Summary
Dette papir giver tre nemme og tilgængelige analyser til vurdering af lipid metabolisme i mus.
Abstract
Vurdering lipid metabolisme er en hjørnesten i evalueringen metabolisk funktion, og det anses for afgørende for in vivo metabolisme undersøgelser. Lipider er en klasse af mange forskellige molekyler med mange veje involveret i deres syntese og stofskifte. Et udgangspunkt for evaluering lipid hæmostase for ernæring og fedme forskning er nødvendig. Dette papir beskriver tre nemme og tilgængelige metoder, der kræver lidt ekspertise eller praksis at mestre, og som kan tilpasses af de fleste laboratorier til at screene for lipid-metabolisme abnormiteter i mus. Disse metoder er (1) måling flere faste serum lipid molekyler ved hjælp af kommercielle kits (2) assaying for kosten lipid-håndtering kapacitet gennem en oral intralipid tolerance test, og (3) evaluere respons på en farmaceutisk forbindelse, CL 316,243, i mus. Sammen vil disse metoder give et højt niveau overblik over lipid håndtering kapacitet i mus.
Introduction
Kulhydrater og lipider er to store substrater for energimetabolisme. Afvigende lipid metabolisme resulterer i mange menneskelige sygdomme, herunder type II diabetes, hjerte-kar-sygdomme, fedtlever sygdomme, og kræft. Kosten lipider, hovedsagelig triglycerider, absorberes gennem tarmen ind i lymfesystemet og kommer ind i venøscirkulationen i chylomicrons nær hjertet1. Lipider bæres af lipoproteinpartikler i blodbanen, hvor fedtsyremoietierne frigøres ved virkningen af lipoprotein lipase ved perifere organer som muskel- og fedtvæv2. De resterende kolesterolrige restpartikler ryddes af leveren3. Mus har været meget udbredt i laboratorier som en forskningsmodel til at studere lipid metabolisme. Med omfattende genetiske værktøjssæt til rådighed og en relativt kort avlscyklus er de en stærk model til at studere, hvordan lipider absorberes, syntetiseres og metaboliseres.
På grund af kompleksiteten af lipid metabolisme, sofistikerede lipidomics undersøgelser eller isotop tracer undersøgelser bruges normalt til at kvantificere samlinger af lipid arter eller lipid-relaterede metaboliske fluxes og skæbner4,5. Dette skaber en massiv udfordring for forskere uden specialiseret udstyr eller ekspertise. I dette papir, præsenterer vi tre analyser, der kan tjene som indledende tests, før teknisk udfordrende teknikker anvendes. De er ikke-terminale procedurer for musene, og dermed meget nyttige til at identificere potentielle forskelle i lipid-håndtering kapacitet og indsnævring af de berørte processer.
For det første kan måling af sende serum lipidmolekyler hjælpe en med at fastslå en mus samlede lipidprofil. Mus skal fastes, fordi mange lipidarter stiger efter måltider, og omfanget af stigningen påvirkes stærkt af kostens sammensætning. Mange lipidmolekyler, herunder total kolesterol, triglycerid og ikke-esterificeret fedtsyre (NEFA), kan måles ved hjælp af et kommercielt kit og en pladelæser, der kan læse absorbans.
For det andet, en oral intralipid tolerance test vurderer lipid-håndtering kapacitet som en nettoeffekt af absorption og stofskifte. En mundtligt administreret intralipid forårsager en stigning i cirkulerende triglyceridniveauer (1-2 timer), hvorefter serum triglyceridniveauet vender tilbage til basalniveauer (4-6 timer). Denne analyse giver oplysninger om, hvor godt en mus kan håndtere de udefrakommende lipider. Hjerte, lever, og brun fedtvæv er aktive forbrugere af triglycerider, mens hvidt fedtvæv gemmer det som en energireserve. Ændringer i disse funktioner vil føre til forskelle i testresultaterne.
