ett plan av avbildning. B = tarm; K= njure; L= lever; S= mjälte. Skalstreck (A) = 2 mm. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Det viktigaste första steget i avbildningen är att identifiera slidan och sedan bestämma bifurcation av livmoderhornet till vänster och höger. Genom att följa varje livmoderhorn är det mindre troligt att bildaren felidentifierar tarmens slingor som livmodern. Dessutom är det viktigt att förstå variationerna i tarmens utseende (med / utan fekal materia) för att skilja dessa från livmodern; ibland kan fekala "bollar" i tarmslingor efterlikna en gravid (gravid) livmoder. Även om andra författare har beskrivit diagnos av graviditet och iscensättning av mus embryonalutveckling 17,18,19 inklusive påvisande av resorbed embryon20, är denna studie den första att beskriva stegen och potentiella fallgropar i imaging gravid murine livmodern.
Bilden måste känna igen potentiella artefakter som kan efterlikna en tidig graviditet eller gravid livmoder eller som kan störa avbildningen av livmodern och embryona. Att följa livmoderhornen i senare led kommer att minska sannolikheten för att missta andra organ och artefakter i buken för livmodern (och små embryon). Potentiella artefakter som kan misstas för livmoder, embryon och/eller obstruktiva föremål inkluderar tarm- och tarmgas, avföring, mjälte, lever och mage.
Denna metod kräver allmän anestesi, och vi är noga med att begränsa: 1) tid för avbildning och 2) frekvens av graviditet kontroller, att minska risken för intrauterin förlust på grund av anestesi. Även om bedövningsmedel och smärtstillande medel verkar vara säkra totalt sett under graviditet21,kan betydande exponering få konsekvenser för musens embryonala tillväxt22. Eftersom modeller för mus knockout ofta visar prenatal eller tidig perinatal död, kan embryots exponering för allmän anestesi under denna avbildning (åtminstone teoretiskt) öka risken för att deras biologi går under eller påverkar deras biologi på okända sätt. Även om en absolut tidsgräns är okänd försöker vi begränsa varje bildsession till högst 15 minuter och till 2–3 bildsessioner (maximalt) per graviditet. "ALARA-principen" är försiktig här: Så låg som rimligen uppnåelig.
Denna metod möjliggör effektivare avel samt snabb bestämning av intrauterin död. Detta är särskilt viktigt i experiment med knockout-modeller som dör tidigt; Andra exempel är toxikologiska studier. Medan några studier har specificerat viktökningen under graviditeten, är det ganska tydligt att viktökningen tidigt (före E8.5) är liten och kanske inte skiljer sig från dagliga viktförändringar. Dessutom härleddes data endast från första gången dräktiga möss och kanske inte återspeglar de förvirrande effekterna av multi-gravid möss10,11. Tidsbestämda graviditeter kanske inte är uppenbara tidigt, och särskilt med genetiskt konstruerade möss kan intrauterinförluster vara vanliga eller till och med påverka hela kullen. Således, helt enkelt för att en mus inte levererar en kull betyder det inte att hon aldrig var gravid. Möss kan paras om en vecka om honan inte är gravid; Annars måste forskare helt enkelt vänta ut det för att se om kvinnan har blivit gravid. När färdigheter har utvecklats för att göra mer än att bara kontrollera graviditeten, kommer denna metod också att tillåta kartläggning och övervakning av embryona när graviditeten fortskrider. På så sätt kan den optimala tidpunkten för embryoskörd bestämmas om vävnader måste skördas före undergång23.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
ingen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Depilatory cream | |||
| Ethanol, 70% | |||
| Fur clippers | |||
| Gauze or KimWipes | |||
| Isoflurane | |||
| Medical oxygen (optional) | |||
| Medical tape | |||
| Mouse imaging system (including anesthesia set-up and imaging platform) | Fujifilm Visual Sonics | Various | Any system with 40 MHz center-frequency ultrasound transducer probe |
| Razor blade (not a safety razor) | |||
| Scale (to weigh mouse) | |||
| Ultrasound gel |
References
- Bogue, M. A., et al. Mouse Phenome Database: an integrative database and analysis suite for curated empirical phenotype data from laboratory mice. Nucleic Acids Research. 46, 843-850 (2018).
