Summary
Bu makale, farelerde lipid metabolizmasını değerlendirmek için üç kolay ve erişilebilir test sağlar.
Abstract
Lipid metabolizmasının değerlendirilmesi metabolik fonksiyonun değerlendirilmesinin temel taşıdır ve in vivo metabolizma çalışmaları için gerekli kabul edilir. Lipitler, sentezlerinde ve metabolizmalarında yer alan birçok yolak ile birçok farklı molekülden oluşan bir sınıftır. Beslenme ve obezite araştırmaları için lipid hemostazını değerlendirmek için bir başlangıç noktasına ihtiyaç vardır. Bu makalede, ustalaşmak için çok az uzmanlık veya pratik gerektiren ve çoğu laboratuvar tarafından farelerdeki lipid metabolizması anormalliklerini taramak için uyarlanabilen üç kolay ve erişilebilir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemler (1) oral intralipid tolerans testi yoluyla diyet lipid işleme yeteneği için ticari kitler (2) tahlilleri kullanarak birkaç açlık serum lipit molekülünün ölçülmesi ve (3) farelerde CL 316.243 adlı bir farmasötik bileşiğin yanıtının değerlendirilmesidir. Birlikte, bu yöntemler farelerde lipit işleme yeteneğine üst düzey bir genel bakış sağlayacaktır.
Introduction
Karbonhidratlar ve lipitler enerji metabolizması için iki ana substrattır. Anormal lipid metabolizması tip II diyabet, kardiyovasküler hastalıklar, yağlı karaciğer hastalıkları ve kanserler de dahil olmak üzere birçok insan hastalığı ile sonuçlanır. Diyet lipitleri, özellikle trigliseritler, bağırsak yoluyla lenfatik sisteme emilir ve kalbe yakın chylomicronlarda venöz dolaşıma girer1. Lipitler, yağ asidi moietiesinin kas ve yağ dokusu gibi periferik organlarda lipoprotein lipazının etkisiyle kurtarıldığı kan dolaşımındaki lipoprotein parçacıkları tarafından taşınır2. Kalan kolesterol bakımından zengin kalıntı parçacıkları karaciğer tarafından temizlenir3. Fareler, lipid metabolizmasını incelemek için laboratuvarlarda bir araştırma modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Kapsamlı genetik araç seti ve nispeten kısa bir üreme döngüsü ile, lipitlerin nasıl emdiğini, sentezlendiğini ve metabolize edildiğini incelemek için güçlü bir modeldir.
Lipid metabolizmasının karmaşıklığı nedeniyle, sofistike lipidomik çalışmalar veya izotopik izleyici çalışmaları genellikle lipit türlerinin veya lipid ile ilgili metabolik akıların ve kaderlerin koleksiyonlarını ölçmek için kullanılır4,5. Bu, özel ekipman veya uzmanlığa sahip olmayan araştırmacılar için büyük bir zorluk yaratır. Bu yazıda teknik olarak zorlu teknikler kullanılmadan önce ilk test görevi görebilecek üç tahlil sunuyoruz. Fareler için terminal olmayan prosedürlerdir ve bu nedenle lipid taşıma kapasitesindeki potansiyel farklılıkları belirlemek ve etkilenen süreçleri daraltmek için çok yararlıdır.
İlk olarak, açlık serumu lipid moleküllerinin ölçülmesi, bir farenin genel lipit profilinin tespitine yardımcı olabilir. Fareler oruç tutmalıdır, çünkü birçok lipit türü yemeklerden sonra yükselir ve artışın boyutu diyetin bileşimini güçlü bir şekilde etkiler. Toplam kolesterol, trigliserit ve esterlenmemiş yağ asidi (NEFA) dahil olmak üzere birçok lipid molekülü, ticari bir kit ve emiciliği okuyabilen bir plaka okuyucu kullanılarak ölçülebilir.
İkinci olarak, oral intralipid tolerans testi lipid işleme yeteneğini emilim ve metabolizmanın net bir etkisi olarak değerlendirir. Ağızdan uygulanan bir intralipid dolaşımdaki trigliserit seviyelerinde (1-2 saat) bir artışa neden olur, daha sonra serum trigliserit seviyeleri bazal seviyelere (4-6 saat) geri döner. Bu tahlil, bir farenin eksojen lipitleri ne kadar iyi idare edebileceği hakkında bilgi sunar. Kalp, karaciğer ve kahverengi yağ dokusu trigliseritlerin aktif tüketicileridir, beyaz yağ dokusu ise onu bir enerji rezervi olarak depolar. Bu işlevlerdeki değişiklikler test sonuçlarında farklılıklara yol açacaktır.