Endelig, fremme lipolyse at mobilisere lagrede lipider betragtes som en mulig strategi for vægttab. Den β3-adrenergic receptor signalering vej i fedtvæv spiller en vigtig rolle i adipocyt lipolyse, og human genetik har identificeret et tab-of-funktion polymorfi Trp64Arg i β3-adrenergic receptor korreleret med fedme6. CL 316,243, en specifik og potent β3-adrenergic receptor agonist, stimulerer fedtvæv lipolyse og frigivelse af glycerol. Evaluering af en mus svar på CL 316,243 kan give værdifulde oplysninger om udvikling, forbedring og forståelse af effekten af forbindelsen.
Kollektivt, disse tests kan bruges som en indledende skærm for ændringer i lipid metaboliske tilstand af mus. De vælges til tilgængeligheden af instrumenter og reagenser. Med resultaterne stammer fra disse analyser, forskere kan danne et samlet billede af metaboliske egnethed af deres dyr og træffe beslutning om mere sofistikerede og målrettede tilgange.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Dyr er anbragt under standardiserede forhold efter dyrepleje og forsøgsprotokoller godkendt af den institutionelle Animal Care and Use Committee af Baylor College of Medicine (BCM). Dyr fodres med en standard eller speciel kost, vand ad libitum og holdes med en 12-timers dag / nat cyklus.
1. Måling af faste serum lipider
- Overfør mus til et nyt bur efter kl. 17 og hurtigt med fri adgang til vand natten over (med ca. 16 timers faste før eksperimentet). Den overnattende faste sikrer fuldstændig tømning af musenes mave-tarmkanaler.
BEMÆRK: Mus spiser deres afføring under faste, så tilbagetrækning af fødevarer kan ikke sikre, at de er tilstrækkeligt fastende. - Næste morgen skal du gribe musen ved halen og placere den på en overflade. Træk forsigtigt tilbage på musens hale for at placere musen i fastholdelsesmanden. Placer næse fastholdelsesanordningen til at omskole bevægelsen af musen, mens du stadig tillader musen at trække vejret. Stram knappen på næsefastholdelsesanordningen. Overvåg brystbevægelser for at sikre, at dyret trækker vejret normalt og minimerer den tid, en mus bruger i fastholdelsesfolk.
- Lav et overfladisk snit (nick) i haleåren af den frit bevægende mus, og tegn 25 μL blod fra snittet til en glas kapillær (påfyldning omkring 1/3 af kapillær) uden at fastholde musen. Blæs hurtigt blodet ind i et mikrocentrifugrør.
- Stop blødningen ved hjælp af styptiske pulvere, genopfyld foderet i buret, og sørg for, at musene ikke viser tegn på stress.
- Fuldfør blodprøven for alle musene.
- Lad blodet størkne ved at lade det være uforstyrret ved stuetemperatur i 1 time. De størkne blodprøver drejes ved 2.000 x g ved 4 °C i 10 minutter i et mikrocentrifuge på bænken på bænken, og overfør supernatant (serum) til analyse.
BEMÆRK: Serum kan opbevares ved –20 °C i flere uger indtil analysen. Til langtidsopbevaring skal du holde serumet ved -70 °C. - Analyser hver lipid metabolit ved hjælp af producentens angivne protokol.
2. Oral intralipid tolerance test
- Efter kl. 17.00 vejes musene til beregning af det intralipidvolumen, der skal gives til dem den næste dag. Overfør derefter musene til et nyt bur og fast dem natten over (16 timer).
- Næste morgen markerer du haler af musene, der er anbragt i et bur for at hjælpe med at identificere dem i de efterfølgende blødningstrin.
- Lav et hak i haleåren og træk 15 μL blod fra snittet til en glas kapillær (påfyldning omkring 1/5 af kapillær), og hurtigt blæse blodet ind i en microcentrifuge rør for T = 0 serum.
BEMÆRK: Der er ingen grund til at stoppe blødningen under analysen, medmindre musene udviser forblødning. - Gavage mus 20% intralipid ved hjælp af en 18G gavage nål i et forhold på 15 μl per gram kropsvægt, ved hjælp af pre-fastende kropsvægt. Stak hver mus med 1 minut.