- Ito, R., Takahashi, T., Ito, M. Humanized mouse models: Application to human diseases. Journal of Cellular Physiology. 233 (5), 3723-3728 (2018).
- Law, M., Shaw, D. R. Mouse Genome Informatics (MGI) is the international resource for information on the laboratory mouse. Methods in Molecular Biology. 1757, 141-161 (2018).
- Rydell-Törmänen, K., Johnson, J. R. The applicability of mouse models to the study of human disease. Methods in Molecular Biology. 1940, 3-22 (2019).
- Hinton, R. B., Yutzey, K. E. Heart valve structure and function in development and disease. Annual Reviews of Physiology. 73, 29-46 (2011).
- Dickinson, M. E., et al. High-throughput discovery of novel developmental phenotypes. Nature. 537 (7621), 508-514 (2016).
- Tam, P. P. L., et al. Formation of the embryonic head in the mouse: attributes of a gene regulatory network. Current Topics in Developmental Biology. 117, 497-521 (2016).
- Palis, J. Hematopoietic stem cell-independent hematopoiesis: emergence of erythroid, megakaryocyte, and myeloid potential in the mammalian embryo. FEBS Letters. 590 (22), 3965-3974 (2016).
- Behringer, R., Gertsenstein, M., Nagy, K. V., Nagy, A. Selecting female mice in estrus and checking plugs. Cold Spring Harbor Protocols. 2016 (8), (2016).
- Heyne, G. W., et al. A simple and reliable method for early pregnancy detection in inbred mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 368-371 (2015).
- Finlay, J. B., Liu, X., Ermel, R. W., Adamson, T. W. Maternal weight gain as a predictor of litter size in Swiss Webster, C57BL/6J, and BALB/cJ mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (6), 694-699 (2015).
- Zhou, Y. Q., et al. Applications for multifrequency ultrasound biomicroscopy in mice from implantation to adulthood. Physiological Genomics. 10 (2), 113-126 (2002).
- Ji, R. P., Phoon, C. K. L. Noninvasive localization of nuclear factor of activated T cells c1-/- mouse embryos by ultrasound biomicroscopy-Doppler allows genotype-phenotype correlation. Journal of the American Society of Echocardiography. 18 (12), 1415-1421 (2005).
- Kulandavelu, S., et al. Embryonic and neonatal phenotyping of genetically engineered mice. ILAR Journal. 47 (2), 103-117 (2006).
- Mu, J., Slevin, J. C., Qu, D., McCormick, S., Adamson, S. L. In vivo quantification of embryonic and placental growth during gestation in mice using micro-ultrasound. Reproductive Biology and Endocrinology. 6, 34 (2008).
- Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H.
- Phoon, C. K. L., Turnbull, D. H. Ultrasound biomicroscopy-Doppler in mouse cardiovascular development. Physiological Genomics. 14 (1), 3-15 (2003).
- Peavey, M. C., et al. A novel use of three-dimensional high-frequency ultrasonography for early pregnancy characterization in the mouse. Journal of Visualized Experiments. (128), e56207 (2017).
- Greco, A., et al. High frequency ultrasound for in vivo pregnancy diagnosis and staging of placental and fetal development in mice. PLoS One. 8 (10), 77205 (2013).
- Flores, L. E., Hildebrandt, T. B., Kühl, A. A., Drews, B. Early detection and staging of spontaneous embryo resorption by ultrasound biomicroscopy in murine pregnancy. Reproductive Biology and Endocrinology. 12, 38 (2014).
- Norton, W. B., et al. Refinements for embryo implantation surgery in the mouse: comparison of injectable and inhalant anesthesias - tribromoethanol, ketamine and isoflurane - on pregnancy and pup survival. Laboratory Animal. 50 (5), 335-343 (2016).
- Thaete, L. G., Levin, S. I., Dudley, A. T. Impact of anaesthetics and analgesics on fetal growth in the mouse. Laboratory Animal. 47 (3), 175-183 (2013).
- Phoon, C. K. L., et al. Tafazzin knockdown in mice leads to a developmental cardiomyopathy with early diastolic dysfunction preceding myocardial noncompaction. Journal of the American Heart Association. 1 (2), (2012).