Son olarak, depolanan lipitleri harekete geçirmek için lipoliz teşvik etmek kilo kaybı için olası bir strateji olarak kabul edilir. Yağ dokusundaki β3-adrenerjik reseptör sinyal yolu adiposit lipolizinde önemli bir rol oynar ve insan genetiği obezite ile ilişkili β3-adrenerjik reseptörde fonksiyon kaybı polimorfizmi Trp64Arg tespit etti6. Cl 316,243, spesifik ve güçlü bir β3-adrenerjik reseptör agonisti, yağ dokusu lipolizini ve gliserol salınımını uyarır. Bir farenin CL 316,243'e verdiği yanıtın değerlendirilmesi, bileşiğin gelişimi, iyileştirilmesi ve etkinliğinin anlaşılması hakkında değerli bilgiler sağlayabilir.
Toplu olarak, bu testler farelerin lipid metabolik durumundaki değişiklikler için bir başlangıç ekranı olarak kullanılabilir. Enstrümanların ve reaktiflerin erişilebilirliği için seçilirler. Bu testlerden elde edilen sonuçlarla araştırmacılar, hayvanlarının metabolik uygunluğunun genel bir resmini oluşturabilir ve daha sofistike ve hedefli yaklaşımlara karar verebilirler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvanlar, Baylor Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (BCM) tarafından onaylanan hayvan bakımı ve deneysel protokolleri takiben standart koşullarda barındırılmaktadır. Hayvanlar standart veya özel bir diyet, su reklam libitum ile beslenir ve 12 saatlik gündüz / gece döngüsü ile tutulur.
1. Açlık serum lipitlerinin ölçülmesi
- Fareleri 17:00'den sonra yeni bir kafese aktarın ve bir gecede suya ücretsiz erişimle hızlı olun (deneyden önce yaklaşık 16 saat oruçla). Gece orucu, farelerin gastrointestinal yollarının tamamen boşaltımını sağlar.
NOT: Fareler oruç sırasında dışkılarını yerler, bu nedenle yiyecek çekme işlemi yeterince oruç tuttuklarından emin olamazlar. - Ertesi sabah, fareyi kuyruğundan kavrayın ve bir yüzeye yerleştirin. Fareyi kısıtlayıcıya yerleştirmek için farenin kuyruğuna hafifçe geri çekin. Farenin nefes almasına izin verirken farenin hareketini yeniden eğitmek için burun kısıtlamasını yerleştirin. Burun kısıtlamasının düğmesini sıkın. Hayvanın normal nefes gördüğünden emin olmak için göğüs hareketlerini izleyin ve bir farenin kısıtlayıcılarda geçirdiği süreyi en aza indirin.
- Serbest hareket eden farenin kuyruk damarında yüzeysel bir kesi (çentik) yapın ve kesiden 25 μL kanı, fareyi kısıtlamadan cam bir kılcal damara (kılcal damarın yaklaşık 1/3'üni doldurarak) çekin. Kanı hızla bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin.
- Stilistik tozlar kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin stres belirtisi göstermemesini kesin.
- Tüm fareler için kan çekmeyi tamamlayın.
- Kanı oda sıcaklığında 1 saat boyunca bozulmadan bırakarak pıhtılaşmasını kesin. Pıhtılaşmış kan örneklerini 4 °C'de 2.000 x g'da, soğutulmuş bir tezgah üstü mikrosantrifüjde 10 dakika döndürün ve analiz için süpernatantı (serum) aktarın.
NOT: Serum analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir. Uzun süreli depolama için serumu –70°C'de tutun. - Üreticinin sağladığı protokolü kullanarak her lipid metabolitini analiz edin.
2. Oral Intralipid Tolerans Testi
- Saat 17:00'den sonra, ertesi gün kendilerine verilecek intralipid hacminin hesaplanması için fareleri tartın. Ardından, fareleri yeni bir kafese aktarın ve gece boyunca (16 saat) oruçlayın.
- Ertesi sabah, sonraki kanama adımlarında tanımlanmasına yardımcı olmak için bir kafeste bulunan farelerin kuyruklarını işaretleyin.
- Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden cam bir kılcal damara (kılcal damarın yaklaşık 1/5'ini doldurarak) 15 μL kan çekin ve kanı hızla T = 0 serum için bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin.
NOT: Fareler fazla kanama göstermediği sürece tahlil sırasında kanamayı durdurmaya gerek yoktur. - Gavage fareleri% 20 intralipid, 18G gavage iğnesi kullanarak gram vücut ağırlığı başına 15 μl oranında, oruç öncesi vücut ağırlığını kullanarak. Her fareyi 1 dakika istifle.
NOT: Hayvanı tartın ve uygun gavage iğne boyutunu belirleyin. Genellikle, 18 kalibrelik bir gavage iğnesi fareler için >25 g uygundur ve 20-22 kalibrelik bir gavage iğnesi daha küçük hayvanlar için daha uygun olacaktır. Fareyi, hayvanın başını yerinde tutmak için cildi omuzların üzerinde kavrayarak reçete edin. Gavage iğnesini ağzına yerleştirin ve ardından yemek borusuna ulaşılana kadar üst damak boyunca hafifçe ilerleyin. Tüp direnç olmadan geçmelidir. Uygun derinliğe ulaşıldıktan sonra, Intralipid yavaşça uygulanabilir. Intralipid'i idare ettikten sonra iğne yerleştirme sırasında aynı açıyı izleyerek iğneyi yavaşça çıkarın. Hayvanı kafese geri koyun ve zahmetli solunum veya diğer sıkıntı belirtilerini izleyin.
NOT: Oral gavage veya kuyruk kanaması teknikleri konusunda deneyimsiz olan araştırmacılar her fareyi 2 dakika veya daha uzun süre istifleyebilirler. - T = 1, 2, 3, 4, 5 ve 6 saatte kan alın: Kuyruk kanaması yoluyla fare başına 15 μL kan (1/5 kılcal damar) çekin ve kanı hızla bir mikrosenjrifuge tüpüne üfleyin.
- Kan örneklerini oda sıcaklığında 2.000 x g'da mikrosantrifüjde 10 dakika döndürün. Yüzen yağ tabakası da dahil olmak üzere süpernatant'ı depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir.
NOT: Süpernatant plazma olmalıdır. Bazı örnekler santrifüjleme zamanında zaten pıhtılaşmışsa, trigliserit ölçümünü etkilemez. - Son kan toplanmasından sonra, styptic tozları kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermemesini kesin.
- 2 μL trigliserit standardı yükleyin ve 96 kuyulu bir plakaya süpernatantlar toplar.
- 200 μL trigliserit reaktif ekleyin ve plakanın renk gelişimi için 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin.
- Laboratuvar plakası okuyucusunda 660 nm referans dalga boyu ile emiciliği 500 nm olarak ölçün ve numunenin konsantrasyonu hesaplayın.
3. β3 Adrenerjik Reseptör Agonist CL 316,243 Uyarılmış Lipoliz Tahlil
- CL 316,243'ü steril salin içinde 5 mg/mL (50x) stok çözeltisi olarak hazırlayın ve kullanıma kadar –20°C'de saklayın.
- Sabahları, deney için gereken seyreltilmiş CL 316.243 çözelti miktarını hesaplamak için fareleri tartın. Fare, 1 mg / kg vücut ağırlığının son dozu için seyreltilmiş CL 316,243'ün gram vücut ağırlığı başına 10 μL alacaktır.
- Fareleri suya ücretsiz erişim ile yeni bir kafese aktarın ve 4 saat boyunca oruçlayın.
- Tuzlu su kullanarak 50x stoktan yeterli 1x CL 316.243 çözeltisi yapın. 1x CL 316,243 çözeltisinin son konsantrasyonu 0,1 mg/mL'dir. Kontrol tedavi grubu için salin kullanın.
- Kanama adımları sırasında kolay tanımlama için aynı kafeste bulunan farelerin kuyruklarını işaretleyin.
- Kuyruk damarında bir çentik yapın ve kesiden cam bir kılcal damara 15 μL kan çekin (kılcal damarın yaklaşık 1/5'ini doldurun) ve kanı hızla T = 0 örneği için bir mikrosantrifüj tüpüne üfleyin.