BEMÆRK: Afvej dyret og bestem den passende gavage nål størrelse. Generelt er en 18 gauge gavage nål egnet til mus >25 g, og en 20-22 gauge gavage nål ville være mere passende for mindre dyr. Scruff musen, greb huden over skuldrene for at holde dyrets hoved på plads. Placer gavagenålen i munden og gå forsigtigt videre langs den øverste gane, indtil spiserøret er nået. Røret skal passere uden modstand. Når den rette dybde er nået, kan Intralipid administreres langsomt. Fjern forsigtigt nålen efter samme vinkel under indføring af nålen efter administration af Intralipid. Returner dyret til buret og overvåge for tegn på besværet vejrtrækning eller anden nød.
BEMÆRK: Forskere, der er uerfarne med oral gavage eller hale blødning teknikker kan stable hver mus med 2 minutter eller endnu længere. - Tegn blod ved T = 1, 2, 3, 4, 5 og 6 timer: Træk 15 μL blod (1/5 kapillær) pr. mus gennem haleblødning, og blæs hurtigt blodet ind i et mikrocentrifugerør.
- Drej blodprøverne ved 2.000 x g ved stuetemperatur i 10 minutter i et mikrocentrifuge. Overfør supernatanten, herunder det flydende fedtlag, til et PCR-rør til opbevaring. Supernatanten kan opbevares ved -20 °C i flere uger indtil analyse.
BEMÆRK: Supernatanten skal være plasma. Hvis nogle prøver allerede er størknet på tidspunktet for centrifugering, påvirker det ikke triglyceridmåling. - Efter den sidste blodopsamling stopper blødningen ved hjælp af styptiske pulvere, genopfylder foderet i buret og sørg for, at musene ikke viser tegn på ekstrem stress.
- Læg 2 μL triglyceridstandard og opsamlede supernatanter i en 96-brønds plade.
- Der tilsættes 200 μL triglyceridreagens, og pladen inkuberes i 5 minutter ved 37 °C til farveudvikling.
- Absorbansen måles ved 500 nm med en referencebølgelængde på 660 nm i en laboratoriepladelæser, og prøvens koncentration beregnes.
3. β3 Adrenergic Receptor Agonist CL 316,243 Stimuleret lipolyse assay
- Klargør CL 316.243 som lageropløsning på 5 mg/mL (50x) i steril saltvand, og opbevares ved -20 °C, indtil den anvendes.
- Om morgenen skal musene vejes for at beregne mængden af fortyndet CL 316.243 opløsning, der er nødvendig for eksperimentet. Musen vil modtage 10 μL pr. gram kropsvægt af fortyndet CL 316.243, for en sidste dosis på 1 mg/kg kropsvægt.
- Overfør musene til et nyt bur med fri adgang til vand, og fast dem i 4 timer.
- Lav nok 1x CL 316.243 opløsning fra 50x lager ved hjælp af saltvand. Den endelige koncentration af 1x CL 316.243 opløsning er 0,1 mg/mL. Brug saltvand til kontrolbehandlingsgruppen.
- Markér musenes haler, der er anbragt i samme bur for nem identifikation under blødningstrinnene.
- Lav et hak i haleåren, og træk 15 μL blod fra snittet til en glas kapillær (påfyldning omkring 1/5 af kapillær), og hurtigt blæse blodet ind i en microcentrifuge rør for T = 0 prøve.
BEMÆRK: Der er ingen grund til at stoppe blødningen under analysen, medmindre musene udviser forblødning. - Indsprøjt fortyndet CL 316.243 opløsning (eller kontrol, hvis den indgår i forsøget) intraperitonealt ved et volumen på 10 μL/g kropsvægt. Stak hver mus med 1 minut. Brug højst 5 mus til hvert 60-minutters eksperiment eller 10 mus til et topersoners hold.
