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Methodenartikel

Mikrofluidisches Modell zur Nachahmung des ersten Ereignisses der Neovaskularisation

4.4K Aufrufe

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DOI:

10.3791/62003

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10. April 2021

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In diesem Artikel

Zusammenfassung

Hier bieten wir einen mikrofluidischen Chip und ein automatisch gesteuertes, hocheffizientes Kreislauf-Mikrofluidsystem, das die anfängliche Mikroumgebung der Neovaskularisation rekapituliert und es ermöglicht, Endothelzellen (ECs) durch hohe Luminalscherspannung, physiologischen Transendothelfluss und verschiedene vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) gleichzeitig zu stimulieren.

Zusammenfassung

Die Neovaskularisation wird in der Regel aus einer bestehenden normalen Vaskulatur initialisiert und die biomechanische Mikroumgebung von Endothelzellen (ECs) variiert in der Anfangsphase dramatisch vom folgenden Prozess der Neovaskularisation. Obwohl es viele Modelle gibt, um verschiedene Stadien der Neovaskularisation zu simulieren, fehlt noch ein In-vitro-3D-Modell, das den anfänglichen Prozess der Neovaskularisation unter den entsprechenden Stimulationen normaler Vaskulatur-Mikroumgebungen kapituliert. Hier haben wir ein In-vitro-3D-Modell rekonstruiert, das das ausgangse Ereignis der Neovaskularisation (MIEN) nachahmt. Das MIEN-Modell enthält einen mikrofluidischen Keimchip und ein automatisches, hocheffizientes Zirkulationssystem. Es wurde ein funktioneller, perfusabler Mikrokanal gebildet, der mit Endothel beschichtet ist, und der Prozess des Keimens wurde im mikrofluidischen Sprossenchip simuliert. Die ursprünglich physiologische Mikroumgebung der Neovaskularisation wurde mit dem mikrofluidischen Kontrollsystem rekapituliert, durch das ECs gleichzeitig hoher Luminalscherspannung, physiologischem transendothelialen Fluss und verschiedenen vaskulären endothelialen Wachstumsfaktor-Verteilungen (VEGF) ausgesetzt waren. Das MIEN-Modell kann problemlos auf die Untersuchung des Neovaskularisationsmechanismus angewendet werden und ist als kostengünstige Plattform für Arzneimittelscreenings und toxikologische Anwendungen ein potenzielles Versprechen.

Einleitung

Neovaskularisation geschieht in vielen normalen und pathologischen Prozessen1,2,3,4, die zwei wichtige Prozesse bei Erwachsenen, Angiogenese und Arteriogenese5enthalten. Neben den bekanntesten Wachstumsfaktoren, wie dem vaskulären endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF)6,sind mechanische Stimulationen, insbesondere der durchblutungsinduzierte Scherstress, bei der Regulierung der Neovaskularisation7wichtig. Wie wir wissen, variieren die Größe und Formen der Scherspannung dram....

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Protokoll

1. Wafer-Vorbereitung

HINWEIS: Dieses Protokoll ist spezifisch für die SU-8 2075 negativen Photoresist während dieser Forschung verwendet.

  1. Den Siliziumwafer 3 bis 5 Mal mit Methanol und Isopropanol auf einem Spincoater wie folgt reinigen: Zuerst 15 s bei 500 U/min drehen und dann 60 s bei 3.000 U/min drehen.
  2. Den Siliziumwafer auf eine auf 180 °C vorgewärmte Kochplatte geben und 10 min backen.
  3. Entfernen Sie den Siliziumwafer von der Kochplatte und kühlen Sie ihn auf Raumtemperatur. Reinigen Sie den Wafer erneut mit Druckluft, bevor Sie mit der Spinbeschichtung fortfahren. Tragen Sie 4 ml des SU-8 2075 Photoresis....

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Ergebnisse

Das hier vorgestellte In-vitro-3D-Modell zur Nachahmung des ersten Ereignisses der Neovaskularisation (MIEN) bestand aus einem mikrofluidischen Keimchip und einem mikrofluidischen Steuerungssystem. Der mikrofluidische Keimchip wurde aus früheren Publikationen22,23,37,40,51,52,53opti.......

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Diskussion

Lange Zeit ist die Echtzeitbeobachtung der Neovaskularisation ein Problem. In letzter Zeit wurden mehrere Ansätze entwickelt, um durchlässige Gefäße zu erzeugen, die mit ECs auskleidung und an die extrazelluläre Matrix angrenzen, um22,32,40,46,54, aber die mechanische Mikroumgebung ist immer noch schwer zu pflegen. Es bleibt ein schwieriges Thema, die anfängli.......

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Offenlegungen

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Danksagungen

Diese Arbeit wurde von der National Natural Science Research Foundation of China Grants-in-Aid (Grant-Nr. 11827803, 31971244, 31570947, 11772036, 61533016, U20A20390 und 32071311), Nationales Forschungs- und Entwicklungsprogramm Chinas (Grant-Nr. 2016YFC1101101 und 2016YFC1102202), das 111-Projekt (B13003) und die Beijing Natural Science Foundation (4194079).

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Materialien

Liste der in diesem Artikel verwendeten Materialien
NameUnternehmenKatalognummerKommentare
0,25 % Trypsin-EDTAGenviewGP3108
Kollagen I, RattenschwanzCorning354236
DAPISigma-AldrichD9542
Elektromagnetisches QuetschventilWokun TechnologyWK02-308-1/3
Endothelzellmedium (ECM)Sciencell1001
Fötales Rinderserum (FBS)Jedes GreenNA
FibronektinCorning354008
FITC-DextranMiragen60842-46-8
Grafische ProgrammierumgebungLab VIEWNA
BildbearbeitungssoftwarePhotoShopNA
BildbearbeitungsprogrammImageJNA
IsopropanolSigma-Aldrich91237
Lithographie-AusrüstungInstitut für Optik und Elektronik, Chinesische Akademie der WissenschaftenURE-2000/35
MethanolSigma-Aldrich82762
Mikro-PeristaltpumpeBleiflüssigkeitBT101L
MikrospritzenpumpeBleiflüssigkeitTYD01
SauerstoffplasmaMING HENGPDC-MG
ParaformaldehydSigma-AldrichP6148
PBS (10x)BeyotimeST448
Permanenter Epoxid-Negativ-FotolackMicrochemSU-8 2075
Phenolrotes NatriumsalzSigma-AldrichP5530
Polydimethylsiloxan (PDMS)Dow CorningSylgard 184
Poly-D-Lysinhydrobromid (PDL)Sigma-AldrichP7886
Polytetrafluorethylen-TeflonNA
ProgrammsoftwareMATLABNA
Rekombinant Human VEGF-165StemImmune LLCHVG-VF5
Natriumhydroxid (NaOH)Sigma-Aldrich1.06498
Tisch-Top-InkubatorTokai Hit
SU-8 EntwicklerMicrochemNA
Trichlor(1H,1H,2H,2H-perfluoroctyl)silanSigma-Aldrich448931
TRITC PhalloidinSigma-AldrichP5285
NA

Referenzen

  1. Potente, M., Gerhardt, H., Carmeliet, P. Basic and therapeutic aspects of angiogenesis. Cell. 146 (6), 873-887 (2011).
  2. Barger, A. C., Beeuwkes, R. D., Lainey, L. L., Silverman, K. J. Hypothesis: vasa vasorum and neovasculariza....

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Nachdrucke und Genehmigungen

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