NOT: Fareler fazla kanama göstermediği sürece tahlil sırasında kanamayı durdurmaya gerek yoktur. - Seyreltilmiş CL 316,243 çözeltisini (veya deneye dahil edilirse kontrol) intraperitoneal olarak 10 μL/ g vücut ağırlığı hacminde enjekte edin. Her fareyi 1 dakika istifle. Her 60 dakikalık deney için en fazla 5 fare veya iki kişilik bir ekip için 10 fare kullanın.
- T = 5, 15, 30, 60 dakika kan çekin: kuyruk kanaması yoluyla fare başına 15 μL kan (1/5 kılcal damar) çekin.
- Son kan toplanmasından sonra, styptic tozları kullanarak kanamayı durdurun, kafesteki yemini yeniden doldurun ve farelerin aşırı stres belirtisi göstermemesini kesin.
- 4 °C'de 2.000 x g'da 5 dakika boyunca soğutmalı bir mikrosantrifüjde kan örnekleri döndürün. Süpernatant depolama için bir PCR tüpüne aktarın. Süpernatant, analize kadar birkaç hafta boyunca –20 °C'de saklanabilir.
- 1 μL 2x seri seyreltilmiş gliserol standartlarını (0.156, 0.312, 0.625, 1.25 ve 2.5 mg/ml Trioleine eşdeğer konsantrasyonlar) yükleyin ve süpernatantları 96 kuyulu bir plakaya toplar. 100 μL serbest gliserol reaktif ekleyin ve rengin gelişmesi için plakanın 37 °C'de 5 dakika kuluçkaya yatmasına izin verin.
- Laboratuvar plakası okuyucu kullanarak emiciliği 540 nm olarak ölçün ve numunenin konsantrasyonu hesaplayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Her testin farelerin lipit metabolizması hakkında değerli bilgiler sunduğunu üç alıntı ile gösteriyoruz. Sekiz haftalıktan başlayarak sekiz haftalık yüksek yağlı diyet (HFD) beslenmesi ile zorlanan C57BL / 6J erkek fareler için, toplam kolesterol seviyeleri önemli ölçüde yükselirken, serum trigliserit ve NEFA değildi (Tablo 1), kandaki trigliserit ve NEFA'nın ağırlıklı olarak bir diyet yağ zorluğu ile düzenlenmediğini düşündürmektedir. İkinci fare kohortunda, C57BL6'nın C57BL/6J ve C57BL6/N alt kısıtlılıkları, sekiz haftalıktan başlayarak sekiz hafta boyunca HFD ile beslendi. Serum trigliserit düzeyleri oral intralipid mücadelesinden sonra karşılaştırıldı. Sonuçlar, 6N ve 6J alt sınırlamaları arasında çarpıcı bir fark olduğunu gösterdi, 6J intralipid uygulamadan sonra serum trigliserit seviyelerinde önemli ölçüde daha yüksek bir tepeye sahip, gelişmiş bir emilim veya çok daha yavaş bir trigliserit boşluğuna işaret ediyor (Şekil 1). Son olarak, normal chow (NC) ile beslenen sekiz haftalık erkek C57BL / 6J fareler için, tek bir CL 316,243 tedavisi yapar (1 mg / kg vücut ağırlığı) serum gliserol önemli bir artışa yol açtı. Bununla birlikte, bir hafta boyunca 1 mg/ kg vücut ağırlığı CL 316.243 olan farelerin günlük intraperitoneal ön muamelesi CL 316.243'e körelmiş bir reaksiyona yol açtı ve bu farelerde CL 3116.263'e karşı direnç gelişimini düşündürdü(Şekil 2).
| Serum Parametreleri | NC | HFD | P Değeri |
| Kolesterol (mg/dL) | 132,7±10,3 | 202.3±8.4 | 0.0002 |
| Trigliserit (mg/dL) | 91,7±9,1 | 79,3±4,5 | 0.26 |
| Esterleşmiş olmayan yağ asitleri (mmol/L) | 1,47±0,12 | 1,48±0,08 | 0.73 |
Tablo 1: Sekiz hafta boyunca normal yemek (NC) veya yüksek yağlı diyet (HFD) ile beslenen farelerde açlık lipit türleri. Veriler SEM. N = NC grubu için 6, HFD grubu için n = 12 ± ortalama değerler olarak ifade edilir. Pdeğeri iki kuyruklu Student's t-test kullanılarak belirlendi.