- Tegn blod ved T = 5, 15, 30, 60 minutter: træk 15 μL blod (1/5 kapillær) pr. mus gennem haleblødning.
- Efter den sidste blodopsamling stopper blødningen ved hjælp af styptiske pulvere, genopfylder foderet i buret og sørg for, at musene ikke viser tegn på ekstrem stress.
- Spin blodprøver ved 2.000 x g ved 4 °C i 5 minutter i et nedkølet mikrocentrifuge. Overfør supernatanten til et PCR-rør til opbevaring. Supernatanten kan opbevares ved -20 °C i flere uger indtil analyse.
- Der skal fyldes 1 μL 2x serieået glycerolstandarder (0,156, 0,312, 0,625, 1,25 og 2,5 mg/ml Trioleine-ækvivalente koncentrationer) og opsamles supernatanter i en 96-brøndsplade. Tilsæt 100 μL frit glycerolreagens, og lad pladen inkubere i 5 minutter ved 37 °C, så farven kan udvikle sig.
- Absorbansen måles ved 540 nm ved hjælp af en laboratoriepladelæser, og prøvens koncentration beregnes.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vi viser med tre uddrag, at hver analyse giver værdifulde oplysninger om musenes lipid metabolisme. For C57BL/6J hanmus, udfordret af otte ugers fedtrig kost (HFD) fodring starter ved otte ugers alder, samlede kolesterolniveauer var signifikant forhøjet, mens serum triglyyceid og NEFA ikke var (tabel 1), tyder på, at triglycerid og NEFA i blodet ikke overvejende er reguleret af en kosten fedt udfordring. I den anden kohorte af mus blev C57BL/6J og C57BL6/N undertræne af C57BL6 fodret HFD i otte uger, begyndende ved otte uger. Deres serum triglycerid niveauer blev sammenlignet efter en oral intralipid udfordring. Resultaterne viste en slående forskel mellem 6N og 6J undertræner, med 6J har en betydeligt højere top i serum triglycerid niveauer efter intralipid administration, hvilket indikerer en forbedret absorption eller en meget langsommere triglycerid clearance (Figur 1). Endelig førte en enkelt CL 316.243-behandling (1 mg/kg kropsvægt) for otte uger gamle hanmus, der blev fodret med normal chow (NC), til en betydelig stigning i serumglycerol. Daglig intraperitoneal forbehandling af mus med 1 mg/kg kropsvægt CL 316.243 i en uge førte imidlertid til en afstumpet reaktion på CL 316.243, hvilket tyder på udvikling af resistens over for CL 3116.263 hos disse mus (figur 2).
| Serum-parametre | NC | HFD | P-værdi |
| Kolesterol (mg/dL) | 132.7±10.3 | 202.3±8.4 | 0.0002 |
| Triglycerid (mg/dL) | 91.7±9.1 | 79.3±4.5 | 0.26 |
| Ikke-esterificerede fedtsyrer (mmol/L) | 1.47±0.12 | 1.48±0.08 | 0.73 |
Tabel 1: Fastende lipidarter hos mus, der fodres med normal chow (NC) eller fedtrig kost (HFD) i otte uger. Data udtrykkes som middelværdier ± SEM. N = 6 for NC-gruppe, n = 12 for HFD-gruppe. P-værdienblev bestemt ved hjælp af to-tailed Student's t-test.
Figur 1: Et eksempel på resultater, der viser forskellen i serum triglycerid af C57BL/6-undertræner efter en oral intralipidudfordring. Data udtrykkes som middelværdier ± SEM. N = 5 for hver gruppe. P-værdiblev bestemt ved hjælp af to-tailed Student's t-testpå hvert tidspunkt. * p < 0,05, ** p < 0,01. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Et eksempel på resultater, der viser udviklingen af resistens over for CL 316.243 behandling i C57BL/6J mus efter en uges daglig CL 316.243 behandling. Data udtrykkes som middelværdier ± SEM. N = 5 for hver gruppe. P-værdiblev bestemt ved hjælp af to-tailed Student's t-testpå hvert tidspunkt. ** p < 0,01. Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
De tre beskrevne analyser fungerer robust i laboratoriet, med et par kritiske overvejelser. Overnight faste er nødvendig for bestemmelse faste serum lipid niveauer og oral intralipid tolerance test. For oral intralipid tolerance test, er det afgørende at dreje blodet ved stuetemperatur for at minimere dannelsen af et fedtlag, især på 1- og 2-timers tid punkter; det er vigtigt ikke at kassere dette fedtlag, hvis det dannes. Sørg for at overføre supernatanten med lipidlaget, og pipet forsigtigt for at blande dem sammen til triglyceridbestemmelse.