Şekil 1: Oral intralipid mücadelesinden sonra C57BL/6 alt sınırlarının serum trigliserit farkını gösteren sonuçlara bir örnek. Veriler, her grup için SEM. N = 5 ± ortalama değerler olarak ifade edilir. Pdeğeri, her zaman noktasında iki kuyruklu Öğrenci'nin t-testi kullanılarak belirlendi. * p < .05, ** p < .01. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Günlük CL 316.243 tedavisindenbir hafta sonra C57BL/6J farelerde CL 316.243 tedavisine direnç gelişimini gösteren sonuçlara bir örnek. Veriler, her grup için SEM. N = 5 ± ortalama değerler olarak ifade edilir. Pdeğeri, her zaman noktasında iki kuyruklu Öğrenci'nin t-testi kullanılarak belirlendi. ** p < .01. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Açıklanan üç tahlil, laboratuvarda birkaç kritik hususla birlikte sağlam bir şekilde işlev görür. Açlık serum lipit düzeylerinin belirlenmesi ve oral intralipid tolerans testi için gece oruç gereklidir. Oral intralipid tolerans testi için, özellikle 1 ve 2 saatlik zaman noktalarında bir yağ tabakası oluşumunu en aza indirmek için kanı oda sıcaklığında döndürmek önemlidir; oluşursa bu yağ tabakasını atmamak önemlidir. Süpernatant lipid tabakası ile transfer emin olun ve trigliserit tayini için birbirine karıştırmak için hafifçe pipet.
Açlık serum lipit seviyelerinin yorumlanması
Oruç farelerde toplam kolesterol seviyelerini düşürdüğü gösterilmiştir7, kronik olarak yüksek yağ içeriğine sahip diyetler tüketmek toplam kolesterol seviyelerini arttırır8. İki ana kolesterol türü vardır: yüksek yoğunluklu lipoprotein -kolesterol (HDL-C) ve düşük yoğunluklu lipoprotein kolesterol (LDL-C). HDL-C insanlarda "iyi" lipit olarak kabul edilir. Kolesterol taşır ve sistemden dışarı atılmak üzere karaciğere taşır. LDL-C'ler insan serumundaki kolesterolün çoğunu oluşturur ve arterlerde birikerek ana arter hastalıklarına yol açabilirler. Bununla birlikte, fareler önemli bir enzimden yoksundur, kolesteril ester transfer proteini (CETP)9HDL ve apoB-lipoproteinler arasında esterleşmiş kolesterol için trigliseritlerin değişimine aracılık eder10. Bu, farelere tamamen farklı bir lipoprotein parçacık profili verir ve HDL ana türdür. Sonuç olarak, toplam serum kolesterol seviyelerindeki bir değişiklik öncelikle HDL-C seviyelerindeki değişiklikleri yansıtır.
Hem farelerde hem de insanlarda, yüksek serum trigliserit seviyeleri düşük dereceli iltihabı artırabilir ve kardiyak fonksiyonu bozabilir11,12. Ancak HFD serum trigliserit seviyelerini artırmaz. Genetik faktörler metabolik durumlar üzerinde serum trigliserit düzeylerinde baskın rol oynayabilir13. Kandaki NEFA, birçok organ tarafından şiddetle emilebilir ve kullanılabilir, insülin ve beslenme ile baskılanabilir ve epinefrin14. HFD besleme serum NEFA seviyesini değiştirmez, hormonal işaretin serum NEFA seviyelerinin düzenlenmesine hakim olduğunu düşündürmektedir.
Oral intralipid temizleme testinin yorumlanarak
Ağızdan uygulanan bir intralipid bağırsak epitel hücreleri tarafından emilir ve kan dolaşımındaki lipoprotein parçacıklarında taşınır, burada serbestleştirilir ve periferik organlar tarafından kullanılır. Lipoprotein lipaz aktiviteslerindeki değişiklikler, periferik doku trigliserit alımı ve oksidasyon serum trigliserit seviyelerinin dinamiklerini etkileyecektir. Örneğin, kahverengi ve bej adipositler ısı üretimi için yağ asitlerini şiddetle oksitler. Soğuk maruziyeti kahverengi ve bej adiposit aktivitesini önemli ölçüde arttırır, trigliseritlerin plazma açıklığını hızlandırır15. Oral intralipid tolerans açıklık testi, makalede gösterildiği gibi soğuk maruziyetin trigliserit metabolizması üzerindeki etkilerini değerlendirmek için çokönemliydi 15.
Yağ dokusu lipolizini hedefleyen bileşiklerin değerlendirilmesi
Lipoliz aktivasyonu sempatik sinir sistemi, endokrin faktörler ve çeşitli metabolitler tarafından iletilir. Yağ dokusu lipolizini teşvik etmek için ilaç şirketleri tarafından birçok bileşik geliştirilmiştir16,17. Fareler gibi klinik öncesi hayvan modellerindeki etkinliklerini değerlendirmek, gelişim sürecini kolaylaştırmak için kritik öneme sahiptir. Burada, bir farenin bileşiğe nasıl tepki verdiğini ve farenin farklı metabolik durumlarda bileşiğe farklı hassasiyet seviyeleri gösterip göstermediğini nasıl değerlendirebileceğimizi göstermek için örnek olarak bir β3- adrenerjik reseptör agonisti, CL 316,243 kullanıyoruz. Örnek sonuçlarda görüldüğü gibi CL 316,243'ün tekrar tekrar kullanılması farelerde tedaviye duyarsızlaşmaya neden oldu. Bir farenin akut tedaviye yanıtını nasıl değerlendirebileceğimizi göstermek için CL 316,243'ü kullandık; daha da önemlisi, bu kavram ve tasarım yağ dokusu lipid metabolizmasını hedefleyen diğer moleküllere kolayca uygulanabilir.
Sınırlama
Seçilen birkaç lipit türü farelerde lipid metabolizması hakkında sınırlı bilgi sunar. Kuyruk kanamasından elde edilen az miktarda serum nedeniyle, bu protokol sadece toplam kolesterolü ölçen ve HDL-C ve LDL-C'yi ayırt etmez, çünkü bu tahliller önemli miktarda kan gerektirir. Fareler CETP'den yoksun oldukları şekilde benzersiz olduklarından, toplam kolesterol iyi bir yaklaşımdır ve farelerde daha fazla HDL-C sağlıklı bir lipit profili göstermez, bu nedenle kolesterolün farklı lipoprotein parçacıklarında ayırt edilmesiyle elde edilen ek bilgiler sınırlıdır.
Trigliserit düzeyleri de dahil olmak üzere serum lipid düzeyleri genellikle çok dinamik bir şekilde hareket eden birçok organ tarafından emilimin ve gezinin net bir etkisidir. Sonuçları yorumlamak genellikle yalnızca bir değişkenle deneysel bir kurulum gerektirir. Örnek sonuçta gösterildiği gibi, C57BL/6J ve C57BL/6N farelerin C57BL/6N alt sınırlamaları arasında lipid emilimi veya gezisi ile ilgili özel bir sonuç yapılamaz. Bununla birlikte, atıf yapılan soğuk maruziyet çalışmasında15, önceki bilgiler ve bazen varsayımlar diğer değişkenlerden katkıları dışlamak için kullanılabilir ve yazarlar belirli bir dokuya sabitlemeyi başardılar ve kahverengi yağ dokusunun gelişmiş trigliserit boşluğuna katkıda bulunduğunu keşfettiler.
Son olarak, metabolizma dinamik bir süreçtir. Lipid metabolik yolunda bir metabolit değişikliği, genel durumu yalnızca bir anlık sağlar. Akışı anlamak için izotop izleme tekniklerini kullanan daha sofistike bir akı çalışması gereklidir.