Fortolkning af faste serum lipid niveauer
Faste har vist sig at sænke det samlede kolesteroltal hos mus7, mens kronisk forbrugende højt fedtindhold kost øger det samlede kolesteroltal8. Der er to hovedtyper af kolesterol: high-density lipoprotein -kolesterol (HDL-C) og lav densitet lipoprotein kolesterol (LDL-C). HDL-C betragtes som den "gode" lipid hos mennesker. Det bærer kolesterol og transporterer det til leveren, der skal skylles ud af systemet. LDL-Cs udgør det meste af kolesterol i det menneskelige serum, og de kan opbygge i arterierne, hvilket fører til større arteriesygdomme. Mus mangler imidlertid et vigtigt enzym, kollesteryl esteroverførselsprotein (CETP)9, der formidler udveksling af triglycerider til esterificeret kolesterol mellem HDL og apoB-lipoproteiner10. Dette giver mus en helt anden lipoprotein partikelprofil, hvor HDL er den vigtigste art. Som følge heraf afspejler en ændring i det samlede serum kolesterolniveauer primært ændringer i HDL-C-niveauet.
Hos både mus og mennesker kan høje serum triglyceridniveauer øge inflammation af lav kvalitet og kan forringe hjertefunktionen11,12. HFD øger dog ikke serum triglyceridniveauet. Genetiske faktorer kan spille en dominerende rolle i serum triglycerid niveauer over metaboliske forhold13. NEFA i blodet kan absorberes og udnyttes ivrigt af mange organer, undertrykkes af insulin og fodring, og øges med adrenalin14. HFD fodring ændrer ikke serum NEFA niveau, hvilket tyder på hormonelle cue dominerer reguleringen af serum NEFA niveauer.
Fortolkning af oral intralipid clearance test
En mundtligt administreret intralipid absorberes af tarmepilelecellerne og transporteres i lipoproteinpartikler i blodbanen, hvor den frigøres og bruges af perifere organer. Ændringer i lipoprotein lipase aktivitet, perifer-væv triglycerid optagelse, og oxidation vil påvirke dynamikken i serum triglycerid niveauer. For eksempel oxiderer brune og beige adipocytter ivrigt fedtsyrer til varmeproduktion. Koldeksponering øger brun og beige adipocytaktivitet betydeligt, hvilket accelererer plasma clearance af triglycerider15. Den orale intralipid tolerance clearance test var afgørende for at vurdere virkningerne af kold eksponering på triglycerid metabolisme, som påvist i papiret15.
Evaluering af forbindelser rettet mod fedtvæv lipolyse
Aktivering af lipolyse formidles af det sympatiske nervesystem, endokrine faktorer og forskellige metabolitter. Mange forbindelser er blevet sat i udvikling af farmaceutiske virksomheder til at fremme fedtvæv lipolyse16,17. Vurdering af deres effektivitet i prækliniske dyremodeller som mus er afgørende for at lette udviklingsprocessen. Her bruger vi en β3- adrenergic receptor agonist, CL 316,243, som et eksempel til at illustrere, hvordan vi kan vurdere, hvordan en mus reagerer på forbindelsen, og om musen viser forskellige niveauer af følsomhed over for forbindelsen i forskellige metaboliske tilstande. Som det ses i de eksemplariske resultater, gentagen brug af CL 316,243 forårsaget desensibilisering til behandlingen i musene. Vi brugte CL 316.243 til at illustrere, hvordan vi kunne vurdere en mus reaktion på akut behandling; endnu vigtigere, dette koncept og design kan let anvendes til andre molekyler rettet mod fedtvæv lipid metabolisme.
Begrænsninger
Et par udvalgte lipidarter giver begrænset information om lipidmetabolisme hos mus. På grund af den lille mængde serum, der er tilgængeligt fra haleblødning, måler denne protokol kun total kolesterol og skelner ikke mellem HDL-C og LDL-C, da disse analyser kræver betydelige mængder blod. Fordi mus er unikke i den måde, de mangler CETP, er total kolesterol en god tilnærmelse, og mere HDL-C hos mus indikerer ikke en sund lipidprofil, så de yderligere oplysninger, der opnås ved at skelne kolesterol i forskellige lipoproteinpartikler, er begrænset.
Serum lipid niveauer, herunder triglycerid niveauer, er normalt en nettoeffekt af absorption og udflugt af mange organer, der virker på en meget dynamisk måde. Fortolkning af resultaterne kræver normalt en eksperimentel opsætning med kun én variabel. Som det fremgår af det eksemplariske resultat, kan der ikke drages nogen specifik konklusion om lipidabsorptionen eller udflugten mellem C57BL/6J og C57BL/6N-underspæde c57BL/6 mus. Men i den citerede kold eksponering undersøgelse15, forudgående viden og undertiden antagelser kan bruges til at udelukke bidrag fra andre variabler, og forfatterne var i stand til at pin ned til et bestemt væv og opdagede, at brun fedtvæv bidraget til den forbedrede triglycerid clearance.
Endelig er stofskiftet en dynamisk proces. Ændringen af en metabolit i en lipid metaboliske vej giver kun et øjebliksbillede af den samlede tilstand. For at forstå strømmen kræves en mere sofistikeret fluxundersøgelse ved hjælp af isotopsporingsteknikker.
Sammenfattende er enkelheden både kraften og svagheden i denne protokol. De tre analyser, der præsenteres her, er ikke designet til studiet af specifikke lipid metabolisme veje, men snarere at give en indledende screening eller et udgangspunkt for evaluering lipid metabolisme i almindelighed ernæring og fedme forskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Dette arbejde er støttet af National Institutes of Health (NIH), tilskud R00-DK114498, og United States Department of Agriculture (USDA), tilskud CRIS: 3092-51000-062 til Y. Z.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 Hydrate | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| Curved Feeding Needles (18 Gauge) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| Free Glycerol Reagent | Sigma Aldrich | F6428 | |
| Glycerol Standard Solution | Sigma | G7793 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 999-34691 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 991-34891 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 995-34791 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 993-35191 | |
| Matrix Plus Chemistry Reference Kit | Verichem | 9500 | |
| Micro Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| NEFA STANDARD SOLUTION | Fujifilm Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| Phosphate Buffered Saline | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Thermo Scientific Triglycerides Reagent | Fisher Scientific | TR22421 | |
| Total Cholesterol Reagents | Thermo Scientifi | TR13421 |
References
- Dixon, J. B. Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).
- Nuno, J., de Oya, M.
- Williams, K. J. Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids. Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).
- Burla, B., et al. MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines. Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).
- Umpleby, A. M. Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes. Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).
- Mitchell, B. D., et al. A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans. Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).
- Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans. Lipids in Health and Disease. 5, 13 (2006).
- Hayek, T., et al. Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice. Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).
- Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats. Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry & Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).
- Tall, A. R. Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk. Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).
- Singh, A. K., Singh, R. Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal. Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).
- Miller, M., et al. Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).
- Dron, J. S., Hegele, R. A.
- Dole, V. P. A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose. Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).
- Bartelt, A., et al. Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance. Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).
- de Souza, C. J., Burkey, B. F. Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans. Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).
- Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues. Journal of Experimental Biology. 221, Pt Suppl 1 (2018).