Özetle, basitlik bu protokolün hem gücü hem de zayıflığıdır. Burada sunulan üç tahlil, spesifik lipid metabolizma yollarının incelenmesi için değil, genel beslenme ve obezite araştırmalarında lipid metabolizmasını değerlendirmek için bir başlangıç taraması veya başlangıç noktası sağlamak için tasarlanmıştır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Acknowledgments
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH), R00-DK114498 hibesi ve Amerika Birleşik Devletleri Tarım Bakanlığı (USDA) tarafından desteklenmektedir, CRIS: 3092-51000-062 Y. Z.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 20% Intralipid | Sigma Aldrich | I141 | |
| BD Slip Tip Sterile Syringes 1ml | Shaotong | B07F1KRMYN | |
| CL 316,243 Hydrate | Sigma-Aldrich | C5976 | |
| Curved Feeding Needles (18 Gauge) | Kent Scientific | FNC-18-2-2 | |
| Free Glycerol Reagent | Sigma Aldrich | F6428 | |
| Glycerol Standard Solution | Sigma | G7793 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 999-34691 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)COLOR REAGENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 991-34891 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT A | Fujifilm Wako Diagnostics | 995-34791 | |
| HR SERIES NEFA-HR(2)SOLVENT B | Fujifilm Wako Diagnostics | 993-35191 | |
| Matrix Plus Chemistry Reference Kit | Verichem | 9500 | |
| Micro Centrifuge Tubes | Fisher Scientific | 14-222-168 | |
| Microhematrocrit Capillary Tube, Not Heparanized | Fisher Scientific | 22-362-574 | |
| NEFA STANDARD SOLUTION | Fujifilm Wako Diagnostics | 276-76491 | |
| Phosphate Buffered Saline | Boston Bioproducts | BM-220 | |
| Thermo Scientific Triglycerides Reagent | Fisher Scientific | TR22421 | |
| Total Cholesterol Reagents | Thermo Scientifi | TR13421 |
References
- Dixon, J. B. Mechanisms of chylomicron uptake into lacteals. Annals of the New York Academy of Sciences. 1207, Suppl 1 52-57 (2010).
- Nuno, J., de Oya, M. Lipoprotein lipase: review. Revista Clínica Española. 170 (3-4), 83-87 (1983).
- Williams, K. J. Molecular processes that handle -- and mishandle -- dietary lipids. Journal of Clinical Investigation. 118 (10), 3247-3259 (2008).
- Burla, B., et al. MS-based lipidomics of human blood plasma: a community-initiated position paper to develop accepted guidelines. Journal of Lipid Research. 59 (10), 2001-2017 (2018).
- Umpleby, A. M. Hormone measurement guidelines: Tracing lipid metabolism: the value of stable isotopes. Journal of Endocrinology. 226 (3), 1-10 (2015).
- Mitchell, B. D., et al. A paired sibling analysis of the beta-3 adrenergic receptor and obesity in Mexican Americans. Journal of Clinical Investigation. 101 (3), 584-587 (1998).
- Mahoney, L. B., Denny, C. A., Seyfried, T. N. Caloric restriction in C57BL/6J mice mimics therapeutic fasting in humans. Lipids in Health and Disease. 5, 13 (2006).
- Hayek, T., et al. Dietary fat increases high density lipoprotein (HDL) levels both by increasing the transport rates and decreasing the fractional catabolic rates of HDL cholesterol ester and apolipoprotein (Apo) A-I. Presentation of a new animal model and mechanistic studies in human Apo A-I transgenic and control mice. Journal of Clinical Investigation. 91 (4), 1665-1671 (1993).
- Hogarth, C. A., Roy, A., Ebert, D. L. Genomic evidence for the absence of a functional cholesteryl ester transfer protein gene in mice and rats. Comparative Biochemistry and Physiology - Part B: Biochemistry & Molecular Biology. 135 (2), 219-229 (2003).
- Tall, A. R. Functions of cholesterol ester transfer protein and relationship to coronary artery disease risk. Journal of Clinical Lipidology. 4 (5), 389-393 (2010).
- Singh, A. K., Singh, R. Triglyceride and cardiovascular risk: A critical appraisal. Indian Journal of Endocrinology and Metabolism. 20 (4), 418-428 (2016).
- Miller, M., et al. Triglycerides and cardiovascular disease: a scientific statement from the American Heart Association. Circulation. 123 (20), 2292-2333 (2011).
- Dron, J. S., Hegele, R. A. Genetics of Hypertriglyceridemia. Frontiers in Endocrinology (Lausanne). 11, 455 (2020).
- Dole, V. P. A relation between non-esterified fatty acids in plasma and the metabolism of glucose. Journal of Clinical Investigation. 35 (2), 150-154 (1956).
- Bartelt, A., et al. Brown adipose tissue activity controls triglyceride clearance. Nature Medicine. 17 (2), 200-205 (2011).
- de Souza, C. J., Burkey, B. F. Beta 3-adrenoceptor agonists as anti-diabetic and anti-obesity drugs in humans. Current Pharmaceutical Design. 7 (14), 1433-1449 (2001).
- Braun, K., Oeckl, J., Westermeier, J., Li, Y., Klingenspor, M. Non-adrenergic control of lipolysis and thermogenesis in adipose tissues. Journal of Experimental Biology. 221, Pt Suppl 1 (2018).
